Name: a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice
Uploaded: 2019-11-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice at JoVE.com

Forfatterne takker Peter bollen, leder av biomedisinsk laboratorium for utlån av utstyr som trengs for å spille inn opptakene sett gjennom mikroskop.

Dyrene var huset inne det universitet av Sør Danmark dyr bekymre Letter ifølge institusjonell retningslinjene. Alle prosedyrer som involverer dyr har blitt godkjent av The Animal eksperimenter Datatilsynet, Miljøverndepartementet og mat av Danmark.
1. pre-kirurgi bestråling
Merk: pre-kirurgi bestråling finner sted 7 dager før operasjonen.
<ol><li>Indusere anestesi.<ol>
<li>Plasser musen i en induksjon boks og sette fordamper til 3% isoflurane med en oksygen ...

<ol>
	<li>Lawenda, B. D., Mondry, T. E., Johnstone, P. A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+a+primer+on+the+identification+and+management+of+a+chronic+condition+in+oncologic+treatment.">Lymphedema: a primer on the identification and management of a chronic condition in oncologic treatment.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 59 (1), 8-24 (2009).</li><li>Greene, A. K., Greene, A. K., Slavin, S. A., Brorson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+morbidity+of+lymphedema.">Epidemiology and morbidity of lymphedema.</a> Lymphedema: Presentation, Diagnosis, and Treatment. , 33-44 (2015).</li><li>Hespe, G. E., Nores, G. G., Huang, J. J., Mehrara, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+lymphedema-Is+there+a+chance+for+medication+treatment?.">Pathophysiology of lymphedema-Is there a chance for medication treatment?.</a> Journal of Surgical Oncology. 115 (1), 96-98 (2017).</li><li>Grada, A. A., Phillips, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+Pathophysiology+and+clinical+manifestations.">Lymphedema: Pathophysiology and clinical manifestations.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 77 (6), 1009-1020 (2017).</li><li>Chang, D. W., Masia, J., Garza, R., Skoracki, R., Neligan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+Surgical+and+Medical+Therapy.">Lymphedema: Surgical and Medical Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 209S-218S (2016).</li><li>Carl, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Review+of+the+Surgical+Treatment+of+Extremity+Lymphedema.">Systematic Review of the Surgical Treatment of Extremity Lymphedema.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 33 (6), 412-425 (2017).</li><li>DiSipio, T., Rye, S., Newman, B., Hayes, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+unilateral+arm+lymphoedema+after+breast+cancer:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Incidence of unilateral arm lymphoedema after breast cancer: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Oncology. 14 (6), 500-515 (2013).</li><li>Douglass, J., Graves, P., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-Care+for+Management+of+Secondary+Lymphedema:+A+Systematic+Review.">Self-Care for Management of Secondary Lymphedema: A Systematic Review.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 10 (6), e0004740 (2016).</li><li>Shih, Y. C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence,+treatment+costs,+and+complications+of+lymphedema+after+breast+cancer+among+women+of+working+age:+a+2-year+follow-up+study.">Incidence, treatment costs, and complications of lymphedema after breast cancer among women of working age: a 2-year follow-up study.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (12), 2007-2014 (2009).</li><li>Ridner, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+psycho-social+impact+of+lymphedema.">The psycho-social impact of lymphedema.</a> Lymphatic Research and Biology. 7 (2), 109-112 (2009).</li><li>Gutknecht, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cost-of-illness+of+patients+with+lymphoedema.">Cost-of-illness of patients with lymphoedema.</a> Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology. 31 (11), 1930-1935 (2017).</li><li>Hayes, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+prognostic+significance+of+secondary+lymphedema+following+breast+cancer.">Prevalence and prognostic significance of secondary lymphedema following breast cancer.</a> Lymphatic Research and Biology. 9 (3), 135-141 (2011).</li><li>Danese, C. A., Georgalas-Bertakis, M., Morales, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+chronic+postsurgical+lymphedema+in+dogs'+limbs.">A model of chronic postsurgical lymphedema in dogs' limbs.</a> Surgery. 64 (4), 814-820 (1968).</li><li>Das, S. K., Franklin, J. D., O'Brien, B. M., Morrison, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+model+of+secondary+lymphedema+in+dogs.">A practical model of secondary lymphedema in dogs.