Name: process optimization using high throughput automated micro-bioreactors in chinese hamster ovary cell cultivation
Uploaded: 2020-05-18T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation at JoVE.com

Forfatterne vil gjerne takke Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF), Det føderale utdannings- og forskningsdepartementet, Tyskland og BioProcessing-teamet til Sartorius Stedim Biotech GmbH, Tyskland, for deres støtte.

1. Preculture Prosedyre
MERK: Rekombinant CHO DG44 celler med en levedyktig cellekonsentrasjon på 1 x 107 celler / ml brukes for denne protokollen.
<ol><li>Tin hetteglasset som inneholder 1,2 ml celler til romtemperatur og overfør umiddelbart cellesuspensjonen til et 15 ml konisk sentrifugerør som inneholder 10 ml kaldt frømedium.</li>
	<li>Sentrifuge det koniske sentrifugerøret i 5 minutter ved 190 x g og romtemperatur og kast supernatanten.</li>
	<...

<ol>
	<li>Walsh, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biopharmaceutical+benchmarks+2018.">Biopharmaceutical benchmarks 2018.</a> Nature Biotechnology. 36, 1136 (2018).</li><li>Kim, J. Y., Kim, Y., Lee, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CHO+cells+in+biotechnology+for+production+of+recombinant+proteins:+current+state+and+further+potential.">CHO cells in biotechnology for production of recombinant proteins: current state and further potential.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 93 (3), 917-930 (2012).</li><li>Lai, T., Yang, Y., Ng, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+Mammalian+cell+line+development+technologies+for+recombinant+protein+production.">Advances in Mammalian cell line development technologies for recombinant protein production.</a> Pharmaceuticals (Basel). 6 (5), 579-603 (2013).</li><li>Carlage, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+dynamic+changes+in+the+proteome+of+a+Bcl-XL+overexpressing+Chinese+hamster+ovary+cell+culture+during+exponential+and+stationary+phases.">Analysis of dynamic changes in the proteome of a Bcl-XL overexpressing Chinese hamster ovary cell culture during exponential and stationary phases.</a> Biotechnology Progress. 28 (3), 814-823 (2012).</li><li>Hacker, D. L., de Jesus, M., Wurm, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=25+years+of+recombinant+proteins+from+reactor-grown+cells+-+where+do+we+go+from+here.">25 years of recombinant proteins from reactor-grown cells - where do we go from here.</a> Biotechnology Advances. 27 (6), 1023-1027 (2009).</li><li>Shukla, A. A., Gottschalk, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-use+disposable+technologies+for+biopharmaceutical+manufacturing.">Single-use disposable technologies for biopharmaceutical manufacturing.</a> Trends in Biotechnology. 31 (3), 147-154 (2013).</li><li>Ao, S., Gelman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Advances in electrical engineering and computational science. Lecture notes in electrical engineering. 39, (2009).</li><li>Bareither, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+disposable+small+scale+reactor+for+high+throughput+bioprocess+development:+a+proof+of+concept+study.">Automated disposable small scale reactor for high throughput bioprocess development: a proof of concept study.</a> Biotechnology and Bioengineering. 110 (12), 3126-3138 (2013).</li><li>Kang, Y., Ludwig, D. L., Balderes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+can+cell+culture+flocculation+offer+for+antibody+purification+processes.">What can cell culture flocculation offer for antibody purification processes.</a> Pharmaceutical Bioprocessing. 2 (6), 483-485 (2014).</li><li>Choe, W., Durgannavar, T. A., Chung, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc-Binding+Ligands+of+Immunoglobulin+G:+An+Overview+of+High+Affinity+Proteins+and+Peptides.">Fc-Binding Ligands of Immunoglobulin G: An Overview of High Affinity Proteins and Peptides.</a> Materials (Basel). 9 (12), (2016).</li><li>Sch&#228;pper, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+microbioreactors+in+fermentation+process+development:+a+review.">Application of microbioreactors in fermentation process development: a review.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 395 (3), 679-695 (2009).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbioreactors+for+Bioprocess+Development.">Microbioreactors for Bioprocess Development.</a> Journal of the Association for Laboratory Automation. 12 (3), 143-151 (2007).</li><li>Cla&#223;en, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectroscopic+sensors+for+in-line+bioprocess+monitoring+in+research+and+pharmaceutical+industrial+application.">Spectroscopic sensors for in-line bioprocess monitoring in research and pharmaceutical industrial application.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 409 (3), 651-666 (2017).</li><li>Janoschek, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+to+transfer+a+fed-batch+platform+process+into+semi-perfusion+mode:+The+benefit+of+automated+small-scale+bioreactors+compared+to+shake+flasks+as+scale-down+model.">A protocol to transfer a fed-batch platform process into semi-perfusion mode: The benefit of automated small-scale bioreactors compared to shake flasks as scale-down model.</a> Biotechnology Progress. 35 (2), 2757 (2019).</li></ol>

