Name: a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice
Uploaded: 2019-11-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice at JoVE.com

ويشكر المؤلفان بيتر بولين ، رئيس المختبر الطبي الحيوي لإقراضهما المعدات اللازمة لتسجيل اللقطات التي شوهدت من خلال المجاهر.

وتم إيواء الماشية في مرفق رعاية الماشية بجامعه جنوب الدانمرك وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية. وقد تمت الموافقة علي جميع الإجراءات المتعلقة بالمواد الحيوانية من قبل مفتشيه التجارب الحيوانية ، وزاره البيئة والاغذيه في الدنمارك.
1. ما قبل الجراحة التشعيع
ملاحظ?...

<ol>
	<li>Lawenda, B. D., Mondry, T. E., Johnstone, P. A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+a+primer+on+the+identification+and+management+of+a+chronic+condition+in+oncologic+treatment.">Lymphedema: a primer on the identification and management of a chronic condition in oncologic treatment.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 59 (1), 8-24 (2009).</li><li>Greene, A. K., Greene, A. K., Slavin, S. A., Brorson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+morbidity+of+lymphedema.">Epidemiology and morbidity of lymphedema.</a> Lymphedema: Presentation, Diagnosis, and Treatment. , 33-44 (2015).</li><li>Hespe, G. E., Nores, G. G., Huang, J. J., Mehrara, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+lymphedema-Is+there+a+chance+for+medication+treatment?.">Pathophysiology of lymphedema-Is there a chance for medication treatment?.</a> Journal of Surgical Oncology. 115 (1), 96-98 (2017).</li><li>Grada, A. A., Phillips, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+Pathophysiology+and+clinical+manifestations.">Lymphedema: Pathophysiology and clinical manifestations.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 77 (6), 1009-1020 (2017).</li><li>Chang, D. W., Masia, J., Garza, R., Skoracki, R., Neligan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+Surgical+and+Medical+Therapy.">Lymphedema: Surgical and Medical Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 209S-218S (2016).</li><li>Carl, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Review+of+the+Surgical+Treatment+of+Extremity+Lymphedema.">Systematic Review of the Surgical Treatment of Extremity Lymphedema.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 33 (6), 412-425 (2017).</li><li>DiSipio, T., Rye, S., Newman, B., Hayes, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+unilateral+arm+lymphoedema+after+breast+cancer:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Incidence of unilateral arm lymphoedema after breast cancer: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Oncology. 14 (6), 500-515 (2013).</li><li>Douglass, J., Graves, P., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-Care+for+Management+of+Secondary+Lymphedema:+A+Systematic+Review.">Self-Care for Management of Secondary Lymphedema: A Systematic Review.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 10 (6), e0004740 (2016).</li><li>Shih, Y. C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence,+treatment+costs,+and+complications+of+lymphedema+after+breast+cancer+among+women+of+working+age:+a+2-year+follow-up+study.">Incidence, treatment costs, and complications of lymphedema after breast cancer among women of working age: a 2-year follow-up study.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (12), 2007-2014 (2009).</li><li>Ridner, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+psycho-social+impact+of+lymphedema.">The psycho-social impact of lymphedema.</a> Lymphatic Research and Biology. 7 (2), 109-112 (2009).</li><li>Gutknecht, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cost-of-illness+of+patients+with+lymphoedema.">Cost-of-illness of patients with lymphoedema.</a> Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology. 31 (11), 1930-1935 (2017).</li><li>Hayes, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+prognostic+significance+of+secondary+lymphedema+following+breast+cancer.">Prevalence and prognostic significance of secondary lymphedema following breast cancer.</a> Lymphatic Research and Biology. 9 (3), 135-141 (2011).</li><li>Danese, C. A., Georgalas-Bertakis, M., Morales, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+chronic+postsurgical+lymphedema+in+dogs'+limbs.">A model of chronic postsurgical lymphedema in dogs' limbs.</a> Surgery. 64 (4), 814-820 (1968).</li><li>Das, S. K., Franklin, J. D., O'Brien, B. M., Morrison, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+model+of+secondary+lymphedema+in+dogs.">A practical model of secondary lymphedema in dogs.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 68 (3), 422-428 (1981).