Name: a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice
Uploaded: 2019-11-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice at JoVE.com

Авторы благодарят Питера Боллена, главу Биомедицинской лаборатории, за предоставление оборудования, необходимого для записи видеоматериалов, увиденных через микроскопы.

В рамках институциональных руководящих принципов животные размещались в Университете южной Дании. Все процедуры, касающиеся животных, были одобрены Инспекцией по экспериментам на животных, министерством окружающей среды и продовольствия Дании.
1. Предоперационное облу?...

<ol>
	<li>Lawenda, B. D., Mondry, T. E., Johnstone, P. A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+a+primer+on+the+identification+and+management+of+a+chronic+condition+in+oncologic+treatment.">Lymphedema: a primer on the identification and management of a chronic condition in oncologic treatment.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 59 (1), 8-24 (2009).</li><li>Greene, A. K., Greene, A. K., Slavin, S. A., Brorson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+morbidity+of+lymphedema.">Epidemiology and morbidity of lymphedema.</a> Lymphedema: Presentation, Diagnosis, and Treatment. , 33-44 (2015).</li><li>Hespe, G. E., Nores, G. G., Huang, J. J., Mehrara, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+lymphedema-Is+there+a+chance+for+medication+treatment?.">Pathophysiology of lymphedema-Is there a chance for medication treatment?.</a> Journal of Surgical Oncology. 115 (1), 96-98 (2017).</li><li>Grada, A. A., Phillips, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+Pathophysiology+and+clinical+manifestations.">Lymphedema: Pathophysiology and clinical manifestations.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 77 (6), 1009-1020 (2017).</li><li>Chang, D. W., Masia, J., Garza, R., Skoracki, R., Neligan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+Surgical+and+Medical+Therapy.">Lymphedema: Surgical and Medical Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 209S-218S (2016).</li><li>Carl, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Review+of+the+Surgical+Treatment+of+Extremity+Lymphedema.">Systematic Review of the Surgical Treatment of Extremity Lymphedema.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 33 (6), 412-425 (2017).</li><li>DiSipio, T., Rye, S., Newman, B., Hayes, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+unilateral+arm+lymphoedema+after+breast+cancer:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Incidence of unilateral arm lymphoedema after breast cancer: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Oncology. 14 (6), 500-515 (2013).</li><li>Douglass, J., Graves, P., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-Care+for+Management+of+Secondary+Lymphedema:+A+Systematic+Review.">Self-Care for Management of Secondary Lymphedema: A Systematic Review.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 10 (6), e0004740 (2016).</li><li>Shih, Y. C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence,+treatment+costs,+and+complications+of+lymphedema+after+breast+cancer+among+women+of+working+age:+a+2-year+follow-up+study.">Incidence, treatment costs, and complications of lymphedema after breast cancer among women of working age: a 2-year follow-up study.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (12), 2007-2014 (2009).</li><li>Ridner, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+psycho-social+impact+of+lymphedema.">The psycho-social impact of lymphedema.</a> Lymphatic Research and Biology. 7 (2), 109-112 (2009).</li><li>Gutknecht, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cost-of-illness+of+patients+with+lymphoedema.">Cost-of-illness of patients with lymphoedema.</a> Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology. 31 (11), 1930-1935 (2017).</li><li>Hayes, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+prognostic+significance+of+secondary+lymphedema+following+breast+cancer.">Prevalence and prognostic significance of secondary lymphedema following breast cancer.</a> Lymphatic Research and Biology. 9 (3), 135-141 (2011).</li><li>Danese, C. A., Georgalas-Bertakis, M., Morales, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+chronic+postsurgical+lymphedema+in+dogs'+limbs.">A model of chronic postsurgical lymphedema in dogs' limbs.</a> Surgery. 64 (4), 814-820 (1968).</li><li>Das, S. K., Franklin, J. D., O'Brien, B. M., Morrison, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+model+of+secondary+lymphedema+in+dogs.">A practical model of secondary lymphedema in dogs.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 68 (3), 422-428 (1981).