Name: a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice
Uploaded: 2019-11-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice at JoVE.com

המחברים מודים פיטר בוללן, ראש המעבדה ביו-רפואי להלוואות את הציוד הדרוש כדי להקליט את המדה לראות דרך מיקרוסקופים.

בעלי חיים היו שוכנו באוניברסיטת דרום דנמרק מתקן טיפול בעלי חיים לפי הנחיות מוסדי. כל ההליכים הכרוכים בנושאי בעלי חיים אושרו על ידי ניסויים בבעלי חיים Inspectorate, משרד הסביבה והמזון של דנמרק.
1. הקרנה טרום-ניתוח
הערה: הקרנה טרום ניתוח מתקיימת 7 ימים לפני הניתוח.
<ol><...

<ol>
	<li>Lawenda, B. D., Mondry, T. E., Johnstone, P. A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+a+primer+on+the+identification+and+management+of+a+chronic+condition+in+oncologic+treatment.">Lymphedema: a primer on the identification and management of a chronic condition in oncologic treatment.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 59 (1), 8-24 (2009).</li><li>Greene, A. K., Greene, A. K., Slavin, S. A., Brorson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+morbidity+of+lymphedema.">Epidemiology and morbidity of lymphedema.</a> Lymphedema: Presentation, Diagnosis, and Treatment. , 33-44 (2015).</li><li>Hespe, G. E., Nores, G. G., Huang, J. J., Mehrara, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+lymphedema-Is+there+a+chance+for+medication+treatment?.">Pathophysiology of lymphedema-Is there a chance for medication treatment?.</a> Journal of Surgical Oncology. 115 (1), 96-98 (2017).</li><li>Grada, A. A., Phillips, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+Pathophysiology+and+clinical+manifestations.">Lymphedema: Pathophysiology and clinical manifestations.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 77 (6), 1009-1020 (2017).</li><li>Chang, D. W., Masia, J., Garza, R., Skoracki, R., Neligan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+Surgical+and+Medical+Therapy.">Lymphedema: Surgical and Medical Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 209S-218S (2016).</li><li>Carl, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Review+of+the+Surgical+Treatment+of+Extremity+Lymphedema.">Systematic Review of the Surgical Treatment of Extremity Lymphedema.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 33 (6), 412-425 (2017).</li><li>DiSipio, T., Rye, S., Newman, B., Hayes, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+unilateral+arm+lymphoedema+after+breast+cancer:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Incidence of unilateral arm lymphoedema after breast cancer: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Oncology. 14 (6), 500-515 (2013).</li><li>Douglass, J., Graves, P., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-Care+for+Management+of+Secondary+Lymphedema:+A+Systematic+Review.">Self-Care for Management of Secondary Lymphedema: A Systematic Review.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 10 (6), e0004740 (2016).</li><li>Shih, Y. C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence,+treatment+costs,+and+complications+of+lymphedema+after+breast+cancer+among+women+of+working+age:+a+2-year+follow-up+study.">Incidence, treatment costs, and complications of lymphedema after breast cancer among women of working age: a 2-year follow-up study.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (12), 2007-2014 (2009).</li><li>Ridner, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+psycho-social+impact+of+lymphedema.">The psycho-social impact of lymphedema.</a> Lymphatic Research and Biology. 7 (2), 109-112 (2009).</li><li>Gutknecht, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cost-of-illness+of+patients+with+lymphoedema.">Cost-of-illness of patients with lymphoedema.</a> Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology. 31 (11), 1930-1935 (2017).</li><li>Hayes, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+prognostic+significance+of+secondary+lymphedema+following+breast+cancer.">Prevalence and prognostic significance of secondary lymphedema following breast cancer.</a> Lymphatic Research and Biology. 9 (3), 135-141 (2011).</li><li>Danese, C. A., Georgalas-Bertakis, M., Morales, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+chronic+postsurgical+lymphedema+in+dogs'+limbs.">A model of chronic postsurgical lymphedema in dogs' limbs.</a> Surgery. 64 (4), 814-820 (1968).</li><li>Das, S. K., Franklin, J. D., O'Brien, B. M., Morrison, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+model+of+secondary+lymphedema+in+dogs.">A practical model of secondary lymphedema in dogs.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 68 (3), 422-428 (1981).