Name: a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice
Uploaded: 2019-11-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice at JoVE.com

Författarna tackar Peter bollen, chef för biomedicinska laboratoriet för utlåning av utrustning som behövs för att spela in materialet sett genom Mikroskop.

Djuren var inhysta i universitet av sydlig dansk djuromsorg Faciliteters så per institutionell riktlinjerna. Alla förfaranden som involverar försöksdjur har godkänts av djur experiment inspektionen, Danmarks miljö-och livsmedels ministerium.
1. bestrålning före kirurgi
Anmärkning: bestrålning före operationen sker 7 dagar före operationen.
<ol><li>Inducera anestesi.<ol>
<li>Placera musen i en induktions låda och Ställ in spridare till 3% isofluran me...

<ol>
	<li>Lawenda, B. D., Mondry, T. E., Johnstone, P. A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+a+primer+on+the+identification+and+management+of+a+chronic+condition+in+oncologic+treatment.">Lymphedema: a primer on the identification and management of a chronic condition in oncologic treatment.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 59 (1), 8-24 (2009).</li><li>Greene, A. K., Greene, A. K., Slavin, S. A., Brorson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+morbidity+of+lymphedema.">Epidemiology and morbidity of lymphedema.</a> Lymphedema: Presentation, Diagnosis, and Treatment. , 33-44 (2015).</li><li>Hespe, G. E., Nores, G. G., Huang, J. J., Mehrara, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+lymphedema-Is+there+a+chance+for+medication+treatment?.">Pathophysiology of lymphedema-Is there a chance for medication treatment?.</a> Journal of Surgical Oncology. 115 (1), 96-98 (2017).</li><li>Grada, A. A., Phillips, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+Pathophysiology+and+clinical+manifestations.">Lymphedema: Pathophysiology and clinical manifestations.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 77 (6), 1009-1020 (2017).</li><li>Chang, D. W., Masia, J., Garza, R., Skoracki, R., Neligan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema:+Surgical+and+Medical+Therapy.">Lymphedema: Surgical and Medical Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 209S-218S (2016).</li><li>Carl, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Review+of+the+Surgical+Treatment+of+Extremity+Lymphedema.">Systematic Review of the Surgical Treatment of Extremity Lymphedema.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 33 (6), 412-425 (2017).</li><li>DiSipio, T., Rye, S., Newman, B., Hayes, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+unilateral+arm+lymphoedema+after+breast+cancer:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Incidence of unilateral arm lymphoedema after breast cancer: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Oncology. 14 (6), 500-515 (2013).</li><li>Douglass, J., Graves, P., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-Care+for+Management+of+Secondary+Lymphedema:+A+Systematic+Review.">Self-Care for Management of Secondary Lymphedema: A Systematic Review.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 10 (6), e0004740 (2016).</li><li>Shih, Y. C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence,+treatment+costs,+and+complications+of+lymphedema+after+breast+cancer+among+women+of+working+age:+a+2-year+follow-up+study.">Incidence, treatment costs, and complications of lymphedema after breast cancer among women of working age: a 2-year follow-up study.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (12), 2007-2014 (2009).</li><li>Ridner, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+psycho-social+impact+of+lymphedema.">The psycho-social impact of lymphedema.</a> Lymphatic Research and Biology. 7 (2), 109-112 (2009).</li><li>Gutknecht, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cost-of-illness+of+patients+with+lymphoedema.">Cost-of-illness of patients with lymphoedema.</a> Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology. 31 (11), 1930-1935 (2017).</li><li>Hayes, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+prognostic+significance+of+secondary+lymphedema+following+breast+cancer.">Prevalence and prognostic significance of secondary lymphedema following breast cancer.</a> Lymphatic Research and Biology. 9 (3), 135-141 (2011).</li><li>Danese, C. A., Georgalas-Bertakis, M., Morales, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+chronic+postsurgical+lymphedema+in+dogs'+limbs.">A model of chronic postsurgical lymphedema in dogs' limbs.</a> Surgery. 64 (4), 814-820 (1968).</li><li>Das, S. K., Franklin, J. D., O'Brien, B. M., Morrison, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+model+of+secondary+lymphedema+in+dogs.">A practical model of secondary lymphedema in dogs.