Name: visualizing the developing brain in living zebrafish using brainbow and time-lapse confocal imaging
Uploaded: 2020-03-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing the Developing Brain in Living Zebrafish using Brainbow and Time-lapse Confocal Imaging at JoVE.com

Y. A. Pan, J. Livet 및 Z. Tobias에게 기술적, 지적 공헌에 감사드립니다. 이 작품은 국립 과학 재단 (상 1553764)와 M.J. 머독 자선 신탁에 의해 지원되었다.

동물 과목과 관련된 절차는 루이스 & 클라크 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다.
1. 얼룩말 어피 배아의 미세 주입
<ol><li>야생형, 성인용 제브라피쉬를 성분리형 짝짓기탱크에 설치하여 오후에미세주사39,,40을수행한다.</li>
	<li>미세 주사의 아침에 DNA 용액을 준비하십시오. 희석 hsp:Zebrabow<sup ...

이 프로토콜은 발달하는 제브라피쉬 뒷뇌에서 전구 세포 및 뉴런의 클론을 시각화하고 이를 뇌무지개 및 타임랩스 공초점 현미경 검사법11을사용하여 생체 내에서 따르는 방법을 설명한다. 생체외 또는 생체외 연구에 비해 이 프로토콜의 주요 장점은 시간이 지남에 따라 자연 적인 milieu에서 척추 동물 뇌의 증식 영역을 직접 관찰 하는 기능. 이 기술은 retroviral 벡터를 사용하여 ?...