</li><li>Huang, G. K., Hsin, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+lymphedema+in+rabbit+ear.">An experimental model for lymphedema in rabbit ear.</a> Microsurgery. 4 (4), 236-242 (1983).</li><li>Tobbia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema+development+and+lymphatic+function+following+lymph+node+excision+in+sheep.">Lymphedema development and lymphatic function following lymph node excision in sheep.</a> Journal of Vascular Research. 46 (5), 426-434 (2009).</li><li>Lahteenvuo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor+therapy+and+autologous+lymph+node+transfer+in+lymphedema.">Growth factor therapy and autologous lymph node transfer in lymphedema.</a> Circulation. 123 (6), 613-620 (2011).</li><li>Honkonen, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+transfer+and+perinodal+lymphatic+growth+factor+treatment+for+lymphedema.">Lymph node transfer and perinodal lymphatic growth factor treatment for lymphedema.</a> Annals of Surgery. 257 (5), 961-967 (2013).</li><li>Wang, G. Y., Zhong, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+experimental+lymphedema+in+rats'+limbs.">A model of experimental lymphedema in rats' limbs.</a> Microsurgery. 6 (4), 204-210 (1985).</li><li>Oashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+acquired+lymphedema+in+the+mouse+hind+limb:+a+preliminary+report.">A new model of acquired lymphedema in the mouse hind limb: a preliminary report.</a> Annals of Plastic Surgery. 69 (5), 565-568 (2012).</li><li>Slavin, S. A., Van den Abbeele, A. D., Losken, A., Swartz, M. A., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Return+of+lymphatic+function+after+flap+transfer+for+acute+lymphedema.">Return of lymphatic function after flap transfer for acute lymphedema.</a> Annals of Surgery. 229 (3), 421-427 (1999).</li><li>Cheung, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+the+study+of+lymphedema+and+its+response+to+therapeutic+lymphangiogenesis.">An experimental model for the study of lymphedema and its response to therapeutic lymphangiogenesis.</a> BioDrugs : Clinical Immunotherapeutics, Biopharmaceuticals and Gene Therapy. 20 (6), 363-370 (2006).</li><li>Rutkowski, J. M., Moya, M., Johannes, J., Goldman, J., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secondary+lymphedema+in+the+mouse+tail:+Lymphatic+hyperplasia,+VEGF-C+upregulation,+and+the+protective+role+of+MMP-9.">Secondary lymphedema in the mouse tail: Lymphatic hyperplasia, VEGF-C upregulation, and the protective role of MMP-9.</a> Microvascular Research. 72 (3), 161-171 (2006).</li><li>Tammela, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+differentiation+and+maturation+of+lymphatic+vessels+after+lymph+node+dissection+and+transplantation.">Therapeutic differentiation and maturation of lymphatic vessels after lymph node dissection and transplantation.</a> Nature Medicine. 13 (12), 1458-1466 (2007).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+surgical+lymphedema+research--a+systematic+review.">Animal models in surgical lymphedema research--a systematic review.</a> Journal of Surgical Research. 200 (1), 208-220 (2016).</li><li>Jorgensen, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Chronic+Lymphedema+in+a+Revised+Mouse+Model.">Quantification of Chronic Lymphedema in a Revised Mouse Model.</a> Annals of Plastic Surgery. 81 (5), 594-603 (2018).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+3D+volumetry+versus+conventional+measuring+techniques+for+the+assessment+of+experimental+lymphedema+in+the+mouse+hindlimb.">High-resolution 3D volumetry versus conventional measuring techniques for the assessment of experimental lymphedema in the mouse hindlimb.</a> Scientific Reports. 6, 34673 (2016).</li><li>Biau, D. J., Kerneis, S., Porcher, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistics+in+brief:+the+importance+of+sample+size+in+the+planning+and+interpretation+of+medical+research.">Statistics in brief: the importance of sample size in the planning and interpretation of medical research.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 466 (9), 2282-2288 (2008).</li><li>Korula, P., Varma, S. K., Sunderrao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+wound+contraction+by+point-to-point+adherent+splintage.">Inhibition of wound contraction by point-to-point adherent splintage.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 95 (4), 725-730 (1995).</li><li>Komatsu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+Drainage+During+Wound+Healing+in+a+Hindlimb+Lymphedema+Mouse+Model.">Lymph Drainage During Wound Healing in a Hindlimb Lymphedema Mouse Model.</a> Lymphatic Research and Biology. 15 (1), 32-38 (2017).</li></ol>

