Name: a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice
Uploaded: 2019-11-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice at JoVE.com

Forfatterne takker Peter Boll, lederen af det biomedicinske laboratorium for udlån af udstyr, der er nødvendigt for at registrere optagelserne set gennem Mikroskoperne.

Dyr blev anbragt på det sydlige Danmarks Universitet for dyrepleje som pr. institutionelle retningslinjer. Alle procedurer, der involverer dyr, er blevet godkendt af Inspektoratet for dyreforsøg, Ministeriet for miljø og fødevarer i Danmark.
1. bestråling før operationen
Bemærk: bestråling forud for operationen finder sted 7 dage før operationen.
<ol><li>Inducerer anæstesi.<ol>
<li>Placer musen i en induktions boks og sæt vaporizer til 3% isofluran med ...

<ol>
	<li>Lawenda, B. D., Mondry, T. E., Johnstone, P. A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+a+primer+on+the+identification+and+management+of+a+chronic+condition+in+oncologic+treatment.">Lymphedema: a primer on the identification and management of a chronic condition in oncologic treatment.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 59 (1), 8-24 (2009).</li><li>Greene, A. K., Greene, A. K., Slavin, S. A., Brorson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+morbidity+of+lymphedema.">Epidemiology and morbidity of lymphedema.</a> Lymphedema: Presentation, Diagnosis, and Treatment. , 33-44 (2015).</li><li>Hespe, G. E., Nores, G. G., Huang, J. J., Mehrara, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+lymphedema-Is+there+a+chance+for+medication+treatment?.">Pathophysiology of lymphedema-Is there a chance for medication treatment?.</a> Journal of Surgical Oncology. 115 (1), 96-98 (2017).</li><li>Grada, A. A., Phillips, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+Pathophysiology+and+clinical+manifestations.">Lymphedema: Pathophysiology and clinical manifestations.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 77 (6), 1009-1020 (2017).</li><li>Chang, D. W., Masia, J., Garza, R., Skoracki, R., Neligan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+Surgical+and+Medical+Therapy.">Lymphedema: Surgical and Medical Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 209S-218S (2016).</li><li>Carl, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Review+of+the+Surgical+Treatment+of+Extremity+Lymphedema.">Systematic Review of the Surgical Treatment of Extremity Lymphedema.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 33 (6), 412-425 (2017).</li><li>DiSipio, T., Rye, S., Newman, B., Hayes, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+unilateral+arm+lymphoedema+after+breast+cancer:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Incidence of unilateral arm lymphoedema after breast cancer: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Oncology. 14 (6), 500-515 (2013).</li><li>Douglass, J., Graves, P., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-Care+for+Management+of+Secondary+Lymphedema:+A+Systematic+Review.">Self-Care for Management of Secondary Lymphedema: A Systematic Review.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 10 (6), e0004740 (2016).</li><li>Shih, Y. C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence,+treatment+costs,+and+complications+of+lymphedema+after+breast+cancer+among+women+of+working+age:+a+2-year+follow-up+study.">Incidence, treatment costs, and complications of lymphedema after breast cancer among women of working age: a 2-year follow-up study.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (12), 2007-2014 (2009).</li><li>Ridner, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+psycho-social+impact+of+lymphedema.">The psycho-social impact of lymphedema.</a> Lymphatic Research and Biology. 7 (2), 109-112 (2009).</li><li>Gutknecht, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cost-of-illness+of+patients+with+lymphoedema.">Cost-of-illness of patients with lymphoedema.</a> Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology. 31 (11), 1930-1935 (2017).</li><li>Hayes, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+prognostic+significance+of+secondary+lymphedema+following+breast+cancer.">Prevalence and prognostic significance of secondary lymphedema following breast cancer.</a> Lymphatic Research and Biology. 9 (3), 135-141 (2011).</li><li>Danese, C. A., Georgalas-Bertakis, M., Morales, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+chronic+postsurgical+lymphedema+in+dogs'+limbs.">A model of chronic postsurgical lymphedema in dogs' limbs.</a> Surgery. 64 (4), 814-820 (1968).</li><li>Das, S. K., Franklin, J. D., O'Brien, B. M., Morrison, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+model+of+secondary+lymphedema+in+dogs.">A practical model of secondary lymphedema in dogs.