발달의 초기 단계에서, 전문화한 선조 세포의 풀은 증식 지역에서 반복적으로 분할하여 딸 세포의 다양한 배열을 생성합니다. 이 발달 기간 도중 품어든 세포는 그 때 분화하고 초기 기관을 형성하기 위하여 여행할 것입니다. 신경계에서는 방사형 glia와 같은 선조가 심실 영역에서 미성숙한 뉴런을 발생시다. 뉴런이 심실에서 멀어지고 성숙함에 따라 확장 조직은 결국 뇌의 매우 복잡한 구조를 형성합니다11,2,3,34,45,,56. 선조의 분열과 뉴런의 분화 및 이동 사이의 조정은 뇌의 최종 크기, 모양 및 따라서 기능을 결정하며, 행동7,,8,,9,,10에직접적인 영향을 미칩니다. 이러한 프로세스에 대 한 엄격한 제어는 명확 하 게 정상적인 두뇌 개발에 대 한 중요 한 동안, 이러한 역학을 조절 하는 글로벌 메커니즘은 잘 이해 되지 않습니다. 여기에서 우리는 세포 해결책에 있는 신경계 발달을 공부하는 공구를 기술합니다, 연구원이 Brainbow를 가진 개발 제브라피시 두뇌에 있는 생체 내 선조 세포 및 신경세포를 구상하고 시간 경과 공초점 현미경 검사법을 통해 그들의 행동을 추적하는 것을허용합니다 11. 접근은 또한 발전 태아의 그밖 부분을 구상하기 위하여 적응될 수 있습니다.
제브라피쉬 뇌의 세포를 관찰하고 구별하기 위해, 우리는 Brainbow 세포 라벨링 기술11을적용했습니다. Brainbow는 세포의 인구를 표시하기 위하여 3개의 명백한 형광성 단백질 (FPs)의 무작위로 결정된, 조합식 식을 이용합니다. Brainbow 발현에 대한 기본 발현은 적색 FP dTomato인 반면, 효소 Cre 재조합효소에 의한 재조합은 mCerulean(청색 형광 단백질, CFP) 또는 황색 형광 단백질(YFP)12,,13의발현을 초래한다. 세포에서 발현되는 각 FP의 결합된 양은 독특한 색조를 제공하여 인접한 세포와 명확한 시각적 구별을 허용합니다. 추가적으로, 선조 세포가 분할할 때, 각 딸 세포는 그것의 어머니 세포에서 색깔을 승계할 것입니다, 색깔 로 구분된 클론을 생성하고 연구원이 세포 계보를 추적하는 것을허용합니다 11,,14. 원래 마우스12에서뉴런 회로를 분석하는 데 사용되었지만, Brainbow는 이후 제브라피시15를포함한 다양한 모델 유기체로 표현되어 왔다.
우리의 기술은 살아있는 제브라피시에서 시간이 지남에 따라 여러 가지 색상 으로 구분 된 클론을 직접 이미지화하기 위해 이전의 다색 라벨링 및 이미징 방법을 기반으로합니다. 배아로서의 광학적 투명성으로 인해 제브라피쉬는 이미징 실험,16에적합하며, 이전 연구에서는 제브라피쉬의 Brainbow를 활용하여 신경계11, 15,,15,17,,18,19,,20,,21,22,,,23,,24,,25,, 26,27. 살아있는 유기체로 직접 이미지화 할 수있는 능력과 빠른 자궁 발달로 얼룩말은 척추 동물 발달의 귀중한 모델로 만듭니다. 포유류 뇌와 는 달리, 제브라피쉬 뒷뇌의 전체 증식 영역은 내인성 환경에 지장을 주지 않고 이미징을 위해 쉽게 사용할 수 있다6. 이것은 시험관 내 또는 고정된 조직 준비보다는 살아있는 유기체에서 실험이 실행될 수 있습니다. 고정 된 이미징 실험과는 달리 생체 내 연구는 세로 설계를 허용하여 패턴을 분석 할 수있는 몇 시간의 데이터를 생성하므로 상대적으로 드문 사건을 관찰 할 가능성이 높아집니다. 관심 있는 사건의 속도와 길이에 따라, 연구원은 짧은 (1-2 시간) 또는 긴 (~16 시간) 시간 경과 화상 진찰 실험을 능력을 발휘하도록 선택할 수 있습니다. 제브라피쉬 열충격프로모터(70)(hsp70, hsp)를 이용하여, 무지개발현은28,,29를시간적으로 조절할 수 있다. 부가적으로, 이러한 프로모터에 의해 유도된 모자이크 발현은 많은클론(11)에라벨링 및 추적에 적합하다.
살아있는 두뇌 내의 다중 클론을 시각적으로 확인하는 기능은 이 방법의 이점입니다. 신경계의 발달 내에서 클론의 역할을 조사한 중요한 이전 연구는 단일 전구 세포및 그 자손에게 단일 FP 또는 기타 쉽게 시각화된 단백질을 사용하여 라벨을 붙이기 위해 레트로바이러스 벡터를 활용하였다. 이러한 라벨링은 연구원이 생체 외 또는 생체 내2,,30, 31,,3231,,33,34,35,36,37,,38에서시간이 지남에 따라 단일 복제를 관찰 할 수 있게합니다. 하나의 클론 내에서 세포의 동작을 추적하는 방법과는 달리, Brainbow의 뚜렷한 색상은 연구원이 클론 중 역학을 관찰 할 수 있습니다. 추가적으로, 뇌 내의 많은 클론에 레이블을 Brainbow를 사용하여, 복제 동작에 대한 추가 데이터는 단일 클론11에레이블을 지정하는 기술에 비해 수집된다. 중요한 것은, 여기에 기술된 접근법은 상이한 유전적 또는 약리학적 조작을 겪은 물고기 들 사이의 발달 비교를 생성하기 위해 확장될 수 있다18. 전반적으로, 이러한 장점은 척추 동물 신경계의 개발을 탐구하는 연구자, 특히 클론의 역할에 관심이있는 연구자들에게 이상적인 Brainbow 표현 얼룩말의 생체 내 공초점 이미징에서 시간 경과를 만듭니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5mL transfer pipet</td>
			<td>Globe Scientific, Inc.</td>
			<td>134020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-phenyl-2-thiourea (PTU)</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>L06690</td>
			<td>Diluted to 0.2 mM in E3 to prevent embryo pigmentation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml conical tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352070</td>
			<td>For heat shocking embryos</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 lb nylon fishing line</td>
			<td>SecureLine</td>
			<td>NMT250</td>
			<td>For making embryo manipulators</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7.5mL transfer pipet</td>
			<td>Globe Scientific, Inc.</td>
			<td>135010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C3881</td>
			<td>For E3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>867-WC NO GLUE</td>
			<td>For making embryo manipulators</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre recombinase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0298M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital dry bath</td>
			<td>Genemate</td>
			<td>490016-616</td>
			<td>Used to store LMA at 40&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epifluorescence dissection scope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillary tubes</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TW100F-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Forma Scientific</td>
			<td>3158</td>
			<td>To maintain embryos at 28&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection plate molds</td>
			<td>Adaptive Science Tools</td>
			<td>TU-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotemp water bath</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>2320</td>
			<td>For heat shocking embryos</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>0395</td>
			<td>For E3 and for DNA solution for injections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser-scanning confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LE agarose</td>
			<td>Genemate</td>
			<td>E3120</td>
			<td>To create agarose injection plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-melt agarose (LMA)</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>J234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mating tanks</td>
			<td>Aquaneering, Inc.</td>
			<td>ZHCT100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9140</td>
			<td>For E3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9397</td>
			<td>For E3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>M3301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette Puller</td>
			<td>Sutter Instrument Co.</td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS-222 Tricaine-S</td>
			<td>Western Chemical, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Stock made at 4 mg/mL in reverse osmosis (RO) water, then added dropwise to E3 to final concentration of 0.2 mM to anesthetize embryos</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>4058-01</td>
			<td>For E3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (90 mm, 60 mm)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-107G</td>
			<td>To house embryos and create imaging chamber (60 mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol red</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft stitch ring markers</td>
			<td>Clover Needlecraft, Inc.</td>
			<td>354</td>
			<td>For creating imaging chamber with Petri dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super glue (Ultra gel control)</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>1363589</td>
			<td>For making embryo manipulators</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe needles</td>
			<td>Beckton Dickinson</td>
			<td>BD329412</td>
			<td>For dechorionating embryos</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing the developing brain in living zebrafish using brainbow and time-lapse confocal imaging