</li><li>Huang, G. K., Hsin, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+lymphedema+in+rabbit+ear.">An experimental model for lymphedema in rabbit ear.</a> Microsurgery. 4 (4), 236-242 (1983).</li><li>Tobbia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema+development+and+lymphatic+function+following+lymph+node+excision+in+sheep.">Lymphedema development and lymphatic function following lymph node excision in sheep.</a> Journal of Vascular Research. 46 (5), 426-434 (2009).</li><li>Lahteenvuo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor+therapy+and+autologous+lymph+node+transfer+in+lymphedema.">Growth factor therapy and autologous lymph node transfer in lymphedema.</a> Circulation. 123 (6), 613-620 (2011).</li><li>Honkonen, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+transfer+and+perinodal+lymphatic+growth+factor+treatment+for+lymphedema.">Lymph node transfer and perinodal lymphatic growth factor treatment for lymphedema.</a> Annals of Surgery. 257 (5), 961-967 (2013).</li><li>Wang, G. Y., Zhong, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+experimental+lymphedema+in+rats'+limbs.">A model of experimental lymphedema in rats' limbs.</a> Microsurgery. 6 (4), 204-210 (1985).</li><li>Oashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+acquired+lymphedema+in+the+mouse+hind+limb:+a+preliminary+report.">A new model of acquired lymphedema in the mouse hind limb: a preliminary report.</a> Annals of Plastic Surgery. 69 (5), 565-568 (2012).</li><li>Slavin, S. A., Van den Abbeele, A. D., Losken, A., Swartz, M. A., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Return+of+lymphatic+function+after+flap+transfer+for+acute+lymphedema.">Return of lymphatic function after flap transfer for acute lymphedema.</a> Annals of Surgery. 229 (3), 421-427 (1999).</li><li>Cheung, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+the+study+of+lymphedema+and+its+response+to+therapeutic+lymphangiogenesis.">An experimental model for the study of lymphedema and its response to therapeutic lymphangiogenesis.</a> BioDrugs : Clinical Immunotherapeutics, Biopharmaceuticals and Gene Therapy. 20 (6), 363-370 (2006).</li><li>Rutkowski, J. M., Moya, M., Johannes, J., Goldman, J., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secondary+lymphedema+in+the+mouse+tail:+Lymphatic+hyperplasia,+VEGF-C+upregulation,+and+the+protective+role+of+MMP-9.">Secondary lymphedema in the mouse tail: Lymphatic hyperplasia, VEGF-C upregulation, and the protective role of MMP-9.</a> Microvascular Research. 72 (3), 161-171 (2006).</li><li>Tammela, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+differentiation+and+maturation+of+lymphatic+vessels+after+lymph+node+dissection+and+transplantation.">Therapeutic differentiation and maturation of lymphatic vessels after lymph node dissection and transplantation.</a> Nature Medicine. 13 (12), 1458-1466 (2007).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+surgical+lymphedema+research--a+systematic+review.">Animal models in surgical lymphedema research--a systematic review.</a> Journal of Surgical Research. 200 (1), 208-220 (2016).</li><li>Jorgensen, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Chronic+Lymphedema+in+a+Revised+Mouse+Model.">Quantification of Chronic Lymphedema in a Revised Mouse Model.</a> Annals of Plastic Surgery. 81 (5), 594-603 (2018).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+3D+volumetry+versus+conventional+measuring+techniques+for+the+assessment+of+experimental+lymphedema+in+the+mouse+hindlimb.">High-resolution 3D volumetry versus conventional measuring techniques for the assessment of experimental lymphedema in the mouse hindlimb.</a> Scientific Reports. 6, 34673 (2016).</li><li>Biau, D. J., Kerneis, S., Porcher, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistics+in+brief:+the+importance+of+sample+size+in+the+planning+and+interpretation+of+medical+research.">Statistics in brief: the importance of sample size in the planning and interpretation of medical research.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 466 (9), 2282-2288 (2008).</li><li>Korula, P., Varma, S. K., Sunderrao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+wound+contraction+by+point-to-point+adherent+splintage.">Inhibition of wound contraction by point-to-point adherent splintage.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 95 (4), 725-730 (1995).</li><li>Komatsu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+Drainage+During+Wound+Healing+in+a+Hindlimb+Lymphedema+Mouse+Model.">Lymph Drainage During Wound Healing in a Hindlimb Lymphedema Mouse Model.</a> Lymphatic Research and Biology. 15 (1), 32-38 (2017).</li></ol>