Optimalisering av prosessen for å øke utbyttet er av avgjørende betydning i biofarmasøytisk industri. Ristflasker kan potensielt brukes til screening av belastningen; Overvåkingen av prosessparametrene som pH og DO er imidlertid utilgjengelig ei kolbene. Mikrobioreaktorene har en fordel da de tillater kontinuerlig overvåking og kontroll av prosessen. Disse kontrollløkkene i mikrobioreaktoren gir også en tilstand som ligner på de i større skala, og dermed gir resultater som kan sammenlignes med de større biorea...

Det globale biofarmasøytiske markedet var verdt mer enn US $ 250 milliarder i 2018 og har kontinuerlig ekspandert1. Farmasøytiske selskaper beveger seg bort fra å produsere små molekylære legemidler til bioteknologisk produserte terapeutiske midler som rekombinant proteiner. Disse alene er ansvarlige for en omsetning på mer enn $ 150 milliarder1. Pattedyrceller er nå mye brukt til produksjon av disse farmasøytiske rekombinantproteiner. I inneværende periode, blant de 68 godkjente produktene produsert av pattedyrceller, produseres 57 av kinesiskhamstereggstokkceller (CHO)2. CHO-celler brukes spesielt til produksjon av rekombinantproteiner som krever post-translasjonelle modifikasjoner. Disse cellene foretrekkes etter hvert som de vokser i en suspensjon og dermed muliggjør reproduserbare resultater i et serumfritt kjemisk definert medium3,,4. Den andre fordelen med å bruke CHO-celler er at glykanstrukturen til produktet ligner på det menneskelige monoklonale antistoffet (mAb) og resulterer i høyere rekombinant proteinutbytte og spesifikk produktivitet på grunn av genforsterkning5.
Utbyttet av rekombinant CHO (rCHO) cellekultur har økt med hundre ganger de siste to tiårene. Denne forbedringen tilskrives optimalisering av prosessparametrene, fôringsstrategi og utvikling av serumfri kjemisk definert medium6. Med økningen i kravene til farmasøytiske produkter øker trykket på kostnader og tidseffektivitet for utviklingen av produksjonsprosessen7. For å redusere trykket samtidig som produktkvaliteten har omdirigert fokuset til den farmasøytiske industrien på Quality by Design (QbD). QbD brukes til å forstå produktproduksjonen samt prosessen. Et viktig verktøy som brukes i ObD er Design of Experiment (DOE). Det bidrar til å øke forståelsen av prosessen ved å avsløre forholdet mellom ulike inndatavariabler og resulterende utdata. Bruk av DOE-tilnærmingen for å optimalisere bioprosessen er gunstig i de tidlige stadiene av prosjektet i assimilering av prosessforholdene og øke titerkvantiteten og kvaliteten. Denne tilnærmingen er gunstig sammenlignet med den gammeldagse strategien: one-factor-at-a-time (OFAT). De statistiske tilnærmingene til DOE ved hjelp av klassisk, shainin eller Taguchi er langt bedre enn OFAT8.
Prosessen og medieoptimaliseringen kan utføres i shake kolbe. Kolbene er relativt billig. Det er imidlertid ikke mulig å kontrollere parametere som temperatur, pH og oppløst oksygen (DO). For å overvinne disse ulempene, kan multiuse benk-top bioreaktorer som spenner fra arbeidsvolum på 0,5 L til 5 L brukes. Reaktorene gir en omfattende on-line overvåking og prosesskontroll. Bruken av multiuse bioreaktoren er imidlertid tid og arbeidskrevende. For å overvinne disse ulempene, brukes en ny engangsbioreaktor som kombinerer den omfattende prosessen med å overvåke benk-top bioreaktoren og enkel håndtering av ristekolben. Det høye gjennomstrømningsscreeningssystemet og engangsteknologien har bidratt til å forbedre effektiviteten av prosessytelse og utvikling9.