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 68 (3), 422-428 (1981).</li><li>Huang, G. K., Hsin, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+lymphedema+in+rabbit+ear.">An experimental model for lymphedema in rabbit ear.</a> Microsurgery. 4 (4), 236-242 (1983).</li><li>Tobbia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphedema+development+and+lymphatic+function+following+lymph+node+excision+in+sheep.">Lymphedema development and lymphatic function following lymph node excision in sheep.</a> Journal of Vascular Research. 46 (5), 426-434 (2009).</li><li>Lahteenvuo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor+therapy+and+autologous+lymph+node+transfer+in+lymphedema.">Growth factor therapy and autologous lymph node transfer in lymphedema.</a> Circulation. 123 (6), 613-620 (2011).</li><li>Honkonen, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+transfer+and+perinodal+lymphatic+growth+factor+treatment+for+lymphedema.">Lymph node transfer and perinodal lymphatic growth factor treatment for lymphedema.</a> Annals of Surgery. 257 (5), 961-967 (2013).</li><li>Wang, G. Y., Zhong, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+experimental+lymphedema+in+rats'+limbs.">A model of experimental lymphedema in rats' limbs.</a> Microsurgery. 6 (4), 204-210 (1985).</li><li>Oashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+acquired+lymphedema+in+the+mouse+hind+limb:+a+preliminary+report.">A new model of acquired lymphedema in the mouse hind limb: a preliminary report.</a> Annals of Plastic Surgery. 69 (5), 565-568 (2012).</li><li>Slavin, S. A., Van den Abbeele, A. D., Losken, A., Swartz, M. A., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Return+of+lymphatic+function+after+flap+transfer+for+acute+lymphedema.">Return of lymphatic function after flap transfer for acute lymphedema.</a> Annals of Surgery. 229 (3), 421-427 (1999).</li><li>Cheung, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+for+the+study+of+lymphedema+and+its+response+to+therapeutic+lymphangiogenesis.">An experimental model for the study of lymphedema and its response to therapeutic lymphangiogenesis.</a> BioDrugs : Clinical Immunotherapeutics, Biopharmaceuticals and Gene Therapy. 20 (6), 363-370 (2006).</li><li>Rutkowski, J. M., Moya, M., Johannes, J., Goldman, J., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secondary+lymphedema+in+the+mouse+tail:+Lymphatic+hyperplasia,+VEGF-C+upregulation,+and+the+protective+role+of+MMP-9.">Secondary lymphedema in the mouse tail: Lymphatic hyperplasia, VEGF-C upregulation, and the protective role of MMP-9.</a> Microvascular Research. 72 (3), 161-171 (2006).</li><li>Tammela, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+differentiation+and+maturation+of+lymphatic+vessels+after+lymph+node+dissection+and+transplantation.">Therapeutic differentiation and maturation of lymphatic vessels after lymph node dissection and transplantation.</a> Nature Medicine. 13 (12), 1458-1466 (2007).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+surgical+lymphedema+research--a+systematic+review.">Animal models in surgical lymphedema research--a systematic review.</a> Journal of Surgical Research. 200 (1), 208-220 (2016).</li><li>Jorgensen, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Chronic+Lymphedema+in+a+Revised+Mouse+Model.">Quantification of Chronic Lymphedema in a Revised Mouse Model.</a> Annals of Plastic Surgery. 81 (5), 594-603 (2018).</li><li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+3D+volumetry+versus+conventional+measuring+techniques+for+the+assessment+of+experimental+lymphedema+in+the+mouse+hindlimb.">High-resolution 3D volumetry versus conventional measuring techniques for the assessment of experimental lymphedema in the mouse hindlimb.</a> Scientific Reports. 6, 34673 (2016).</li><li>Biau, D. J., Kerneis, S., Porcher, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistics+in+brief:+the+importance+of+sample+size+in+the+planning+and+interpretation+of+medical+research.">Statistics in brief: the importance of sample size in the planning and interpretation of medical research.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 466 (9), 2282-2288 (2008).</li><li>Korula, P., Varma, S. K., Sunderrao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+wound+contraction+by+point-to-point+adherent+splintage.">Inhibition of wound contraction by point-to-point adherent splintage.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 95 (4), 725-730 (1995).</li><li>Komatsu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+Drainage+During+Wound+Healing+in+a+Hindlimb+Lymphedema+Mouse+Model.">Lymph Drainage During Wound Healing in a Hindlimb Lymphedema Mouse Model.</a> Lymphatic Research and Biology. 15 (1), 32-38 (2017).</li></ol>

