Name: visualizing the developing brain in living zebrafish using brainbow and time-lapse confocal imaging
Uploaded: 2020-03-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing the Developing Brain in Living Zebrafish using Brainbow and Time-lapse Confocal Imaging at JoVE.com

Y. A. Pan, J. Livet ve Z. Tobias'a teknik ve entelektüel katkıları için teşekkür ederiz. Bu çalışma Ulusal Bilim Vakfı (Ödül 1553764) ve M.J. Murdock Charitable Trust tarafından desteklenmiştir.

Hayvan denekleri ile ilgili prosedürler Lewis & Clark Koleji'ndeki Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Zebrabalığı Embriyolarının Mikroenjeksiyonu
<ol><li>Mikroenjeksiyonlar39,40gerçekleştirmeden önce öğleden sonra seks ayrılmış çiftleme tankları vahşi tip, yetişkin zebra balığı kurmak.</li>
	<li>Mikroenjeksiyonların olduğu sabah DNA çözeltisini hazırlayın. ...

Bu protokol, gelişmekte olan zebra balığı arka beyninde progenitor hücreleri ve nöronların klonlarını görselleştirmek ve Brainbow ve zaman atlamalı konfokal mikroskopi11kullanarak in vivo onları takip etmek için bir yöntem açıklar. Bu protokolün in vitro veya ex vivo çalışmalara kıyasla en büyük avantajı, omurgalı beyninin proliferatif bölgesini zaman içinde doğal ortamında doğrudan gözlemleyebilme yeteneğidir. Bu teknik retroviral vektörler kullanarak tek bir klo...