</li><li>Huang, G. K., Hsin, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+lymphedema+in+rabbit+ear.">An experimental model for lymphedema in rabbit ear.</a> Microsurgery. 4 (4), 236-242 (1983).</li><li>Tobbia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema+development+and+lymphatic+function+following+lymph+node+excision+in+sheep.">Lymphedema development and lymphatic function following lymph node excision in sheep.</a> Journal of Vascular Research. 46 (5), 426-434 (2009).</li><li>Lahteenvuo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor+therapy+and+autologous+lymph+node+transfer+in+lymphedema.">Growth factor therapy and autologous lymph node transfer in lymphedema.</a> Circulation. 123 (6), 613-620 (2011).</li><li>Honkonen, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+transfer+and+perinodal+lymphatic+growth+factor+treatment+for+lymphedema.">Lymph node transfer and perinodal lymphatic growth factor treatment for lymphedema.</a> Annals of Surgery. 257 (5), 961-967 (2013).</li><li>Wang, G. Y., Zhong, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+experimental+lymphedema+in+rats'+limbs.">A model of experimental lymphedema in rats' limbs.</a> Microsurgery. 6 (4), 204-210 (1985).</li><li>Oashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+acquired+lymphedema+in+the+mouse+hind+limb:+a+preliminary+report.">A new model of acquired lymphedema in the mouse hind limb: a preliminary report.</a> Annals of Plastic Surgery. 69 (5), 565-568 (2012).</li><li>Slavin, S. A., Van den Abbeele, A. D., Losken, A., Swartz, M. A., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Return+of+lymphatic+function+after+flap+transfer+for+acute+lymphedema.">Return of lymphatic function after flap transfer for acute lymphedema.</a> Annals of Surgery. 229 (3), 421-427 (1999).</li><li>Cheung, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+the+study+of+lymphedema+and+its+response+to+therapeutic+lymphangiogenesis.">An experimental model for the study of lymphedema and its response to therapeutic lymphangiogenesis.</a> BioDrugs : Clinical Immunotherapeutics, Biopharmaceuticals and Gene Therapy. 20 (6), 363-370 (2006).</li><li>Rutkowski, J. M., Moya, M., Johannes, J., Goldman, J., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secondary+lymphedema+in+the+mouse+tail:+Lymphatic+hyperplasia,+VEGF-C+upregulation,+and+the+protective+role+of+MMP-9.">Secondary lymphedema in the mouse tail: Lymphatic hyperplasia, VEGF-C upregulation, and the protective role of MMP-9.</a> Microvascular Research. 72 (3), 161-171 (2006).</li><li>Tammela, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+differentiation+and+maturation+of+lymphatic+vessels+after+lymph+node+dissection+and+transplantation.">Therapeutic differentiation and maturation of lymphatic vessels after lymph node dissection and transplantation.</a> Nature Medicine. 13 (12), 1458-1466 (2007).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+surgical+lymphedema+research--a+systematic+review.">Animal models in surgical lymphedema research--a systematic review.</a> Journal of Surgical Research. 200 (1), 208-220 (2016).</li><li>Jorgensen, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Chronic+Lymphedema+in+a+Revised+Mouse+Model.">Quantification of Chronic Lymphedema in a Revised Mouse Model.</a> Annals of Plastic Surgery. 81 (5), 594-603 (2018).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+3D+volumetry+versus+conventional+measuring+techniques+for+the+assessment+of+experimental+lymphedema+in+the+mouse+hindlimb.">High-resolution 3D volumetry versus conventional measuring techniques for the assessment of experimental lymphedema in the mouse hindlimb.</a> Scientific Reports. 6, 34673 (2016).</li><li>Biau, D. J., Kerneis, S., Porcher, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistics+in+brief:+the+importance+of+sample+size+in+the+planning+and+interpretation+of+medical+research.">Statistics in brief: the importance of sample size in the planning and interpretation of medical research.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 466 (9), 2282-2288 (2008).</li><li>Korula, P., Varma, S. K., Sunderrao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+wound+contraction+by+point-to-point+adherent+splintage.">Inhibition of wound contraction by point-to-point adherent splintage.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 95 (4), 725-730 (1995).</li><li>Komatsu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+Drainage+During+Wound+Healing+in+a+Hindlimb+Lymphedema+Mouse+Model.">Lymph Drainage During Wound Healing in a Hindlimb Lymphedema Mouse Model.</a> Lymphatic Research and Biology. 15 (1), 32-38 (2017).</li></ol>

