Name: a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice
Uploaded: 2019-11-02T14:00:00
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Os autores agradecem peter Bollen, cabeça do laboratório biomédico para emprestar o equipamento necessário gravar a metragem vista através dos microscópios.

Os animais foram alojados na Universidade do Sul da Dinamarca Animal Care Facility de acordo com as orientações institucionais. Todos os procedimentos que envolvem indivíduos animais foram aprovados pela Inspecção de Experiências Animais, Ministério do Ambiente e Alimentação da Dinamarca.
1. Irradiação pré-cirurgia
NOTA: A irradiação pré-cirurgia ocorre 7 dias antes da cirurgia.
<ol><li>Induzir anestesia.<ol>
<li>Coloque o mouse em uma caixa de indu...

<ol>
	<li>Lawenda, B. D., Mondry, T. E., Johnstone, P. A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+a+primer+on+the+identification+and+management+of+a+chronic+condition+in+oncologic+treatment.">Lymphedema: a primer on the identification and management of a chronic condition in oncologic treatment.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 59 (1), 8-24 (2009).</li><li>Greene, A. K., Greene, A. K., Slavin, S. A., Brorson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+morbidity+of+lymphedema.">Epidemiology and morbidity of lymphedema.</a> Lymphedema: Presentation, Diagnosis, and Treatment. , 33-44 (2015).</li><li>Hespe, G. E., Nores, G. G., Huang, J. J., Mehrara, B. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Review+of+the+Surgical+Treatment+of+Extremity+Lymphedema.">Systematic Review of the Surgical Treatment of Extremity Lymphedema.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 33 (6), 412-425 (2017).</li><li>DiSipio, T., Rye, S., Newman, B., Hayes, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+unilateral+arm+lymphoedema+after+breast+cancer:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Incidence of unilateral arm lymphoedema after breast cancer: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Oncology. 14 (6), 500-515 (2013).</li><li>Douglass, J., Graves, P., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-Care+for+Management+of+Secondary+Lymphedema:+A+Systematic+Review.">Self-Care for Management of Secondary Lymphedema: A Systematic Review.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 10 (6), e0004740 (2016).</li><li>Shih, Y. 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P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+lymphedema+in+rabbit+ear.">An experimental model for lymphedema in rabbit ear.</a> Microsurgery. 4 (4), 236-242 (1983).</li><li>Tobbia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema+development+and+lymphatic+function+following+lymph+node+excision+in+sheep.">Lymphedema development and lymphatic function following lymph node excision in sheep.</a> Journal of Vascular Research. 46 (5), 426-434 (2009).</li><li>Lahteenvuo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor+therapy+and+autologous+lymph+node+transfer+in+lymphedema.">Growth factor therapy and autologous lymph node transfer in lymphedema.</a> Circulation. 123 (6), 613-620 (2011).</li><li>Honkonen, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+transfer+and+perinodal+lymphatic+growth+factor+treatment+for+lymphedema.">Lymph node transfer and perinodal lymphatic growth factor treatment for lymphedema.</a> Annals of Surgery. 257 (5), 961-967 (2013).</li><li>Wang, G. Y., Zhong, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+experimental+lymphedema+in+rats'+limbs.">A model of experimental lymphedema in rats' limbs.</a> Microsurgery. 6 (4), 204-210 (1985).</li><li>Oashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+acquired+lymphedema+in+the+mouse+hind+limb:+a+preliminary+report.">A new model of acquired lymphedema in the mouse hind limb: a preliminary report.</a> Annals of Plastic Surgery. 69 (5), 565-568 (2012).</li><li>Slavin, S. A., Van den Abbeele, A. D., Losken, A., Swartz, M. A., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Return+of+lymphatic+function+after+flap+transfer+for+acute+lymphedema.">Return of lymphatic function after flap transfer for acute lymphedema.</a> Annals of Surgery. 229 (3), 421-427 (1999).</li><li>Cheung, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+the+study+of+lymphedema+and+its+response+to+therapeutic+lymphangiogenesis.">An experimental model for the study of lymphedema and its response to therapeutic lymphangiogenesis.</a> BioDrugs : Clinical Immunotherapeutics, Biopharmaceuticals and Gene Therapy. 20 (6), 363-370 (2006).</li><li>Rutkowski, J. M., Moya, M., Johannes, J., Goldman, J., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secondary+lymphedema+in+the+mouse+tail:+Lymphatic+hyperplasia,+VEGF-C+upregulation,+and+the+protective+role+of+MMP-9.">Secondary lymphedema in the mouse tail: Lymphatic hyperplasia, VEGF-C upregulation, and the protective role of MMP-9.</a> Microvascular Research. 72 (3), 161-171 (2006).</li><li>Tammela, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+differentiation+and+maturation+of+lymphatic+vessels+after+lymph+node+dissection+and+transplantation.">Therapeutic differentiation and maturation of lymphatic vessels after lymph node dissection and transplantation.</a> Nature Medicine. 13 (12), 1458-1466 (2007).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+surgical+lymphedema+research--a+systematic+review.">Animal models in surgical lymphedema research--a systematic review.</a> Journal of Surgical Research. 200 (1), 208-220 (2016).</li><li>Jorgensen, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Chronic+Lymphedema+in+a+Revised+Mouse+Model.">Quantification of Chronic Lymphedema in a Revised Mouse Model.</a> Annals of Plastic Surgery. 81 (5), 594-603 (2018).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+3D+volumetry+versus+conventional+measuring+techniques+for+the+assessment+of+experimental+lymphedema+in+the+mouse+hindlimb.">High-resolution 3D volumetry versus conventional measuring techniques for the assessment of experimental lymphedema in the mouse hindlimb.</a> Scientific Reports. 6, 34673 (2016).</li><li>Biau, D. J., Kerneis, S., Porcher, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistics+in+brief:+the+importance+of+sample+size+in+the+planning+and+interpretation+of+medical+research.">Statistics in brief: the importance of sample size in the planning and interpretation of medical research.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 466 (9), 2282-2288 (2008).</li><li>Korula, P., Varma, S. K., Sunderrao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+wound+contraction+by+point-to-point+adherent+splintage.">Inhibition of wound contraction by point-to-point adherent splintage.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 95 (4), 725-730 (1995).</li><li>Komatsu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+Drainage+During+Wound+Healing+in+a+Hindlimb+Lymphedema+Mouse+Model.">Lymph Drainage During Wound Healing in a Hindlimb Lymphedema Mouse Model.</a> Lymphatic Research and Biology. 15 (1), 32-38 (2017).</li></ol>

