Name: a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice
Uploaded: 2019-11-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice at JoVE.com

De auteurs bedanken Peter bollen, hoofd van het Biomedische Laboratorium voor het lenen van de apparatuur die nodig is om de beelden te registreren die door de microscopen worden gezien.

Dieren werden ondergebracht in de Dierenverzorgings faciliteit van de Universiteit van Zuid-Denemarken volgens de institutionele richtlijnen. Alle procedures waarbij dierproef personen zijn betrokken, zijn goedgekeurd door de Keuringsdienst voor dierproeven, ministerie van milieu en voedsel van Denemarken.
1. bestraling vóór de operatie
Opmerking: de bestraling van pre-chirurgie vindt plaats 7 dagen voor de operatie.
<ol><li>Induceren van anesthesie.<ol>
<li>Pla...

<ol>
	<li>Lawenda, B. D., Mondry, T. E., Johnstone, P. A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+a+primer+on+the+identification+and+management+of+a+chronic+condition+in+oncologic+treatment.">Lymphedema: a primer on the identification and management of a chronic condition in oncologic treatment.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 59 (1), 8-24 (2009).</li><li>Greene, A. K., Greene, A. K., Slavin, S. A., Brorson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+morbidity+of+lymphedema.">Epidemiology and morbidity of lymphedema.</a> Lymphedema: Presentation, Diagnosis, and Treatment. , 33-44 (2015).</li><li>Hespe, G. E., Nores, G. G., Huang, J. J., Mehrara, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+lymphedema-Is+there+a+chance+for+medication+treatment?.">Pathophysiology of lymphedema-Is there a chance for medication treatment?.</a> Journal of Surgical Oncology. 115 (1), 96-98 (2017).</li><li>Grada, A. A., Phillips, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+Pathophysiology+and+clinical+manifestations.">Lymphedema: Pathophysiology and clinical manifestations.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 77 (6), 1009-1020 (2017).</li><li>Chang, D. W., Masia, J., Garza, R., Skoracki, R., Neligan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+Surgical+and+Medical+Therapy.">Lymphedema: Surgical and Medical Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 209S-218S (2016).</li><li>Carl, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Review+of+the+Surgical+Treatment+of+Extremity+Lymphedema.">Systematic Review of the Surgical Treatment of Extremity Lymphedema.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 33 (6), 412-425 (2017).</li><li>DiSipio, T., Rye, S., Newman, B., Hayes, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+unilateral+arm+lymphoedema+after+breast+cancer:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Incidence of unilateral arm lymphoedema after breast cancer: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Oncology. 14 (6), 500-515 (2013).</li><li>Douglass, J., Graves, P., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-Care+for+Management+of+Secondary+Lymphedema:+A+Systematic+Review.">Self-Care for Management of Secondary Lymphedema: A Systematic Review.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 10 (6), e0004740 (2016).</li><li>Shih, Y. C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence,+treatment+costs,+and+complications+of+lymphedema+after+breast+cancer+among+women+of+working+age:+a+2-year+follow-up+study.">Incidence, treatment costs, and complications of lymphedema after breast cancer among women of working age: a 2-year follow-up study.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (12), 2007-2014 (2009).</li><li>Ridner, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+psycho-social+impact+of+lymphedema.">The psycho-social impact of lymphedema.</a> Lymphatic Research and Biology. 7 (2), 109-112 (2009).</li><li>Gutknecht, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cost-of-illness+of+patients+with+lymphoedema.">Cost-of-illness of patients with lymphoedema.</a> Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology. 31 (11), 1930-1935 (2017).</li><li>Hayes, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+prognostic+significance+of+secondary+lymphedema+following+breast+cancer.">Prevalence and prognostic significance of secondary lymphedema following breast cancer.</a> Lymphatic Research and Biology. 9 (3), 135-141 (2011).</li><li>Danese, C. A., Georgalas-Bertakis, M., Morales, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+chronic+postsurgical+lymphedema+in+dogs'+limbs.">A model of chronic postsurgical lymphedema in dogs' limbs.</a> Surgery. 64 (4), 814-820 (1968).</li><li>Das, S. K., Franklin, J. D., O'Brien, B. M., Morrison, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+model+of+secondary+lymphedema+in+dogs.">A practical model of secondary lymphedema in dogs.