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 68 (3), 422-428 (1981).</li><li>Huang, G. K., Hsin, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+lymphedema+in+rabbit+ear.">An experimental model for lymphedema in rabbit ear.</a> Microsurgery. 4 (4), 236-242 (1983).</li><li>Tobbia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema+development+and+lymphatic+function+following+lymph+node+excision+in+sheep.">Lymphedema development and lymphatic function following lymph node excision in sheep.</a> Journal of Vascular Research. 46 (5), 426-434 (2009).</li><li>Lahteenvuo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor+therapy+and+autologous+lymph+node+transfer+in+lymphedema.">Growth factor therapy and autologous lymph node transfer in lymphedema.</a> Circulation. 123 (6), 613-620 (2011).</li><li>Honkonen, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+transfer+and+perinodal+lymphatic+growth+factor+treatment+for+lymphedema.">Lymph node transfer and perinodal lymphatic growth factor treatment for lymphedema.</a> Annals of Surgery. 257 (5), 961-967 (2013).</li><li>Wang, G. Y., Zhong, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+experimental+lymphedema+in+rats'+limbs.">A model of experimental lymphedema in rats' limbs.</a> Microsurgery. 6 (4), 204-210 (1985).</li><li>Oashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+acquired+lymphedema+in+the+mouse+hind+limb:+a+preliminary+report.">A new model of acquired lymphedema in the mouse hind limb: a preliminary report.</a> Annals of Plastic Surgery. 69 (5), 565-568 (2012).</li><li>Slavin, S. A., Van den Abbeele, A. D., Losken, A., Swartz, M. A., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Return+of+lymphatic+function+after+flap+transfer+for+acute+lymphedema.">Return of lymphatic function after flap transfer for acute lymphedema.</a> Annals of Surgery. 229 (3), 421-427 (1999).</li><li>Cheung, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+the+study+of+lymphedema+and+its+response+to+therapeutic+lymphangiogenesis.">An experimental model for the study of lymphedema and its response to therapeutic lymphangiogenesis.</a> BioDrugs : Clinical Immunotherapeutics, Biopharmaceuticals and Gene Therapy. 20 (6), 363-370 (2006).</li><li>Rutkowski, J. M., Moya, M., Johannes, J., Goldman, J., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secondary+lymphedema+in+the+mouse+tail:+Lymphatic+hyperplasia,+VEGF-C+upregulation,+and+the+protective+role+of+MMP-9.">Secondary lymphedema in the mouse tail: Lymphatic hyperplasia, VEGF-C upregulation, and the protective role of MMP-9.</a> Microvascular Research. 72 (3), 161-171 (2006).</li><li>Tammela, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+differentiation+and+maturation+of+lymphatic+vessels+after+lymph+node+dissection+and+transplantation.">Therapeutic differentiation and maturation of lymphatic vessels after lymph node dissection and transplantation.</a> Nature Medicine. 13 (12), 1458-1466 (2007).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+surgical+lymphedema+research--a+systematic+review.">Animal models in surgical lymphedema research--a systematic review.</a> Journal of Surgical Research. 200 (1), 208-220 (2016).</li><li>Jorgensen, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Chronic+Lymphedema+in+a+Revised+Mouse+Model.">Quantification of Chronic Lymphedema in a Revised Mouse Model.</a> Annals of Plastic Surgery. 81 (5), 594-603 (2018).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+3D+volumetry+versus+conventional+measuring+techniques+for+the+assessment+of+experimental+lymphedema+in+the+mouse+hindlimb.">High-resolution 3D volumetry versus conventional measuring techniques for the assessment of experimental lymphedema in the mouse hindlimb.</a> Scientific Reports. 6, 34673 (2016).</li><li>Biau, D. J., Kerneis, S., Porcher, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistics+in+brief:+the+importance+of+sample+size+in+the+planning+and+interpretation+of+medical+research.">Statistics in brief: the importance of sample size in the planning and interpretation of medical research.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 466 (9), 2282-2288 (2008).</li><li>Korula, P., Varma, S. K., Sunderrao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+wound+contraction+by+point-to-point+adherent+splintage.">Inhibition of wound contraction by point-to-point adherent splintage.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 95 (4), 725-730 (1995).</li><li>Komatsu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+Drainage+During+Wound+Healing+in+a+Hindlimb+Lymphedema+Mouse+Model.">Lymph Drainage During Wound Healing in a Hindlimb Lymphedema Mouse Model.</a> Lymphatic Research and Biology. 15 (1), 32-38 (2017).</li></ol>