Há alguns passos críticos neste protocolo. Em primeiro lugar, é importante que os pesquisadores tomem precauções de segurança ao trabalhar com radioatividade. Em segundo lugar, durante a parte cirúrgica deste protocolo, é importante iniciar o procedimento uma vez que o rato tenha sido anestesiado e terminá-lo sem pausas desnecessárias. Isso é importante para evitar um período cirúrgico excessivamente longo para o animal e evitar que a anestesia perca efeito durante a cirurgia. Recomenda-se administrar apenas...

O linfedema é caracterizado por um acúmulo de líquido linfático que leva ao inchaço do tecido localizado, que ocorre principalmente devido ao fluxo prejudicado ou interrompido de fluido linfático nos vasos linfáticos1. O fluxo linfático pode ser prejudicado ou interrompido por infecção, obstrução, lesão ou defeitos congênitos no sistema linfático2. Essas etiologias resultam em acúmulo de líquido linfático, o que leva a um estado crônico de inflamação, resultando em fibrose subseqüente, bem como a deposição do tecido adiposo3. O linfedema pode ser categorizado como linfedema primário ou secundário. O linfedema primário é causado por anormalidades no desenvolvimento ou mutação genética2,4. O linfedema secundário ocorre devido à doença sistêmica subjacente, cirurgia ou trauma2,4. Linfedema secundário é a forma mais comum de linfedema no mundo2. Nos países desenvolvidos, a causa mais comum do linfedema secundário é a terapia oncológica, como radioterapia adjuvante e dissecção do nóde linfático5. O linfedema é mais frequente entre os pacientes com câncer de mama, mas também pode se desenvolver em pacientes com câncer ginecológico, melanoma, genitourinário ou pescoço6. Tem sido sugerido que de todas as mulheres diagnosticadas com câncer de mama, 21% desenvolverão linfedema7.
Linfedema pode ser estressante para o paciente física e psicologicamente. Pacientes com linfedema têm um risco aumentado de infecção5,8,9, má qualidade de vida e podem desenvolver ansiedade social e sintomas de depressão10. As complicações do linfedema crônico levam ao alto custo dos cuidados e ao aumento da carga da doença9,11. Os resultados também sugeriram que o linfedema pode estar associado ao aumento do risco de morte após o tratamento do câncer de mama12. A gerência conservadora tal como a compressão da área afetada, a drenagem manual do linfa e o skincare geral permanecem a primeira aproximação da linha. Atualmente não há tratamento curativo6. Embora o progresso foi feito no campo da terapia cirúrgica e médica, há ainda um quarto para a melhoria. Mais pesquisa, fornecendo a introspecção na fisiopatologia e progressão da doença, é necessário permitir clínicos de fornecer melhores opções do tratamento para os pacientes5.
Modelos animais estão sendo usados em pesquisas pré-clínicas para entender a fisiopatologia de doenças e desenvolver opções potenciais de tratamento. Vários modelos animais linfedemos diferentes foram estabelecidos em caninos13,14,coelhos15,ovelhas16,porcos17,18 e roedores19,20, 21,22,23,24. O modelo de roedores parece ser o modelo mais econômico, ao investigar a reconstrução da função linfática, devido a roedores serem facilmente acessíveis e relativamente de baixo preço25. A maioria dos modelos de camundongos se concentraram em induzir linfedema na cauda dos camundongos21,22,23. O modelo da cauda é muito de confiança mas a técnica cirúrgica exata para induzir o linfedema varia significativamente no material publicado precedente. Isso resulta em flutuações de duração e robustez do linfedema desenvolvido apresentado sapateado conhecido25. Diferentes técnicas também estão sendo usadas para induzir linfedema no modelo de membros posteriores e também produzem resultados variados, mas o modelo de membros posteriores pode ser mais fácil de entender de uma perspectiva translacional. Modelos anteriores de linfedema foram prejudicados pela resolução espontânea do linfedema e, portanto, um modelo de linfedema reproduzível e permanente é necessário25. Os investigadores têm tentado previamente aumentar a dose da radiação, para impedir a definição espontânea do linfedema, mas esta conduziu frequentemente à morbosidade severa subseqüente25.