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 68 (3), 422-428 (1981).</li><li>Huang, G. K., Hsin, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+lymphedema+in+rabbit+ear.">An experimental model for lymphedema in rabbit ear.</a> Microsurgery. 4 (4), 236-242 (1983).</li><li>Tobbia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema+development+and+lymphatic+function+following+lymph+node+excision+in+sheep.">Lymphedema development and lymphatic function following lymph node excision in sheep.</a> Journal of Vascular Research. 46 (5), 426-434 (2009).</li><li>Lahteenvuo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor+therapy+and+autologous+lymph+node+transfer+in+lymphedema.">Growth factor therapy and autologous lymph node transfer in lymphedema.</a> Circulation. 123 (6), 613-620 (2011).</li><li>Honkonen, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+transfer+and+perinodal+lymphatic+growth+factor+treatment+for+lymphedema.">Lymph node transfer and perinodal lymphatic growth factor treatment for lymphedema.</a> Annals of Surgery. 257 (5), 961-967 (2013).</li><li>Wang, G. Y., Zhong, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+experimental+lymphedema+in+rats'+limbs.">A model of experimental lymphedema in rats' limbs.</a> Microsurgery. 6 (4), 204-210 (1985).</li><li>Oashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+acquired+lymphedema+in+the+mouse+hind+limb:+a+preliminary+report.">A new model of acquired lymphedema in the mouse hind limb: a preliminary report.</a> Annals of Plastic Surgery. 69 (5), 565-568 (2012).</li><li>Slavin, S. A., Van den Abbeele, A. D., Losken, A., Swartz, M. A., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Return+of+lymphatic+function+after+flap+transfer+for+acute+lymphedema.">Return of lymphatic function after flap transfer for acute lymphedema.</a> Annals of Surgery. 229 (3), 421-427 (1999).</li><li>Cheung, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+the+study+of+lymphedema+and+its+response+to+therapeutic+lymphangiogenesis.">An experimental model for the study of lymphedema and its response to therapeutic lymphangiogenesis.</a> BioDrugs : Clinical Immunotherapeutics, Biopharmaceuticals and Gene Therapy. 20 (6), 363-370 (2006).</li><li>Rutkowski, J. M., Moya, M., Johannes, J., Goldman, J., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secondary+lymphedema+in+the+mouse+tail:+Lymphatic+hyperplasia,+VEGF-C+upregulation,+and+the+protective+role+of+MMP-9.">Secondary lymphedema in the mouse tail: Lymphatic hyperplasia, VEGF-C upregulation, and the protective role of MMP-9.</a> Microvascular Research. 72 (3), 161-171 (2006).</li><li>Tammela, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+differentiation+and+maturation+of+lymphatic+vessels+after+lymph+node+dissection+and+transplantation.">Therapeutic differentiation and maturation of lymphatic vessels after lymph node dissection and transplantation.</a> Nature Medicine. 13 (12), 1458-1466 (2007).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+surgical+lymphedema+research--a+systematic+review.">Animal models in surgical lymphedema research--a systematic review.</a> Journal of Surgical Research. 200 (1), 208-220 (2016).</li><li>Jorgensen, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Chronic+Lymphedema+in+a+Revised+Mouse+Model.">Quantification of Chronic Lymphedema in a Revised Mouse Model.</a> Annals of Plastic Surgery. 81 (5), 594-603 (2018).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+3D+volumetry+versus+conventional+measuring+techniques+for+the+assessment+of+experimental+lymphedema+in+the+mouse+hindlimb.">High-resolution 3D volumetry versus conventional measuring techniques for the assessment of experimental lymphedema in the mouse hindlimb.</a> Scientific Reports. 6, 34673 (2016).</li><li>Biau, D. J., Kerneis, S., Porcher, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistics+in+brief:+the+importance+of+sample+size+in+the+planning+and+interpretation+of+medical+research.">Statistics in brief: the importance of sample size in the planning and interpretation of medical research.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 466 (9), 2282-2288 (2008).</li><li>Korula, P., Varma, S. K., Sunderrao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+wound+contraction+by+point-to-point+adherent+splintage.">Inhibition of wound contraction by point-to-point adherent splintage.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 95 (4), 725-730 (1995).</li><li>Komatsu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+Drainage+During+Wound+Healing+in+a+Hindlimb+Lymphedema+Mouse+Model.">Lymph Drainage During Wound Healing in a Hindlimb Lymphedema Mouse Model.</a> Lymphatic Research and Biology. 15 (1), 32-38 (2017).</li></ol>