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 68 (3), 422-428 (1981).</li><li>Huang, G. K., Hsin, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+lymphedema+in+rabbit+ear.">An experimental model for lymphedema in rabbit ear.</a> Microsurgery. 4 (4), 236-242 (1983).</li><li>Tobbia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema+development+and+lymphatic+function+following+lymph+node+excision+in+sheep.">Lymphedema development and lymphatic function following lymph node excision in sheep.</a> Journal of Vascular Research. 46 (5), 426-434 (2009).</li><li>Lahteenvuo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor+therapy+and+autologous+lymph+node+transfer+in+lymphedema.">Growth factor therapy and autologous lymph node transfer in lymphedema.</a> Circulation. 123 (6), 613-620 (2011).</li><li>Honkonen, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+transfer+and+perinodal+lymphatic+growth+factor+treatment+for+lymphedema.">Lymph node transfer and perinodal lymphatic growth factor treatment for lymphedema.</a> Annals of Surgery. 257 (5), 961-967 (2013).</li><li>Wang, G. Y., Zhong, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+experimental+lymphedema+in+rats'+limbs.">A model of experimental lymphedema in rats' limbs.</a> Microsurgery. 6 (4), 204-210 (1985).</li><li>Oashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+acquired+lymphedema+in+the+mouse+hind+limb:+a+preliminary+report.">A new model of acquired lymphedema in the mouse hind limb: a preliminary report.</a> Annals of Plastic Surgery. 69 (5), 565-568 (2012).</li><li>Slavin, S. A., Van den Abbeele, A. D., Losken, A., Swartz, M. A., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Return+of+lymphatic+function+after+flap+transfer+for+acute+lymphedema.">Return of lymphatic function after flap transfer for acute lymphedema.</a> Annals of Surgery. 229 (3), 421-427 (1999).</li><li>Cheung, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+the+study+of+lymphedema+and+its+response+to+therapeutic+lymphangiogenesis.">An experimental model for the study of lymphedema and its response to therapeutic lymphangiogenesis.</a> BioDrugs : Clinical Immunotherapeutics, Biopharmaceuticals and Gene Therapy. 20 (6), 363-370 (2006).</li><li>Rutkowski, J. M., Moya, M., Johannes, J., Goldman, J., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secondary+lymphedema+in+the+mouse+tail:+Lymphatic+hyperplasia,+VEGF-C+upregulation,+and+the+protective+role+of+MMP-9.">Secondary lymphedema in the mouse tail: Lymphatic hyperplasia, VEGF-C upregulation, and the protective role of MMP-9.</a> Microvascular Research. 72 (3), 161-171 (2006).</li><li>Tammela, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+differentiation+and+maturation+of+lymphatic+vessels+after+lymph+node+dissection+and+transplantation.">Therapeutic differentiation and maturation of lymphatic vessels after lymph node dissection and transplantation.</a> Nature Medicine. 13 (12), 1458-1466 (2007).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+surgical+lymphedema+research--a+systematic+review.">Animal models in surgical lymphedema research--a systematic review.</a> Journal of Surgical Research. 200 (1), 208-220 (2016).</li><li>Jorgensen, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Chronic+Lymphedema+in+a+Revised+Mouse+Model.">Quantification of Chronic Lymphedema in a Revised Mouse Model.</a> Annals of Plastic Surgery. 81 (5), 594-603 (2018).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+3D+volumetry+versus+conventional+measuring+techniques+for+the+assessment+of+experimental+lymphedema+in+the+mouse+hindlimb.">High-resolution 3D volumetry versus conventional measuring techniques for the assessment of experimental lymphedema in the mouse hindlimb.</a> Scientific Reports. 6, 34673 (2016).</li><li>Biau, D. J., Kerneis, S., Porcher, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistics+in+brief:+the+importance+of+sample+size+in+the+planning+and+interpretation+of+medical+research.">Statistics in brief: the importance of sample size in the planning and interpretation of medical research.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 466 (9), 2282-2288 (2008).</li><li>Korula, P., Varma, S. K., Sunderrao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+wound+contraction+by+point-to-point+adherent+splintage.">Inhibition of wound contraction by point-to-point adherent splintage.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 95 (4), 725-730 (1995).</li><li>Komatsu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+Drainage+During+Wound+Healing+in+a+Hindlimb+Lymphedema+Mouse+Model.">Lymph Drainage During Wound Healing in a Hindlimb Lymphedema Mouse Model.</a> Lymphatic Research and Biology. 15 (1), 32-38 (2017).</li></ol>