קיימים מספר שלבים קריטיים בפרוטוקול זה. ראשית, חשוב כי החוקרים לנקוט אמצעי זהירות בטיחות כאשר עובדים עם רדיואקטיביות. שנית, במהלך הניתוח של פרוטוקול זה, חשוב להתחיל את ההליך ברגע שהעכבר מורדם ולסיים אותו ללא הפסקות מיותרות. זה חשוב להימנע מתקופה כירורגית ארוכה מדי עבור בעל החיים כדי למנוע ...

ימפתית מאופיין על ידי הצטברות של נוזל הלימפה המובילה נפיחות רקמות מקומי, אשר מתרחשת בעיקר בשל לקויי או זרימה של נוזל הלימפה בכלי הלימפה1. זרימת הלימפה יכול להיות לקוי או מופרת על ידי זיהום, חסימה, פציעה או פגמים מולדים במערכת הלימפה2. אלה התוצאה הסופית של הצטברות של נוזל הלימפה, אשר מוביל למצב כרוני של דלקת, וכתוצאה מכך פיברוזיס הבאים, כמו גם התצהיר של רקמת האדיפוז3. ניתן לסווג את ימפתית כימפתית ראשי או משני. ראשי ימפתית נגרמת על ידי חריגות התפתחותיות או מוטציה גנטית2,4. ימפתית משנית מתרחשת בשל מחלה מערכתית הבסיסית, ניתוח או טראומה2,4. ימפתית משנית היא הצורה הנפוצה ביותר של ימפתית בעולם2. במדינות מפותחות, הגורם השכיח ביותר של ימפתית משנית הוא טיפול אונלוגי כגון הקרנות שדון ובלוטות הלימפה לנתיחה5. ימפתית הוא הנפוץ ביותר בקרב חולי סרטן השד, אבל יכול גם לפתח בחולים עם גניקולוגיות, מלנומה, שמין או סרטן צווארשישה. זה הציע כי מתוך כל הנשים שאובחנו עם סרטן השד, 21% יפתחו ימפתית7.
ימפתית יכול להיות מלחיץ את המטופל הן פיזית ופסיכולוגית. חולים עם ימפתית יש סיכון מוגבר של זיהום5,8,9, איכות ירודה של החיים והוא יכול לפתח חרדה חברתית ותסמינים של דיכאון10. הסיבוכים של ימפתית כרונית להוביל לעלות גבוהה של טיפול ונטל מחלות מוגברת9,11. ממצאים הציעו גם כי ימפתית עשוי להיות משויך לסיכון מוגבר למוות לאחר טיפול בסרטן השד12. ניהול שמרני כגון דחיסה של האזור המושפע, ניקוז לימפה ידני וטיפוח כללי להישאר הגישה הקו הראשון. כרגע אין טיפול מרפא6. למרות שההתקדמות נעשתה בתחום הטיפול הכירורגי והרפואי, עדיין יש מקום לשיפור. מחקר נוסף, מתן תובנה הפתופסולוגיה והתקדמות של המחלה, יש צורך לאפשר לרופאים כדי לספק אפשרויות טיפול טוב יותר עבור חולים5.
מודלים בעלי חיים נמצאים בשימוש במחקרים פרה-קליניים כדי להבין את הפתופסיולוגיה של מחלות ולפתח אפשרויות טיפול פוטנציאליות. מספר מודלים ימפתית בעלי חיים שונים הוקמו כלבים13,14, ארנבים15, כבשים16, חזירים17,18 ומכרסמים19,20, . 21,22,23,24 המודל מכרסם נראה המודל החסכוני ביותר, כאשר בחקירת שחזור של תפקוד הלימפה, בשל מכרסמים נגיש בקלות יחסית נמוכה במחיר25. רוב המודלים עכברים התמקדו גרימת ימפתית בזנב של עכברים21,22,23. מודל הזנב הוא מאוד אמין, אבל את הטכניקה כירורגית מדויקת לגרימת ימפתית משתנה באופן משמעותי בחומר שפורסם קודם לכן. התוצאה היא תנודות במשך ובחוסן של הימפתית המפותחות שהוצגו בשנת הארגז הידוע25. טכניקות שונות משמשות גם לגרימת ימפתית במודל הגוף החדש והם גם להניב תוצאות משתנות, אבל המודל החדש עשוי להיות קל יותר להבין מנקודת מבט טרנסלבית. הדגמים הקודמים ימפתית כבר ה על ידי החלטה ספונטנית ימפתית ולכן מודל ימפתית להיות לאחר וקבע צריך25. החוקרים ניסו בעבר להגדיל את מינון הקרינה, כדי למנוע את הרזולוציה ימפתית ספונטנית, אבל זה הוביל לעתים קרובות לתחלואה חמורה הבאים25.
מודל זה מביא לימפתית משמעותיים מבחינה סטטיסטית, מבלי לגרום לתחלואה חמורה, על ידי שילוב מיקרו-ניתוחים עם קרינה. המודל תוקן ממודל כירורגי קודם על ידי הוספת מנה של הקרנה הגורמת ימפתית, מבלי לגרום לתחלואה קשה26. הוא גם מציע הזדמנות מצוינת להכשרה מיקרוכירורגית. לאחר גישה לציוד מיקרו כירורגי מיקרוסקופ הוא הכרחי, בשל מבנים אנטומיים קטנים של העכברים. הליך כירורגי ניתן לבצע כאשר המשתמש כבר לימד טכניקות מיקרו כירורגי בסיסיות, כגון תפירה עם כלי מיקרו כירורגי. המפעילים כי ביצעו את ההליך הזה כל קטעי וידאו הדרכה שנצפו על ידי acland על תנאי מראש של מיומנויות יקרוכירורגית (1981) וטכניקה מיקרותפר בסיסי (1985). אנו ממליצים לתרגל את ההליך הכירורגי 8-10 פעמים לפני השימוש בו במחקר. תרגול ההליך מבטיח כי בוצעו פחות טעויות ושהתהליך יכול להתבצע ביתר יעילות. כאשר שולט, ההליך הכירורגי ניתן לבצע בתוך 45 דקות.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10-0 Nylon suture</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>12051-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Nylon suture - Dafilon</td>
			<td>B Braun</td>
			<td>C0933112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coagulator - ICC 50</td>
			<td>ERBE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td>Yibon medical co</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>09-0190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastic retractors</td>
			<td>Odense University Hospital</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical clipper</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>GT420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl 0,315 mg/ml</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad - PhysioSuite</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane 1000mg Attane</td>
			<td>Scan Vet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporizer - PPV</td>
			<td>Penlon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro jewler forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>1405-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Needle holder</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>25679-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>10128-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro tying forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>43953-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfine U-40 syringe 0,5ml</td>
			<td>BD</td>
			<td>328821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 25g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 27g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam 5 mg/ml (hameln)</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder - Circle wood</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>08-0065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non woven swabs</td>
			<td>Selefa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opmi pico microscope F170</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patent blue V - 25 mg/ml</td>
			<td>Guerbet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors - Joseph</td>
			<td>BD</td>
			<td>RH1630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siemens INVEON multimodality pre-clinical scanner</td>
			<td>Siemens pre-clinical solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Source of radiation - D3100</td>
			<td>Gulmay</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stata Statistical Software: Release 15</td>
			<td>StataCorp LLC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temgesic - 0,2 mg</td>
			<td>Indivior</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vet eye ointment - viscotears</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice

דגמי בעלי חיים הם בעלי חשיבות עליונה במחקר של ימפתית על מנת להבין את הפתופסולוגיה של המחלה, אלא גם כדי לחקור אפשרויות טיפול פוטנציאליות. מודל זה של העכבר מאפשר לחוקרים לגרום ימפתית משמעותי מתמשך לפחות 8 שבועות. ימפתית הוא המושרה באמצעות שילוב של הקרנות שבירה ואבלציה כירורגית של lymphatics. מודל זה דורש כי העכברים לקבל מנה של 10 אפור (Gy) קרינה לפני ואחרי הניתוח. החלק הכירורגי של המודל כולל הארכה של שלושה כלי הלימפה החילוץ של שני בלוטות הלימפה מתוך הגוף החוצה העכבר. לאחר גישה לכלי מיקרו כירורגי מיקרוסקופ חיוני, בשל מבנים אנטומיים קטנים של עכברים. היתרון של מודל זה הוא שהוא יוצר ימפתית משמעותיים סטטיסטית, אשר מספק בסיס טוב להערכת אפשרויות טיפול שונות. זוהי גם אפשרות גדולה וזמינה בקלות עבור הכשרה מיקרוכירורגית. המגבלה של מודל זה היא כי ההליך יכול להיות ארוך זמן, במיוחד אם לא לתרגל מראש. המודל מביא לימפתית באופן אובייקטיבי בעכברים, מבלי לגרום לתחלואה קשה ונבדק בשלושה פרויקטים נפרדים.

הליך זה שימש בעבר בשלושה ניסויים נפרדים. כל הניסויים נעשו על ידי חוקרים מובילים שונים אשר כולם מחברים שותפים של מאמר זה. בכל שלושת הניסויים, הטיפול הגדול נלקח לדבוק באותו תהליך כפי שמתואר בפרוטוקול זה. בכל שלושת הניסויים, ימפתית משנית המושרה באחד הגפיים האחרון בעוד האיבר ...

Watch this Scientific Journal Video about A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice at JoVE.com

A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice

מודל זה חיה מאפשר לחוקרים לגרום מימפתית משני משמעותי מבחינה סטטיסטית בתוך האיבר הארוך של עכברים, שנמשך לפחות 8 שבועות. המודל יכול לשמש כדי ללמוד את הפתופסולוגיה של ימפתית ולחקור אפשרויות טיפול הרומן.

שיטה מתוקנת לגרימת ימפתית משנית בתוך הגפיים של עכברים

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore ...

