Name: process optimization using high throughput automated micro-bioreactors in chinese hamster ovary cell cultivation
Uploaded: 2020-05-18T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation at JoVE.com

저자는 분데스장관 퓌르 빌둥 und Forschung (BMBF), 교육 및 연구의 연방 정부, 독일, 그리고 사르토리우스 스테딤 생명 공학 GmbH의 바이오 프로세싱 팀에 감사드립니다, 독일, 그들의 지원에 대한.

1. 사전 배양 절차
참고: 1 x 107 세포/mL의 가능한 세포 농도를 가진 재조합 CHO DG44 세포가 이 프로토콜에 사용된다.
<ol><li>1.2 mL의 세포를 함유하는 바이알을 실온으로 해동시키고 즉시 10 mL의 차가운 종자 배지를 함유하는 15 mL 원추형 원심분리관으로 세포 현탁액을 옮김을 옮김.</li>
	<li>원심분리기 튜브를 190 x g 및 실온에서 5분간 원심분리하고 상온...

<ol>
	<li>Walsh, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biopharmaceutical+benchmarks+2018.">Biopharmaceutical benchmarks 2018.</a> Nature Biotechnology. 36, 1136 (2018).</li><li>Kim, J. Y., Kim, Y., Lee, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CHO+cells+in+biotechnology+for+production+of+recombinant+proteins:+current+state+and+further+potential.">CHO cells in biotechnology for production of recombinant proteins: current state and further potential.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 93 (3), 917-930 (2012).</li><li>Lai, T., Yang, Y., Ng, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+Mammalian+cell+line+development+technologies+for+recombinant+protein+production.">Advances in Mammalian cell line development technologies for recombinant protein production.</a> Pharmaceuticals (Basel). 6 (5), 579-603 (2013).</li><li>Carlage, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+dynamic+changes+in+the+proteome+of+a+Bcl-XL+overexpressing+Chinese+hamster+ovary+cell+culture+during+exponential+and+stationary+phases.">Analysis of dynamic changes in the proteome of a Bcl-XL overexpressing Chinese hamster ovary cell culture during exponential and stationary phases.</a> Biotechnology Progress. 28 (3), 814-823 (2012).</li><li>Hacker, D. L., de Jesus, M., Wurm, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=25+years+of+recombinant+proteins+from+reactor-grown+cells+-+where+do+we+go+from+here.">25 years of recombinant proteins from reactor-grown cells - where do we go from here.</a> Biotechnology Advances. 27 (6), 1023-1027 (2009).</li><li>Shukla, A. A., Gottschalk, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-use+disposable+technologies+for+biopharmaceutical+manufacturing.">Single-use disposable technologies for biopharmaceutical manufacturing.</a> Trends in Biotechnology. 31 (3), 147-154 (2013).</li><li>Ao, S., Gelman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Advances in electrical engineering and computational science. Lecture notes in electrical engineering. 39, (2009).</li><li>Bareither, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+disposable+small+scale+reactor+for+high+throughput+bioprocess+development:+a+proof+of+concept+study.">Automated disposable small scale reactor for high throughput bioprocess development: a proof of concept study.</a> Biotechnology and Bioengineering. 110 (12), 3126-3138 (2013).</li><li>Kang, Y., Ludwig, D. L., Balderes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+can+cell+culture+flocculation+offer+for+antibody+purification+processes.">What can cell culture flocculation offer for antibody purification processes.</a> Pharmaceutical Bioprocessing. 2 (6), 483-485 (2014).</li><li>Choe, W., Durgannavar, T. A., Chung, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc-Binding+Ligands+of+Immunoglobulin+G:+An+Overview+of+High+Affinity+Proteins+and+Peptides.">Fc-Binding Ligands of Immunoglobulin G: An Overview of High Affinity Proteins and Peptides.</a> Materials (Basel). 9 (12), (2016).</li><li>Sch&#228;pper, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+microbioreactors+in+fermentation+process+development:+a+review.">Application of microbioreactors in fermentation process development: a review.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 395 (3), 679-695 (2009).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbioreactors+for+Bioprocess+Development.">Microbioreactors for Bioprocess Development.</a> Journal of the Association for Laboratory Automation. 12 (3), 143-151 (2007).</li><li>Cla&#223;en, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectroscopic+sensors+for+in-line+bioprocess+monitoring+in+research+and+pharmaceutical+industrial+application.">Spectroscopic sensors for in-line bioprocess monitoring in research and pharmaceutical industrial application.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 409 (3), 651-666 (2017).</li><li>Janoschek, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+to+transfer+a+fed-batch+platform+process+into+semi-perfusion+mode:+The+benefit+of+automated+small-scale+bioreactors+compared+to+shake+flasks+as+scale-down+model.">A protocol to transfer a fed-batch platform process into semi-perfusion mode: The benefit of automated small-scale bioreactors compared to shake flasks as scale-down model.</a> Biotechnology Progress. 35 (2), 2757 (2019).</li></ol>