척추 동물 신경계의 발달은 복잡한 세포 행동 및 상호 작용의 정확한 조정을 요구합니다. 생체 내 이미징 기술에서 고해상도의 사용은 살아있는 유기체에서 이러한 과정에 명확한 창을 제공 할 수 있습니다. 예를 들면, 세포와 그들의 자손을 나누는 것은 신경계가 형성될 때 실시간으로 따를 수 있습니다. 최근 몇 년 동안, 다색 기술의 기술 발전은 조사 할 수있는 질문의 유형을 확장했다. 다중 색 Brainbow 접근법은 세포와 같은 것을 구별할 뿐만 아니라, 각각 하나의 전구 세포로부터 파생되는 관련 세포의 여러 가지 다른 클론을 색상 코드화하는 데 사용될 수 있습니다. 이를 통해 개발 중에 다양한 클론과 해당 동작의 멀티플렉스 계보 분석을 동시에 수행할 수 있습니다. 여기에서 우리는 개발 제브라피시 신경계 내의 다중 색깔 Brainbow 표지세포의 다수를 구상하기 위하여 시간 경과 공초점 현미경 검사법을 이용하기 위한 기술을 기술합니다. 이것은 전통적인 프로모터 구동 색상을 사용하여 차별화하기 어려운 세포 들 간의 세포 상호 작용을 따르는 데 특히 유용합니다. 우리의 접근 방식은 동시에 여러 다른 클론 간의 계보 관계를 추적하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술을 사용하여 생성된 대규모 데이터 세트는 유전적 또는 약리학적 조작에 걸쳐 정량적으로 비교할 수 있는 풍부한 정보를 제공합니다. 궁극적으로 생성 된 결과 신 경계 개발 방법에 대 한 체계적인 질문에 대답 하는 데 도움이 수 있습니다.

