Name: process optimization using high throughput automated micro-bioreactors in chinese hamster ovary cell cultivation
Uploaded: 2020-05-18T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation at JoVE.com

Yazarlar Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF), Federal Eğitim ve Araştırma Bakanlığı, Almanya ve Sartorius Stedim Biotech GmbH, Almanya Biyoİşleme ekibi, destek için teşekkür etmek istiyorum.

1. Kültür Öncesi Prosedürü
NOT: Bu protokol için 1 x 107 hücre/mL canlı hücre konsantrasyonu olan rekombinant CHO DG44 hücreleri kullanılmaktadır.
<ol><li>1,2 mL hücre içeren şişeyi oda sıcaklığına kadar eritin ve hücre süspansiyonuna hemen 10 mL soğuk tohum lu orta içeren 15 mL konik santrifüj tüpüne aktarın.</li>
	<li>Konik santrifüj tüpünü 190 x g ve oda sıcaklığında 5 dakika santrifüj edin ve süpernatantı atın.<...

<ol>
	<li>Walsh, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biopharmaceutical+benchmarks+2018.">Biopharmaceutical benchmarks 2018.</a> Nature Biotechnology. 36, 1136 (2018).</li><li>Kim, J. Y., Kim, Y., Lee, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CHO+cells+in+biotechnology+for+production+of+recombinant+proteins:+current+state+and+further+potential.">CHO cells in biotechnology for production of recombinant proteins: current state and further potential.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 93 (3), 917-930 (2012).</li><li>Lai, T., Yang, Y., Ng, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+Mammalian+cell+line+development+technologies+for+recombinant+protein+production.">Advances in Mammalian cell line development technologies for recombinant protein production.</a> Pharmaceuticals (Basel). 6 (5), 579-603 (2013).</li><li>Carlage, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+dynamic+changes+in+the+proteome+of+a+Bcl-XL+overexpressing+Chinese+hamster+ovary+cell+culture+during+exponential+and+stationary+phases.">Analysis of dynamic changes in the proteome of a Bcl-XL overexpressing Chinese hamster ovary cell culture during exponential and stationary phases.</a> Biotechnology Progress. 28 (3), 814-823 (2012).</li><li>Hacker, D. L., de Jesus, M., Wurm, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=25+years+of+recombinant+proteins+from+reactor-grown+cells+-+where+do+we+go+from+here.">25 years of recombinant proteins from reactor-grown cells - where do we go from here.</a> Biotechnology Advances. 27 (6), 1023-1027 (2009).</li><li>Shukla, A. A., Gottschalk, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-use+disposable+technologies+for+biopharmaceutical+manufacturing.">Single-use disposable technologies for biopharmaceutical manufacturing.</a> Trends in Biotechnology. 31 (3), 147-154 (2013).</li><li>Ao, S., Gelman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Advances in electrical engineering and computational science. Lecture notes in electrical engineering. 39, (2009).</li><li>Bareither, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+disposable+small+scale+reactor+for+high+throughput+bioprocess+development:+a+proof+of+concept+study.">Automated disposable small scale reactor for high throughput bioprocess development: a proof of concept study.</a> Biotechnology and Bioengineering. 110 (12), 3126-3138 (2013).</li><li>Kang, Y., Ludwig, D. L., Balderes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+can+cell+culture+flocculation+offer+for+antibody+purification+processes.">What can cell culture flocculation offer for antibody purification processes.</a> Pharmaceutical Bioprocessing. 2 (6), 483-485 (2014).</li><li>Choe, W., Durgannavar, T. A., Chung, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc-Binding+Ligands+of+Immunoglobulin+G:+An+Overview+of+High+Affinity+Proteins+and+Peptides.">Fc-Binding Ligands of Immunoglobulin G: An Overview of High Affinity Proteins and Peptides.</a> Materials (Basel). 9 (12), (2016).</li><li>Sch&#228;pper, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+microbioreactors+in+fermentation+process+development:+a+review.">Application of microbioreactors in fermentation process development: a review.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 395 (3), 679-695 (2009).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbioreactors+for+Bioprocess+Development.">Microbioreactors for Bioprocess Development.</a> Journal of the Association for Laboratory Automation. 12 (3), 143-151 (2007).</li><li>Cla&#223;en, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectroscopic+sensors+for+in-line+bioprocess+monitoring+in+research+and+pharmaceutical+industrial+application.">Spectroscopic sensors for in-line bioprocess monitoring in research and pharmaceutical industrial application.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 409 (3), 651-666 (2017).</li><li>Janoschek, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+to+transfer+a+fed-batch+platform+process+into+semi-perfusion+mode:+The+benefit+of+automated+small-scale+bioreactors+compared+to+shake+flasks+as+scale-down+model.">A protocol to transfer a fed-batch platform process into semi-perfusion mode: The benefit of automated small-scale bioreactors compared to shake flasks as scale-down model.</a> Biotechnology Progress. 35 (2), 2757 (2019).</li></ol>