수율을 높이기 위한 공정의 최적화는 바이오 제약 산업에서 매우 중요합니다. 쉐이크 플라스크는 잠재적으로 균주의 스크리닝에 사용될 수 있다; 그러나 pH 및 DO와 같은 공정 파라미터의 모니터링은 플라스크에서 사용할 수 없습니다. 마이크로 바이오리액터는 공정을 지속적으로 모니터링하고 제어할 수 있다는 장점이 있습니다. 마이크로 바이오리액터의 이러한 제어 루프는 또한 더 큰 규모의 ?...

글로벌 바이오 의약품 시장은 2018년에 2,500억 달러 이상의 가치를 지니고 있으며 지속적으로1개사업을 확장하고 있습니다. 제약 회사들은 작은 분자 약물을 생산하는 것에서 재조합 단백질과 같은 생명 공학적으로 생산된 치료제로 옮겨가고 있습니다. 이들 만이 1,500억 달러 이상의 수익을 책임지고있습니다. 포유류 세포는 이제 이러한 약제학적 재조합 단백질의 생산에 광범위하게 사용된다. 현재 포유류 세포에 의해 생산된 68개의 승인된 제품 중 57개는 중국 햄스터 난소 세포(CHO)에 의해 생산된다2. CHO 세포는 특히 번역 후 수정을 필요로 하는 재조합 단백질의 생산에 사용됩니다. 이들 세포는 현탁액에서 성장함에 따라 바람직하며, 이에 따라 화학적으로 정의된 배지3,,4. CHO 세포를 사용하는 또 다른 장점은 생성물의 글리칸 구조가 인간 단일클론 항체(mAb)의 글리칸 구조와 유사하고 유전자 증폭5로 인한 재조합 단백질 수율 및 특이적 생산성을 초래한다는것이다.
재조합 CHO (rCHO) 세포 배양의 수율은 지난 2 년간 백 배 증가했습니다. 이러한 개선은 공정 파라미터의 최적화, 공급 전략 및 화학적으로 정의된 배지6의혈청 자유의 개발에 기인한다. 의약품의 요구 사항의 증가와 함께, 생산 공정의 개발을위한 비용 및 시간 효율에 대한 압력이 증가7. 제품 품질을 보장하면서 압력을 줄이기 위해 설계 품질 (QbD)에 제약 산업의 초점을 리디렉션했습니다. QbD는 제품 생산과 공정을 이해하는 데 사용됩니다. ObD에 사용되는 중요한 도구는 실험 설계(DOE)입니다. 다양한 입력 변수와 결과 출력 데이터 간의 관계를 표시하여 프로세스에 대한 이해를 높이는 데 도움이 됩니다. 생물 공정을 최적화하기 위해 DOE 접근법을 적용하는 것은 공정 조건을 동화하고 적조기 수량 및 품질을 증가시키는 프로젝트의 초기 단계에서 유용합니다. 이 방법은 구식 전략인 한 번에 한 단계(OFAT)와 비교할 때 유용합니다. 고전, 샤인 또는 타구치를 사용하여 DOE에 대한 통계적 접근 방식은 OFAT8보다훨씬 우수합니다.
프로세스 및 미디어 최적화는 쉐이크 플라스크에서 수행할 수 있습니다. 플라스크는 상대적으로 저렴합니다. 그러나 온도, pH 및 용존 산소(DO)와 같은 파라미터를 제어할 수 없습니다. 이러한 단점을 극복하기 위해 0.5L ~ 5L의 작업량에 이르는 다용도 벤치탑 바이오리액터를 사용할 수 있습니다. 반응기는 광범위한 온라인 모니터링 및 공정 제어를 제공합니다. 그러나, 다용도 바이오리액터의 사용은 시간과 노동 집약적이다. 이러한 단점을 극복하기 위해 벤치탑 바이오리액터와 쉐이크 플라스크의 손쉬운 취급을 모니터링하는 포괄적인 공정을 결합한 새로운 일회용 바이오리액터가 사용된다. 높은 처리량 스크리닝 시스템과 일회용 기술은 공정 성능 및 개발의 효율성을 향상시키는 데기여했습니다 9.
이 문서에서는 자동화된 마이크로 바이오리액터(AMBR) 소프트웨어에 레시피를 로드하는 지침이 나열되어 있습니다. 이 실험의 과정에서 상이한 교반기 속도 및 pH가 생존 가능한 세포 농도(VCC) 및 기중기에 미치는 영향이 연구된다. 실험 결과 및 분석은 실험 소프트웨어 MODDE 12의 설계로 수행된다. 제품 분석은 단백질 A 컬럼이 있는 고압 액체 크로마토그래피(HPLC) 시스템에서 수행됩니다. mAb의 Fc 영역이 높은 친화성10,,11을가진 단백질 A에 결합한다는 원리에 기초한다. 이 방법을 사용하면 mAb를 식별하고 정량화할 수 있습니다. 정량화는 280 nm에서 측정된 용출 피크 영역에 걸쳐 수행된다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL disposable pipette tips, sterilized</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 mM L-glutamine</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>25-005-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Well deep well plates</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL disposable pipette tips, sterilized</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ambr 15 automated microbioreactor system</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>001-2804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ambr 15 Cell Culture 24 Disposable Bioreactors - Sparged</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>001-1B86</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifoam C Emulsion</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>A8011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle Top Sterile filter</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>CLS431474</td>