Der er nogle få kritiske trin i denne protokol. For det første er det vigtigt, at forskerne tager sikkerhedsforanstaltninger, når de arbejder med radioaktivitet. For det andet, under den kirurgiske del af denne protokol, er det vigtigt at starte proceduren, når musen er blevet bedøvet og afslutte det uden unødvendige pauser. Dette er vigtigt for at undgå en alt for lang kirurgisk periode for dyret og for at forhindre, at anæstesi mister virkning under operationen. Det anbefales kun at administrere en injektion af...

Lymfom er karakteriseret ved en ophobning af lymfevæske, der fører til lokaliseret vævshævelse, som hovedsagelig opstår på grund af nedsat eller forstyrret strøm af lymfevæske i lymfekarrene1. Lymfe strømmen kan blive forringet eller forstyrret af infektion, obstruktion, tilskadekomst eller medfødte defekter i lymfesystemet2. Disse ætiologier resulterer i ophobning af lymfatisk væske, hvilket fører til en kronisk tilstand af betændelse, resulterer i efterfølgende fibrose, samt aflejring af fedtvæv3. Lymphedema kan kategoriseres som primær eller sekundær lymfom. Primær lymfom er forårsaget af udviklingsmæssige abnormiteter eller genetisk mutation2,4. Sekundær lymfom opstår på grund af underliggende systemisk sygdom, kirurgi eller traumer2,4. Sekundær lymfom er den mest almindeligt forekommende form for lymfom i verden2. I de udviklede lande er den mest almindeligt forekommende årsag til sekundær lymfom er onkologisk behandling såsom adjuverende strålebehandling og lymfeknude dissektion5. Lymfomer er hyppigste blandt brystkræftpatienter, men kan også udvikle hos patienter med gynækolog, melanom, urogenitale eller nakke kræft6. Det er blevet foreslået, at ud af alle kvinder diagnosticeret med brystkræft, 21% vil udvikle lymfom7.
Lymfom kan være stressende for patienten både fysisk og psykisk. Patienter med lymfom har en øget risiko for infektion5,8,9, dårlig livskvalitet og kan udvikle social angst og symptomer på depression10. Komplikationer af kronisk lymfom fører til høje udgifter til pleje og en øget sygdomsbyrde9,11. Fund har også antydet, at lymfom kan være forbundet med øget risiko for død efter brystkræft behandling12. Konservativ ledelse såsom kompression af det berørte område, manuel lymfe dræning og generel hudpleje forbliver den første linje tilgang. Der er i øjeblikket ingen helbredende behandling6. Selv om der er gjort fremskridt inden for kirurgisk og medicinsk behandling, er det stadig plads til forbedring. Mere forskning, der giver indsigt i Patofysiologi og progression af sygdommen, er nødvendig for at give klinikere til at give bedre behandlingsmuligheder for patienterne5.
Dyremodeller anvendes i præklinisk forskning til at forstå Patofysiologi af sygdomme og udvikle potentielle behandlingsmuligheder. Flere forskellige lymfom-dyremodeller er blevet etableret i hjørnetænder13,14, kaniner15, får16, grise17,18 og gnavere19,20, 21,22,23,24. Gnaver modellen synes at være den mest omkostningseffektive model, når man undersøger genopbygningen af lymfe funktionen, fordi gnavere er let tilgængelige og relativt lavpris25. De fleste af de mus modeller har fokuseret på inducerende lymfom i halen af musene21,22,23. Hale modellen er meget pålidelig, men den nøjagtige kirurgiske teknik til inducerende lymfom, varierer betydeligt i tidligere offentliggjorte materialer. Dette resulterer i udsving i varighed og robusthed af det udviklede lymfom, præsenteret i kendt litteratur25. Der anvendes også forskellige teknikker til at inducere lymfom i baglemmer-modellen, og de giver også varierende resultater, men modellen med baglemmer kan være lettere at forstå ud fra et translationelt perspektiv. Tidligere Lymphedema-modeller er blevet hæmmet af spontan lymfom-opløsning, og derfor er der behov for en reproducerbar og permanent lymfafhedema-model25. Forskere har tidligere forsøgt at øge dosis af stråling, for at forhindre spontan lymfom opløsning, men dette har ofte ført til efterfølgende svær sygelighed25.
