Name: a delayed inoculation model of chronic pseudomonas aeruginosa wound infection
Uploaded: 2020-02-20T12:30:00
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PUT-Tn5-EM7-लक्स-Km1 ल्यूमिनेसेंट निर्माण वेक्टर जे हार्डी से एक शालीन उपहार था । BioRender.com के साथ योजनाबद्ध बनाया गया था। हम घाव संक्रमण मॉडल पर उनकी सलाह के लिए जी गुर्टनर की लैब का शुक्रिया अदा करते हैं । हम अपनी तकनीकी विशेषज्ञता के लिए वीवो इमेजिंग में स्टैनफोर्ड सेंटर फॉर इनोवेशन से टी डॉयल को भी धन्यवाद देते हैं । इस काम को अनुदान R21AI133370, R21AI 133240, R01AI12492093, और स्टैनफोर्ड स्पार्क, फाल्क मेडिकल रिसर्च ट्रस्ट और सिस्टिक फाइब्रोसिस फाउंडेशन (CFF) से P.L.B. C.R.D. द्वारा समर्थित T32AI0007502 द्वारा समर्थित किया गया था । विज्ञान और इंजीनियरिंग के लिए एक गैबलन स्टैनफोर्ड ग्रेजुएट फेलोशिप और एक लुबर्ट स्ट्राइकर बायो-एक्स स्टैनफोर्ड इंटरडिसिप्लिनरी ग्रेजुएट फेलोशिप ने जेएमएस का समर्थन किया ।

यहां वर्णित सभी तरीकों को स्टैनफोर्ड विश्वविद्यालय में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) द्वारा अनुमोदित किया गया है ।
1. बैक्टीरिया की तैयारी और वृद्धि
<ol><li>शोधकर्ता की संस्था?...

<ol>
	<li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair and Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).</li><li>Serra, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+wound+infections:+the+role+of+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus.">Chronic wound infections: the role of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus.</a> Expert Review of Anti-infective Therapy. 13 (5), 605-613 (2015).</li><li>Obritsch, M. D., Fish, D. N., MacLaren, R., Jung, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nosocomial+infections+due+to+multidrug-resistant+Pseudomonas+aeruginosa:+epidemiology+and+treatment+options.">Nosocomial infections due to multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa: epidemiology and treatment options.</a> Pharmacotherapy. 25 (10), 1353-1364 (2005).</li><li>Secor, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filamentous+Bacteriophage+Produced+by+Pseudomonas+aeruginosa+Alters+the+Inflammatory+Response+and+Promotes+Noninvasive+Infection+In+Vivo.">Filamentous Bacteriophage Produced by Pseudomonas aeruginosa Alters the Inflammatory Response and Promotes Noninvasive Infection In Vivo.</a> Infection and Immunity. 85 (1), (2017).</li><li>Rice, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biofilm+life+cycle+and+virulence+of+Pseudomonas+aeruginosa+are+dependent+on+a+filamentous+prophage.">The biofilm life cycle and virulence of Pseudomonas aeruginosa are dependent on a filamentous prophage.</a> The ISME Journal. 3 (3), 271-282 (2009).</li><li>Bayes, H. K., Ritchie, N., Irvine, S., Evans, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+early+Pseudomonas+aeruginosa+lung+disease+with+transition+to+chronic+infection.">A murine model of early Pseudomonas aeruginosa lung disease with transition to chronic infection.</a> Scientific Reports. 6, 35838 (2016).</li><li>van Gennip, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+polymorphonuclear+leukocytes+and+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+on+silicone+implants+in+vivo.">Interactions between polymorphonuclear leukocytes and Pseudomonas aeruginosa biofilms on silicone implants in vivo.</a> Infection and Immunity. 80 (8), 2601-2607 (2012).</li><li>Tr&#248;strup, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+aggravates+skin+inflammatory+response+in+BALB/c+mice+in+a+novel+chronic+wound+model.">Pseudomonas aeruginosa biofilm aggravates skin inflammatory response in BALB/c mice in a novel chronic wound model.</a> Wound Repair and Regeneration. 21 (2), 292-299 (2013).</li><li>Zhao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+study+of+delayed+wound+healing+in+a+biofilm-challenged+diabetic+mouse+model.">Time course study of delayed wound healing in a biofilm-challenged diabetic mouse model.</a> Wound Repair and Regeneration. 20 (3), 342-352 (2012).</li><li>Brubaker, A. L., Rendon, J. L., Ramirez, L., Choudhry, M. A., Kovacs, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+neutrophil+chemotaxis+and+infiltration+contributes+to+delayed+resolution+of+cutaneous+wound+infection+with+advanced+age.">Reduced neutrophil chemotaxis and infiltration contributes to delayed resolution of cutaneous wound infection with advanced age.</a> Journal of Immunolology. 190 (4), 1746-1757 (2013).</li><li>Watters, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+perturb+wound+resolution+and+antibiotic+tolerance+in+diabetic+mice.">Pseudomonas aeruginosa biofilms perturb wound resolution and antibiotic tolerance in diabetic mice.</a> Medical Microbiology and Immunology. 202 (2), 131-141 (2013).</li><li>Lee, C., Kerrigan, C. L., Picard-Ami, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclophosphamide-induced+neutropenia:+effect+on+postischemic+skin-flap+survival.">Cyclophosphamide-induced neutropenia: effect on postischemic skin-flap survival.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 89 (6), 1092-1097 (1992).</li><li>Sweere, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+response+to+Chronic+Pseudomonas+aeruginosa+wound+infection+in+immunocompetent+mice.">The immune response to Chronic Pseudomonas aeruginosa wound infection in immunocompetent mice.</a> Advances in Wound Care. , (2019).</li><li>Sweere, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacteriophage+trigger+antiviral+immunity+and+prevent+clearance+of+bacterial+infection.">Bacteriophage trigger antiviral immunity and prevent clearance of bacterial infection.</a> Science. 363 (6434), (2019).</li></ol>