			<td>0.1 &#956;m pore size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CEDEX Detergent (3% Mucosol)</td>
			<td>Roche Innovatis AG</td>
			<td>05-650-658-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counter</td>
			<td>Roche Innovatis AG</td>
			<td>05-650-216-001</td>
			<td>CEDEX HiRes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHO DG44 cell line</td>
			<td>Cellca, Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Feed Media A (FMA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Feed Media B (FMB)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Production Medium</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Stock Culture Meium</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromaster high pressure liquid chromatography system</td>
			<td>VWR International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Centrifuge tube</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>SIAL0790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1070179026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>56-40-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC Vials</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>SUPLSU860181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>P4417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein A Column</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1502226</td>
			<td>POROS&#8482; A 1.7&#160;mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>7558-79-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>VWRVK940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>YSI</td>
			<td>YSI Inc</td>
			<td>2900D</td>
			<td>YSI 2900 Select</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

process optimization using high throughput automated micro-bioreactors in chinese hamster ovary cell cultivation

원하는 제품의 수율을 높이기 위해 바이오 공정의 최적화는 바이오 제약 산업에서 중요합니다. 이것은 변형 률 선택과 생물 공정 매개 변수를 개발하여 달성 할 수 있습니다. 이 목적을 위해 사용 된 쉐이크 플라스크. 그러나, 그들은 pH 및 용존 산소 (DO)와 같은 공정 파라미터를 제어 할 수있는 능력이 부족합니다. 이러한 한계는 자동화된 마이크로 바이오리액터의 도움으로 극복될 수 있다. 이러한 생물 반응기는 더 큰 규모로 재배를 모방합니다. 이 시스템의 주요 장점 중 하나는 소프트웨어에 실험 설계(DOE)를 통합하는 것입니다. 이러한 통합을 통해 여러 공정 파라미터를 동시에 변경할 수 있는 설계를 수립할 수 있습니다. 중요한 공정 파라미터와 최적의 바이오 공정 조건을 소프트웨어 내에서 분석할 수 있습니다. 여기에 제시된 작업의 초점은 재배 실행 내에서 DOE의 소프트웨어 및 통합에서 프로세스 설계와 관련된 단계를 사용자에게 소개하는 것입니다.