Er zijn enkele kritieke stappen in dit protocol. Ten eerste is het belangrijk dat de onderzoekers veiligheidsmaatregelen nemen bij het werken met radioactiviteit. Ten tweede, tijdens het chirurgische deel van dit protocol, is het belangrijk om de procedure te starten zodra de muis is verdoiliseerd en eindig zonder onnodige pauzes. Dit is belangrijk om te voorkomen dat een buitensporig lange chirurgische periode voor het dier en om te voorkomen dat de anesthesie verliest effect tijdens de operatie. Het wordt aanbevolen om...

Lymfoedeem wordt gekenmerkt door een ophoping van lymfe vloeistof die leidt tot gelokaliseerde zwelling van het weefsel, die voornamelijk optreedt als gevolg van een verstoorde of verstoorde stroom van lymfe vloeistof in de lymfevaten1. De lymfestroom kan worden aangetast of verstoord door infectie, obstructie, letsel of aangeboren defecten in het lymfatische systeem2. Deze etiologieën resulteren in accumulatie van lymfatische vloeistof, wat leidt tot een chronische toestand van ontsteking, wat resulteert in latere fibrose, evenals de afzetting van vetweefsel3. Lymfoedeem kan worden gecategoriseerd als primair of secundair lymfoedeem. Primair lymfoedeem wordt veroorzaakt door ontwikkelingsafwijkingen of genetische mutatie2,4. Secundair lymfoedeem treedt op als gevolg van onderliggende systemische ziekte, chirurgie of trauma2,4. Secundair lymfoedeem is de meest voorkomende vorm van lymfoedeem in de wereld2. In ontwikkelde landen is de meest voorkomende oorzaak van secundair lymfoedeem oncologische therapie zoals adjuvante radiotherapie en lymfeklier dissectie5. Lymfoedeem komt het vaakst voor bij borstkankerpatiënten, maar kan zich ook ontwikkelen bij patiënten met gynaecologische, melanoom, urogenitaal of nekkanker6. Er is gesuggereerd dat van alle vrouwen gediagnosticeerd met borstkanker, 21% lymfoedeem zal ontwikkelen7.
Lymfoedeem kan zowel lichamelijk als psychologisch stressvol zijn voor de patiënt. Patiënten met lymfoedeem hebben een verhoogd risico op infectie5,8,9, slechte kwaliteit van leven en kunnen sociale angst en symptomen van depressie10ontwikkelen. De complicaties van chronisch lymfoedeem leiden tot hoge kosten van zorg en een verhoogde ziektelast9,11. De bevindingen hebben ook gesuggereerd dat lymfoedeem gepaard zou kunnen worden gebracht met een verhoogd risico op overlijden na behandeling van borstkanker12. Conservatief beheer zoals compressie van het getroffen gebied, handmatige lymfedrainage en algemene huidverzorging blijven de eerste lijn benadering. Er is momenteel geen curatieve behandeling6. Hoewel er vooruitgang is geboekt op het gebied van chirurgische en medische therapie, is er nog ruimte voor verbetering. Meer onderzoek, het verstrekken van inzicht in de pathofysiologie en progressie van de ziekte, is nodig om clinici in staat te stellen betere behandelingsopties te bieden voor de patiënten5.
Diermodellen worden in preklinisch onderzoek gebruikt om de pathofysiologie van ziekten te begrijpen en mogelijke behandelingsopties te ontwikkelen. Verschillende lymfoedeem-diermodellen zijn vastgesteld in de kannen13,14, konijnen15, schapen16, varkens17,18 en knaagdieren19,20, 21,22,23,24. Het knaagdier-model lijkt het meest kosteneffectieve model te zijn bij het onderzoeken van de reconstructie van de lymfatische functie, omdat knaagdieren gemakkelijk toegankelijk zijn en relatief laag geprijsd25. De meeste muizen modellen hebben zich geconcentreerd op het induceren van lymfoedeem in de staart van de muizen21,22,23. Het staart model is zeer betrouwbaar, maar de precieze chirurgische techniek voor het induceren van lymfoedeem varieert aanzienlijk in eerder gepubliceerd materiaal. Dit resulteert in schommelingen in de duur en robuustheid van het ontwikkelde lymfoedeem, gepresenteerd in de bekende litteratuur25. Er worden ook verschillende technieken gebruikt voor het induceren van lymfoedeem in het achterledemaat en ze leveren ook wisselende resultaten op, maar het achterlijf model kan vanuit een translationeel perspectief gemakkelijker te begrijpen zijn. Eerdere lymfoedeem-modellen zijn belemmerd door spontane lymfoedeem-resolutie en daarom is een reproduceerbaar en permanent lymfoedeem-model nodig25. Onderzoekers hebben eerder geprobeerd om de dosis van straling te verhogen, om de spontane lymfoedeem resolutie te voorkomen, maar dit heeft vaak geleid tot daaropvolgende ernstige morbiditeit25.