I denne artikkelen er retningslinjene for å laste oppskriften i den automatiserte mikrobioreaktoren (AMBR) programvare oppført. Påvirkningen av ulike rørehastigheter og pH på levedyktig cellekonsentrasjon (VCC) og titer studeres i løpet av dette eksperimentet. Det eksperimentelle resultatet og analysen utføres med design av eksperimentprogramvare MODDE 12. Produktanalysen utføres i et høytrykks flytende kromatografi (HPLC) system med en Protein A-kolonne. Det er basert på prinsippet om at Fc-regionen i mAb binder seg til protein A med høy affinitet10,11. Med denne metoden er det mulig å identifisere og kvantifisere mAb. Kvantifiseringen utføres over de målte områdene på 280 nm.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL disposable pipette tips, sterilized</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 mM L-glutamine</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>25-005-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Well deep well plates</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL disposable pipette tips, sterilized</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ambr 15 automated microbioreactor system</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>001-2804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ambr 15 Cell Culture 24 Disposable Bioreactors - Sparged</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>001-1B86</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifoam C Emulsion</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>A8011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle Top Sterile filter</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>CLS431474</td>
			<td>0.1 &#956;m pore size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CEDEX Detergent (3% Mucosol)</td>
			<td>Roche Innovatis AG</td>
			<td>05-650-658-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counter</td>
			<td>Roche Innovatis AG</td>
			<td>05-650-216-001</td>
			<td>CEDEX HiRes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHO DG44 cell line</td>
			<td>Cellca, Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Feed Media A (FMA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Feed Media B (FMB)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Production Medium</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Stock Culture Meium</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromaster high pressure liquid chromatography system</td>
			<td>VWR International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Centrifuge tube</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>SIAL0790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1070179026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>56-40-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC Vials</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>SUPLSU860181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>P4417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein A Column</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1502226</td>
			<td>POROS&#8482; A 1.7&#160;mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>7558-79-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>VWRVK940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>YSI</td>
			<td>YSI Inc</td>
			<td>2900D</td>
			<td>YSI 2900 Select</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

process optimization using high throughput automated micro-bioreactors in chinese hamster ovary cell cultivation

Optimalisering av bioprosesser for å øke utbyttet av ønskede produkter er av betydning i biofarmasøytisk industri. Dette kan oppnås ved belastningsvalg og ved å utvikle bioprosessparametere. Shake kolber har blitt brukt til dette formålet. De mangler imidlertid evnen til å kontrollere prosessparametrene som pH og oppløst oksygen (DO). Denne begrensningen kan overvinnes ved hjelp av en automatisert mikrobioreaktor. Disse bioreaktorene etterligner dyrking i større skala. En av de viktigste fordelene med dette systemet er integreringen av Design of Experiment (DOE) i programvaren. Denne integreringen gjør det mulig å etablere en design der flere prosessparametere kan varieres samtidig. De kritiske prosessparametrene og optimale bioprosessforholdene kan analyseres i programvaren. Fokuset for arbeidet som presenteres her er å introdusere brukeren til trinnene som er involvert i prosessdesign i programvaren og inkorporeringen av DOE innenfor dyrkingskjøringen.