Denne model resulterer i statistisk signifikant lymfom, uden at forårsage alvorlig sygelighed, ved at kombinere mikrokirurgi med stråling. Modellen er blevet revideret fra en tidligere kirurgisk model ved at tilføje en dosis bestråling, der inducerer lymfom, uden at forårsage alvorlig sygelighed26. Det giver også en fantastisk mulighed for mikrokirurgisk træning. At have adgang til mikrokirurgisk udstyr og et mikroskop er nødvendigt, på grund af musene små anatomiske strukturer. Den kirurgiske procedure kan udføres, når brugeren er blevet undervist grundlæggende mikrokirurgiske teknikker, såsom suturering med mikrokirurgiske instrumenter. De operatører, der udførte denne procedure alle kiggede tutorial videoer af Acland om forudsætningerne for mikrokirurgiske færdigheder (1981) og grundlæggende mikrosutur teknik (1985). Vi anbefaler at øve den kirurgiske procedure 8 − 10 gange, før du bruger den i forskning. Øve proceduren sikrer, at færre fejl er lavet, og at proceduren kan udføres mere effektivt. Når mestrer, kan den kirurgiske procedure udføres i 45 minutter.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10-0 Nylon suture</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>12051-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Nylon suture - Dafilon</td>
			<td>B Braun</td>
			<td>C0933112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coagulator - ICC 50</td>
			<td>ERBE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td>Yibon medical co</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>09-0190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastic retractors</td>
			<td>Odense University Hospital</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical clipper</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>GT420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl 0,315 mg/ml</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad - PhysioSuite</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane 1000mg Attane</td>
			<td>Scan Vet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporizer - PPV</td>
			<td>Penlon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro jewler forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>1405-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Needle holder</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>25679-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>10128-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro tying forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>43953-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfine U-40 syringe 0,5ml</td>
			<td>BD</td>
			<td>328821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 25g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 27g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam 5 mg/ml (hameln)</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder - Circle wood</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>08-0065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non woven swabs</td>
			<td>Selefa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opmi pico microscope F170</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patent blue V - 25 mg/ml</td>
			<td>Guerbet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors - Joseph</td>
			<td>BD</td>
			<td>RH1630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siemens INVEON multimodality pre-clinical scanner</td>
			<td>Siemens pre-clinical solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Source of radiation - D3100</td>
			<td>Gulmay</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stata Statistical Software: Release 15</td>
			<td>StataCorp LLC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temgesic - 0,2 mg</td>
			<td>Indivior</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vet eye ointment - viscotears</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice

Dyremodeller er af afgørende betydning for forskningen af lymfom, for at forstå sygdommens Patofysiologi, men også for at udforske potentielle behandlingsmuligheder. Denne musemodel giver forskerne mulighed for at inducere signifikant lymfom, som varer mindst 8 uger. Lymfom er induceret ved hjælp af en kombination af fraktioneret strålebehandling og kirurgisk ablation af lymfeknuder. Denne model kræver, at musene får en dosis på 10 grå (Gy) stråling før og efter operationen. Den kirurgiske del af modellen involverer ligering af tre lymfeknuder og ekstraktion af to lymfeknuder fra musens bagled. At have adgang til mikrokirurgiske værktøjer og et mikroskop er afgørende på grund af muternes små anatomiske strukturer. Fordelen ved denne model er, at det resulterer i statistisk signifikant lymfom, som giver et godt grundlag for at evaluere forskellige behandlingsmuligheder. Det er også en stor og let tilgængelig mulighed for mikrokirurgisk træning. Begrænsningen af denne model er, at proceduren kan være tidskrævende, især hvis ikke praktiseres på forhånd. Modellen resulterer i objektivt kvantificerbare lymfom i mus, uden at forårsage alvorlig sygelighed og er blevet testet i tre separate projekter.

Denne procedure har tidligere været anvendt i tre forskellige eksperimenter. Alle eksperimenter blev foretaget af forskellige bly efterforskere, der alle er medforfattere af denne artikel. I alle tre eksperimenter blev der taget stor omhu for at overholde den samme procedure som beskrevet i denne protokol. I alle tre eksperimenter blev sekundær lymfom fremkaldt i en baglemmer, mens den anden baglemmer fungerede som kontrol. Mængderne af bagbenene var det primære resultat i alle tre ek...

Watch this Scientific Journal Video about A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice at JoVE.com

A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice

Denne dyremodel gør det muligt for forskerne at fremkalde statistisk signifikant sekundært lymfom i den bagdel af mus, som varede mindst 8 uger. Modellen kan bruges til at studere lymfophysiologien og til at undersøge nye behandlingsmuligheder.

En revideret metode til inducerende sekundær lymfom i den bagende af mus

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore ...

Det overordnede mål med denne metode er at fremkalde konsekvent sekundær Lymphedema i baglærg af mus uden at forårsage alvorlig sygelighed. Denne metode kan bruges til at fremkalde sekundær Lymphedema i baglærg af mus. Den største fordel ved denne metode er, at det løser ubetydelige Lymphedema varer mindst otte uger uden at forårsage alvorlig sygelighed.Nogen ny til proceduren kan kæmpe med de mikrokirurgiske teknikker. Vi anbefaler derfor mikrokirurgisk uddannelse og flere praksisprocedurer for at sikre et vellykket resultat, men også for at forberede forskeren, så han eller hun kan udføre proceduren mere effektivt. Konfigurer kilden til stråling og bedøve musen som beskrevet i protokollen.Placer en 1,5 millimeter tyk bly pad for at sikre, at kun det område, der gennemgår kirurgi bliver bestrålet. Det viste eksempel er en mus efter operationen for at afklare området. Der skal gives en dosis på 10 grå bestråling.Forskerne skal tage forholdsregler, når de arbejder med stråling. Under dette eksperiment blev al bestråling udført i et strålingsisoleret rum. Og kilden til stråling blev først tændt, når alt personale havde forladt rummet.Afvej musen før operationen. Undersøg bedøvelsesdybde ved pote eller hale knivspids test. Barber benet valgt til proceduren.Indstil strømmen af ilt til 0,8 liter i minuttet. Forbind den med en næsekeve. Påfør oftalmologiske salve.Injicer 0,5 milliliter saltvand subkutant, helst i scruff af musen for at forhindre hypovolæmi under operationen. Anstænge musen på den kirurgiske klud i liggende stilling. Placer næsekeden over snuden.Fiksere enden af bagbenene forsigtigt med tape, for at forhindre musen i at flytte under operationen. Løft huden med glatte snævler og klip en lille åbning ca. fem millimeter proksimalt til popliteal fossa. Skub skarpe saks ind i åbningen og klip mod knæet, så snittet ender lige over knæet.Sørg for ikke at punktere de underliggende kar ved at løfte huden med sævrænninger, mens du klipper. Flyt musen til udsat position og fuldføre omkredsen indsnit. Disseker huden til et par millimeter over vinklen.Husk at holde vævet fugtigt med sterilt saltvand under hele proceduren. Træk huden af den proksimale sår med en elastisk retractor. Og sørg for, at iskiasvene er synlig som vist.Injicer 0,01 milliliter Patent Blue V subkutant mellem den anden og tredje tå. Tryk forsigtigt på poten et par gange for at distribuere Patent Blue V.Fordelingen af Patent Blue V kan ses gennem mikroskopet. Strukturerne skulle visualiseres er, den proksimale lymfeknuder fartøj, PLV, popliteal lymfeknude, PLN, den første distale lymfeknuder fartøj, DLV1, og den anden