Dit model resulteert in statistisch significant lymfoedeem, zonder ernstige morbiditeit te veroorzaken, door microchirurgie met straling te combineren. Het model is gewijzigd van een eerder chirurgisch model door een dosis bestraling toe te voegen die lymfoedeem induceert, zonder ernstige morbiditeit26te veroorzaken. Het biedt ook een geweldige kans voor microchirurgische training. Toegang hebben tot microchirurgische apparatuur en een microscoop is noodzakelijk, vanwege de kleine anatomische structuren van de muizen. De chirurgische ingreep kan worden uitgevoerd wanneer de gebruiker basis microchirurgische technieken heeft geleerd, zoals het hechten met microchirurgische instrumenten. De operators die deze procedure uitgevoerd alle keek instructievideo's door Acland op de voorwaarden van microchirurgische vaardigheden (1981) en basis microsuture techniek (1985). We raden aan om de chirurgische ingreep 8 − 10 keer te beoefenen voordat u deze in onderzoek gebruikt. Het beoefenen van de procedure zorgt ervoor dat er minder fouten worden gemaakt en dat de procedure efficiënter kan worden uitgevoerd. Wanneer onder de knie, de chirurgische ingreep kan worden uitgevoerd in 45 minuten.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10-0 Nylon suture</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>12051-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Nylon suture - Dafilon</td>
			<td>B Braun</td>
			<td>C0933112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coagulator - ICC 50</td>
			<td>ERBE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td>Yibon medical co</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>09-0190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastic retractors</td>
			<td>Odense University Hospital</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical clipper</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>GT420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl 0,315 mg/ml</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad - PhysioSuite</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane 1000mg Attane</td>
			<td>Scan Vet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporizer - PPV</td>
			<td>Penlon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro jewler forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>1405-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Needle holder</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>25679-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>10128-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro tying forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>43953-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfine U-40 syringe 0,5ml</td>
			<td>BD</td>
			<td>328821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 25g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 27g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam 5 mg/ml (hameln)</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder - Circle wood</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>08-0065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non woven swabs</td>
			<td>Selefa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opmi pico microscope F170</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patent blue V - 25 mg/ml</td>
			<td>Guerbet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors - Joseph</td>
			<td>BD</td>
			<td>RH1630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siemens INVEON multimodality pre-clinical scanner</td>
			<td>Siemens pre-clinical solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Source of radiation - D3100</td>
			<td>Gulmay</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stata Statistical Software: Release 15</td>
			<td>StataCorp LLC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temgesic - 0,2 mg</td>
			<td>Indivior</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vet eye ointment - viscotears</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice

Diermodellen zijn van het allergrootste belang bij het onderzoek naar lymfoedeem om de pathofysiologie van de ziekte te begrijpen, maar ook om mogelijke behandelingsopties te onderzoeken. Dit muismodel stelt onderzoekers in staat om significant lymfoedeem te induceren dat ten minste 8 weken duurt. Lymfoedeem wordt geïnduceerd met behulp van een combinatie van gefractioneerde radiotherapie en chirurgische ablatie van lymfe bewegingen. Dit model vereist dat de muizen een dosis van 10 grijze (Gy) straling krijgen voor en na de operatie. Het chirurgische deel van het model omvat de ligatie van drie lymfevaten en de extractie van twee lymfeklieren van de muis-hindledemaat. Toegang hebben tot microchirurgische gereedschappen en een microscoop is essentieel, vanwege de kleine anatomische structuren van muizen. Het voordeel van dit model is dat het resulteert in statistisch significant lymfoedeem, wat een goede basis vormt voor het evalueren van verschillende behandelingsopties. Het is ook een geweldige en gemakkelijk beschikbare optie voor microchirurgische training. De beperking van dit model is dat de procedure tijdrovend kan zijn, vooral als niet van tevoren beoefend. Het model resulteert in objectief kwantificeerbaar lymfoedeem bij muizen, zonder ernstige morbiditeit te veroorzaken en is getest in drie afzonderlijke projecten.

Deze procedure is eerder gebruikt in drie afzonderlijke experimenten. Alle experimenten zijn gemaakt door verschillende lead onderzoekers die allemaal co-auteurs zijn van dit artikel. In alle drie experimenten werd grote zorgvuldigheid in acht genomen om te voldoen aan dezelfde procedure als beschreven in dit protocol. In alle drie de experimenten werd secundair lymfoedeem geïnduceerd in één achterledemaat, terwijl de andere achterledemaat als een controle diende. De volumes van de ach...

Watch this Scientific Journal Video about A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice at JoVE.com

A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice

Dit diermodel stelt onderzoekers in staat om statistisch significant secundair lymfoedeem in het achterlijf van muizen te induceren, met een minimumduur van 8 weken. Het model kan worden gebruikt om de pathofysiologie van lymfoedeem te bestuderen en nieuwe behandelingsopties te onderzoeken.

Een herziene methode voor het induceren van secundair lymfoedeem in het achterlijf van muizen

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore ...