Det finns några kritiska steg i det här protokollet. För det första är det viktigt att forskarna vidtar säkerhetsåtgärder vid arbete med radioaktivitet. För det andra, under den kirurgiska delen av detta protokoll, är det viktigt att inleda förfarandet när musen har sövda och avsluta det utan onödiga pauser. Detta är viktigt för att undvika en överdrivet lång kirurgisk period för djuret och för att förhindra att anestesi förlorar effekt under operationen. Det rekommenderas att endast administrera en...

Lymfödem kännetecknas av en ansamling av lymfa vätska som leder till lokaliserad vävnad svullnad, som främst uppstår på grund av nedsatt eller störd flöde av lymfvätska i lymfkärlen1. Lymfflödet kan försämras eller störas av infektion, obstruktion, skada eller medfödda defekter i lymfsystemet2. Dessa etiologier resultera i ackumulering av lymf vätskan, vilket leder till ett kroniskt tillstånd av inflammation, vilket resulterar i efterföljande fibros, samt avsättning av fettvävnad3. Lymfödem kan kategoriseras som primära eller sekundära lymfödem. Primära lymfödem orsakas av utvecklingsstörningar eller genetisk mutation2,4. Sekundära lymfödem uppstår på grund av underliggande systemisk sjukdom, kirurgi eller trauma2,4. Sekundära lymfödem är den vanligaste formen av lymfödem i världen2. I utvecklade länder, den vanligaste orsaken till sekundära lymfödem är onkologisk terapi såsom Adjuvant strålbehandling och lymfkörtel dissektion5. Lymfödem är vanligast bland bröstcancerpatienter, men kan också utvecklas hos patienter med gynekologisk, melanom, urogenital eller halscancer6. Det har föreslagits att av alla kvinnor som diagnostiserats med bröstcancer, 21% kommer att utveckla lymfödem7.
Lymfödem kan vara stressande för patienten både fysiskt och psykiskt. Patienter med lymfödem har en ökad risk för infektion5,8,9, dålig livskvalitet och kan utveckla social ångest och symtom på depression10. Komplikationer av kroniska lymfödem leder till höga kostnader för vård och en ökad sjukdomsbörda9,11. Fynd har också föreslagit att lymfödem kan vara förknippade med ökad risk för dödsfall efter bröstcancerbehandling12. Konservativ förvaltning såsom komprimering av det drabbade området, Manuell lymfdränage och allmän hudvård förblir den första linjen strategi. Det finns för närvarande ingen botande behandling6. Även om framsteg har gjorts inom området kirurgisk och medicinsk terapi, finns det fortfarande utrymme för förbättringar. Mer forskning, ge insikt i patofysiologi och progression av sjukdomen, behövs för att kliniker att ge bättre behandlingsalternativ för patienterna5.
Djurmodeller används i preklinisk forskning för att förstå sjukdomens patofysiologi och utveckla potentiella behandlingsalternativ. Flera olika lymfödem djurmodeller har fastställts i hundar13,14, kaniner15, får16, svin17,18 och gnagare19,20, 21,22,23,24. Den gnagare modellen verkar vara den mest kostnadseffektiva modellen, när man undersöker återuppbyggnaden av lymfatiska funktion, på grund av gnagare är lättillgänglig och relativt lågpris25. Majoriteten av möss modellerna har fokuserat på att inducera lymfödem i svansen på möss21,22,23. Svansen modellen är mycket tillförlitlig, men den exakta kirurgiska tekniken för att inducera lymfödem varierar avsevärt i tidigare publicerat material. Detta resulterar i variationer i varaktighet och robusthet av de utvecklade lymfödem presenteras i känd litteratur25. Olika tekniker används också för att inducera lymfödem i bakbenen modellen och de ger också varierande resultat, men bakbenen modellen kan vara lättare att förstå från ett translationell perspektiv. Tidigare lymfödem modeller har hämmats av spontan lymfödem upplösning och därför en reproducerbar och permanent lymfödem modell behövs25. Forskare har tidigare försökt att öka dosen av strålning, för att förhindra spontan lymfödem upplösning, men detta har ofta lett till efterföljande svår morbiditet25.