이 섹션은 여기서 설명된 생체 내 다색 타임랩스 이미징 접근법을 사용하여 얻을 수 있는 결과의 예를 예시한다. 우리는 개발 제브라피쉬 뒷뇌의 증식성 심실 영역에서 세포의 Brainbow 색코딩클론이 14 (도 1)임을보여준다.
전형적으로, Brainbow 표지된 세포가 특정 방사형 섬유를 따라 배열되었을 때, 그들은 상대적인 RGB 채널 가중치로 정?...

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Visualizing the Developing Brain in Living Zebrafish using Brainbow and Time-lapse Confocal Imaging

생체 내 이미징은 신경계 발달의 근본적인 세포 메커니즘을 조사하는 데 사용할 수있는 강력한 도구입니다. 여기에서 우리는 개발 제브라피시 신경계 내의 다중 색깔 Brainbow 표지세포의 다수를 구상하기 위하여 시간 경과 공초점 현미경 검사법을 이용하기 위한 기술을 기술합니다.

무지개와 타임랩스 공초점 이미징을 사용하여 살아있는 제브라피시의 뇌 발달 시각화

Development of the vertebrate nervous system requires a precise coordination of complex cellular behaviors and interactions. The use of high resolution in ...

이 방법은 신경 전구 세포의 역학과 척추 동물 뇌 발달의 기초가되는 그들의 자손에 대한 근본적인 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 발달의 많은 시간 동안 살아있는 두뇌 내의 복제 관련 세포의 다중 클러스터를 직접 시각화하는 기능입니다. 프로토콜은 또한 제브라피시 태아의 그밖 개발 체계에 있는 복제및 전구역학을 공부하기 위하여 적용될 수 있습니다.이 방법을 사용한 시각화는 신경 발달 중에 발생하는 기본 프로세스를 직접 관찰하는 데 특히 유용합니다. 마이크로 주사를 수행하기 전에 오후에, 섹스 분리 결합 탱크에 야생 유형 성인 제브라피시를 설정합니다. 다음날 아침 원고 방향에 따라 DNA 용액을 준비하고 수정 45분 이내에 이 용액의 약 4.2 나노 리터를 한 세포 제브라피시 배아에 주입한다.E 3 배지와 섭씨 28도의 주입된 배아를 24시간 동안 유지한 다음 그룹에서 죽은 배아와 변형된 배아를 호출합니다. 최대 20개의 건강한 배아를 50밀리리터 튜브로 옮기고, 10밀리리터의 E 3를 채우고 각 튜브 위에 캡을 놓습니다. 50 밀리리터 튜브가 있는 랙을 섭씨 37도의 수조에 80~90분 동안 똑바로 세우고 욕조의 수위가 튜브의 E 3보다 높은지 확인합니다.수조에서 튜브 랙을 제거하고 섭씨 28도 인큐베이터에 놓습니다. E 3가 식히고 배아가 온도로 재적응할 수 있도록 최대 1시간까지 허용하십시오. 그런 다음 0.2 밀리머 PTU와 E 3이 섭씨 28도 인큐베이터에서 따뜻하게 유지된 페트리 요리로 옮깁니다.열 충격 후 2 ~ 4 시간에서, 성공적인 Brainbow 재조합을 나타내는 CFP 또는 YFP의 발현을 위한 표준 형광 해부 현미경의 밑에 배아를 검사합니다. 전체적으로 강력한 FP 발현을 가진 배아를 선택하고 PTU를 사용하여 별도의 접시로 옮깁니다. 1일, 2일 또는 3일 후에 수정을 이미지합니다.형광 현미경의 밑에 희미한 나타나는 발현은 실제로 응초점 시간 경과 화상 진찰에서 잘 시각화될 수 있습니다. 실험의 날 전에, 이미징 챔버 및 배아 조작 도구를 준비합니다. 이미징 챔버를 준비하려면 플라스틱 링을 60mm 페트리 접시의 중앙에 조심스럽게 대접하십시오.4 인치 나무 면봉 스틱의 끝에 나일론 낚시 라인의 작은 길이를 슈퍼 접착제로 조작기를 구성합니다. 