Este modelo resulta em linfedema estatisticamente significativo, sem causar morbidade grave, combinando microcirurgia com radiação. O modelo foi revisado a partir de um modelo cirúrgico anterior, adicionando uma dose de irradiação que induz o linfedema, sem causar morbidade grave26. Ele também oferece uma grande oportunidade para o treinamento microcirúrgico. É necessário ter acesso a equipamentos microcirúrgicos e microscópio, devido às pequenas estruturas anatômicas dos camundongos. O procedimento cirúrgico pode ser realizado quando o usuário foi ensinado técnicas microcirúrgicas básicas, como a sutura com instrumentos microcirúrgicos. Os operadores que realizaram este procedimento assistiram a vídeos tutoriais de Acland sobre as pré-condições de habilidades microcirúrgicas (1981) e técnica de microssutura básica (1985). Recomendamos a prática do procedimento cirúrgico 8 a 10 vezes antes de usá-lo em pesquisa. A prática do procedimento garante que menos erros sejam cometidos e que o procedimento possa ser realizado de forma mais eficiente. Quando dominado, o procedimento cirúrgico pode ser realizado em 45 minutos.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10-0 Nylon suture</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>12051-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Nylon suture - Dafilon</td>
			<td>B Braun</td>
			<td>C0933112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coagulator - ICC 50</td>
			<td>ERBE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td>Yibon medical co</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>09-0190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastic retractors</td>
			<td>Odense University Hospital</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical clipper</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>GT420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl 0,315 mg/ml</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad - PhysioSuite</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane 1000mg Attane</td>
			<td>Scan Vet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporizer - PPV</td>
			<td>Penlon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro jewler forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>1405-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Needle holder</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>25679-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>10128-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro tying forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>43953-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfine U-40 syringe 0,5ml</td>
			<td>BD</td>
			<td>328821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 25g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 27g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam 5 mg/ml (hameln)</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder - Circle wood</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>08-0065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non woven swabs</td>
			<td>Selefa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opmi pico microscope F170</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patent blue V - 25 mg/ml</td>
			<td>Guerbet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors - Joseph</td>
			<td>BD</td>
			<td>RH1630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siemens INVEON multimodality pre-clinical scanner</td>
			<td>Siemens pre-clinical solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Source of radiation - D3100</td>
			<td>Gulmay</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stata Statistical Software: Release 15</td>
			<td>StataCorp LLC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temgesic - 0,2 mg</td>
			<td>Indivior</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vet eye ointment - viscotears</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice

Os modelos animais são de suma importância na pesquisa do linfedema, a fim de compreender a fisiopatologia da doença, mas também para explorar potenciais opções de tratamento. Este modelo do rato permite que os investigadores induzam o linfedema significativo que dura pelo menos 8 semanas. O linfedema é induzido usando uma combinação de radioterapia fracionada e ablação cirúrgica de linfáticos. Este modelo exige que os ratos recebem uma dose de 10 cinza (Gy) radiação antes e depois da cirurgia. A parte cirúrgica do modelo envolve a ligadura de três vasos linfáticos e extração de dois gânglios linfáticos do membro posterior do rato. Ter acesso a ferramentas microcirúrgicas e um microscópio é essencial, devido às pequenas estruturas anatômicas dos camundongos. A vantagem deste modelo é que ele resulta em linfedema estatisticamente significativo, o que fornece uma boa base para avaliar diferentes opções de tratamento. É também uma opção grande e facilmente disponível para o treinamento microcirúrgico. A limitação deste modelo é que o procedimento pode ser demorado, especialmente se não for praticado com antecedência. O modelo resulta em linfedema objetivamente quantificável em camundongos, sem causar morbidade grave e foi testado em três projetos separados.

Este procedimento foi usado previamente em três experiências separadas. Todos os experimentos foram feitos por diferentes investigadores principais que todos são co-autores deste artigo. Em todos os três experimentos, foi tomado grande cuidado para aderir ao mesmo procedimento descrito neste protocolo. Em todos os três experimentos, o linfedema secundário foi induzido em um membro posterior, enquanto o outro membro posterior serviu como controle. Os volumes dos membros posteriores f...

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A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice

Este modelo animal permite que os investigadores induzam o linfedema secundário estatìstica significativo no retrospecto dos ratos, durando pelo menos 8 semanas. O modelo pode ser usado para estudar a fisiopatologia do linfedema e para investigar novas opções de tratamento.

Um método revisado para induzir o linfedema secundário no hindlimb dos ratos

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore ...