وهناك بضع خطوات حاسمه في هذا البروتوكول. أولا ، من المهم ان الباحثين اتخاذ احتياطات السلامة عند العمل مع النشاط الإشعاعي. ثانيا ، خلال الجزء الجراحي من هذا البروتوكول ، من المهم ان تبدا الاجراء مره واحده وقد تم تخدير الماوس والانتهاء منه دون فواصل لا لزوم لها. هذا أمر مهم لتجنب فتره طويلة ب?...

تتميز الوذمه اللمفية بتراكم السائل الليمفاوي الذي يؤدي إلى تورم الانسجه الموضعية ، والذي يحدث بشكل رئيسي بسبب ضعف أو تعطل تدفق السائل الليمفاوي في الاوعيه اللمفاوية1. يمكن ان تضعف تدفق الليمفاوية أو تعطل بسبب العدوى, انسداد, أصابه أو عيوب خلقيه في الجهاز اللمفاوي2. هذه المسببات تؤدي إلى تراكم السائل اللمفاوي ، مما يؤدي إلى حاله مزمنة من التهاب ، مما يؤدي إلى التليف اللاحق ، فضلا عن ترسب الانسجه الدهنية3. يمكن تصنيف الوذمه اللمفية علي انها الوذمه اللمفية الاوليه أو الثانوية. وذمه لمفية الاوليه بسبب تشوات النمو أو الطفرة الجينية2,4. تحدث الوذمه اللمفية الثانوية بسبب الامراض الجهازية الاساسيه أو الجراحة أو الصدمات2،4. الوذمه اللمفية الثانوية هي الشكل الأكثر شيوعا من الوذمه اللمفية في العالم2. في البلدان المتقدمة ، السبب الأكثر شيوعا للوذمه اللمفية الثانوية هو العلاج بالأورام مثل المعالجة الاشعاعيه المساعد وتشريح العقدة الليمفاوية5. الوذمه اللمفية هي الأكثر شيوعا بين مرضي سرطان الثدي ، ولكن يمكن أيضا ان تتطور في المرضي الذين يعانون من امراض النسائية ، الميلانوما ، البولي التناسلي أو سرطان الرقبة6. وقد اقترح ان من بين جميع النساء تشخيص سرطان الثدي, 21% سوف تتطور الوذمه اللمفية7.
يمكن ان تكون الوذمه اللمفية مرهقه للمريض جسديا ونفسانيا. المرضي الذين يعانون من الوذمه اللمفية لديهم زيادة خطر الاصابه5,8,9, سوء نوعيه الحياة ويمكن ان تتطور القلق الاجتماعي واعراض الاكتئاب10. مضاعفات الوذمه اللمفية المزمنة تؤدي إلى ارتفاع تكلفه الرعاية وزيادة عبء المرض9,11. وقد أشارت النتائج أيضا إلى ان الوذمه اللمفية قد تترافق مع زيادة خطر الوفاة بعد علاج سرطان الثدي12. الاداره المحافظة مثل ضغط المنطقة المصابة ، والصرف الليمفاوي اليدوي والعناية بالبشرة العامة لا تزال نهج الخط الأول. لا يوجد حاليا اي علاج علاجي6. علي الرغم من التقدم المحرز في مجال العلاج الجراحي والطبي ، لا يزال هناك مجال للتحسين. المزيد من البحوث ، وتوفير البصيرة في الفيزيولوجيا المرضية وتطور المرض ، وهناك حاجه لتمكين الأطباء لتوفير أفضل خيارات العلاج للمرضي5.
وتستخدم النماذج الحيوانية في البحوث قبل السريرية لفهم الفيزيولوجيا المرضية للامراض وتطوير خيارات العلاج المحتملة. وقد أنشئت عده نماذج مختلفه الحيوانية الوذمه اللمفية في أنياب13,14, الأرانب15, الأغنام16, الخنازير17,18 والقوارض19,20, 21،22،23،24. نموذج القوارض يبدو ان النموذج الأكثر فعاليه من حيث التكلفة, عند التحقيق في أعاده بناء الوظيفة اللمفاوية, بسبب القوارض يجري الوصول اليها بسهوله ومنخفضه السعر نسبيا25. وقد ركزت غالبيه نماذج الفئران علي الحث علي الوذمه اللمفية في ذيل الفئران21،22،23. نموذج الذيل موثوق جدا ولكن التقنية الجراحية الدقيقة للحث علي الوذمه اللمفية تختلف بشكل كبير في المواد المنشورة السابقة. وهذا يؤدي إلى تقلبات في مده ومتانة المتقدمة الوذمه اللمفية المقدمة في المعروفة25. ويجري أيضا استخدام تقنيات مختلفه للحث علي الوذمه اللمفية في نموذج الأطراف السفلية ، كما انها تسفر عن نتائج متفاوتة ، ولكن قد يكون من الأسهل فهم نموذج الأطراف السفلية من منظور انتقالي. وقد أعاقت نماذج الوذمه اللمفية السابقة عن طريق قرار الوذمه اللمفية العفوية ، التالي هناك حاجه إلى نموذج اللمفية القابلة للاستنساخ ودائم25. وقد حاول الباحثون في السابق لزيادة جرعه من الإشعاع ، لمنع القرار الوذمه اللمفية العفوية ، ولكن هذا قد ادي في كثير من الأحيان إلى اعتلال شديد اللاحقة25.
ينتج هذا النموذج عن الوذمه اللمفية ذات الدلالة الاحصائيه ، دون التسبب في اعتلال شديد ، من خلال الجمع بين الجراحة المجهرية والإشعاع. وقد تم تنقيح النموذج من نموذج الجراحية السابقة عن طريق أضافه جرعه من التشعيع الذي يحفز الوذمه اللمفية, دون التسبب في اعتلال شديد26. كما يوفر فرصه كبيره للتدريب الجراحي المجهري. الحصول علي المعدات الجراحية الدقيقة والمجهر ضروري ، وذلك بسبب الهياكل التشريحية الصغيرة للفئران. ويمكن اجراء العملية الجراحية عندما يكون المستخدم قد تم تدريس التقنيات الجراحية الدقيقة الاساسيه ، مثل خياطه مع الاداات الجراحية المجهرية. المشغلين الذين يؤدون هذا الاجراء شاهدوا جميع أشرطه الفيديو التعليمية من قبل Acland علي الشروط المسبقة للمهارات الجراحية الدقيقة (1981) وتقنيه الخياطة المجهرية الاساسيه (1985). نوصي بممارسه العملية الجراحية 8 − 10 مرات قبل استخدامها في البحوث. ممارسه الاجراء يضمن ان يتم اجراء عدد اقل من الأخطاء وان الاجراء يمكن ان يؤديها بشكل أكثر كفاءه. عندما يتقن ، يمكن اجراء العملية الجراحية في 45 دقيقه.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10-0 Nylon suture</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>12051-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Nylon suture - Dafilon</td>
			<td>B Braun</td>
			<td>C0933112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coagulator - ICC 50</td>
			<td>ERBE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td>Yibon medical co</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>09-0190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastic retractors</td>
			<td>Odense University Hospital</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical clipper</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>GT420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl 0,315 mg/ml</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad - PhysioSuite</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane 1000mg Attane</td>
			<td>Scan Vet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporizer - PPV</td>
			<td>Penlon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro jewler forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>1405-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Needle holder</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>25679-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>10128-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro tying forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>43953-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfine U-40 syringe 0,5ml</td>
			<td>BD</td>
			<td>328821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 25g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 27g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam 5 mg/ml (hameln)</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder - Circle wood</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>08-0065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non woven swabs</td>
			<td>Selefa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opmi pico microscope F170</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patent blue V - 25 mg/ml</td>
			<td>Guerbet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors - Joseph</td>
			<td>BD</td>
			<td>RH1630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siemens INVEON multimodality pre-clinical scanner</td>
			<td>Siemens pre-clinical solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Source of radiation - D3100</td>
			<td>Gulmay</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stata Statistical Software: Release 15</td>
			<td>StataCorp LLC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temgesic - 0,2 mg</td>
			<td>Indivior</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vet eye ointment - viscotears</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice

النماذج الحيوانية ذات اهميه قصوى في البحث عن الوذمه اللمفية من أجل فهم الفيزيولوجيا المرضية للمرض ولكن أيضا لاستكشاف خيارات العلاج المحتملة. هذا النموذج الماوس يسمح للباحثين للحث علي ذمه لمفية كبيره تدوم 8 أسابيع علي الأقل. يتم الحث علي الوذمه اللمفية باستخدام مزيج من العلاج بالاشعه والاستئصال الجراحي للمفاويات. هذا النموذج يتطلب ان الفئران الحصول علي جرعه من 10 غراي (غراي) الإشعاع قبل وبعد الجراحة. الجزء الجراحي من النموذج ينطوي علي ربط ثلاثه الاوعيه الليمفاوية واستخراج اثنين من الغدد الليمفاوية من مؤخر الماوس. الحصول علي الاداات الجراحية الدقيقة والمجهر أمر ضروري ، وذلك بسبب الهياكل التشريحية الصغيرة من الفئران. ميزه هذا النموذج هو انه يؤدي إلى الوذمه اللمفية ذات الدلالة الاحصائيه ، والتي توفر أساسا جيدا لتقييم خيارات العلاج المختلفة. وهو أيضا خيار كبير ومتاح بسهوله للتدريب الجراحي المجهري. الحد من هذا النموذج هو ان الاجراء يمكن ان يكون مضيعه للوقت ، وخاصه إذا لم تمارس مقدما. ينتج النموذج عن الوذمه اللمفية القابلة للقياس الكمي بشكل موضوعي في الفئران ، دون التسبب في اعتلال شديد وقد تم اختبارها في ثلاثه مشاريع منفصلة.

وقد سبق استخدام هذا الاجراء في ثلاث تجارب منفصلة. وأجريت جميع التجارب من قبل المحققين الرصاص مختلفه الذين هم جميعا المشاركين في تاليف هذه المادة. وفي جميع التجارب الثلاث ، تم توخي الحرص الشديد علي التزام بنفس الاجراء الموصوف في هذا البروتوكول. وفي جميع التجارب الثلاثة ، ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice at JoVE.com

A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice

هذا النموذج الحيواني يمكن الباحثين من حمل الوذمه اللمفية الثانوية ذات الدلالة الاحصائيه في الطرف السفلي من الفئران ، والتي تدوم 8 أسابيع علي الأقل. ويمكن استخدام هذا النموذج لدراسة الفيزيولوجيا المرضية من الوذمه اللمفية والتحقيق في خيارات العلاج الرواية.

طريقه منقحه للحث علي الوذمه اللمفية الثانوية في الأطراف السفلية من الفئران

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore ...