Det finnes noen viktige trinn i denne protokollen. For det første er det viktig at forskerne tar sikkerhetsforanstaltninger når du arbeider med radioaktivitet. For det andre, under kirurgisk del av denne protokollen, er det viktig å starte prosedyren når musen er anesthetized og fullføre den uten unødvendige pauser. Dette er viktig for å unngå en overdrevent lang kirurgisk periode for dyret og for å hindre at anestesi mister effekt under operasjonen. Det anbefales å bare administrere en bolus injeksjon av bedø...

Lymfødem er preget av en opphopning av lymfe væske som fører til lokaliserte vev hevelse, som i hovedsak oppstår på grunn av nedsatt eller forstyrret flyt av lymfe væske i lymfesystemet fartøy1. Lymfe strømmen kan svekkes eller forstyrret av infeksjon, obstruksjon, skade eller medfødt defekter i lymfesystemet2. Disse årsaker resultere i opphopning av lymfatisk væske, noe som fører til en kronisk tilstand av betennelse, noe som resulterer i påfølgende fibrose, samt deponering av fettvev3. Lymfødem kan kategoriseres som primær eller sekundær lymfødem. Primær lymfødem er forårsaket av utviklingsmessige unormalt eller genetisk mutasjon2,4. Sekundær lymfødem oppstår på grunn av underliggende systemisk sykdom, kirurgi eller traumer2,4. Sekundær lymfødem er den vanligste formen for lymfødem i verden2. I utviklede land, den vanligste årsaken til sekundær lymfødem er onkologiske terapi som adjuvant strålebehandling og lymfe node disseksjon5. Lymfødem er hyppigste blant brystkreftpasienter, men kan også utvikles hos pasienter med Gynecologic, melanom, urin eller nakke kreft6. Det har blitt antydet at av alle kvinner diagnostisert med brystkreft, vil 21% utvikle lymfødem7.
Lymfødem kan være stressende for pasienten både fysisk og psykologisk. Pasienter med lymfødem har en økt risiko for infeksjon5,8,9, dårlig livskvalitet og kan utvikle sosial angst og symptomer på depresjon10. Komplikasjoner av kronisk lymfødem føre til høye kostnader for omsorg og en økt sykdoms byrde9,11. Funnene har også antydet at lymfødem kan være assosiert med økt risiko for død etter brystkreftbehandling12. Konservativ ledelse som kompresjon av det berørte området, manuell lymfe drenering og generell hudpleie forblir den første linjen tilnærming. Det er for øyeblikket ingen helbredende behandling6. Selv om fremgangen har blitt gjort innen kirurgisk og medisinsk behandling, er det fortsatt rom for forbedring. Mer forskning, som gir innsikt i patofysiologi og progresjon av sykdommen, er nødvendig for at klinikere skal kunne gi bedre behandlingsalternativer for pasientene5.
Animal modeller brukes i prekliniske forskning for å forstå patofysiologi av sykdommer og utvikle potensielle behandlingstilbud. Adskillige annerledes lymfødem dyr modeller ha blitt etablerte inne hjørnetenner13,14, kanin15, sau16, pigs17,18 og gnagere19,20, 21,22,23,24. Den gnager modellen synes å være den mest kostnadseffektive modellen, når gransker gjenoppbyggingen av lymfatisk funksjon, på grunn av gnagere blir lett tilgjengelig og relativt lavt priset25. De fleste av musene modellene har fokusert på inducing lymfødem i halen av mus21,22,23. Halen modellen er svært pålitelig, men den eksakte kirurgiske teknikken for inducing lymfødem varierer betydelig i tidligere publisert materiale. Dette resulterer i svingninger i varighet og robusthet av de utviklede lymfødem presentert i kjente litteratur25. Ulike teknikker blir også brukt for inducing lymfødem i hindlimb bentap modellen og de gir også varierende resultater, men hindlimb bentap modellen kan være lettere å forstå fra et translational perspektiv. Tidligere lymfødem modeller har blitt hemmet av spontan lymfødem oppløsning og derfor en reproduserbar og permanent lymfødem modell er nødvendig25. Forskere har tidligere forsøkt å øke dosen av stråling, for å hindre spontan lymfødem oppløsning, men dette har ofte ført til påfølgende alvorlig sykelighet25.
Denne modellen resulterer i statistisk signifikant lymfødem, uten å forårsake alvorlig sykelighet, ved å kombinere mikrokirurgi med stråling. Modellen har blitt revidert fra en tidligere kirurgisk modell ved å legge en dose av bestråling som induserer lymfødem, uten å forårsake alvorlig sykelighet26. Den likeledes tilbyder en stor opportunity for mikrokirurgisk lærer opp. Å ha tilgang til mikrokirurgisk utstyr og et mikroskop er nødvendig, på grunn av de små anatomiske strukturer av mus. Den kirurgiske prosedyren kan utføres når brukeren har lært grunnleggende mikrokirurgisk teknikker, for eksempel suturing med mikrokirurgisk instrumenter. Operatørene som utførte denne prosedyren alle så tutorial videoer av Acland på forutsetningene for mikrokirurgisk ferdigheter (1981) og grunnleggende microsuture teknikk (1985). Vi anbefaler at du praktiserer den kirurgiske prosedyren 8 − 10 ganger før du bruker den i forskning. Praktisere prosedyren sikrer at færre feil er gjort og at prosedyren kan utføres mer effektivt. Når mestret, kan den kirurgiske prosedyren utføres i 45 minutter.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10-0 Nylon suture</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>12051-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Nylon suture - Dafilon</td>
			<td>B Braun</td>
			<td>C0933112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coagulator - ICC 50</td>
			<td>ERBE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td>Yibon medical co</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>09-0190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastic retractors</td>
			<td>Odense University Hospital</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical clipper</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>GT420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl 0,315 mg/ml</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad - PhysioSuite</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane 1000mg Attane</td>
			<td>Scan Vet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporizer - PPV</td>
			<td>Penlon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro jewler forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>1405-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Needle holder</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>25679-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>10128-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro tying forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>43953-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfine U-40 syringe 0,5ml</td>
			<td>BD</td>
			<td>328821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 25g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 27g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam 5 mg/ml (hameln)</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder - Circle wood</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>08-0065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non woven swabs</td>
			<td>Selefa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opmi pico microscope F170</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patent blue V - 25 mg/ml</td>
			<td>Guerbet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors - Joseph</td>
			<td>BD</td>
			<td>RH1630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siemens INVEON multimodality pre-clinical scanner</td>
			<td>Siemens pre-clinical solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Source of radiation - D3100</td>
			<td>Gulmay</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stata Statistical Software: Release 15</td>
			<td>StataCorp LLC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temgesic - 0,2 mg</td>
			<td>Indivior</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vet eye ointment - viscotears</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice

Animal modeller er av største betydning i forskningen av lymfødem for å forstå patofysiologi av sykdommen, men også å utforske potensielle behandlingstilbud. Denne muse modellen gjør det mulig for forskere å indusere betydelig lymfødem som varer i minst 8 uker. Lymfødem er indusert ved hjelp av en kombinasjon av fraksjoneres strålebehandling og kirurgisk ablasjon av lymphatics. Denne modellen krever at musene får en dose på 10 Gray (gy) stråling før og etter operasjonen. Den kirurgiske delen av modellen innebærer ligation av tre lymfe fartøy og utvinning av to lymfeknuter fra musen hindlimb bentap. Å ha tilgang til mikrokirurgisk verktøy og et mikroskop er viktig, på grunn av de små anatomiske strukturer av mus. Fordelen med denne modellen er at det resulterer i statistisk signifikant lymfødem, som gir et godt grunnlag for å vurdere ulike behandlingstilbud. Det er også et flott og lett tilgjengelig alternativ for mikrokirurgisk trening. Begrensningen av denne modellen er at prosedyren kan være tidkrevende, spesielt hvis ikke praktisert på forhånd. Modellen resulterer i objektivt målbare lymfødem i mus, uten å forårsake alvorlig sykelighet og har blitt testet i tre separate prosjekter.