본 연구에서 수행된 재배에 대한 개요는 그림 2에제시되어 있습니다.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60577/60577fig02.jpg"> 도 2: 배양스테이션에서 pH 및 교반기 속도 프로파일을 시험하기 위한 실험 조건의 개략적 표현. 그림은 또한 선박을 배치하는 올바른 레이아웃을 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/f...

Watch this Scientific Journal Video about Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation at JoVE.com

Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation

여기에서, 우리는 단백질 A 열을 사용하여 세포 수확 및 단백질 정량화에 선행된 자동화된 마이크로 bioreactor에 있는 실험의 디자인을 실행하는 상세한 절차를 제시합니다.

중국 햄스터 난소 세포 재배에서 고처리량 자동화 마이크로 바이오리액터를 사용한 공정 최적화

Optimization of bioprocesses to increase the yield of desired products is of importance in the biopharmaceutical industry. This can be achieved by strain ...

이 비디오에서 사용자는 실험 또는 DOE 설계를 계획하고 실행하여 마이크로 생물 반응기 소프트웨어에 도입했습니다. 분석기 보조 밸브는 공정 상태를 최적화하는 데도 입증됩니다. 모뎀을 자동화된 마이크로 바이오리소터 소프트웨어에 통합하는 것은 데이터 분석을 위한 공식적인 것입니다.많은 수의 실험을 소규모로 동시에 계획하고 실행할 수 있습니다. 절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 박사 과정 학생 인 타마나 나그라익 (Tamanna Nagraik)이 될 것입니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 주요 재배에서 사전 배양 절차로 시작합니다.새 실험을 만들려면 Amber 자체 배양 소프트웨어를 열고 소개 탭에서 클릭하여 새 실험을 만듭니다. 새 실험 탭에서 실험 이름과 실험이 수행되는 날짜와 함께 입력합니다. 재배 중에 사용되는 선박의 배양소의 검문소를 활성화합니다.DOE 실험을 프로그래밍하는 동안 자동 추가 DOE 태그가 활성화되어 쉽게 전환할 수 있습니다. 다음 탭으로 전환하려면 다음 탭을 클릭합니다. 항폼, 접종, 사료 및 포도당과 함께 용기에 미디어를 추가하는 것에 대한 정보를 설정하려면 추가 미디어 플레이트"체크포인트를 활성화합니다.배지를 포함하는 플레이트의 플레이트 유형, 이름 및 위치를 정의합니다. 용기에 미디어를 추가하려면 클릭하십시오. 용기에 추가할 미디어의 볼륨을 입력합니다.플레이트에서 선박으로의 미디어 전송 매핑을 정의합니다. 다음 탭으로 전환하려면 다음 탭을 클릭합니다. 미디어 정보가 소프트웨어에 공급된 후 재배 조건을 할당합니다.조건 매체를 클릭하고 온도, 대상 DO, 상부 PH 제한 및 교반 RPM을 채웁니다. 그런 다음 교반을 클릭"또는 아래로 저어. 혈관에 접종을 추가하려면 세포 판을 추가하려면 활성화하십시오.배지를 포함하는 플레이트의 플레이트 유형, 이름 및 위치를 정의합니다. 용기에 셀을 추가하려면 클릭하십시오. 접종 시간과 용기에 추가될 매체의 부피를 입력합니다.액체 처리기에 의해 이동 된 경로를 정의하여 플레이트에서 용기로 셀을 전송합니다. 다음 탭으로 전환하려면 다음 탭을 클릭합니다. 사료, 포도당 및 항폼의 첨가를 설정하려면, 사료 플레이트를 추가하고 플레이트 유형, 이름 및 위치를 정의한다.용기에 사료를 추가하고 용기에 추가할 수 있는 사료의 부피를 입력합니다. 재배에 따라 추가 된 사료 수를 추가합니다. 이 재배를 위해, 반응기는 24 시간마다 72 시간 후에 공급됩니다.데이터를 추가된 셀에서 지연으로 입력하여 수유 사이의 시간 지연을 수동으로 추가합니다. 먹이의 첫 날은 접종72 시간 후이며, 다음 날은 96 시간 후에 등등입니다. 플레이트에서 선박으로 이송하는 매핑을 정의합니다.재배 중에 샘플링을 설정하려면 샘플 플레이트를 추가하고 플레이트 유형, 이름 및 위치를 정의합니다. 