En oversikt over dyrkingen som utføres i denne studien presenteres i figur 2.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60577/60577fig02.jpg"> Figur 2: Skjematisk representasjon av de eksperimentelle forholdene for å teste pH- og rørerhastighetsprofiler i kulturstasjonene. Figuren representerer også riktig layout for å plassere fartøyene. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/6057...

Watch this Scientific Journal Video about Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation at JoVE.com

Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation

Her presenterer vi en detaljert prosedyre for å kjøre en Design of Experiment i en automatisert mikrobioreaktor etterfulgt av celleinnhøsting og proteinkvantifisering ved hjelp av en Protein A-kolonne.

Prosessoptimalisering ved hjelp av høy gjennomstrømning automatiserte mikrobioreaktorer i kinesisk hamster eggstokk celle dyrking

Optimization of bioprocesses to increase the yield of desired products is of importance in the biopharmaceutical industry. This can be achieved by strain ...

I denne videoen introduserte brukerne mikrobioreaktorprogramvaren med planlegging og gjennomføring av design av eksperimenter eller DOE. Analysatorene ekstra ventiler er også demonstrert for å optimalisere prosesstilstanden. Inkorporering av modet i den automatiserte mikrobioreaktorprogramvaren har vært offisiell for dataanalysen.Et stort antall eksperimenter kan planlegges og utføres samtidig i liten skala. Å demonstrere prosedyren vil være Tamanna Nagraik, en ph.d.-student fra laboratoriet mitt. Begynn med pre-kultur prosedyren i hoveddyrking som beskrevet i tekstprotokollen.Hvis du vil opprette et nytt eksperiment, åpner du Amber-programvaren for selvkultur, og i introduksjonsfanen klikker du på og oppretter nytt eksperiment. I den nye eksperimentfanen skriver du inn navnet på eksperimentet sammen med datoen det skal utføres på. Aktiver kontrollpunktet for kulturstasjonen i fartøyene som skal brukes under dyrkingen.De automatisk legge doe koder vil også bli aktivert for en enkel overgang under programmering av DOE eksperimentet. Klikk på neste"for å bytte til neste fane. For å angi informasjon om tilsetning av medier i fartøyet, sammen med anti-skum, inokus, fôr og glukose, aktiver legg til medieplate"-kontrollpunkt.Definer platetypen, navnet og plasseringen av platen som inneholder mediet. Klikk på legg til medier i fartøy. Skriv inn volumet på mediet som skal legges inn i fartøyene.Definer kartleggingen av medieoverføring fra platen til fartøyene. Klikk på neste"for å bytte til neste fane. Etter at medieinformasjonen er matet inn i programvaren, tilordne dyrkingsforholdene.Klikk på betingelsesmedier, og fyll ut temperaturen, målet DO, øvre PH-grense, og rør RPM. Klikk deretter opp omrøring"eller ned omrøring. For å angi tilsetning av inokuler i karene, aktiver legg til celleplate.Definer platetypen, navnet og plasseringen av platen som inneholder mediet. Klikk på legg til celler i fartøy. Angi tidspunktet for inokulasjon og volumet av media som skal legges til fartøyene.Definer banen som er reist av væskebehandlingen for å overføre cellen fra platen til karene. Klikk på neste"for å bytte til neste fane. For å angi tilsetning av fôr, glukose og anti-skum, aktiver tilsetningsmateplaten og definer platetype, navn og plassering.Klikk på legg til fôr til fartøy, og skriv inn volumet på fôret som skal legges til fartøyene. Avhengig av dyrking, legg til antall fôrtillegg. For denne dyrkingen mates reaktoren etter 72 timer hver 24.Legg manuelt til tidsforsinkelsen mellom fôringen ved å skrive inn dataene i forsinkelse fra celler lagt til. Den første dagen med fôring er etter 72 timer med inokulasjon, den neste er etter 96 timer, og så videre. Definer kartleggingen av overføringen av fôret fra platen til fartøyene.Hvis du vil angi prøvetaking under dyrkingen, aktiverer du tilføye prøveplaten", og definerer platetype, navn og plassering. Sjekk ta prøven fra fartøy", og skriv inn volumet på prøven som skal fjernes fra fartøyene. Sørg for at volumet ikke reduseres under 10 mililitere