Gelişimin ilk aşamalarında, özel leştirilmiş progenitor hücrelerinin havuzları proliferatif bölgelerde tekrar tekrar bölünür ve farklı kız hücreleri dizileri üretir. Bu gelişim döneminde doğan hücreler daha sonra farklılaşır ve yeni doğan organları oluşturmak için seyahat ederler. Sinir sisteminde radyal glia gibi atalar ventriküler bölgelerde olgunlaşmamış nöronlara yol açar. Nöronlar ventriküllerden uzaklaşır ve olgunlaşırken, genişleyen doku sonunda beynin son derece karmaşık yapılarını oluşturur1,2,3,4,5,6. Atalarının bölünmesi ve farklılaşma ve nöronların göç arasındaki koordinasyon nihai boyut, şekil belirleyecek ve böylece beynin fonksiyonu, doğrudan davranış etkileyen7,8,9,10. Bu süreçler üzerinde sıkı kontrol açıkça normal beyin gelişimi için çok önemli olmakla birlikte, bu dinamikleri düzenleyen küresel mekanizmalar iyi anlaşılamamıştır. Burada bir hücresel çözünürlükte sinir sistemi gelişimini incelemek için bir araç tarif, araştırmacılar Brainbow ile gelişmekte olan zebrabalığı beyninde progenitor hücreleri ve nöronlar in vivo görselleştirmek ve zaman atlamalı konfokal mikroskopi ile zaman içinde davranışlarını izlemek için izin11. Yaklaşım aynı zamanda gelişmekte olan embriyonun diğer bölümlerini görselleştirmek için adapte edilebilir.
Gelişmekte olan zebra balığı beynindeki hücreleri gözlemlemek ve ayırt etmek için Brainbow hücre etiketlemetekniğini 11'euyarladık. Brainbow, bir hücre popülasyonunu etiketlemek için üç farklı floresan proteinin (FP) rastgele belirlenmiş, birleştirici ekspresyonu kullanır. Brainbow ekspresyonu için varsayılan ifade kırmızı FP dTomato iken, enzim Cre rekombinaz ile rekombinasyon mCerulean (siyan floresan protein, CFP) veya sarı floresan protein (YFP)12,13ifadesi ile sonuçlanır . Bir hücrede ifade edilen her FP'nin birleşik miktarı, hücreye benzersiz bir renk verir ve komşu hücrelerden net görsel ayrım sağlar. Ayrıca, bir ata hücresi bölündüğünde, her kız hücre renk kodlu klonlar üreten ve araştırmacılar hücre soy 11 ,,14izlemek için izin, kendi ana hücreden renk devralacak.11 Başlangıçta farelerde nöronal devreleri analiz etmek için kullanılırken12, Brainbow beri model organizmaların geniş bir yelpazede ifade edilmiştir, zebrabalığı da dahil olmak üzere15.
Tekniğimiz, yaşayan zebra balıklarında zaman içinde birden fazla renk kodlu klonları doğrudan görüntülemek için önceki çok renkli etiketleme ve görüntüleme yöntemlerine dayanmaktadır. Embriyo lar gibi optik şeffaflık nedeniyle, zebra balıkları görüntüleme deneyleri için uygundur16, ve önceki çalışmalarda sinir sistemi11, 15,,17,18,19,20,21,22,23,15,25, çeşitli dokuları incelemek için zebrabalığı Brainbow kullandık24 26,27. Canlı organizmanın doğrudan görüntü yeteneği, onların hızlı eski rahim gelişimi ile birlikte, zebra balığı omurgalı gelişimi değerli bir model yapmak. Memeli beyninin aksine, zebra balığı hindbrain tüm proliferatif bölge endojen çevre6bozulmadan görüntüleme için hazırdır. Bu deneylerin in vitro veya sabit doku preparatları yerine canlı organizmada yapılmasını sağlar. Sabit görüntüleme deneylerinin aksine, in vivo çalışmalar uzunlamasına bir tasarıma olanak sağlayarak desenler için analiz edilebilen saatler süren veriler üreterek nispeten nadir olayları gözlemleme olasılığını artırır. İlgi çekici olayların hızına ve uzunluğuna bağlı olarak, araştırmacılar kısa (1-2 saat) veya uzun (~16 saate kadar) hızlandırılmış görüntüleme deneyleri yapmayı seçebilirler. Zebrabalığı ısı şok organizatörü 70 (hsp70, hsp) kullanılarak, Brainbow ekspresyonu zamansal olarak kontrol edilebilir28,29. Ayrıca, bu organizatör tarafından indüklenen mozaik ifade de etiketleme ve birçok klonlar11izleme için uygundur.
Canlı beyindeki birden fazla klonu görsel olarak tanımlayabilme yeteneği bu yöntemin bir avantajıdır. Sinir sisteminin gelişiminde klonların rolünü araştıran önemli önceki çalışmalar, tek bir ata hücresi ve onun atasını tek bir FP veya diğer kolayca görselleştirilmiş protein kullanarak etiketlemek için retroviral vektörler kullanılmıştır. Bu tür etiketleme araştırmacılar zaman içinde tek bir klon gözlemlemek için izin verir, in vitro veya in vivo2,30,,31,32,33,34,35,36,37,38. Brainbow'un farklı renkleri, bir klondaki hücrelerin davranışını izleme yöntemlerinin aksine, araştırmacıların klonlar arasındaki dinamikleri gözlemlemelerine olanak tanır. Ayrıca, beyindeki birçok klonları etiketlemek için Brainbow kullanılarak, klonal davranışla ilgili ek veriler tek bir klonu11etiketleyen tekniklere göre toplanır. Daha da önemlisi, burada açıklanan yaklaşımlar farklı genetik veya farmakolojik manipülasyonlar18uğramıştır balıklar arasında gelişimsel karşılaştırmalar oluşturmak için genişletilebilir. Genel olarak, bu avantajlar, omurgalı sinir sisteminin gelişimini araştıran araştırmacılar için ideal olan Brainbow ifade eden zebra balığının vivo konfokal görüntülemesinde zaman atlamalı hale getirilmektedir, özellikle de klonların rolüyle ilgilenenler.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5mL transfer pipet</td>
			<td>Globe Scientific, Inc.</td>
			<td>134020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-phenyl-2-thiourea (PTU)</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>L06690</td>
			<td>Diluted to 0.2 mM in E3 to prevent embryo pigmentation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml conical tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352070</td>
			<td>For heat shocking embryos</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 lb nylon fishing line</td>
			<td>SecureLine</td>
			<td>NMT250</td>
			<td>For making embryo manipulators</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7.5mL transfer pipet</td>
			<td>Globe Scientific, Inc.</td>
			<td>135010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C3881</td>
			<td>For E3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>867-WC NO GLUE</td>
			<td>For making embryo manipulators</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre recombinase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0298M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital dry bath</td>
			<td>Genemate</td>
			<td>490016-616</td>
			<td>Used to store LMA at 40&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epifluorescence dissection scope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillary tubes</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TW100F-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Forma Scientific</td>
			<td>3158</td>
			<td>To maintain embryos at 28&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection plate molds</td>
			<td>Adaptive Science Tools</td>
			<td>TU-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotemp water bath</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>2320</td>
			<td>For heat shocking embryos</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>0395</td>
			<td>For E3 and for DNA solution for injections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser-scanning confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LE agarose</td>
			<td>Genemate</td>
			<td>E3120</td>
			<td>To create agarose injection plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-melt agarose (LMA)</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>J234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mating tanks</td>
			<td>Aquaneering, Inc.</td>
			<td>ZHCT100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9140</td>
			<td>For E3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9397</td>
			<td>For E3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>M3301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette Puller</td>
			<td>Sutter Instrument Co.</td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS-222 Tricaine-S</td>
			<td>Western Chemical, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Stock made at 4 mg/mL in reverse osmosis (RO) water, then added dropwise to E3 to final concentration of 0.2 mM to anesthetize embryos</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>4058-01</td>
			<td>For E3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (90 mm, 60 mm)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-107G</td>
			<td>To house embryos and create imaging chamber (60 mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol red</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft stitch ring markers</td>
			<td>Clover Needlecraft, Inc.</td>
			<td>354</td>
			<td>For creating imaging chamber with Petri dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super glue (Ultra gel control)</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>1363589</td>
			<td>For making embryo manipulators</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe needles</td>
			<td>Beckton Dickinson</td>
			<td>BD329412</td>
			<td>For dechorionating embryos</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing the developing brain in living zebrafish using brainbow and time-lapse confocal imaging