Denna modell resulterar i statistiskt signifikanta lymfödem, utan att orsaka allvarlig morbiditet, genom att kombinera mikrokirurgi med strålning. Modellen har reviderats från en tidigare kirurgisk modell genom att tillsätta en dos av bestrålning som inducerar lymfödem, utan att orsaka allvarlig morbiditet26. Det erbjuder också en stor möjlighet för mikrokirurgisk träning. Att ha tillgång till mikrokirurgisk utrustning och ett Mikroskop är nödvändigt, på grund av de små anatomiska strukturer av möss. Det kirurgiska ingreppet kan utföras när användaren har fått lära sig grundläggande mikrokirurgiska tekniker, såsom suturering med mikrokirurgiska instrument. Operatörerna som utförde den här proceduren alla såg handledning videor av Acland om förutsättningarna för mikrokirurgiska färdigheter (1981) och grundläggande microsutur teknik (1985). Vi rekommenderar att du tränar kirurgiska ingrepp 8 − 10 gånger innan du använder det i forskning. Öva proceduren säkerställer att färre misstag görs och att förfarandet kan utföras mer effektivt. När behärskar, kan det kirurgiska ingreppet utföras i 45 minuter.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10-0 Nylon suture</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>12051-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Nylon suture - Dafilon</td>
			<td>B Braun</td>
			<td>C0933112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coagulator - ICC 50</td>
			<td>ERBE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td>Yibon medical co</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>09-0190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastic retractors</td>
			<td>Odense University Hospital</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical clipper</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>GT420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl 0,315 mg/ml</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad - PhysioSuite</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane 1000mg Attane</td>
			<td>Scan Vet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporizer - PPV</td>
			<td>Penlon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro jewler forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>1405-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Needle holder</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>25679-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>10128-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro tying forceps</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>43953-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfine U-40 syringe 0,5ml</td>
			<td>BD</td>
			<td>328821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 25g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance syringe 27g</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam 5 mg/ml (hameln)</td>
			<td>Matrix</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder - Circle wood</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>08-0065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non woven swabs</td>
			<td>Selefa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opmi pico microscope F170</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patent blue V - 25 mg/ml</td>
			<td>Guerbet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors - Joseph</td>
			<td>BD</td>
			<td>RH1630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siemens INVEON multimodality pre-clinical scanner</td>
			<td>Siemens pre-clinical solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Source of radiation - D3100</td>
			<td>Gulmay</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stata Statistical Software: Release 15</td>
			<td>StataCorp LLC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temgesic - 0,2 mg</td>
			<td>Indivior</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vet eye ointment - viscotears</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a revised method for inducing secondary lymphedema in the hindlimb of mice