الهدف العام من هذه الطريقة هو الحث على الوذمة اللمفاوية الثانوية متسقة في hindlimb الفئران دون التسبب في المراضة الشديدة. يمكن استخدام هذه الطريقة للحث على الوذمة اللمفاوية الثانوية في الوذمة الخلفية للفئران. الميزة الرئيسية لهذه الطريقة هي أنه يحل الوذمة اللمفاوية غير الهامة التي تستمر ثمانية أسابيع على الأقل دون التسبب في مراضة شديدة.قد يعاني شخص جديد من هذا الإجراء من الأساليب الجراحية الدقيقة. لذلك نوصي بالتدريب المجهري والإجراءات العملية العديدة لضمان نجاح النتيجة، وكذلك إعداد الباحث حتى يتمكن من إجراء العملية بشكل أكثر كفاءة. إعداد مصدر الإشعاع و التخدير الماوس كما هو موضح في البروتوكول.ضع لوحة رصاص سميكة 1.5 ملليمتر لضمان أن المنطقة التي تخضع للجراحة فقط يحصل على المشعع. المثال المبين هو فأرة ما بعد الجراحة لتوضيح المنطقة. إعطاء جرعة من 10 تشعيع رمادي.يجب على الباحثين اتخاذ الاحتياطات اللازمة عند العمل مع الإشعاع. وخلال هذه التجربة، تم إجراء كل التشعيع في غرفة معزولة عن الإشعاع. ولم يتم تشغيل مصدر الإشعاع إلا عندما غادر جميع الموظفين الغرفة.وزن الماوس قبل الجراحة. فحص عمق التخدير عن طريق مخلب أو الذيل اختبار قرصة. حلق الساق المختارة لإجراء العملية.تعيين تدفق الأوكسجين إلى 0.8 لتر في الدقيقة. ربطه بمخروط الأنف. تطبيق مرهم العيون.حقن 0.5 ملليلتر من تحت الجلد المالحة، ويفضل في scruff من الماوس لمنع نقص الدم أثناء الجراحة. وضع الماوس على القماش الجراحي في موقف supine. ضع مخروط الأنف على الخطم.إصلاح نهاية hindlimbs بلطف مع الشريط، لمنع الماوس من التحول أثناء الجراحة. رفع الجلد مع ملقط على نحو سلس ومقطع فتحة صغيرة تقريبا خمسة ملليمترات قريبة إلى فوسا popliteal. حرك مقصًا حادًا في الفتحة ومقطعًا نحو الركبة ، بحيث ينتهي الشق فوق الركبة مباشرةً.تأكد من عدم ثقب الأوعية الأساسية، عن طريق رفع الجلد مع ملقط أثناء قص. حرك الماوس إلى موضع عرضة وأكمل الشق المحيطي. تشريح الجلد إلى بضعة ملليمترات فوق الزاوية.تذكر أن تبقي الأنسجة رطبة مع المالحة العقيمة أثناء الإجراء بأكمله. سحب الجلد من الجرح القريب مع مرنة السحب. وتأكد من أن الوريد الوركي مرئي كما هو مبين.حقن 0.01 milliliters براءات الاختراع الأزرق الخامس تحت الجلد بين ثاني وثالث من الدلع. اضغط بلطف مخلب بضع مرات لتوزيع البراءة الأزرق V.The توزيع البراءة الأزرق الخامس يمكن أن ينظر إليها من خلال المجهر. الهياكل اللازمة لتكون تصور، والأوعية الليمفاوية القريبة، PLV، العقدة الليمفاوية الزفير، PLN، والأوعية الليمفاوية القاصي الأول، DLV1، والأوعية الليمفاوية القاصي الثاني، DLV2.تكبير لتصور PLV وligate ذلك باستخدام خياطة النايلون 10-0. اضغط على مخلب لضمان عدم وجود براءات الاختراع الأزرق يمر القريبة إلى الرباط. Ligate الأوعية الليمفاوية القاصيتين كما هو مبين.اضغط على مخلب عدة مرات مرة أخرى للتأكد من أن أي براءة اختراع الأزرق الخامس يمر القريبة إلى الرباط. في هذا المثال، يمكن ملاحظة أن أحد الأوعية الليمفاوية رشقات نارية بسبب الرباط تعوق تدفق الليمفاوية. إزالة العقدة الليمفاوية الزاوي، العقدة الليمفاوية لديه سطح مثل اللؤلؤ على نحو سلس وملونة من قبل V الأزرق براءات الاختراع على النقيض من الأنسجة الدهنية المحيطة بها.