हमने एक उपन्यास देरी से टीका पी aeruginosa घाव संक्रमण मॉडल विकसित किया है। एक्सिजनल घायल होने के बाद 24 घंटे तक बैक्टीरिया के साथ टीका में देरी की रणनीति 1 सप्ताह की समय सीमा पर घाव संक्रमण के मूल्यांकन को स?...

स्यूडोमोनास एरुजिनोसा (पी एरुजिनोसा)मानव स्वास्थ्य और रोग के लिए बढ़ती प्रासंगिकता के साथ एक ग्राम-नकारात्मक रॉड के आकार का जीवाणु है। यह नोसोकोमियल सेटिंग्स में व्यापक रुग्णता और मृत्यु दर के लिए जिम्मेदार है, विशेष रूप से इम्यूनोसमझौता रोगियों में घाव संक्रमणशामिल 1,2। इस रोगजनक के मल्टीड्रग प्रतिरोधी उपभेदों के उद्भव ने पी एरुजिनोसा उग्रता, पी एरुजिनोसा एंटीबायोटिक प्रतिरोध के तंत्र और इस घातक संक्रमण3की रोकथाम और उपचार के लिए नए तरीकों में योगदान करने वाले कारकों की जांच के लिए और प्रोत्साहन प्रदान किया है । जैसे, इन शोध सवालों की जांच के लिए उपकरण के रूप में पुराने घाव संक्रमण के पशु मॉडल के लिए की जरूरत है और अधिक कभी नहीं किया गया है ।
दुर्भाग्य से, पी aeruginosa संक्रमण के कई पशु मॉडल सेप्सिस4,5के कारण संक्रमण या तेजी से गिरावट के तेजी से समाधान के साथ तीव्र संक्रमण का अनुकरण करते हैं, जो इन संक्रमणों की अक्सर पुरानी प्रकृति का पर्याप्त रूप से अनुकरण नहीं करता है। इस खामी को दूर करने के लिए, कुछ मॉडल विदेशी निकायों जैसे आगर मोतियों, सिलिकॉन प्रत्यारोपण, या अल्गिनेट जैल6,7,8के प्रत्यारोपण का उपयोग करते हैं। अन्य मॉडल उन चूहों का उपयोग करते हैं जिन्हें उन्नत उम्र, मोटापा या मधुमेह के कारण या औषधीय साधनों जैसे साइक्लोफोस्फामिमाइड-प्रेरित न्यूट्रोपेनिया9,10,11,12के कारण इम्यूनोसमझौता किया जाता है। हालांकि, या तो विदेशी सामग्री या प्रतिरक्षा समझौता मेजबानों का उपयोग स्थानीय भड़काऊ प्रक्रिया को बदल देता है, जिससे अन्यथा सामान्य प्रतिरक्षा प्रणालियों के साथ मेजबानों में पुराने घाव संक्रमणों में शामिल रोगविज्ञान की समझ हासिल करना मुश्किल हो जाता है।
हमने चूहों में पी aeruginosa घाव संक्रमण का एक पुराना मॉडल विकसित किया है जिसमें एक्सिशनल घायल होने के बाद बैक्टीरिया के साथ देरी से टीका शामिल है। देरी टीका बैक्टीरियल बोझ का आकलन करने वाले प्रयोगों के लिए कम से कम 7 दिनों तक विस्तार करने की अनुमति देता है। यह मॉडल पी एरुजिनोसा क्रोनिक संक्रमणों के रोगजनन और नए उपचारदोनों की जांच के लिए नए अवसरों को खोलता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride injection</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>2484457</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 G x 1 sterile needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305195</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G x 1 1/5 sterile needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol swab</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aura Imaging Software</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Purdue Frederick Company</td>
			<td>19-065534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR LAB</td>
			<td>Zoopharm</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J male mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable biopsy punch, 6mm</td>
			<td>Integra</td>
			<td>33-36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors - Tungsten Carbide</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14568-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bead Dry Sterilizer</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>61-0183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Granulated Agar</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP9744</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad</td>
			<td>Milliard</td>
			<td>804879481218</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe with 28 G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lago X Imaging System</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP1426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leur-Lok 1 mL syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Arco Animal Trimmer</td>
			<td>Wahl Professional</td>
			<td>919152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Removal Lotion with Baby Oil</td>
			<td>Church and Dwight</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Available at any pharmacy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octagon Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11041-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS) 1x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Press and Seal Cling Wrap</td>
			<td>Glad</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SafetyGlide Insulin syringe with 30 G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safetyglide Insulin syringe, 1/2 mL, 30 G x 5/16 TW</td>
			<td>BD</td>
			<td>305934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>Ohaus Scout Pro</td>
			<td>SP202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplical Nutritional Supplement</td>
			<td>Henry Schein Animal Health</td>
			<td>29908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm, 6 cm x 7 cm</td>
			<td>3M</td>
			<td>1624W</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a delayed inoculation model of chronic pseudomonas aeruginosa wound infection