Denne prosedyren har tidligere vært brukt i tre separate eksperimenter. Alle eksperimentene ble gjort av forskjellige bly etterforskere som alle er co-forfatterne av denne artikkelen. I alle tre eksperimenter ble det tatt stor forsiktighet for å følge samme fremgangsmåte som beskrevet i denne protokollen. I alle tre eksperimenter ble sekundær lymfødem indusert i en hindlimb bentap mens de andre hindlimb bentap fungerte som en kontroll. Volumene av hindlimbs var det primære utfallet...

Watch this Scientific Journal Video about A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice at JoVE.com

A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice

Denne dyre modellen gjør det mulig for forskere å indusere statistisk signifikant sekundær lymfødem i hindlimb bentap av mus, som varer i minst 8 uker. Modellen kan brukes til å studere patofysiologi av lymfødem og å undersøke romanen behandlingstilbud.

En revidert metode for å indusere sekundær lymfødem i Hindlimb bentap av mus

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore ...

Det overordnede målet med denne metoden er å indusere konsekvent sekundært lymfødem i baklimb av mus uten å forårsake alvorlig sykelighet. Denne metoden kan brukes til å indusere sekundært lymfødem i baklimb av mus. Den største fordelen med denne metoden er at den løser ubetydelig lymfødem som varer minst åtte uker uten å forårsake alvorlig sykelighet.Noen som er nye i prosedyren, kan slite med mikrokirurgiske teknikker. Vi anbefaler derfor mikrokirurgisk opplæring og flere praksisprosedyrer for å sikre et vellykket resultat, men også for å forberede forskeren slik at han eller hun kan utføre prosedyren mer effektivt. Sett opp kilden til stråling og bedøve musen som beskrevet i protokollen.Plasser en 1,5 millimeter tykk blypute for å sikre at bare området som gjennomgår kirurgi blir bestrålt. Det viste eksemplet er av en mus etter operasjonen for å klargjøre området. Administrer en dose på 10 grå bestråling.Forskerne må ta forholdsregler når de arbeider med stråling. Under dette eksperimentet ble all bestråling utført i et strålingsisolert rom. Og strålingskilden ble bare slått på da alt personell hadde forlatt rommet.Vei musen før operasjonen. Undersøk bedøvelsesdybden ved pote- eller haleklemmetest. Barber beinet valgt for prosedyren.Sett oksygenstrømmen til 0,8 liter per minutt. Koble den til en nesekjegle. Påfør oftalmisk salve.Injiser 0,5 milliliter saltvanns subkutant, helst i scruff av musen for å forhindre hypovolemi under operasjonen. Plasser musen på den kirurgiske kluten i liggende stilling. Plasser nesekjeglen over snuten.Fest enden av baklimbs forsiktig med tape, for å hindre at musen skifter under operasjonen. Løft huden med glatte tang og klip en liten åpning omtrent fem millimeter proksimal til popliteal fossa. Skyv skarp saks inn i åpningen og klips mot kneet, slik at snittet slutter like over kneet.Pass på at du ikke punkterer de underliggende karene, ved å løfte huden med tang under klipping. Flytt musen til utsatt posisjon og fullføre circumferential snitt. Dissekere huden til et par millimeter over vinkelen.Husk å holde vevet fuktig med steril saltvann under hele prosedyren. Trekk tilbake huden på den proksimale sårasjen med en elastisk retractor. Og sørg for at isjiavenen er synlig som vist.Injiser 0,01 milliliter Patent Blue V subkutant mellom andre og tredje tå. Trykk forsiktig på poten et par ganger for å distribuere Patent Blue V.Fordelingen av Patent Blue V kan ses gjennom mikroskopet. Strukturene som trengs for å visualiseres er, det proksimale lymfefartøyet PLV, popliteal lymfeknute, PLN, det første distale lymfefartøyet, DLV1, og det andre distale lymfefartøyet, DLV2.Forstørre for å visualisere PLV og ligate den ved hjelp av en 10-0 nylon sutur. Trykk på poten for å sikre at ingen Patent Blue passerer proksimal til ligaturen. Ligate de to distale lymfekarene som vist.Trykk på poten flere ganger igjen for å forsikre deg om at ingen Patent Blue V passerer proksimalt til ligaturen. I dette eksemplet kan det ses at et av lymfekarene brister på grunn av ligaturen som hindrer lymfestrømmen. Fjern popliteal lymfeknute, lymfeknuten har en glatt perlelignende overflate og er farget av Patent Blue V i motsetning til det omkringliggende fettvevet.Før