Verimi artırmak için sürecin optimizasyonu biyofarmasötik endüstrisinde çok önemlidir. Shake şişeleri potansiyel olarak zorlanma nın taranması için kullanılabilir; ancak, pH ve DO gibi proses parametrelerinin izlenmesi şişelerde kullanılamaz. Mikro-biyoreaktörler, sürecin sürekli izlenmesine ve kontrol altına alabilmesine olanak sağladıkları için avantaja sahiptirler. Mikro-biyoreaktör bu kontrol döngüleri de daha büyük ölçekli benzer bir durum sağlamak ve böylece, daha büyük ölçekli ...

Küresel biyofarmasötik pazarı 2018 yılında 250 milyar doların üzerinde ydi ve sürekli olarak1milyar abd doları hızla genişlemektedir. İlaç şirketleri küçük moleküler ilaçlar üretmekten rekombinant proteinler gibi biyoteknolojik olarak üretilen terapötiklere geçiyorlar. Bu tek başına fazla 150 milyar dolar1gelir sorumludur. Memeli hücreleri artık bu farmasötik rekombinant proteinlerin üretimi için yaygın olarak kullanılmaktadır. Mevcut dönemde, memeli hücreleri tarafından üretilen 68 onaylı ürünler arasında, 57 Çin Hamster yumurtalık hücreleri tarafından üretilmektedir (CHO)2. CHO hücreleri özellikle post-translational değişiklikler gerektiren rekombinant proteinlerin üretimi için kullanılır. Bu hücreler bir süspansiyon büyümek ve bu nedenle bir serum serbest kimyasal olarak tanımlanan orta3,,4çoğaltılabilir sonuçlar etkinleştirmek gibi tercih edilir. CHO hücreleri kullanarak diğer avantajı ürünün glikan yapısı insan monoklonal antikor benzer olmasıdır (mAb) ve gen amplifikasyon nedeniyle daha yüksek rekombinant protein verimi ve spesifik verimlilik sonuçları5.
Rekombinant CHO (rCHO) hücre kültürünün verimi son yirmi yılda yüz kat artmıştır. Bu gelişme proses parametrelerinin optimizasyonu, besleme stratejisi ve serum serbest kimyasal olarak tanımlanan orta6geliştirilmesi atfedilir. Farmasötik ürünlerin gereksinimlerindeki artış ile, üretim sürecinin gelişimi için maliyet ve zaman verimliliği üzerindeki basınç artar7. Ürün kalitesini güvence altına alırken basıncı azaltmak için kalite kalite (QbD) kalite üzerinde ilaç endüstrisinin odak yönlendirmiştir. QbD, ürün üretimini ve süreci anlamak için kullanılır. ObD kullanılan önemli bir araç Deney Tasarımı (DOE). Çeşitli giriş değişkenleri ile ortaya çıkan çıktı verileri arasındaki ilişkiyi ortaya çıkararak sürecin anlaşılmasını artırmaya yardımcı olur. Biyoprosesin optimize etmek için DOE yaklaşımının uygulanması, proses koşullarını asimile etme ve titrek miktarını ve kalitesini artırmada projenin erken aşamalarında yararlıdır. Bu yaklaşım, eski moda strateji ile karşılaştırıldığında yararlıdır: bir faktör-at-a-time (OFAT). Klasik, Shainin veya Taguchi kullanarak DOE istatistiksel yaklaşımlar OFAT8çok daha üstündür.
Süreç ve ortam optimizasyonu shake şişelerinde yapılabilir. Şişeler nispeten ucuzdur. Ancak sıcaklık, pH ve çözünmüş oksijen (DO) gibi parametreleri kontrol etmek mümkün değildir. Bu sakıncaları aşmak için, 0,5 L'den 5 L'ye kadar çok kullanımlı tezgah üstü biyoreaktörler kullanılabilir. Reaktörler kapsamlı bir on-line izleme ve süreç kontrolü sağlar. Ancak, çok kullanımlı biyoreaktör kullanımı zaman ve emek yoğundur. Bu dezavantajları aşmak için, tezgah üstü biyoreaktörün izlenmesi ve shake şişesinin kolay kullanımı nın izlenmesi sürecini birleştiren yeni bir tek kullanımlık biyoreaktör kullanılmaktadır. Yüksek verim tarama sistemi ve tek kullanımlık teknoloji proses performansı ve geliştirme verimliliğini artırmak için katkıda bulunmuştur9.