i løpet av hele dyrkingen.Legg til antall prøver som skal tas under dyrkingen. I likhet med fôring, legg til tidspunktet for prøven som fjernes fra fartøyet for hvert inngangsprøvepunkt. Lagre prosessen.Den er nå klar for henrettelse. Til slutt definerer du kartleggingen av overføringen av prøven fra karene til platen. Åpne Amber 15 DOE-programvaren.Klikk på etterforskning"og velg nytt. Skriv inn navnet på den nye DOE-undersøkelsen i dialogboksen Opprett undersøkelse". For å tilordne et eksperiment til DOE-undersøkelsen, åpne oppskriften som er opprettet for å studere de forskjellige parametrene.Klikk på bla gjennom, og velg det respektive eksperimentet. Fartøyets koder er allerede vervet i kolonnen. For å definere ønsket DOE-faktor, velg parameteren og klikk på kolonnen merket, DOE-faktor.Velg ny", og legg til enhetene, forkortelsen, samt nedre og øvre grense for faktorene. I svar-kategorien definerer du verdiene som skal vurderes for analysen av dataene. Klikk på rediger DOE-svar, og definer navnet på svar, forkortelse, enheter og minimums- og maksimumsgrenser.Når svarene er definert, velger du den gule variabelen for hvert svar og definerer. Et svar kan automatisk knyttes til en mikrobe bioreaktor variabel. Velg ønsket variabel fra rullegardinlisten.Endre formelen for hvert svar avhengig av kravet. Valgene mellom minimums-, maksimums-, vare-, siste- og gjennomsnittsdataene. Hvis du vil opprette en utforming, bruker du veiviseren for startutforming til å velge typen eksperimentell utforming og legge til eller fjerne antall repliker og midtpunkter.Velg målet, som bestemmer valget av design og modeller. Fullfør og opprett arbeidspakker som kan importeres til Amber selvkulturprogramvare som beskrevet i tekstprotokollen. Klikk på opprett DOE-eksperiment i eksperimentfanen, og bla gjennom etter arbeidspakken som er opprettet ved hjelp av DOE-programvaren.Initialiser prosessen ved å klikke start. Når eksperimentet er utført, eksporterer du dataene ved hjelp av eksportresultater for DOE. Eksporten DOE resultater "vinduet åpnes, og radene som indikerer kulturfartøyet og stasjonen er oppført i tabellen.Velg de ønskede radene, og klikk på eksporterte valgte rader"eller eksporter eksperimentelle data"for å lagre alle resultatene og lagre filen for videre analyse. Importer dataene til Amber DOE-modulen ved å bytte til resultatene"-fanen og velge importresultater. Bla gjennom etter ønsket datafil, og klikk analyser resultater.Celleveksten i de automatiserte mikrobebioreaktorene kan sammenlignes med multibruksbioreaktorene. Ved sammenligning av cellekonsentrasjonen fra tre forskjellige skalaer, observeres det at den 15 milliliter automatiserte mikrobebioreaktoren etterligner den to liters glassbioreaktoren. Resultatene fra shake kolben er også sammenlignet med å vise fordelen av Amber.Påvirkningen av forskjellig rørehastighet og PH studeres i de automatiserte mikrobebioreaktorene. Vist her er en sammenligning av levedyktig cellekonsentrasjon, eller VCC, og monoklonal antistoffkonsentrasjon i de forskjellige mikrobebioreaktorene. Den negative påvirkningen av PH 6.9 på VCC kan observeres.I tillegg forbedret veksten av cellene seg betydelig under kulturen ved PH 7.3 sammenlignet med PH 7.1. Vist her er responskonturplottene til VCC og monoklonal antistoffkonsentrasjon. Verdiene er sammenlignbare i fartøyene med samme PH og forskjellig rørehastighet, noe som indikerer at rørerhastigheten som samles inn for denne prosessen ikke har noen signifikant innflytelse på prosessproduksjonen.Hver instruksjon gitt til maskinen må være nøye skrevet for å unngå feil under utførelsen av eksperimentet. Programvaren er fleksibel, og den kan kjøre en rekke eksperimenter samtidig, og dermed redusere tiden det tar å optimalisere en prosess. Utformingen av eksperimentet er nyttig innen bioprosess, da resultatene gir kunnskapsbasert prosessforståelse, som kan utvides til andre organismer til en viss grad.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Developing Custom Chinese Hamster Ovary-host Cell Protein Assays using Acoustic Membrane Microparticle Technology