Omurgalı sinir sisteminin gelişimi karmaşık hücresel davranışlar ve etkileşimlerin hassas bir koordinasyon gerektirir. Vivo görüntüleme tekniklerinde yüksek çözünürlüklü kullanımı, canlı organizmada bu süreçlere açık bir pencere açabilir. Örneğin, hücreleri ve bunların dölleri sinir sistemi formları olarak gerçek zamanlı olarak takip edilebilir bölme. Son yıllarda, çok renkli tekniklerde teknik gelişmeler araştırılabilir soru türlerini genişletti. Çok renkli Brainbow yaklaşımı sadece hücreler gibi ayırt etmek için değil, aynı zamanda her bir ata hücresi türetmek ilgili hücrelerin birden fazla farklı klonları renk kodu için kullanılabilir. Bu, geliştirme sırasında birçok farklı klonların ve davranışlarının aynı anda çok katlı bir soy analizine olanak tanır. Burada, gelişmekte olan zebra balığı sinir sistemi içinde çok renkli Brainbow etiketli çok sayıda hücreyi gerçek zamanlı olarak görselleştirmek için zaman atlamalı konfokal mikroskopiyi kullanma tekniğini açıklıyoruz. Bu, özellikle geleneksel promotör odaklı renkleri kullanarak farklı bir şekilde etiketlemesi zor olan hücreler arasındaki hücresel etkileşimleri takip etmek için yararlıdır. Yaklaşımımız aynı anda birden fazla farklı klon lar arasındaki soy ilişkilerini izlemek için kullanılabilir. Bu teknik kullanılarak oluşturulan büyük veri kümeleri, genetik veya farmakolojik manipülasyonlar arasında nicel olarak karşılaştırılabilen zengin bilgiler sağlar. Sonuçta oluşturulan sonuçlar sinir sisteminin nasıl geliştiği hakkında sistematik sorulara cevap yardımcı olabilir.