Bu makalede, otomatik mikro-biyoreaktör (AMBR) yazılımında tarifi yüklemek için kurallar listelenmiştir. Bu deney sırasında farklı karıştırıcı hızlarının ve pH'sının canlı hücre konsantrasyonu (VCC) ve titreşen üzerindeki etkisi incelenmiştir. Deney sonucu ve analizi deney yazılımı MODDE 12 tasarımı ile gerçekleştirilir. Ürün analitiği, Protein A sütunlu yüksek basınçlı sıvı kromatografi (HPLC) sisteminde gerçekleştirilir. MAb'nin Fc bölgesinin yüksek yakınlıklı A proteinine bağlanması prensibine dayanır10,11. Bu yöntemle mAb'yi tanımlamak ve ölçmek mümkündür. Niceleme 280 nm ölçülü elüsyon tepe alanları üzerinde gerçekleştirilir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL disposable pipette tips, sterilized</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 mM L-glutamine</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>25-005-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Well deep well plates</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL disposable pipette tips, sterilized</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ambr 15 automated microbioreactor system</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>001-2804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ambr 15 Cell Culture 24 Disposable Bioreactors - Sparged</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>001-1B86</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifoam C Emulsion</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>A8011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle Top Sterile filter</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>CLS431474</td>
			<td>0.1 &#956;m pore size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CEDEX Detergent (3% Mucosol)</td>
			<td>Roche Innovatis AG</td>
			<td>05-650-658-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counter</td>
			<td>Roche Innovatis AG</td>
			<td>05-650-216-001</td>
			<td>CEDEX HiRes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHO DG44 cell line</td>
			<td>Cellca, Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Feed Media A (FMA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Feed Media B (FMB)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Production Medium</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Stock Culture Meium</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromaster high pressure liquid chromatography system</td>
			<td>VWR International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Centrifuge tube</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>SIAL0790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1070179026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>56-40-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC Vials</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>SUPLSU860181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>P4417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein A Column</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1502226</td>
			<td>POROS&#8482; A 1.7&#160;mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>7558-79-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>VWRVK940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>YSI</td>
			<td>YSI Inc</td>
			<td>2900D</td>
			<td>YSI 2900 Select</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

process optimization using high throughput automated micro-bioreactors in chinese hamster ovary cell cultivation

Biyoproseslerin istenilen ürünlerin verimini artırmak için optimizasyonu biyofarmasötik endüstrisinde önem taşımaktadır. Bu, gerinim seçimi ve biyoproses parametreleri geliştirilerek elde edilebilir. Shake şişeleri bu amaçla kullanılmıştır. Ancak, pH ve çözünmüş oksijen (DO) gibi proses parametrelerini kontrol etme yeteneğinden yoksundurlar. Bu sınırlama otomatik bir mikro-biyoreaktör yardımıyla aşılabilir. Bu biyoreaktörler daha büyük ölçekte ekimi taklit. Bu sistemin en önemli avantajlarından biri, Deneme Tasarımı'nın (DOE) yazılıma entegre sidir. Bu tümleştirme, birden çok işlem parametresini aynı anda çeşitlendirebileceğiniz bir tasarım oluşturulmasını sağlar. Kritik proses parametreleri ve optimum biyoproses koşulları yazılım içinde analiz edilebilir. Burada sunulan çalışmanın odak noktası, kullanıcıyı yazılımda proses tasarımı ve DOE'nin ekim eki ile dahil edilen adımlarla tanıştırmaktır.