قبل إزالة وسادة الدهون الإربية، الكي هذه السفينة كما هو مبين. ثم إزالة وسادة الدهون في قطعة واحدة. تأكد من عدم وجود نزيف نشط.هذا مثال على العقدة الليمفاوية الإربية الموجودة. العقدة الليمفاوية الموجودة في وسادة الدهون الإربية نادرا ما الملونة من قبل V الأزرق براءات الاختراع ويمكن أن يكون من الصعب التفريق من الدهون. إزالة وسادة الدهون في قطعة واحدة هو أفضل وسيلة لضمان إزالة العقدة الليمفاوية.خياطة حواف الجلد وصولا الى ففة العضلات، مع خياطة النايلون 6-0 باستخدام ملقط وحامل إبرة، وترك فجوة من 2-3 ملليمترات، لتقييد تدفق الليمفاوية السطحية. هذا مثال على الغرز النهائية ، في فوسا popliteal ، الجانب الجانبي من hindlimb ، فوق الركبة ، والجانب الوسيط من hindlimb. إدارة المسكنات ووزنها الماوس بعد الجراحة، ثم وضعه في مجلس الوزراء ساخنة للانتعاش.كرر الإجراء الخاص بالإشعاع قبل الجراحة. يُظهر هذا الرسم البياني الحجم المُعَد المُدمج لثلاث دراسات منفصلة في الأسابيع الثمانية التي تلت الجراحة. تم تضمين 31 الفئران في المجموع.يمثل المحور س بعد أسابيع من الجراحة. ويمثل المحور y حجم الـ hindlimb في ملليمتر مكعب. تمثل أشرطة الأسهم الانحراف المعياري.ومن المتوقع أن تورم من الجراحة وذمة اللمفية المستحثة سوف تنخفض خلال الأسابيع الأربعة الأولى. بعد الأسابيع الأربعة الأولى نرى حالة مستقرة نسبيا من الوذمة اللمفاوية. يزيد حجم التحكم hindlimb خلال الأسابيع الثمانية ، وبالتالي القول بدقة الفرق في الحجم بين الوذمة اللمفاوية hindlimb والسيطرة hindlimb ، وكان هذا غير متوقع.وتكهن السبب أن الفئران تستخدم hindlimb غير تعمل أكثر من hindlimb تعمل في الأسابيع التالية لعملية جراحية. وهذا يمكن أن يؤدي إلى تضخم في hindlimb التحكم وربما يفسر الزيادة في حجم. للأرقام الفردية على الدراسات الثلاث المدرجة يرجى قراءة البروتوكول.يُظهر هذا الجدول اختبار المقارنة المتعددة الذي تم اختباره في سيداك لقياسات الحجم المجمعة للدراسات الثلاث المشمولة. وتبين القيمة المحسوبة P أن هناك فرقاً هاماً إحصائياً بين الوذمة الخلفية مع الوذمة اللمفاوية المستحثة و hindlimbs التحكم، خلال كل ثمانية أسابيع من المتابعة. وللتحلي بالتحليل الإحصائي الفردي للمشاريع الثلاثة المشمولة، يرجى قراءة البروتوكول.هذه الطريقة تحفز الوذمة اللمفاوية ذات الأهمية الإحصائية ، وتستمر ثمانية أسابيع على الأقل. يمكن استخدام هذا الإجراء لدراسة تحجر الوذمة اللمفاوية والبحث عن خيارات العلاج الجديدة. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن تكون قد اكتسبت فهمًا لكيفية تحفيز الوذمة اللمفاوية الثانوية في hindlimb من الفئران ، وذلك باستخدام مزيج من الجراحة الدقيقة والتشعيع قبل وبعد الجراحة.بمجرد أن يتقن، يمكن إجراء العملية الجراحية في 45 دقيقة.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