필요한 경우 장착하기 전에 해부 현미경으로 배아를 비초합니다. 배아를 장착하려면, 이미징 챔버에서 플라스틱 링의 중심으로 물고기를 전송하고 미세 팁 전송 파이펫으로 가능한 한 많은 초과 E 세를 제거합니다.깨끗한 이송 파이펫을 사용하여 물고기를 1% 낮은 녹인 아가로즈와 E 3로 덮어 플라스틱 링 전체를 아가로즈 층으로 채웁니다. 그런 다음 배아를 파이펫 팁으로 부드럽게 당기고 기포를 도입하지 않고 아가로즈로 돌아갑니다. 배아 조작기를 사용하여 물고기와 아가로즈가 굳어지기 전에 빠르게 방향을 지정합니다.똑바로 현미경으로 이미징하는 경우, 가능한 한 아가로즈의 상부 표면에 가까운 배아를 배치, 그들은 바로 자신의 꼬리와 이미징 챔버의 바닥에 평행 있는지 확인. 아가로즈가 굳어질 때까지 기다린 다음 이미징 챔버를 E 3로 채우고 이미징 과정을 통해 증발을 고려하도록 가능한 한 많이 추가하십시오. 공초점 현미경에 물고기와 E 3와 이미징 챔버를 배치합니다.그런 다음 높은 숫자 조리개와 긴 작업 거리로 목표를 선택합니다. 셀의 밀도가 높고 밝은 라벨이 있는 영역을 찾아 수집 매개 변수를 설정합니다. 이것은 Zen 소프트웨어를 사용하는 예이지만 사용 가능한 현미경 및 레이저 라인에 따라 설정이 달라집니다.세 트랙을 준비하여 각 FP 채널을 순차적으로 이미지화합니다. 아르곤 레이저를 사용하여 514 나노미터에서 458 나노미터및 YFP에서 CFP를 자극하고 DPSS 561 나노미터 레이저를 사용하여 dTomato을 흥분시킵니다. 적절한 파장에서 세 가지 임무를 수집합니다.이미지에 Z 스택 범위를 선택하고 10~30분 사이의 시간 간격을 선택하여 미토틱 및 석면 이벤트를 추적합니다. 마지막으로 이미징 세션의 길이를 선택하고 실험을 실행합니다. 이미징이 완료된 후, 피지와 호환되는 Zen 또는 다른 형식을 사용하는 경우 원시 데이터를 CZI 형식으로 저장한 다음 바이오 포맷 수입업체를 사용하여 이미지를 피지로 가져옵니다.생체 내 다색 타임랩스 이미징은 개발 제브라피시 힌드뇌의 증식 심실 영역에서 세포의 Brainbow 색상 코딩 클론을 보여주기 위해 사용되었다. Brainbow 표지 된 세포는 같은 색상을 공유 하는 특정 방사형 섬유를 따라 배열. 이는 상대RGB 채널 가중치로 정량화될 수 있습니다.이것은 이 라디오 단이 세포를 분할의 클론이고 그들의 유사한 색깔이 복제관련인 것으로 그(것)들을 확인하기 위하여 이용될 수 있었다는 것을 건의합니다. 정량적 색 분석은 딸 세포가 어머니의 세포와 같은 색깔을 표현하는 것을 보여주었습니다. 그러나 세포의 이웃 무선 클러스터는 서로 구별 될 수있다.관련 세포의 수많은 클론은 생체 내 시간 동안 동시에 추적될 수 있어 멀티플렉스 계보 분석 및 비교를 가능하게 합니다. 2일 클론에서 색표현의 정량화는 3일 후에 다시 수정한 후 Brainbow 표현이 2~3일 동안 상대적으로 일정한 것으로 나타났다. 시간 경과 화상 진찰은 1에서 2 일 후에 비옥한 후에 간 동역학 핵 이동 및 세포 분열을 겪고 있는 수많은 세포를 밝혔습니다, 세포 주기를 공부하는 가능하게 합니다.8.4시간의 평균 세포 주기가 제브라피시의 이전 측정과 비교할 수 있는 계산되었습니다. 더욱이, 이 화상 진찰 기술은 막 출혈 및 세포 단편화와 같은 세포 분열과 같은 세포 세포가 세포 분열과 관련되었던 고정관적인 형태학적 변화를 겪고 있는 개별 세포를 관찰하기 위하여 이용되었습니다. 이 방법은 생체 내에서 수행되기 때문에, 제브라피쉬는 이미징 챔버에서 구출되고 나중에 이미징 또는 기타 실험을 위해 유지될 수 있다.이 기술의 사용은 우리가 신경 발달 도중 복제 관련 세포의 역할에 관하여 새로운 질문을 탐구하는 것을 허용합니다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion (FDAP)