Bu çalışmada yapılan ekime genel bir bakış Şekil 2'desunulmuştur.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60577/60577fig02.jpg"> Şekil 2: Kültür istasyonlarındaki pH ve karıştırıcı hız profillerini test etmek için deneysel koşulların şematik gösterimi. Şekil aynı zamanda gemileri yerleştirmek için doğru düzeni temsil eder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_up...

Watch this Scientific Journal Video about Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation at JoVE.com

Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation

Burada, otomatik bir mikro-biyoreaktörde deney tasarımı ve ardından hücre hasadı ve protein nicelemi nin bir Protein A sütunu kullanılarak çalıştırılaması için ayrıntılı bir prosedür saklıyız.

Çin Hamster Yumurtalık Hücre Yetiştiriciliğinde Yüksek İş-İş BulaMetli Otomatik Mikro-Biyoreaktörler Kullanılarak Proses Optimizasyonu

Optimization of bioprocesses to increase the yield of desired products is of importance in the biopharmaceutical industry. This can be achieved by strain ...

Bu videoda, kullanıcılar planlama ve deneyler veya DOE tasarımı yürütülmesi ile mikro biyoreaktör yazılımı içine tanıttı. Analizörler yardımcı vanalar da proses durumunu optimize etmek için gösterilmiştir. Otomatik mikro biyoreaktör yazılımıiçine modet dahil veri analizi için resmi olmuştur.Çok sayıda deneme küçük ölçekte aynı anda planlanabilir ve yürütülebilir. Prosedürü gösteren Tamanna Nagraik, benim laboratuvar bir doktora öğrencisi olacaktır. Metin protokolünde açıklandığı gibi ana tarımda kültür öncesi prosedür ile başlayın.Yeni bir deneme oluşturmak için Amber öz kültür yazılımını açın ve giriş sekmesinde yeni bir deneme oluşturun' seçeneğini tıklayın. Yeni deneme sekmesinde, denemenin yapılacağı tarihle birlikte denemenin adını girin. Ekim sırasında kullanılacak gemilerdeki kültür istasyonu için kontrol noktasını etkinleştirin.Otomatik doe etiketleri de DOE denemeprogramlama sırasında kolay bir geçiş için etkinleştirilir. Sonraki sekmeye geçmek için sonraki"ne tıklayın. Damariçine ortam eklenmesi hakkında bilgi ayarlamak için, anti-köpük ile birlikte, inoculum, yem, ve glikoz, medya plaka eklemek etkinleştirmek"kontrol noktası.Ortamı içeren plaka türünü, adını ve konumunu tanımlayın. Gemilere ortam ekleme'ye tıklayın. Gemilere eklenecek ortamın hacmini girin.Plakadan damarlara medya transferinin haritalamasını tanımlayın. Sonraki sekmeye geçmek için sonraki"ne tıklayın. Medya bilgileri yazılıma aktarıldıktan sonra, yetiştirme koşullarını atayın.Koşul ortamına tıklayın ve sıcaklığı, hedef DO'yu, üst PH limitini ve karıştırma RPM'sini doldurun. Sonra yukarı veya aşağı karıştırma tıklayın. Damarlara inoculum eklenmesini ayarlamak için hücre plakasını etkinleştirin.Ortamı içeren plaka türünü, adını ve konumunu tanımlayın. Damarlara hücre ekleme'yi tıklatın. Aşılama zamanını ve damarlara eklenecek ortamın hacmini girin.Hücreyi plakadan damarlara aktarmak için sıvı işleyicitarafından giden yolu tanımlayın. Sonraki sekmeye geçmek için sonraki"ne tıklayın. Yem, glikoz ve köpük önleyici eklemeyi ayarlamak için, besleme plakası eklemeyi etkinleştirin ve plaka türünü, adını ve konumunu tanımlayın.Damarlara yem ekle'ye tıklayın ve damarlara eklenecek yem hacmini girin. Ekime bağlı olarak, yem ek sayısını ekleyin. Bu ekim için, reaktör her 24 saatte bir 72 saat sonra beslenir.Eklenen hücrelerden gecikmeye veri girerek besleme arasındaki zaman gecikmesini el ile ekleyin. Beslenmenin ilk günü 72 saatlik aşılamadan sonra, bir sonraki gün 96 saat sonra, vesaire. Yemin plakadan damarlara transferinin haritasını tanımlayın.Ekim sırasında örnekleme ayarlamak için, örnek plaka ekle"yi etkinleştirin ve plaka türünü, adını ve konumunu tanımlayın. Gemilerden numune alın" kontrol edin ve damarlardan çıkarılacak numunenin hacmini girin. Ekim boyunca hacmin 10 mililitrenin altına düşmemesini sağlayın.Ekim sırasında alınacak numune sayısını ekleyin. Beslemeye benzer şekilde, her giriş numune noktası için numunenin damardan çıkarıldığı süreyi ekleyin. İşlemi kaydedin.