distale lymfeknuder fartøj, DLV2.Forstørre at visualisere PLV og ligate det ved hjælp af en 10-0 nylon sutur. Tryk på poten for at sikre, at ingen Patent Blue passerer proksimale til ligaturen. Du skal have de to distale lymfeknuder som vist.Tryk på poten flere gange igen for at sikre, at ingen Patent Blue V passerer proksimale til ligaturen. I dette eksempel kan det ses, at en af de lymfekar brister på grund af ligatur hindrer lymfeknuder flow. Fjern popliteal lymfeknude, lymfeknuden har en glat perle-lignende overflade og er farvet af Patent Blue V i modsætning til det omgivende fedtvæv.Før du fjerner lyskeglasfedt pad, ætse dette fartøj som vist. Fjern derefter fedtpuden i ét stykke. Sørg for, at der ikke er nogen aktiv blødning.Dette er et eksempel på en placeret lyskelymfeknude. Lymfeknuden placeret i lyskefattige pad er sjældent farvet af Patent Blue V og kan være svært at skelne fra fedt. Fjernelse af fedt pad i ét stykke er den bedste måde at sikre, at lymfeknuden er blevet fjernet.Sutur huden kanter ned til musklen fascia, med en 6-0 nylon sutur ved hjælp af scener og nål indehaveren, efterlader et hul på to til tre millimeter, for at begrænse den overfladiske lymfeknuder flow. Dette er et eksempel på de færdige suturer, i popliteal fossa, den laterale side af baglimb, over knæet, og den mediale side af baglimb. Administrere analgesi og veje musen efter operationen, derefter placere den i et kabinet opvarmet til nyttiggørelse.Gentag proceduren for præ-kirurgi bestråling. Denne graf viser den kombinerede gennemsnitlige hindlimb volumen af tre separate undersøgelser i de otte uger efter operationen. 31 mus blev inkluderet i alt.X-aksen repræsenterer uger efter operationen. Y-aksen repræsenterer hindlimb volumen i kubikm millimeter. Pilelinjerne repræsenterer standardafvigelsen.Det må forventes, at hævelsen fra operationen og den inducerede Lymphedema vil falde i løbet af de første fire uger. Efter de første fire uger ser vi en relativ stabil tilstand af Lymphedema. Mængden af kontrol hindlimb stiger i løbet af de otte uger, således strengt siger forskellen i volumen mellem Lymphedema hindlimb og kontrol hindlimb, dette var uventet.Årsagen er spekuleret på at være, at musene brugte deres ikke-opererede hindlimb mere end den opererede hindlimb i ugerne efter operationen. Dette kan føre til hypertrofi af kontrol hindlimb og måske forklare stigningen i volumen. For individuelle tal for de tre inkluderede undersøgelser bedes du læse protokollen.Denne tabel viser Sidaks multiple sammenligningstest for de kombinerede volumenmålinger af de tre omfattede undersøgelser. Den beregnede P-værdi viser, at der er statistisk signifikant forskel mellem bagbenene med induceret Lymphedema og kontrol hindlimbs, i alle otte ugers opfølgning. For individuel statistisk analyse af de tre omfattede projekter bedes du læse protokollen.Denne metode inducerer statistisk signifikant Lymphedema, der varer mindst otte uger. Proceduren kan bruges til at studere petrificalitet af Lymphedema og til forskning nye behandlingsmuligheder. Efter at have set denne video, bør du have fået en forståelse af, hvordan man fremkalder sekundært Lymphedema i baglå af mus, ved hjælp af en kombination af mikrokirurgi og før og efter operationen bestråling.Når behersket, den kirurgiske procedure kan udføres i 45 minutter.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

The grafting of human tumor cells into the brain of immunosuppressed mice is an established method for the study of brain cancers including glioblastoma ...

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

Inducerende myointimal Hyperplasi Versus Åreforkalkning i Mus: En introduktion af to gyldige modeller

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Halspulsåren infusioner farmakokinetisk og farmakodynamisk analyse af Taxaner i mus

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Minimal Invasive Surgical Procedure of Inducing Myocardial Infarction in Mice

Minimal Invasive Kirurgisk Procedure inducere myokardieinfarkt i mus

Myocardial infarction still remains the main cause of death in western countries, despite considerable progress in the stent development area in the last ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

En forbedret fremgangsmåde til hurtig intubation af trachea i mus

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Induktion af accelereret åreforkalkning i Mus: Den "Wire-Skade" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Vurdering af terapeutisk angiogenese i en murine model af baglemmer iskæmi

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Inducerende akut lungeskade i mus ved direkte Intratracheal Lipopolysaccharid instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

En høj-throughput In Situ metode til vurdering af Hepatocyt Nuklearploidy i mus

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...