Het algemene doel van deze methode is om consistent secundair lymfoedeem te induceren in de achterpoot van muizen zonder ernstige morbiditeit te veroorzaken. Deze methode kan worden gebruikt om secundair lymfoedeem te induceren in de achterpoot van muizen. Het belangrijkste voordeel van deze methode is dat het onbeduidend lymfoedeem oplost dat ten minste acht weken duurt zonder ernstige morbiditeit te veroorzaken.Iemand die nieuw is in de procedure kan worstelen met de microchirurgische technieken. We raden daarom microchirurgische training en verschillende praktijkprocedures aan om een succesvol resultaat te garanderen, maar ook om de onderzoeker voor te bereiden zodat hij of zij de procedure efficiënter kan uitvoeren. Stel de stralingsbron in en verdoof de muis zoals beschreven in het protocol.Plaats een 1,5 millimeter dik loden pad om ervoor te zorgen dat alleen het gebied dat een operatie ondergaat wordt bestraald. Het getoonde voorbeeld is van een post-operatie muis om het gebied te verduidelijken. Toedienen van een dosis van 10 grijze bestraling.De onderzoekers moeten voorzorgsmaatregelen nemen bij het werken met straling. Tijdens dit experiment werd alle bestraling uitgevoerd in een stralingsgeïsoleerde ruimte. En de stralingsbron werd alleen ingeschakeld toen al het personeel de kamer had verlaten.Weeg de muis voor de operatie. Onderzoek verdovingsdiepte per poot of staart pinch test. Scheer het been gekozen voor de procedure.Stel de zuurstofstroom in op 0,8 liter per minuut. Sluit het aan met een neuskegel. Breng oogheelkundige zalf aan.Injecteer 0,5 milliliter zout onderhuids, bij voorkeur in de scruff van de muis om hypovolemie tijdens de operatie te voorkomen. Plaats de muis op de chirurgische doek in supine positie. Plaats de neuskegel over de snuit.Fixeer het uiteinde van de achterpoten voorzichtig met tape, om te voorkomen dat de muis tijdens de operatie verschuift. Til de huid op met gladde tangen en klem een kleine opening van ongeveer vijf millimeter proximale naar de popliteal fossa. Schuif een scherpe schaar in de opening en klem naar de knie, zodat de incisie net boven de knie eindigt.Zorg ervoor dat u de onderliggende vaten niet doorboorde, door de huid op te tillen met tangen tijdens het knippen. Verplaats de muis naar de gevoelige positie en voltooi de omtrek incisie. Ontleed de huid tot een paar millimeter boven de hoek.Vergeet niet om het weefsel vochtig te houden met steriele zoutoplossing tijdens de hele procedure. Trek de huid van de proximale wond in met een elastisch oprolmechanisme. En zorg ervoor dat de heupader zichtbaar is zoals afgebeeld.Injecteer 0,01 milliliter Patent Blue V onderhuids tussen de tweede en derde teen. Druk voorzichtig een paar keer op de poot om de Patent Blue V.De distributie van de Patent Blue V kan worden gezien door de microscoop. De structuren die moeten worden gevisualiseerd zijn, het proximale lymfevat, PLV, de popliteale lymfeklier, PLN, het eerste distale lymfevat, DLV1, en het tweede distale lymfevat, DLV2.Vergroot om de PLV te visualiseren en te ligate het met behulp van een 10-0 nylon hechting. Druk op de poot om ervoor te zorgen dat er geen Patent Blue proximaal doorgeeft aan de ligatuur. Ligate de twee distale lymfevaten zoals afgebeeld.Druk de poot meerdere malen opnieuw om ervoor te zorgen dat er geen Patent Blue V proximaal doorgeeft aan de ligatuur. In dit voorbeeld kan worden gezien dat een van de lymfevaten barst als gevolg van de ligatuur die de lymfestroom belemmert. Verwijder de popliteale lymfeklier, de lymfeklier heeft een glad parelachtig oppervlak en wordt gekleurd door de Patent Blue V in tegenstelling tot het omringende vetweefsel.Voordat u het inguinale vetkussen verwijdert, moet u dit vat cauterize zoals afgebeeld. Verwijder vervolgens de vetkussen in één stuk. Zorg ervoor dat er geen actieve bloedingen.Dit is een voorbeeld van een inguinale lymfeklier. De lymfeklier in de inguinale vetpad wordt zelden gekleurd door het Patent Blue V en kan moeilijk te onderscheiden van het vet. Het verwijderen van de vetpad in een stuk is de beste manier om ervoor te zorgen dat de lymfeklier is verwijderd.Hecht de huid randen tot aan de spier fascia, met een 6-0 nylon hechting met behulp van tangen en naald houder, waardoor