המטרה הכוללת של שיטה זו היא לגרום בצקת לימפתית משנית עקבית בדיעבד של עכברים מבלי לגרום לתחלואה חמורה. שיטה זו יכולה לשמש כדי לגרום בצקת לימפתית משנית בדיעבד של עכברים. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא שהיא פותרת בצקת לימפתית חסרת משמעות שתימשך לפחות שמונה שבועות מבלי לגרום לתחלואה חמורה.מישהו חדש בהליך עשוי להיאבק בטכניקות המיקרוכירורגיות. לכן אנו ממליצים על אימון מיקרוכירורגי וכמה הליכי תרגול כדי להבטיח תוצאה מוצלחת, אלא גם כדי להכין את החוקר כך שהוא או היא יוכלו לבצע את ההליך בצורה יעילה יותר. הגדר את מקור הקרינה והרס את העכבר כמתואר בפרוטוקול.מניחים כרית עופרת בעובי 1.5 מ"מ כדי להבטיח שרק האזור שעובר ניתוח מוקרן. הדוגמה המוצגת היא של עכבר לאחר הניתוח כדי להבהיר את האזור. מתן מנה של 10 הקרנה אפורה.החוקרים חייבים לנקוט אמצעי זהירות בעת עבודה עם קרינה. במהלך ניסוי זה כל ההקרנה בוצעה בחדר מבודד קרינה. ומקור הקרינה נדלק רק כאשר כל אנשי הצוות עזבו את החדר.לשקול את העכבר לפני הניתוח. בחן עומק הרדמה על ידי מבחן כף רגל או צביטת זנב. לגלח את הרגל שנבחרה להליך.הגדר את זרימת החמצן ל 0.8 ליטר לדקה. לחבר אותו עם חרוט האף. החל משחה עיניים.להזריק 0.5 מיליליטר של מלוחים תת עורית, רצוי ב scruff של העכבר כדי למנוע hypovolemia במהלך הניתוח. מניחים את העכבר על הבד הכירורגי במצב על-חושי. מניחים את חרוט האף על האף.לקבע את הקצה של hindlimbs בעדינות עם קלטת, כדי למנוע את העכבר מפני הסטה במהלך הניתוח. מרימים את העור במלקחי חלקים וחותכים פתח קטן כ-5 מילימטרים קרובים לאפוסה הפופליטית. החלק מספריים חדים לתוך הפתח וגזור לכיוון הברך, כך החתך מסתיים ממש מעל הברך.הקפד לא לנקב את כלי הדם הבסיסיים, על ידי הרמת העור עם מלקחים בעת חיתוך. להזיז את העכבר למיקום נוטה ולהשלים את החתך ההיקף. לנתח את העור לכמה מילימטרים מעל הזווית.זכור לשמור על הרקמה לחה עם מלוחים סטריליים במהלך כל ההליך. נסיגת העור של הפצע הפרוקסימלי עם מפשק אלסטי. וודאו שהווריד הסיאטי נראה כפי שמוצג.להזריק 0.01 מיליליטר פטנט כחול V תת עורית בין בוהן השנייה והשלישית. בעדינות ללחוץ על הכף כמה פעמים כדי להפיץ את V.The הפטנט הכחול ההפצה של V כחול פטנט ניתן לראות דרך המיקרוסקופ. המבנים הדרושים כדי להיות חזותיים הם, כלי הלימפה proximal, PLV, צומת הלימפה popliteal, PLN, כלי הלימפה הדיסטלי הראשון, DLV1, ואת כלי הלימפה דיסטלי השני, DLV2.הגדל כדי לדמיין את ה- PLV וללקט אותו באמצעות תפר ניילון 10-0. לחץ על הכף כדי להבטיח שאף פטנט כחול לא יעבור קרוב לקשירה. Ligate שני כלי הלימפה דיסטלי כפי שמוצג.