선박에서 샘플을 채취하여 검사하고 용기에서 제거할 시료의 부피를 입력합니다. 재배 의 전체 과정에서 볼륨이 10 밀리터 미만감소하지 않는지 확인합니다.재배 중에 채취해야 할 샘플 수를 추가합니다. 수유와 마찬가지로 각 입력 샘플 점에 대해 용기에서 제거되는 샘플의 시간을 추가합니다. 프로세스를 저장합니다.이제 실행 준비가 되었습니다. 마지막으로, 용기에서 플레이트로 샘플 의 전송 매핑을 정의합니다. 호박색 15 DOE 소프트웨어를 엽니 다.조사를 클릭"하고 새 를 선택합니다. 새 DOE 조사 이름을 작성하여 "대화 상자 만들기"를 입력합니다. DOE 조사에 실험을 할당하려면 다양한 매개 변수를 연구하기 위해 만든 레시피를 엽니다.찾아보기를 클릭하고 각 실험을 선택합니다. 선박 태그가 이미 열에 등록되어 있습니다. 원하는 DOE 계수를 정의하려면 매개 변수를 선택하고 레이블이 지정된 열DOE 계수를 클릭합니다.새 를 선택하고 단위, 약어뿐만 아니라 요인의 하부 및 상한을 추가합니다. 응답 탭에서 데이터 분석에 대해 고려해야 할 값을 정의합니다. DOE 응답 편집을 클릭하고 응답, 약어, 단위 및 최소 및 최대 제한의 이름을 정의합니다.응답이 정의되면 각 응답에 대해 황색 변수를 선택하고 정의합니다. 반응은 미생물 생물 반응기 변수와 자동으로 연관될 수 있다. 드롭다운 목록에서 필요한 변수를 선택합니다.요구 사항에 따라 각 응답에 대한 방정식을 변경합니다. 최소, 최대, 첫 번째, 마지막 데이터 및 평균 데이터 간의 선택 입니다. 디자인을 만들려면 시작 설계 마법사를 사용하여 실험 설계 유형을 선택하고 복제 및 중앙 점 수를 추가하거나 제거합니다.디자인과 모델의 선택을 결정하는 목표를 선택합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 앰버 셀프 배양 소프트웨어로 가져올 수 있는 작업 패킷을 완료하고 만듭니다. 실험 탭에서 DOE 실험 만들기를 클릭하고 DOE 소프트웨어를 사용하여 만든 작업 패킷을 찾아봅보십시오.시작을 클릭하여 프로세스를 초기화합니다. 실험이 실행되면 내보내기 DOE 결과를 사용하여 데이터를 내보냅니다. 내보내기 DOE 결과"창이 열리고 배양 용기와 역을 나타내는 행이 테이블에 나열됩니다.원하는 행을 선택하고 선택한 행 내보내기"또는 내보내기 실험 데이터"를 클릭하여 모든 결과를 저장하고 추가 분석을 위해 파일을 저장합니다. 결과를 "탭"탭으로 전환하고 가져오기 결과를 선택하여 황색 DOE 모듈로 데이터를 가져옵니다. 원하는 데이터 파일을 찾아보고 결과를 분석합니다.자동화된 미생물 생물 반응기의 세포 성장은 다용도 생물 반응기와 유사합니다. 3개의 다른 저울에서 세포 농도를 비교할 때, 15밀리리터 자동 미생물 생물반응기는 2리터 유리 생물반응기를 모방하는 것으로 관찰된다. 쉐이크 플라스크의 결과는 호박의 이점을 나타내는 것과도 비교됩니다.다른 교반 속도와 PH의 영향은 자동화 된 미생물 생물 반응기에서 연구된다. 여기에 도시된 것은 상이한 미생물 생물반응기에서 실행 가능한 세포 농도, 또는 VCC, 및 단일클론 항체 농도의 비교이다. VCC에 대한 PH 6.9의 부정적인 영향을 관찰할 수 있다.추가적으로, 세포의 성장은 PH 7.1에 비해 PH 7.3에서 배양하에서 현저하게 향상되었다. 여기에 표시된 VCC 및 단일 클론 항체 농도의 응답 윤곽 플롯이 있습니다. 값은 동일한 PH 및 다른 교반기 속도를 가진 용기에서 비교할 수 있으며, 이 공정을 위해 수집된 교반기 속도는 공정 출력에 큰 영향을 미치지 않는다는 것을 나타냅니다.실험을 실행하는 동안 오류를 방지하기 위해 컴퓨터에 제공된 모든 지침을 주의 깊게 작성해야 합니다. 이 소프트웨어는 유연하고 한 번에 여러 실험을 실행할 수 있으므로 프로세스를 최적화하는 데 걸리는 시간을 줄일 수 있습니다. 실험의 설계는 생체 공정 분야에서 유용하며, 그 결과는 지식 기반 공정 이해를 제공하므로 다른 유기체로 어느 정도 확장 될 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Developing Custom Chinese Hamster Ovary-host Cell Protein Assays using Acoustic Membrane Microparticle Technology