Şimdi idam için hazır. Son olarak, numunenin damarlardan plakaya transferinin haritalamasını tanımlayın. Amber 15 DOE Yazılımını açın.Soruşturma"ya tıklayın ve yeni yi seçin. Create investigation"diyalog kutusuna yeni DOE soruşturmasının adını girin. DOE araştırmasına bir deneme atamak için, farklı parametreleri incelemek için oluşturulan tarifi açın.Gözat'a tıklayın ve ilgili denemeyi seçin. Gemi etiketleri sütunda zaten kayıtlıdır. İstenilen DOE faktörünü tanımlamak için parametreyi seçin ve etiketlenmiş, DOE faktörü olarak etiketlenen sütuna tıklayın.Yeni"yi seçin ve birimlerini, kısaltmayı ve etkenlerin alt ve üst sınırını ekleyin. Yanıtlar sekmesinde, verilerin analizi için dikkate alınacak değerleri tanımlayın. DOE yanıtlarını edit'i tıklatın ve yanıtın adını, kısaltmayı, birimleri ve minimum ve maksimum sınırları tanımlayın.Yanıtlar tanımlandıktan sonra, her yanıt için kehribar değişkenini seçin ve tanımlayın. Bir yanıt otomatik olarak bir mikrop biyoreaktör değişkeni ile ilişkili olabilir. Açılan listeden gerekli değişkeni seçin.Gereksinime bağlı olarak her yanıt için denklemi değiştirin. Minimum, maksimum, ilk, son ve ortalama veriler arasındaki seçimler. Tasarım oluşturmak için, deneme tasarım türünü seçmek ve çoğaltma ve merkez noktalarının sayısını eklemek veya kaldırmak için Tasarım Sihirbazı'nı kullanın.Tasarım ve model seçimini belirleyen hedefi seçin. Metin protokolünde açıklandığı gibi Amber öz kültür Yazılımına aktarılabilen iş paketlerini bitirin ve oluşturun. Deneme sekmesinde, DOE denemesini oluştur'a tıklayın ve DOE yazılımı kullanılarak oluşturulan iş paketine göz atın.Başlat'ı tıklatarak işlemi başlatın. Deneme yürütüldükten sonra, dışa aktarma DOE sonuçlarını kullanarak verileri dışa aktarın. Dışa aktarma DOE sonuçları"penceresi açılır ve kültür gemisi ve istasyonunu gösteren satırlar tabloda listelenir.İstenilen satırları seçin ve tüm sonuçları depolamak ve daha fazla analiz için dosyayı kaydetmek için seçili satırları dışa aktarın veya deneysel verileri dışa aktarın. Sonuçlar sekmesine geçerek ve alma sonuçlarını seçerek verileri Amber DOE Modülüne aktarın. İstenilen veri dosyasına göz atın ve sonuçları analiz et'i tıklatın.Otomatik mikrop biyoreaktörlerindeki hücre büyümesi çok amaçlı biyoreaktörlerle karşılaştırılabilir. Üç farklı ölçekten hücre konsantrasyonu karşılaştırırken, bu 15 mililitre otomatik mikrop biyoreaktör iki litrecam biyoreaktör taklit gözlenmiştir. Sallamak şişesi sonuçları da Amber yararı sergilemek için karşılaştırılır.Farklı karıştırma hızı ve PH etkisi otomatik mikrop biyoreaktörler incelenir. Burada gösterilen canlı hücre konsantrasyonu bir karşılaştırma, veya VCC, ve farklı mikrop biyoreaktörler monoklonal antikor konsantrasyonu. PH 6.9'un VCC üzerindeki olumsuz etkisi görülebilir.Ayrıca, PH 7.3'te PH 7.1 ile karşılaştırıldığında, hücrelerin büyümesi kültür altında önemli ölçüde düzeldi. Burada VCC ve monoklonal antikor konsantrasyonunun tepki kontur çizimleri gösterilmiştir. Değerler aynı PH ve farklı karıştırıcı hızına sahip kaplarda karşılaştırılabilir olup, bu işlem için toplanan karıştırıcı hızının proses çıkışı üzerinde önemli bir etkisi olmadığını gösterir.Makineye verilen her talimat, denemenin yürütülmesi sırasında hata dan kaçınmak için dikkatle yazılmalıdır. Yazılım esnektir ve aynı anda bir dizi deney çalıştırabilir, böylece bir işlemi optimize etmek için gereken süreyi azaltır. Deney tasarımı biyoproses alanında yararlıdır, çünkü sonuçlar bilgiye dayalı süreç anlayışı verir ve bu da diğer organizmalara belirli bir ölçüde genişletilebilir.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Developing Custom Chinese Hamster Ovary-host Cell Protein Assays using Acoustic Membrane Microparticle Technology