Djurmodeller är av största vikt i forskningen av lymfödem för att förstå patofysiologin av sjukdomen, men också att utforska potentiella behandlingsalternativ. Denna musmodell gör det möjligt för forskare att inducera betydande lymfödem varar minst 8 veckor. Lymfödem induceras med hjälp av en kombination av fraktionerad strålbehandling och kirurgisk ablation av lymphatics. Denna modell kräver att mössen får en dos av 10 grå (Gy) strålning före och efter operationen. Den kirurgiska delen av modellen innebär ligering av tre lymfkärlen och utvinning av två lymfkörtlar från musen bakben. Att ha tillgång till mikrokirurgiska verktyg och ett Mikroskop är viktigt, på grund av de små anatomiska strukturer av möss. Fördelen med denna modell är att det resulterar i statistiskt signifikanta lymfödem, vilket ger en god grund för att utvärdera olika behandlingsalternativ. Den er också en stor och lätt tillgänglig valen för mikrokirurgisk bildning. Begränsningen av denna modell är att förfarandet kan vara tidskrävande, särskilt om inte praktiseras i förväg. Modellen resulterar i objektivt kvantifierbara lymfödem hos möss, utan att orsaka allvarlig morbiditet och har testats i tre separata projekt.

Denna procedur har tidigare använts i tre separata experiment. Alla experiment gjordes av olika bly utredare som alla är medförfattare till denna artikel. I alla tre experimenten togs stor omsorg för att följa samma förfarande som beskrivs i detta protokoll. I alla tre experiment, var sekundärt lymfödem induceras i en bakben medan den andra bakbenen tjänade som en kontroll. Volymerna av bakbenen var det primära utfallet i alla tre experimenten. Figur 1</stro...

Watch this Scientific Journal Video about A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice at JoVE.com

A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice

Denna djurmodell gör det möjligt för forskare att inducera statistiskt signifikanta sekundära lymfödem i bakbenen av möss, varar minst 8 veckor. Modellen kan användas för att studera patofysiologin i lymfödem och för att undersöka nya behandlingsalternativ.

En reviderad metod för att inducera sekundära lymfödem i bakdelen av möss

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore ...

Det övergripande målet med denna metod är att inducera konsekvent sekundärt lymfödem i hindlimb av möss utan att orsaka allvarliga sjuklighet. Denna metod kan användas för att inducera sekundärt lymfödem i hindlimb av möss. Den största fördelen med denna metod är att det löser obetydliga lymfödem varar minst åtta veckor utan att orsaka allvarliga sjuklighet.Någon ny till förfarandet kan kämpa med mikrokirurgiska tekniker. Vi rekommenderar därför mikrokirurgisk utbildning och flera övningsrutiner för att säkerställa ett lyckat resultat, men också för att förbereda forskaren så att han eller hon kan utföra proceduren mer effektivt. Ställ in strålkällan och bedöva musen enligt beskrivningen i protokollet.Placera en 1,5 millimeter tjock bly pad för att säkerställa att endast det område som genomgår kirurgi blir bestrålade. Det visade exemplet är av en efter-kirurgi mus för att klargöra området. Administrera en dos av 10 grå bestrålning.Forskarna måste vidta försiktighetsåtgärder när de arbetar med strålning. Under detta experiment alla bestrålning utfördes i en strålning isolerad rum. Och strålningskällan var bara påslagen när all personal hade lämnat rummet.Väg musen före operationen. Undersök bedövningsdjup genom paw eller tail pinch test. Raka benet valt för förfarandet.Ställ in flödet av syre till 0,8 Liter per minut. Koppla ihop den med en noskon. Applicera oftalmisk salva.Injicera 0,5 milliliter saltlösning subkutant, helst i scruff av musen för att förhindra hypovolemi under operation. Placera musen på den kirurgiska trasan i ryggläge. Placera noskonen över nosen.Fixera änden av bakbenen försiktigt med tejp, för att förhindra att musen skiftar under operationen. Lyft huden med jämna tångar och klipp en liten öppning cirka fem millimeter proximala till popliteal fossa. Skjut in vass sax i öppningen och klipp mot knäet, så att snittet slutar precis ovanför knät.Se till att inte punktera de underliggande kärlen, genom att lyfta huden med tåten medan klippning. Flytta musen till benägen position och slutföra det omkretsande snittet. Dissekera huden till ett par millimeter ovanför vinkeln.Kom ihåg att hålla vävnaden fuktig med steril koksaltlösning under hela proceduren. Dra tillbaka huden på det proximala sårverket med ett elastiskt upprullningsdon. Och se till att ischiasven syns som på bilden.Injicera 0,01 milliliter Patent Blue V subkutant mellan den andra och tredje tå. Tryck försiktigt på tassen ett par gånger för att distribuera Patent Blue V.Fördelningen av Patent Blue V kan ses genom mikroskopet. De strukturer som behövs för att visualiseras är, den proximala lymfkärl, PLV, den popliteal lymfkörtel, PLN, den första distala lymfkärl, DLV1, och den andra distala lymfkärl, DLV2.Förstora för att visualisera PLV och ligate det med hjälp av en 10-0 nylon sutur. Tryck