een gat van twee tot drie millimeter, om de oppervlakkige lymfestroom te beperken. Dit is een voorbeeld van de afgewerkte hechtingen, in de popliteal fossa, de zijdelingse kant van de achterpoot, boven de knie, en de mediale kant van de achterpoot. Beheer analgesie en weeg de muis na de operatie, dan plaats het in een kast verwarmd voor herstel.Herhaal de procedure voor pre-operatie bestraling. Deze grafiek toont het gecombineerde gemiddelde achterpootvolume van drie afzonderlijke studies in de acht weken na de operatie. In totaal werden 31 muizen opgenomen.De x-as staat voor weken na de operatie. De y-as vertegenwoordigt achterpootvolume in kubieke millimeter. De pijlbalken vertegenwoordigen de standaarddeviatie.Het is te verwachten dat de zwelling van de operatie en het geïnduceerde lymfoedeem gedurende de eerste vier weken zal afnemen. Na de eerste vier weken zien we een relatieve stabiele toestand van lymfoedeem. Het volume van de controle achterpoot neemt toe tijdens de acht weken, dus strikt zeggen het verschil in volume tussen de lymfoedeem achterpoot en de controle achterpoot, dit was onverwacht.De oorzaak wordt gespeculeerd te zijn dat de muizen hun niet-geopereerde achterpoot meer gebruikt dan de geopereerde achterpoot in de weken na de operatie. Dit kan leiden tot hypertrofie van de controle achterpoot en misschien verklaren de toename van het volume. Voor individuele cijfers over de drie opgenomen studies leest u het protocol.Deze tabel toont Sidak's meervoudige vergelijkingstest voor de gecombineerde volumemetingen van de drie opgenomen studies. De berekende P-waarde toont aan dat er statistisch significant verschil is tussen de achterpoten met geïnduceerd lymfoedeem en de controleachterpotten, gedurende alle acht weken van follow-up. Voor individuele statistische analyse van de drie opgenomen projecten leest u het protocol.Deze methode induceert statistisch significant lymfoedeem, dat minstens acht weken duurt. De procedure kan worden gebruikt om de petrificialiteit van lymfoedeem te bestuderen en om nieuwe behandelingsopties te onderzoeken. Na het bekijken van deze video, moet u hebben opgedaan een goed begrip van hoe secundairlymfoedeem induceren in de achterpoot van muizen, met behulp van een combinatie van microchirurgie en pre-en post-operatie bestraling.Eenmaal onder de knie, kan de chirurgische ingreep worden uitgevoerd in 45 minuten.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

A Simple Guide Schroef Methode voor Intracraniële xenograft Studies in Muizen

The grafting of human tumor cells into the brain of immunosuppressed mice is an established method for the study of brain cancers including glioblastoma ...

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

De Trier Social Stress Test Protocol voor het induceren van psychologische stress

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

Inducerende Myointimal Hyperplasie Versus atherosclerose in Muizen: Een inleiding van twee geldige Models

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Halsslagader Infusions voor farmacokinetische en farmacodynamische analyse van Taxanen in Muizen

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Minimal Invasive Surgical Procedure of Inducing Myocardial Infarction in Mice

Minimaal invasieve chirurgische procedure voor het induceren van Myocardinfarct in Muizen

Myocardial infarction still remains the main cause of death in western countries, despite considerable progress in the stent development area in the last ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Een verbeterde werkwijze voor snelle intubatie van de trachea in muizen

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Inductie van versnelde atherosclerose bij muizen: het "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Beoordeling van therapeutische angiogenese in een Muriene model van Hindledemaat ischemie

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Inducerende acute Long blessure bij muizen door directe Intratracheal lipopolysaccharide instillatie

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

Een High-Throughput In Situ Methode voor schatting van Hepatocyte Nucleaire Ploidy in muizen

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...