לחץ על הכף מספר פעמים שוב כדי לוודא כי שום V כחול פטנט עובר קרוב לקשירה. בדוגמה זו, ניתן לראות כי אחד מכלי הלימפה מתפרץ עקב הקשירה המעכבת את זרימת הלימפה. הסר את צומת הלימפה popliteal, צומת הלימפה יש משטח חלק דמוי פנינה והוא נצבע על ידי V כחול פטנט בניגוד לרקמת השומן שמסביב.לפני הסרת כרית השומן inguinal, לצרוב את הכלי הזה כפי שמוצג. ואז להסיר את כרית השומן בחתיכה אחת. ודא כי אין דימום פעיל.זוהי דוגמה של צומת לימפה inguinal ממוקם. צומת הלימפה הממוקם כרית השומן inguinal הוא לעתים רחוקות בצבע על ידי V כחול פטנט יכול להיות קשה להבדיל מן השומן. הסרת כרית השומן בחתיכה אחת היא הדרך הטובה ביותר להבטיח כי צומת הלימפה הוסר.תפר את קצות העור עד fascia השריר, עם תפר ניילון 6-0 באמצעות מטח ומחזיק מחט, משאיר פער של שניים עד שלושה מילימטרים, כדי להגביל את זרימת הלימפה שטחית. זוהי דוגמה לתפרים המוגמרים, באפוסה הפופליטית, בצד הצדדי של הבד האחורי, מעל הברך, ובצוד המדיאלי של האחורי. לנהל משככי כאבים ולשקול את העכבר לאחר הניתוח, ולאחר מכן למקם אותו ארון מחומם להחלמה.חזור על ההליך להקרנה לפני הניתוח. גרף זה מראה את נפח hindlimb הממוצע המשולב של שלושה מחקרים נפרדים בשמונת השבועות שלאחר הניתוח. 31 עכברים נכללו בסך הכל.ציר ה-x מייצג שבועות לאחר הניתוח. ציר ה- y מייצג נפח אחורי במילימטרים מעוקבים. סרגלי החצים מייצגים את סטיית התקן.יש לצפות כי הנפיחות מהניתוח ואת בצקת הלימפה המושרה יקטן במהלך ארבעת השבועות הראשונים. לאחר ארבעת השבועות הראשונים אנו רואים מצב יציב יחסית של בצקת לימפתית. נפח השליטה hindlimb עולה במהלך שמונת השבועות, ובכך בקפדנות אומר את ההבדל בנפח בין hindlimb בצקת הלימפה ואת hindlimb שליטה, זה היה בלתי צפוי.הגורם הוא העריך להיות כי העכברים השתמשו hindlimb לא מופעל שלהם יותר מאשר hindlimb המופעל בשבועות שלאחר הניתוח. זה יכול להוביל היפרטרופיה של hindlimb שליטה ואולי להסביר את הגידול בנפח. לנתונים פרטניים על שלושת המחקרים שנכללו אנא קראו את הפרוטוקול.טבלה זו מציגה את מבחן ההשוואה המרובים של Sidak למדידות הנפח המשולבות של שלושת המחקרים הכלולים. ערך P מחושב מראה כי יש הבדל מובהק סטטיסטית בין hindlimbs עם בצקת לימפתית המושרה ואת השליטה hindlimbs, במהלך כל שמונת השבועות של מעקב. לניתוח סטטיסטי פרטני על שלושת הפרויקטים הכלולים אנא קרא את הפרוטוקול.שיטה זו גורמת בצקת לימפתית מובהקת סטטיסטית, נמשך לפחות שמונה שבועות. ההליך יכול לשמש כדי ללמוד את פטריות של בצקת הלימפה כדי לחקור אפשרויות טיפול חדשני. לאחר צפייה בסרטון זה, היית צריך להשיג הבנה של איך לגרום בצקת לימפתית משנית בדיעבד של עכברים, באמצעות שילוב של מיקרוכירורגיה הקרנה לפני ואחרי הניתוח.לאחר השליטה, ניתן לבצע את ההליך הכירורגי תוך 45 דקות.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