Custom assays for unique proteins are often limited to time consuming manual detection and quantitation techniques such as ELISA or Western blots due to ...

High Throughput Single-cell and Multiple-cell Micro-encapsulation

Høy gjennomstrømning encellede og Multiple-celle Micro-innkapsling

Microfluidic encapsulation methods have been previously utilized to capture cells in picoliter-scale aqueous, monodisperse drops, providing confinement ...

Using Tomoauto: A Protocol for High-throughput Automated Cryo-electron Tomography

Bruke Tomoauto: En protokoll for høy gjennomstrømming Automated Cryo-elektron Tomography

Cryo-electron tomography (Cryo-ET) is a powerful three-dimensional (3-D) imaging technique for visualizing macromolecular complexes in their native ...

Generic Protocol for Optimization of Heterologous Protein Production Using Automated Microbioreactor Technology

Generisk protokoll for optimalisering av Heterologous Protein produksjonen ved hjelp av automatisert Microbioreactor teknologi

A core business in industrial biotechnology using microbial production cell factories is the iterative process of strain engineering and optimization of ...

Automated Slide Scanning and Segmentation in Fluorescently-labeled Tissues Using a Widefield High-content Analysis System

Automatisert lysbildet skanning og segmentering i Fluorescently-merket vev bruker Widefield høyt innhold analysesystem

Automated slide scanning and segmentation of fluorescently-labeled tissues is the most efficient way to analyze whole slides or large tissue sections. ...

Comprehensive Evaluation of the Effectiveness and Safety of Placenta-Targeted Drug Delivery Using Three Complementary Methods

Omfattende evaluering av effektiviteten og sikkerheten til morkaken målrettede narkotika-leveranser med tre komplementære metoder

No effective treatments currently exist for placenta-associated pregnancy complications, and developing strategies for the targeted delivery of drugs to ...

Use of High-Throughput Automated Microbioreactor System for Production of Model IgG1 in CHO Cells

Bruk av høy gjennomstrømming automatisert Microbioreactor System for produksjon av modellen IgG1 i CHO celler

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of ...

Purification and Analytics of a Monoclonal Antibody from Chinese Hamster Ovary Cells Using an Automated Microbioreactor System

Rensing og analyse av en monoklonale antistoff fra kinesisk hamster eggstokk celler ved hjelp av en automatisert Microbioreactor system

Monoclonal antibodies (mAbs) are one of the most popular and well-characterized biological products manufactured today. Most commonly produced using ...

Generation of Dynamical Environmental Conditions using a High-Throughput Microfluidic Device

Generering av dynamiske miljøforhold ved hjelp av en mikrofluidisk enhet med høy gjennomstrømning

Mimicking in vivo environmental conditions is crucial for in vitro studies on complex life machinery. However, current techniques targeting live cells and ...