på tassen för att säkerställa att ingen Patent Blue passerar proximalt till ligaturen. Ligate de två distala lymfkärlen som visas.Tryck på tassen flera gånger igen för att försäkra dig om att ingen Patent Blue V passerar proximalt till ligaturen. I detta exempel kan man se att ett av lymfkärlen brister på grund av att ligaturen hindrar lymfflödet. Ta bort popliteal lymfkörtknuten, lymfkörtknuten har en slät pärla-liknande yta och är färgad av Patent Blue V i motsats till den omgivande fettvävnaden.Innan du tar bort inguinal fett pad, kauterisera detta fartyg som visas. Ta sedan bort fettdynan i ett stycke. Se till att det inte sker någon aktiv blödning.Detta är ett exempel på en lokaliserad inguinal lymfkörtel. Lymfkörtknuten som ligger i inguinal fett pad är sällan färgad av Patent Blue V och kan vara svårt att skilja från fettet. Att ta bort fettdynan i ett stycke är det bästa sättet att säkerställa att lymfkörtknuten har tagits bort.Suturera huden kanterna ner till muskelfascia, med en 6-0 nylon sutur med hjälp av tlyckor och nålhållare, lämnar en lucka på två till tre millimeter, för att begränsa den ytliga lymfflödet. Detta är ett exempel på de färdiga suturer, i popliteal föl, den laterala sidan av bakb, ovanför knät, och den mediala sidan av bakbnäben. Administrera analgesi och väga musen efter operationen, placera den sedan i ett skåp uppvärmt för återhämtning.Upprepa proceduren för bestrålning före operationen. Detta diagram visar den kombinerade medelvärdet av hindlimb volymen av tre separata studier i åtta veckor efter operationen. 31 möss ingick totalt.X-axeln representerar veckor efter operationen. Y-axeln representerar bakbvolym i kubikmillimeter. Pilstaplarna representerar standardavvikelsen.Det är att vänta att svullnaden från operationen och det inducerade lymfödem kommer att minska under de första fyra veckorna. Efter de första fyra veckorna ser vi en relativ stabilt tillstånd av lymfödem. Volymen av kontrollen hindlimb ökar under de åtta veckorna, alltså strikt säga skillnaden i volym mellan lymfödem hindlimb och kontroll hindlimb, detta var oväntat.Orsaken spekuleras vara att mössen använde sin icke-opererade hindlimb mer än den opererade hindlimben under veckorna efter operationen. Detta kan leda till hypertrofi av kontrollen hindlimb och kanske förklara ökningen i volym. För enskilda siffror om de tre studier som ingår var vänlig och läs protokollet.Denna tabell visar Sidaks multipla jämförelsetest för de kombinerade volymmätningarna av de tre inkluderade studierna. Det beräknade P-värdet visar att det finns statistiskt signifikant skillnad mellan baktänderna med inducerat lymfödem och kontroll hindlimbs, under alla åtta veckors uppföljning. För individuell statistisk analys på de tre inkluderade projekten läs protokollet.Denna metod inducerar statistiskt signifikant lymfödem, varar minst åtta veckor. Förfarandet kan användas för att studera petrificialitet av lymfödem och forskning nya behandlingsalternativ. Efter att ha sett den här videon, du borde ha fått en förståelse för hur man inducerar sekundära lymfödem i hindlimb av möss, med hjälp av en kombination av mikrokirurgi och före och efter operationen bestrålning.När behärskar, kan det kirurgiska ingreppet utföras i 45 minuter.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

En enkel guide Skruv Metod för Intrakraniell xenograft studier på möss

The grafting of human tumor cells into the brain of immunosuppressed mice is an established method for the study of brain cancers including glioblastoma ...

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

Den Trier Social Stress Test protokoll för att framkalla psykisk stress

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

Induktion myointimal Hyperplasi Versus åderförkalkning hos möss: En introduktion av två giltiga modeller

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Halspulsådern Tinkturer för farmakokinetiska och farmakodynamiska Analys av taxaner i möss

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Minimal Invasive Surgical Procedure of Inducing Myocardial Infarction in Mice

Minimal invasiv kirurgisk procedur att inducera hjärtinfarkt hos möss

Myocardial infarction still remains the main cause of death in western countries, despite considerable progress in the stent development area in the last ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

En förbättrad metod för Rapid Intubation av luftstrupen hos möss

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Induktion av accelererad åderförkalkning hos möss: "Wire-skada" Modell

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Bedömning av terapeutisk angiogenes i en murin modell av Hindlimb ischemia

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Inducera akut lung skada hos möss genom direkt Intratracheal Lipopolysaccharide instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

En hög genomströmning in Situ metod för uppskattning av Hepatocyte Nuclear Ploidy hos möss

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...