O objetivo geral deste método é induzir linfedema secundário consistente na linha de frente dos camundongos sem causar morbidade grave. Este método pode ser usado para induzir linfedema secundário na etapa posterior de camundongos. A principal vantagem deste método é que ele resolve linfedema insignificante que dura pelo menos oito semanas sem causar morbidade grave.Alguém novo no procedimento pode lutar com as técnicas microcirúrgicas. Por isso, recomendamos treinamento microcirúrgico e diversos procedimentos práticos para garantir um resultado bem-sucedido, mas também para preparar o pesquisador para que ele possa realizar o procedimento de forma mais eficiente. Configure a fonte de radiação e anestesia o rato como descrito no protocolo.Coloque uma almofada de chumbo de 1,5 milímetros de espessura para garantir que apenas a área que passa por cirurgia seja irradiada. O exemplo mostrado é de um rato pós-operatório para esclarecer a área. Administre uma dose de 10 irradiações cinzas.Os pesquisadores devem tomar precauções ao trabalhar com radiação. Durante este experimento, toda a irradiação foi realizada em uma sala isolada de radiação. E a fonte de radiação só foi ligada quando todo o pessoal saiu da sala.Pese o rato antes da cirurgia. Examine a profundidade anestésico por teste de pata ou pinça traseira. Raspe a perna escolhida para o procedimento.Defina o fluxo de oxigênio para 0,8 Litros por minuto. Conecte-o com um cone de nariz. Aplique pomada oftálmica.Injete 0,5 mililitros de soro fisiológico subcutâneamente, de preferência no escroto do camundongo para prevenir hipovolemia durante a cirurgia. Coloque o mouse sobre o pano cirúrgico em posição supina. Coloque o cone do nariz sobre o focinho.Fixar a extremidade dos blocos traseiros suavemente com fita adesiva, para evitar que o rato mude durante a cirurgia. Levante a pele com fórceps lisos e corte uma pequena abertura de aproximadamente cinco milímetros proximal à fossa popliteal. Deslize uma tesoura afiada na abertura e corte em direção ao joelho, de modo que a incisão termine logo acima do joelho.Certifique-se de não perfurar os vasos subjacentes, levantando a pele com fórceps durante o corte. Mova o mouse para uma posição propensa e complete a incisão circunferencial. Dissecar a pele a alguns milímetros acima do ângulo.Lembre-se de manter o tecido úmido com soro fisiológico estéril durante todo o procedimento. Retraia a pele da ferida proximal com um retrátil elástico. E certifique-se de que a veia ciática seja visível como mostrado.Injete 0,01 mililitros Patente Blue V subcutâneamente entre o segundo e o terceiro dedo do dedo. Pressione suavemente a pata algumas vezes para distribuir a Patente Azul V.A distribuição da Patente Azul V pode ser vista através do microscópio. As estruturas necessárias para serem visualizadas são, o vaso linfático proximal, PLV, o linfonodo popliteal, PLN, o primeiro vaso linfático distal, DLV1, e o segundo vaso linfático distal, DLV2.Amplie para visualizar o PLV e ligate-lo usando uma sutura de nylon 10-0. Pressione a pata para garantir que nenhuma patente azul passe proximal para a ligadura. Ligate os dois vasos linfáticos distal, como mostrado.Pressione a pata várias vezes novamente para ter certeza de que nenhuma patente Azul V passa proximal para a ligadura. Neste exemplo, pode-se ver que um dos vasos linfáticos estoura devido à ligadura que dificulta o fluxo linfático. Remova o linfonodo popliteal, o linfonodo tem uma superfície lisa semelhante a pérolas e é colorido pelo Azul Patente V em contraste com o tecido de gordura circundante.Antes de remover a almofada de gordura inguinal, cauterize este recipiente como mostrado. Em seguida, remova a almofada de gordura em uma peça. Certifique-se de que não há sangramento ativo.Este é um exemplo de um linfonodo inguinal localizado. O linfonodo localizado na almofada de gordura inguinal raramente é colorido pela Patente Azul V e pode ser difícil de diferenciar da gordura. Remover a almofada de gordura em uma peça é a melhor maneira de garantir que o linfonodo tenha sido removido.Sutura as bordas da pele até a fáscia muscular, com uma sutura de nylon 6-0 usando fórceps e suporte de agulha, deixando uma lacuna de dois a três milímetros, para restringir o fluxo linfático superficial. Este é um exemplo das suturas acabadas, na fossa popliteal, no lado lateral da linha traseira, acima do joelho, e no lado medial da barra traseira. Administre analgesia e pese o rato após a cirurgia, em seguida, colocá-lo em um armário aquecido para recuperação.Repita o procedimento para irradiação pré-cirurgia. Este gráfico mostra o volume médio combinado de três estudos separados nas oito semanas após a cirurgia. No total, foram incluídos 31 camundongos.O eixo x representa semanas após a cirurgia. O eixo y representa o volume de subida traseira em milímetros cúbicos. As barras de seta representam o desvio padrão.Espera-se que o inchaço da cirurgia e o linfedema induzido diminuam durante as primeiras quatro semanas. Depois das primeiras quatro semanas vemos um estado relativamente estável de linfedema. O volume do controle de linha traseira aumenta durante as oito semanas, dizendo estritamente a diferença de volume entre o nível traseiro linfedema e o controle hindlimb, isso foi inesperado.Especula-se que os camundongos usaram seu hindlimb não operado mais do que o hindlimb operado nas semanas seguintes à cirurgia. Isso pode levar à hipertrofia do controle de retroesco e talvez explicar o aumento do volume. Para figuras individuais sobre os três estudos incluídos, leia o protocolo.Esta tabela mostra o teste de comparação múltipla de Sidak para as medidas de volume combinadas dos três estudos incluídos. O valor P calculado mostra que há uma diferença estatisticamente significativa entre os obstáculos com linfedema induzido e os preços traseiros de controle, durante todas as oito semanas de seguimento. Para análise estatística individual sobre os três projetos incluídos, leia o protocolo.Este método induz linfedema estatisticamente significativo, com duração mínima de oito semanas. O procedimento pode ser usado para estudar a petrificialidade do linfedema e para pesquisar novas opções de tratamento. Depois de assistir a este vídeo, você deveria ter adquirido uma compreensão de como induzir linfedema secundário na etapa posterior de camundongos, usando uma combinação de microcirurgia e irradiação pré e pós-cirurgia.Uma vez dominado, o procedimento cirúrgico pode ser realizado em 45 minutos.

Research

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