어쿠스틱 막 Microparticle 기술을 사용하여 개발 사용자 지정 중국어 햄스터 난소 - 숙주 세포의 단백질 Assays

Custom assays for unique proteins are often limited to time consuming manual detection and quantitation techniques such as ELISA or Western blots due to ...

연구

생체공학

High Throughput Single-cell and Multiple-cell Micro-encapsulation

높은 처리량 마이크로 캡슐 단일 셀 및 다중 셀

Microfluidic encapsulation methods have been previously utilized to capture cells in picoliter-scale aqueous, monodisperse drops, providing confinement ...

Using Tomoauto: A Protocol for High-throughput Automated Cryo-electron Tomography

Tomoauto 사용 : 프로토콜 높은 처리량 자동화 된 곳을 알아내는 - 전자 단층 촬영을 위해

Cryo-electron tomography (Cryo-ET) is a powerful three-dimensional (3-D) imaging technique for visualizing macromolecular complexes in their native ...

Generic Protocol for Optimization of Heterologous Protein Production Using Automated Microbioreactor Technology

자동화 된 Microbioreactor 기술을 사용 하 여 분리 단백질 생산의 최적화를 위한 일반 프로토콜

A core business in industrial biotechnology using microbial production cell factories is the iterative process of strain engineering and optimization of ...

Automated Slide Scanning and Segmentation in Fluorescently-labeled Tissues Using a Widefield High-content Analysis System

자동된 슬라이드 스캔 및 Widefield 하이 콘텐츠 분석 시스템을 사용 하 여 붙일 표시 된 조직에서 시장 세분화

Automated slide scanning and segmentation of fluorescently-labeled tissues is the most efficient way to analyze whole slides or large tissue sections. ...

Comprehensive Evaluation of the Effectiveness and Safety of Placenta-Targeted Drug Delivery Using Three Complementary Methods

3 보완 방법을 사용 하 여 태 반 대상 약물 전달의 안전과 효율성의 종합 평가

No effective treatments currently exist for placenta-associated pregnancy complications, and developing strategies for the targeted delivery of drugs to ...

Use of High-Throughput Automated Microbioreactor System for Production of Model IgG1 in CHO Cells

높은 처리량의 사용 모델 IgG1 조 세포에서의 생산을 위한 Microbioreactor 시스템 자동화

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of ...

Purification and Analytics of a Monoclonal Antibody from Chinese Hamster Ovary Cells Using an Automated Microbioreactor System

자동화된 미생물체 시스템을 사용하여 중국 햄스터 난소 세포의 단일 클론 항체의 정화 및 분석

Monoclonal antibodies (mAbs) are one of the most popular and well-characterized biological products manufactured today. Most commonly produced using ...

Generation of Dynamical Environmental Conditions using a High-Throughput Microfluidic Device

고처리량 미세 유체 장치를 사용하여 동적 환경 조건의 생성

Mimicking in vivo environmental conditions is crucial for in vitro studies on complex life machinery. However, current techniques targeting live cells and ...