מדריך פשוט בורג שיטה ללימודי xenograft תוך גולגולתי של עכברים

The grafting of human tumor cells into the brain of immunosuppressed mice is an established method for the study of brain cancers including glioblastoma ...

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

מבחן הלחץ החברתי טרייר פרוטוקול גרימת לחץ פסיכולוגי

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

גרימת Myointimal היפרפלזיה נגד טרשת עורקים בעכברים: מבוא של שני מודלים חוקיים

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

חליטות עורק הראשי לpharmacokinetic וpharmacodynamic ניתוח של taxanes בעכברים

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Minimal Invasive Surgical Procedure of Inducing Myocardial Infarction in Mice

נוהל כירורגי זעיר פולשנית של גרימת אוטם שריר הלב בעכברים

Myocardial infarction still remains the main cause of death in western countries, despite considerable progress in the stent development area in the last ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

שיטה משופרת עבור אינטובציה מהירה של קנה הנשימה של עכברים

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים: מודל "פגיעת חוט"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

הערכת אנגיוגנזה תרפויטי במודל של מורטין של איסכמיה החוצה

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

גרימת פציעה חריפה של הריאה בעכברים על ידי הישירה ליפופוליסכראסטיליאלגרלציה

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

תפוקה גבוהה בשיטת באתרו להערכת הפטציט הגרעיני בעכברים

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...