В этом протоколе есть несколько важных шагов. Во-первых, важно, чтобы исследователи принимали меры предосторожности при работе с радиоактивностью. Во-вторых, во время хирургической части этого протокола, важно начать процедуру, как только мышь была обезглавина и закончить его без лишни...

Лимфедема характеризуется накоплением лимфатической жидкости, что приводит к локализованной отек тканей, который в основном происходит из-за нарушения или нарушения потока лимфатической жидкости в лимфатических сосудах1. Лимфатический поток может быть нарушен или нарушен инфекцией, обструкцией, травмой или врожденными дефектами в лимфатической системе2. Эти этиологии приводят к накоплению лимфатической жидкости, что приводит к хроническому состоянию воспаления, что приводит к последующему фиброзу, а также осаждению жировой ткани3. Лимфедема может быть классифицирована как первичная или вторичная лимфедема. Первичная лимфедема вызвана отклонениями в развитии или генетической мутацией2,4. Вторичный лимфедема возникает из-за основного системного заболевания, хирургии или травмы2,4. Вторичный лимфедема является наиболее распространенной формой лимфедемы в мире2. В развитых странах наиболее распространенной причиной вторичной лимфедемы является онкологическая терапия, такая как адъювантная лучевая терапия и вскрытие лимфатических узлов5. Лимфедема является наиболее частым среди больных раком молочной железы, но также может развиваться у пациентов с гинекологическими, меланомы, мочеполовой или рак шеи6. Было высказано предположение, что из всех женщин с диагнозом рака молочной железы, 21% будет развиваться лимфедема7.
Лимфедема может быть стресс для пациента как физически, так и психологически. Пациенты с лимфедема имеют повышенный риск заражения5,8,9, низкое качество жизни и может развиться социальная тревога и симптомы депрессии10. Осложнения хронической лимфедемы приводят к высокой стоимости медицинской помощи и увеличению бремени болезней9,11. Выводы также предположили, что лимфедема может быть связано с повышенным риском смерти после лечения рака молочной железы12. Консервативное управление, такие как сжатие пораженного участка, ручной лимфатический дренаж и общий уход за кожей остаются первой линией подхода. В настоящее время не лечит6. Хотя был достигнут прогресс в области хирургической и медицинской терапии, все еще есть возможности для совершенствования. Необходимы дополнительные исследования, обеспечивая понимание патофизиологии и прогрессирования заболевания, необходимы для того, чтобы врачи могли обеспечить лучшие варианты лечения для пациентов5.
Модели животных используются в доклинических исследованиях для понимания патофизиологии заболеваний и разработки потенциальных вариантов лечения. Несколько различных моделей лимфедемы животных были созданы в клыки13,14,кролики15, овец16,свиней17,18 и грызунов19,20, 21,22,23,24. Модель грызунов, как представляется, наиболее экономически эффективной моделью, при исследовании реконструкции лимфатической функции, из-за грызунов быть легко доступными и относительнонедорогой 25. Большинство моделей мышей были сосредоточены на индуцировании лимфедема в хвосте мышей21,22,23. Хвост модель очень надежна, но точный хирургический метод для индуцирования лимфедема значительно варьируется в предыдущих опубликованных материалов. Это приводит к колебаниям продолжительности и надежности разработанной лимфедемы, представленной в известной стифетуре25. Различные методы также используются для индуцирования лимфедема в модели задних конечностей, и они также дают различные результаты, но модель hindlimb может быть легче понять с точки зрения перевода. Предыдущие модели лимфедемы были затруднены спонтанное разрешение лимфедемы и, следовательно, воспроизводимый и постоянный лимфедема модель необходима25. Исследователи ранее пытались увеличить дозу радиации, чтобы предотвратить спонтанное разрешение лимфедемы, но это часто приводило к последующей тяжелой заболеваемости25.
Эта модель приводит к статистически значимой лимфедеме, не вызывая тяжелой заболеваемости, сочетая микрохирургию с радиацией. Модель была пересмотрена из предыдущей хирургической модели, добавив дозу облучения, что вызывает лимфедема, не вызывая тяжелой заболеваемости26. Он также предлагает прекрасную возможность для микрохирургического обучения. Доступ к микрохирургическому оборудованию и микроскопу необходим, благодаря небольшим анатомическим структурам мышей. Хирургическая процедура может быть выполнена, когда пользователь был обучен основным микрохирургическим методам, таким как зашивание микрохирургическими инструментами. Операторы, которые выполнили эту процедуру все смотрели учебник видео Acland на предварительные условия микрохирургических навыков (1981) и основной метод микросватуры (1985). Мы рекомендуем практиковать хирургическую процедуру 8–10 раз, прежде чем использовать ее в исследованиях. Практика процедуры гарантирует, что меньше ошибок, и что процедура может быть выполнена более эффективно. При освоении хирургическая процедура может быть выполнена за 45 минут.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10-0 Nylon suture</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>12051-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Nylon suture - Dafilon</td>
			<td>B Braun</td>
			<td>C0933112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coagulator - ICC 50</td>
			<td>ERBE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td>Yibon medical co</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>09-0190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastic retractors</td>
			<td>Odense University Hospital</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical clipper</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>GT420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl 0,315 mg/ml</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad - PhysioSuite</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane 1000mg Attane</td>
			<td>Scan Vet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporizer - PPV</td>
			<td>Penlon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro jewler forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>1405-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Needle holder</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>25679-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>10128-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro tying forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>43953-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfine U-40 syringe 0,5ml</td>
			<td>BD</td>
			<td>328821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 25g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 27g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam 5 mg/ml (hameln)</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder - Circle wood</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>08-0065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non woven swabs</td>
			<td>Selefa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opmi pico microscope F170</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patent blue V - 25 mg/ml</td>
			<td>Guerbet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors - Joseph</td>
			<td>BD</td>
			<td>RH1630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siemens INVEON multimodality pre-clinical scanner</td>
			<td>Siemens pre-clinical solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Source of radiation - D3100</td>
			<td>Gulmay</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stata Statistical Software: Release 15</td>
			<td>StataCorp LLC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temgesic - 0,2 mg</td>
			<td>Indivior</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vet eye ointment - viscotears</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice

Модели животных имеют первостепенное значение в исследовании лимфедемы для того, чтобы понять патофизиологию болезни, но и изучить потенциальные варианты лечения. Эта модель мыши позволяет исследователям вызвать значительное лимфедема продолжительностью не менее 8 недель. Лимфедема индуцируется с помощью комбинации дробной лучевой терапии и хирургической абляции лимфатических. Эта модель требует, чтобы мыши получают дозу 10 серый (Gy) излучения до и после операции. Хирургическая часть модели включает в себя перевязку трех лимфатических сосудов и извлечение двух лимфатических узлов из задней конечности мыши. Наличие доступа к микрохирургическим инструментам и микроскопу имеет важное значение, из-за небольших анатомических структур мышей. Преимущество этой модели в том, что она приводит к статистически значимым лимфедема, который обеспечивает хорошую основу для оценки различных вариантов лечения. Это также отличный и легко доступный вариант для микрохирургического обучения. Ограничение этой модели заключается в том, что процедура может занять много времени, особенно если она не практикуется заранее. Модель приводит к объективно количественной лимфедемы у мышей, не вызывая тяжелой заболеваемости и был протестирован в трех отдельных проектах.

Эта процедура ранее использовалась в трех отдельных экспериментах. Все эксперименты были сделаны различными ведущими следователями, которые все являются соавторами этой статьи. Во всех трех экспериментах было принято большое окоза придерживаться той же процедуры, ч...