برغي دليل بسيط أسلوب للدراسات طعم أجنبي داخل الجمجمة في الفئران

The grafting of human tumor cells into the brain of immunosuppressed mice is an established method for the study of brain cancers including glioblastoma ...

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

اختبار الإجهاد ترير الاجتماعي بروتوكول لإحداث الضغط النفسي

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

حمل عضلية للبطانة الشريانية الحميد مقابل تصلب الشرايين في فئران: مقدمة من اثنين من نماذج صالحة

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

الحقن الشريان السباتي لوأضافا الدوائية وتحليل Taxanes في الفئران

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Minimal Invasive Surgical Procedure of Inducing Myocardial Infarction in Mice

الحد الأدنى من الإجراءات الجراحية للتحريض احتشاء عضلة القلب في الفئران

Myocardial infarction still remains the main cause of death in western countries, despite considerable progress in the stent development area in the last ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

افضل طريقة لرابيد تنبيب القصبة الهوائية في الفئران

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

تحريض تصلب الشرايين المتسارع في الفئران: نموذج "الأسلاك- إصابة"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

تقييم تكوين الأوعية العلاجية في نموذج مورين من نقص التروية الخلفية

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

إحداث إصابات الرئة الحادة في الفئران عن طريق التبيل المباشر للكيس الشحمي داخل الرغامى

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

طريقة عالية الإنتاجية في الموقع لتقدير البليدي النووي الكبدي في الفئران

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...