Bu bölümde, burada açıklanan in vivo çok renkli hızlandırılmış görüntüleme yaklaşımı kullanılarak elde edilebilen sonuçlara örnekler gösterilmektedir. Gelişmekte olan zebra balığıhindbrain14 proliferatif ventriküler zonlarında hücrelerin Brainbow renk kodlu klonları göstermek(Şekil 1).
Tipik olarak, Brainbow etiketli hücreler belirli bir radyal lif boyunca düzenlendiğinde, göreceli RGB kanal ağırlıkları...

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing the Developing Brain in Living Zebrafish using Brainbow and Time-lapse Confocal Imaging at JoVE.com

Visualizing the Developing Brain in Living Zebrafish using Brainbow and Time-lapse Confocal Imaging

In vivo görüntüleme sinir sistemi gelişiminin altında yatan hücresel mekanizmaları araştırmak için kullanılabilecek güçlü bir araçtır. Burada, gelişmekte olan zebra balığı sinir sistemi içinde çok renkli Brainbow etiketli çok sayıda hücreyi gerçek zamanlı olarak görselleştirmek için zaman atlamalı konfokal mikroskopiyi kullanma tekniğini açıklıyoruz.

Brainbow ve Time-lapse Konfokal Görüntüleme kullanarak Yaşayan Zebrabalıklarında Gelişen Beyni Görselleştirme

Development of the vertebrate nervous system requires a precise coordination of complex cellular behaviors and interactions. The use of high resolution in ...