Watch this Scientific Journal Video about A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice at JoVE.com

A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice

Эта модель животных позволяет исследователям индуцировать статистически значимые вторичные лимфедемы в задней конечности мышей, продолжительностью не менее 8 недель. Модель может быть использована для изучения патофизиологии лимфедемы и для изучения новых вариантов лечения.

Пересмотренный метод для индуцирования вторичной лимфедемы в Hindlimb мышей

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore ...

Общая цель этого метода состоит в том, чтобы вызвать последовательную вторичную лимфедему в задней части мышей, не вызывая тяжелой заболеваемости. Этот метод может быть использован для индуцирования вторичной лимфедемы в задней части мышей. Основным преимуществом этого метода является то, что он разрешает незначительные лимфедемы продолжительностью не менее восьми недель, не вызывая тяжелой заболеваемости.Кто-то новый к процедуре может бороться с микрохирургическими методами. Поэтому мы рекомендуем микрохирургическое обучение и несколько практических процедур для обеспечения успешного результата, а также подготовить исследователя, чтобы он или она могли выполнять процедуру более эффективно. Настройка источника излучения и обезболить мышь, как описано в протоколе.Поместите 1,5 миллиметра толщиной свинца площадку для обеспечения того, чтобы только область, которая проходит операцию получает облучение. Показанный пример — послеоперационная мышь для уточнения области. Администрирование дозы 10 серого облучения.Исследователя должны принять меры предосторожности работая с радиацией. В ходе этого эксперимента все облучение проводилось в радиационно-изолированном помещении. И источник радиации был включен только тогда, когда весь персонал покинул помещение.Взвесь мышь перед операцией. Изучите анестетической глубины лапой или хвостом щепотку теста. Бритье ноги выбрали для процедуры.Установите поток кислорода до 0,8 литра в минуту. Соедините его с конусом носа. Нанесите офтальмологическую мазь.Введать 0,5 миллилитров солевого подкожно, предпочтительно в потертости мыши, чтобы предотвратить гиповолемию во время операции. Поместите мышь на хирургическую ткань в положении лежа. Поместите нос конуса над мордой.Зафиксировать конец задних конечностей осторожно лентой, чтобы предотвратить сдвиг мыши во время операции. Поднимите кожу с гладкими типсами и клип небольшое отверстие примерно пять миллиметров проксимальных к popliteal fossa. Сдвиньте острые ножницы в отверстие и клип к колену, так что разрез заканчивается чуть выше колена.Убедитесь в том, чтобы не проколоть основные сосуды, подняв кожу миппами во время отсечения. Перемести мышь в положение, подверженное расположению, и завершите окружной разрез. Рассекают кожу на пару миллиметров выше угла.Не забудьте сохранить ткань влажной стерильным солевым раствором в течение всей процедуры. Убирать кожу проксимальной раны с помощью эластичного ретрактора. И убедитесь, что седалищная вена видна, как показано на видео.Ввините 0,01 миллилитров Patent Blue V подкожно между вторым и третьим ногой. Аккуратно нажмите лапу пару раз, чтобы распространить патент Blue V.Распределение патента Blue V можно увидеть через микроскоп. Структуры, необходимые для визуализации являются, проксимальный лимфатический сосуд, PLV, popliteal лимфатический узел, PLN, первый дистальный лимфатический сосуд, DLV1, и второй дистальный лимфатический сосуд, DLV2.Увеличьте, чтобы визуализировать PLV и ligate его с помощью 10-0 нейлоновый шов. Нажмите лапу, чтобы убедиться, что не патентный синий проходит проксималь к лигатуре. Ligate двух дистальных лимфатических сосудов, как показано на.Нажмите лапу несколько раз еще раз, чтобы убедиться, что ни один патент Blue V проходит проксимальной лигатуры. В этом примере видно, что один из лимфатических сосудов лопается из-за лигатуры, препятствуя лимфотеку. Удалите поплитальный лимфатический узел, лимфатический узел имеет гладкую жемчужную поверхность и окрашен патентом Blue V в отличие от окружающих жировой ткани.Перед удалением паховой жировой прокладки, прижигать этот сосуд, как показано на показано. Затем удалите жировую прокладку в один кусок. Убедитесь, что нет активного кровотечения.