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion FDAP

광 변환 한 후 형광 붕괴를 사용하여 생활 Zebrafish의 태아의 단백질 안정성을 측정 (FDAP)

Protein stability influences many aspects of biology, and measuring the clearance kinetics of proteins can provide important insights into biological ...

연구

발생학

Capturing Tissue Repair in Zebrafish Larvae with Time-lapse Brightfield Stereomicroscopy

시간 경과 브라이트 실체 현미경으로 Zebrafish의 애벌레에서 조직 복구를 캡처

The zebrafish larval tail fin is ideal for studying tissue regeneration due to the simple architecture of the larval fin-fold, which comprises of two ...

Imaging Subcellular Structures in the Living Zebrafish Embryo

살아있는 Zebrafish의 배아에서 세포 이하 구조를 이미징

In vivo imaging provides unprecedented access to the dynamic behavior of cellular and subcellular structures in their natural context. Performing such ...

Tracking Cells in GFP-transgenic Zebrafish Using the Photoconvertible PSmOrange System

Photoconvertible PSmOrange 시스템을 사용하여 GFP 유전자 변형 Zebrafish의 세포를 추적

The rapid development of transparent zebrafish embryos (Danio rerio) in combination with fluorescent labelings of cells and tissues allows visualizing ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

분석<em&gt; 생체</em&gt; 셀 마이그레이션 Zebrafish의 배아에서 세포 이식 및 시간 경과 이미징을 사용하여

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Analysis of Zebrafish Kidney Development with Time-lapse Imaging Using a Dissecting Microscope Equipped for Optical Sectioning

해부 현미경을 사용하여 시간 경과 영상과 Zebrafish의 신장 개발의 분석 광학 단면에 대한 장착

In order to understand organogenesis, the spatial and temporal alterations that occur during development of tissues need to be recorded. The method ...

Visualizing the Interrenal Steroidogenic Tissue and Its Vascular Microenvironment in Zebrafish

Interrenal Steroidogenic 조직 및 제브라 피쉬의 혈관 미세 시각화

This protocol introduces how to detect differentiated interrenal steroidogenic cells through a simple whole-mount enzymatic activity assay. Identifying ...

Live Confocal Imaging of Developing Arabidopsis Flowers

애기 장대 꽃 개발의 공 촛점 이미징 라이브

The study of plant growth and development has long relied on experimental techniques using dead, fixed tissues and lacking proper cellular resolution. ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

살아있는 개구리와 Zebrafish 태아의 저산소증 유도

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

실시간으로 개발을 시각화 하기 위해 다중 광자 시간 경과 영상: 마이그레이션 Zebrafish 태아 신경 크레스트 셀의 시각화

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...