Bu yöntem, nöral ata hücrelerinin dinamiği ve omurgalı beyin gelişiminin altında yatan bunların soyundan gelen temel soruların yanıtlatılabiliyor. Bu tekniğin en büyük avantajı, gelişimin birçok saat boyunca canlı beyin içinde klonsal ilişkili hücrelerin birden fazla kümeleri doğrudan görselleştirmek için yeteneğidir. Protokol ayrıca zebrabalığı embriyonun diğer gelişmekte olan sistemlerinde klonal ve ata dinamiğinin incelenmesiiçin de uygulanabilir.Bu yöntemi kullanarak görselleştirme özellikle nöral gelişim sırasında meydana gelen temel süreçleri doğrudan gözlemlemek için yararlıdır. Öğleden sonra mikro enjeksiyonlar gerçekleştirmeden önce, cinsiyet ayrı çiftleşmiş tanklarda yabani tip yetişkin zebra balığı kurmak. Ertesi sabah dna çözeltisini el yazması yönlere göre hazırlayın ve döllenmeden sonraki 45 dakika içinde bu çözeltinin yaklaşık 4,2 nano litresini bir hücre zebra balığı embriyosuna enjekte edin.E üç orta ve 28 santigrat derece inkübatör 24 saat boyunca enjekte embriyolar korumak, sonra gruptan ölü ve deforme embriyolar arayın. 50 mililitrelik bir tüp içine 20 kadar sağlıklı embriyo transfer, E üç 10 mililitre ile doldurun ve her tüpün üstüne bir kap yerleştirin. 50 mililitrelik tüpleri dik bir şekilde 80 ila 90 dakika boyunca 37 derece lik su banyosuna yerleştirin, banyodaki su seviyesinin tüpteki E üçünden daha yüksek olduğundan emin olun.Tüp rafını su banyosundan çıkarın ve 28 santigrat derece kuluçka makinesine yerleştirin. E üçün soğuması ve embriyoların ısıya alışması için bir saate kadar bekleyin. Daha sonra 0.2 milimolar PTU ve E üç 28 santigrat derece inkübatör sıcak tutulan Petri yemekleri aktarın.Isı şokundan 2-4 saat sonra, başarılı Brainbow rekombinasyonunu gösteren CFP veya YFP ekspresyonu için embriyoları standart floresan diseksiyonu mikroskobu altında inceleyin. Boyunca sağlam bir FP ifadesi ile embriyoları seçin ve Bunları PTU ile ayrı bir tabağa aktarın. Onları bir, iki veya üç gün sonra döllenme görüntü.Floresan mikroskobualtında loş görünen ifade aslında konfokal zaman atlamalı görüntülemede iyi görüntülenebilir. Deney gününden önce, görüntüleme odasını ve embriyo manipülasyon aracını hazırlayın. Görüntüleme odası hazırlamak için, dikkatle 60 milimetre Petri çanak merkezine plastik bir halka superglue.Dört inç ahşap bez sopa sonuna kadar naylon olta küçük bir uzunluk yapıştırma süper manipülatör inşa edin. Gerekirse, montajdan önce embriyoları bir diseksiyon mikroskobu altında dekoron. Embriyoları monte etmek için, görüntüleme odasında plastik halka nın merkezine balık transferi ve ince uçlu transfer pipet ile mümkün olduğunca fazla E üç kaldırın.Bir yüzde düşük erime agarose ve E üç ile balık kapsayacak şekilde temiz bir transfer pipet kullanın, agarose bir tabaka ile tüm plastik halka doldurma. Sonra yavaşça pipet ucu içine embriyo çekin ve geri agarose içine herhangi bir hava kabarcıkları tanıtmadan. Hızlı bir şekilde sertleşir önce balık ve agarose yönlendirmek için bir embriyo manipülatör kullanın.Dik bir mikroskopla görüntülenirse, embriyoyu agarose'un üst yüzeyine mümkün olduğunca yakın konumlandırın ve kuyrukları düz olarak görüntüleme odasının altına paralel olduğundan emin olun. Agarose sertleşmek için bekleyin, sonra E üç ile görüntüleme odası doldurun, görüntüleme boyunca buharlaşma için mümkün olduğunca ekleyerek. Görüntüleme odasını balık ve E üçünle birlikte konfokal mikroskoba yerleştirin.Sonra yüksek sayısal diyafram ve uzun bir çalışma mesafesi ile hedef seçin. Hücrelerin uygun şekilde yoğun ve parlak etiketleetiketlenmiş bir bölge bulun ve edinme parametrelerini ayarlayın. Bu Zen yazılımı kullanarak bir örnektir, ancak ayarlar mikroskop ve lazer hatları mevcut bağlı olarak değişir.Her FP kanalını ardından güçlemek için üç parça hazır 458 nanometrede CFP ve 514 nanometrede YFP'yi heyecanlandırmak için argon lazer kullanın ve dTomato'yı heyecanlandırmak için DPSS 561 nanometre lazer kullanın. Uygun dalga boylarında üç için misyonları toplamak.Görüntü ve mitotik ve apoptotik olayları izlemek için 10 ila 30 dakika arasında bir zaman aralığı z yığını aralığı seçin. Son olarak, görüntüleme oturumunun uzunluğunu seçin ve denemeyi çalıştırın. Görüntüleme tamamlandıktan sonra, Zen veya Fiji ile uyumlu başka bir biçim kullanıyorsanız, czi formatında ham verileri kaydedin, ardından bio formatları ithalatçısını kullanarak görüntüleri Fiji'ye aktarın.In vivo multicolor time-lapse görüntüleme gelişmekte olan zebrabalığı hindbrain proliferatif ventriküler zonunda hücrelerin Brainbow renk kodlu klonlar göstermek için kullanılmıştır. Belirli bir radyal lif boyunca düzenlenmiş Brainbow etiketli hücreler aynı rengi paylaştı. Hangi göreli RGB kanal ağırlıkları olarak ölçülebilir.Bu, bu radyo gruplarının bölünen hücrelerin klonları olduğunu ve benzer renklerinin onları klonsal olarak ilişkili olarak tanımlamak için kullanılabileceğini göstermektedir. Kantitatif renk analizi, kız hücrelerinin annelerinin hücresiyle aynı rengi ifade ettiğini gösterdi. Ama bu komşu radyo hücre kümeleri birbirinden ayırt edilebilir.İlgili hücrelerin çok sayıda klonları aynı anda vivo saat içinde takip edilebilir, bir multipleks soy analizi ve karşılaştırma için izin. Klonlarda renk ekspresyonunun iki de ve daha sonra üç gün sonra döllenme sonrası ölçülmesi Brainbow ifadesinin iki ila üç gün arasında nispeten sabit kaldığını göstermiştir. Hızlandırılmış görüntüleme, döllenmeden bir ila iki gün sonra interkinetik nükleer göç ve hücre bölünmesi geçiren çok sayıda hücreyi ortaya çıkararak hücre döngüsünü incelemeyi mümkün kıldı.Zebra balığında önceki ölçümlerle karşılaştırılabilecek ortalama 8,4 saatlik bir hücre döngüsü hesaplanmıştır. Ayrıca bu görüntüleme tekniği, membran blebbing ve hücre parçalanması gibi apoptoz ile ilişkili stereotipik morfolojik değişiklikleri geçiren hücreleri tek tek gözlemlemek için kullanılmıştır. Bu yöntem in vivo olarak yapıldığından, zebra balıkları görüntüleme odasından kurtarılabilir ve daha sonraki zaman noktalarında görüntüleme veya diğer deneyler için muhafaza edilebilir.Bu tekniğin kullanımı bize nöral gelişim sırasında klonsal ilişkili hücrelerin rolleri hakkında yeni sorular keşfetmek için izin verir.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion (FDAP)