Akustik Membran mikropartikül Teknoloji Geliştirme Özel Çin Hamsteri Yumurtalık-host Hücre Proteini Tahliller

Custom assays for unique proteins are often limited to time consuming manual detection and quantitation techniques such as ELISA or Western blots due to ...

High Throughput Single-cell and Multiple-cell Micro-encapsulation

Yüksek Verim Micro-encapsulation Tek hücreli ve Çoklu-hücre

Microfluidic encapsulation methods have been previously utilized to capture cells in picoliter-scale aqueous, monodisperse drops, providing confinement ...

Using Tomoauto: A Protocol for High-throughput Automated Cryo-electron Tomography

Tomoauto kullanma: Bir Protokol Yüksek verim Otomatik Cryo-elektron Tomografi için

Cryo-electron tomography (Cryo-ET) is a powerful three-dimensional (3-D) imaging technique for visualizing macromolecular complexes in their native ...

Generic Protocol for Optimization of Heterologous Protein Production Using Automated Microbioreactor Technology

Otomatik Microbioreactor teknolojisini kullanarak Contegra Protein üretim duruma getirilmesi için genel iletişim kuralı

A core business in industrial biotechnology using microbial production cell factories is the iterative process of strain engineering and optimization of ...

Automated Slide Scanning and Segmentation in Fluorescently-labeled Tissues Using a Widefield High-content Analysis System

Otomatik slayt tarama ve segmentasyon Fluorescently etiketli dokularda Widefield yüksek-içeriği analiz sistemi kullanılarak

Automated slide scanning and segmentation of fluorescently-labeled tissues is the most efficient way to analyze whole slides or large tissue sections. ...

Comprehensive Evaluation of the Effectiveness and Safety of Placenta-Targeted Drug Delivery Using Three Complementary Methods

Kapsamlı değerlendirme etkinliği ve güvenliği üç tamamlayıcı yöntemlerle plasenta hedefli ilaç dağıtım

No effective treatments currently exist for placenta-associated pregnancy complications, and developing strategies for the targeted delivery of drugs to ...

Use of High-Throughput Automated Microbioreactor System for Production of Model IgG1 in CHO Cells

Yüksek üretilen iş kullanımı otomatik Microbioreactor sistemi modeli Igg1 CHO hücrelerdeki imalatı için

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of ...

Purification and Analytics of a Monoclonal Antibody from Chinese Hamster Ovary Cells Using an Automated Microbioreactor System

Otomatik bir Mikrobioreactor sistemi kullanılarak Çin hamster yumurtlama hücrelerinden bir monoklonal antikor arıtma ve analitik

Monoclonal antibodies (mAbs) are one of the most popular and well-characterized biological products manufactured today. Most commonly produced using ...

Generation of Dynamical Environmental Conditions using a High-Throughput Microfluidic Device

Yüksek Verimli Mikroakışkan Cihaz Kullanarak Dinamik ÇevreSel Koşulların Üretilmesi

Mimicking in vivo environmental conditions is crucial for in vitro studies on complex life machinery. However, current techniques targeting live cells and ...