du fjerner inngangsfettputen, cauterize dette fartøyet som vist. Fjern deretter fettputen i ett stykke. Pass på at det ikke er noen aktiv blødning.Dette er et eksempel på en lokalisert inguinal lymfeknute. Lymfeknuten som ligger i inngangsfettputen er sjelden farget av Patent Blue V og kan være vanskelig å skille fra fettet. Fjerne fett puten i ett stykke er den beste måten å sikre at lymfeknuten er fjernet.Sutur huden kanter ned til muskel fascia, med en 6-0 nylon sutur ved hjelp av tang og nål holder, forlater et gap på to til tre millimeter, for å begrense overfladisk lymfe flyt. Dette er et eksempel på de ferdige suturene, i popliteal fossa, den laterale siden av baklimb, over kneet og den mediale siden av baklimb. Administrer analgesi og veie musen etter operasjonen, og plasser den deretter i et skap oppvarmet for utvinning.Gjenta prosedyren for pre-kirurgi bestråling. Denne grafen viser det kombinerte gjennomsnittlige baklimbvolumet på tre separate studier i de åtte ukene etter operasjonen. Totalt 31 mus ble inkludert.X-aksen representerer uker etter operasjonen. Y-aksen representerer bakklimavolum i kubikkmillimeter. Pillinjene representerer standardavviket.Det er å forvente at hevelsen fra operasjonen og det induserte lymfødemet vil avta i løpet av de første fire ukene. Etter de første fire ukene ser vi en relativ stabil tilstand av lymfødem. Volumet av kontrollen hindlimb øker i løpet av de åtte ukene, og dermed strengt sier forskjellen i volum mellom lymfødem hindlimb og kontroll hindlimb, dette var uventet.Årsaken er spekulert å være at musene brukte sin ikke-opererte hindlimb mer enn den opererte hindlimb i ukene etter operasjonen. Dette kan føre til hypertrofi av kontrollen hindlimb og kanskje forklare økningen i volum. For individuelle tall på de tre studiene inkludert vennligst les protokollen.Denne tabellen viser Sidaks flere sammenligningstest for de kombinerte volummålingene for de tre inkluderte studiene. Den beregnede P-verdien viser at det er statistisk signifikant forskjell mellom bakkulene med indusert lymfødem og kontrollhinnelimbs, i løpet av alle åtte ukene med oppfølging. For individuell statistisk analyse av de tre inkluderte prosjektene vennligst les protokollen.Denne metoden induserer statistisk signifikant lymfødem, som varer minst åtte uker. Prosedyren kan brukes til å studere petrificiality av lymfødem og til forskning nye behandlingstilbud. Etter å ha sett denne videoen, bør du ha fått en forståelse av hvordan du induserer sekundært lymfødem i bakkulb av mus, ved hjelp av en kombinasjon av mikrokirurgi og pre- og etterkirurgibestråling.Når mestret, kan den kirurgiske prosedyren utføres om 45 minutter.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

The grafting of human tumor cells into the brain of immunosuppressed mice is an established method for the study of brain cancers including glioblastoma ...

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

Inducing Myointimal Hyperplasi Versus Åreforkalkning i Mus: En introduksjon av to gyldige modeller

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Carotisar infusjoner for farmakokinetiske og farmakodynamiske Analyse av Taxaner i Mus

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Minimal Invasive Surgical Procedure of Inducing Myocardial Infarction in Mice

Minimal Invasive Kirurgisk prosedyre for å indusere hjerteinfarkt i Mus

Myocardial infarction still remains the main cause of death in western countries, despite considerable progress in the stent development area in the last ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

En forbedret fremgangsmåte for Rapid intubering av trakea hos mus

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Induksjon av akselerert aterosklerose hos mus: "Wire-Injury" Modell

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Vurdering av terapeutiske angiogenese i en murine modell av Hindlimb bentap ischemia

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Inducing akutt lungeskade i mus ved direkte Intratrakeal lipopolysakkarid drypping

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

En høy-gjennomstrømning i Situ metode for estimering av hepatocytt kjernefysisk ploidy i mus

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...