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion FDAP

Fotoçevrim sonra Floresans Bozunma kullanarak Oturma balığı Embriyolar protein stabilitesi ölçümü (FDAP)

Protein stability influences many aspects of biology, and measuring the clearance kinetics of proteins can provide important insights into biological ...

Capturing Tissue Repair in Zebrafish Larvae with Time-lapse Brightfield Stereomicroscopy

Time-lapse aydınlık stereomikroskobi ile Zebra balığı Larva Doku Onarım yakalama

The zebrafish larval tail fin is ideal for studying tissue regeneration due to the simple architecture of the larval fin-fold, which comprises of two ...

Imaging Subcellular Structures in the Living Zebrafish Embryo

Yaşayan Zebra balığı Embriyo Hücre alt yapıları görüntüleme

In vivo imaging provides unprecedented access to the dynamic behavior of cellular and subcellular structures in their natural context. Performing such ...

Tracking Cells in GFP-transgenic Zebrafish Using the Photoconvertible PSmOrange System

Photoconvertible PSmOrange Sistemi kullanılarak GFP transgenik zebrafish hücreleri izleme

The rapid development of transparent zebrafish embryos (Danio rerio) in combination with fluorescent labelings of cells and tissues allows visualizing ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analiz<em&gt; İn Vivo</em&gt; Hücre Göç Zebra balığı Embriyolar hücre nakli ve Time-lapse Görüntüleme kullanılarak

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Analysis of Zebrafish Kidney Development with Time-lapse Imaging Using a Dissecting Microscope Equipped for Optical Sectioning

diseksiyon mikroskobu kullanılarak Time-lapse Görüntüleme ile Zebra balığı Böbrek Kalkınma Analizi Optik Kesit için donatılmış

In order to understand organogenesis, the spatial and temporal alterations that occur during development of tissues need to be recorded. The method ...

Visualizing the Interrenal Steroidogenic Tissue and Its Vascular Microenvironment in Zebrafish

Interrenal steroidogenik Doku ve Zebra balığı Onun Vasküler Mikroçevre görselleştirme

This protocol introduces how to detect differentiated interrenal steroidogenic cells through a simple whole-mount enzymatic activity assay. Identifying ...

Live Confocal Imaging of Developing Arabidopsis Flowers

Arabidopsis Çiçek Gelişmekte Konfokal Görüntüleme Canlı

The study of plant growth and development has long relied on experimental techniques using dead, fixed tissues and lacking proper cellular resolution. ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Kurbağa ve Zebra balığı Embriyolarında Hipoksinin İndüklenmesi

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Geliştirme gerçek zamanlı olarak görselleştirmek için çoklu foton zaman atlamalı görüntüleme: nöral Crest hücrelerde geçirme Zebra balığı embriyo görselleştirme

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...