Это пример расположенного пахового лимфатического узла. Лимфатический узел, расположенный в паховой жировой площадке, редко окрашен патентом Blue V и может быть трудно отличить от жира. Удаление жира площадку в один кусок является лучшим способом для обеспечения того, чтобы лимфатический узел был удален.Шов кожи края до мышечной фасции, с 6-0 нейлонового шва с использованием миппов и держателя иглы, оставляя зазор от двух до трех миллиметров, чтобы ограничить поверхностный поток лимфы. Это пример готовых швов, в popliteal fossa, боковой стороне заднего конечности, выше колена, и медиальной стороне заднего лапы. Администрирование анальгезии и взвесить мышь после операции, а затем поместить его в шкаф нагревается для восстановления.Повторите процедуру предоперардного облучения. На этом графике показан комбинированный средний объем хиндлимба из трех отдельных исследований в течение восьми недель после операции. Всего в него был включен 31 мыша.X-ось представляет недели после операции. Y-ось представляет объем задней части в кубических миллиметрах. Стрелки представляют собой стандартное отклонение.Следует ожидать, что опухоль после операции и индуцированной лимфедемы будет уменьшаться в течение первых четырех недель. После первых четырех недель мы видим относительно стабильное состояние лимфедемы. Объем контроля задняя часть увеличивается в течение восьми недель, таким образом строго говоря, разница в объеме между лимфедема хиндлимб и контроль задняя, это было неожиданно.Причина предположила, что мыши использовали свои неоперированные хиндлимб больше, чем прооперированный задний в течение нескольких недель после операции. Это может привести к гипертрофии задней части управления и, возможно, объяснить увеличение объема. Для отдельных цифр по трем исследованиям включены, пожалуйста, прочитайте протокол.В этой таблице показан многократный сравнительный тест Сидака для комбинированных измерений объема трех включенных исследований. Рассчитанное P-значение показывает, что существует статистически значимая разница между задними конечностями с индуцированной лимфедемой и контрольными задними конечностями, в течение всех восьми недель последующей деятельности. Для индивидуального статистического анализа по трем включенным проектам, пожалуйста, прочитайте протокол.Этот метод вызывает статистически значимые лимфедемы, продолжительностью не менее восьми недель. Процедура может быть использована для изучения петроциальности лимфедемы и исследования новых вариантов лечения. После просмотра этого видео, вы должны были получить понимание того, как вызвать вторичные лимфедемы в задней части мышей, используя сочетание микрохирургии и до и послеоперационного облучения.После освоения хирургическая процедура может быть выполнена за 45 минут.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

Простой метод Винт Руководство по Внутричерепное ксенотрансплантата Исследования на мышах

The grafting of human tumor cells into the brain of immunosuppressed mice is an established method for the study of brain cancers including glioblastoma ...

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

Трир социальной протокол стресс-тест для стимулирования психологического стресса

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

Склонение Myointimal гиперплазия против атеросклероза у мышей: Введение двух допустимых моделей

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Сонной артерии Настои для Фармакокинетические и фармакодинамические анализ Таксаны в мышах

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Minimal Invasive Surgical Procedure of Inducing Myocardial Infarction in Mice

Минимально инвазивная хирургическая процедура индукции инфаркта миокарда у мышей

Myocardial infarction still remains the main cause of death in western countries, despite considerable progress in the stent development area in the last ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Усовершенствованный метод Rapid интубации трахеи у мышей

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Индукция ускоренного атеросклероза у мышей: модель "Wire-Injury"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Оценка терапевтического ангиогенеза в модели Murine Hindlimb Ischemia

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Индуцирование острая травма легких у мышей путем прямого внутричехального липополисахарида интиллация

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

Высокой пропускной способ в Ситу Метод оценки гепатоцитов ядерной плоиди у мышей

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...