स्यूडोमोनास एरुजिनोसा (पी एरुजिनोसा)मानव स्वास्थ्य और रोग के लिए प्रासंगिकता बढ़ाने का एक प्रमुख नोसोकोमियल रोगजनक है, विशेष रूप से मधुमेह और अस्पताल में भर्ती रोगियों में पुराने घाव संक्रमण की स्थापना में। घाव रोगजनककी जांच और इस रोगजनक के खिलाफ नए उपचारों के विकास में सहायता करने के लिए पुराने संक्रमण मॉडलों की तत्काल आवश्यकता है। यहां, हम एक प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं जो पूर्ण मोटाई उत्तेजित घायल होने के 24 घंटे बाद विलंबित टीका का उपयोग करता है। इस समय मौजूद अनंतिम घाव मैट्रिक्स का संक्रमण या तो तेजी से निकासी या संक्रमण के प्रसार को वनील करता है और इसके बजाय विदेशी सामग्रियों या प्रतिरक्षा दमन के प्रत्यारोपण की आवश्यकता के बिना 7-10 दिनों तक चलने वाले पुराने संक्रमण को स्थापित करता है। यह प्रोटोकॉल मनुष्यों में पोस्ट-ऑपरेटिव संक्रमण के एक विशिष्ट अस्थायी पाठ्यक्रम की नकल करता है। एक ल्यूमिनेसेंट पी aeruginosa तनाव (PAO1:lux) का उपयोग पी aeruginosa घाव संक्रमण के लिए जीवाणु बोझ के मात्रात्मक दैनिक मूल्यांकन के लिए अनुमति देता है । यह उपन्यास मॉडल बैक्टीरियल रोगजनकता की जांच और क्रोनिक पी एरुजिनोसा घाव संक्रमण के लिए नए उपचारों के विकास में एक उपयोगी उपकरण हो सकता है।

लक्साबाडे रिपोर्टर सिस्टम (PAO1:lux) को एन्कोडिंग करने वाले प्लाज्मिड के साथ पीएओ1 के ल्यूमिनेसेंट तनाव का उपयोग करते हुए, हमने चूहों पर एक्सीशनल घायल किया, प्लैंकटोनिक पी aeruginosa 24 एच के साथ इन घ...

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A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

हम इम्यूनोसक्षम चूहों में पुराने घाव संक्रमण पैदा करने के लिए एक विलंबित टीका प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं।

क्रोनिक स्यूडोमोनास एरुजिनोसा घाव संक्रमण का एक विलंबित टीका मॉडल

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of ...

यह प्रोटोकॉल महत्वपूर्ण है क्योंकि यह विदेशी सामग्री प्रत्यारोपण या प्रतिरक्षा दमन की आवश्यकता के बिना क्रोनिक स्यूडोमोनास एरुगिनोसा घाव संक्रमण के लिए एक मॉडल का वर्णन करता है। स्यूडोमोनास एरुगिनोसा के साथ टीका लगाने में देरी 24 घंटे बाद पूर्ण मोटाई उत्तेजनीय घायल होने से बैक्टीरिया की तेजी से मंजूरी और प्रसार होता है, जो एक संक्रमण की स्थापना करता है जो सात से 10 दिनों तक रहता है। यह अनूठा मॉडल बैक्टीरियल रोगजनन, मेजबान रोगजनक बातचीत, और क्रोनिक स्यूडोमोनास एरुगिनोसा घाव संक्रमण के लिए नए उपचारों के विकास की जांच के लिए एक उपयोगी उपकरण होगा।मुझे प्रक्रिया के एक प्रदर्शन में सहायता दान लियू, Bollyky प्रयोगशाला से एक चिकित्सा छात्र होगा । प्रक्रिया शुरू करने से पहले, एक आधारभूत वजन प्राप्त करने और प्रवण स्थिति में माउस रखने के लिए आठ से 12 सप्ताह पुराने माउस का वजन करें। पेडल पलटा के जवाब की कमी की पुष्टि करने के बाद, प्रत्येक पार्श्व पर पूर्व-गर्म बाँझ 0.9% सोडियम क्लोराइड के 250 माइक्रोलीटर के साथ माउस को संक्षेप में इंजेक्ट करें।माउस के पृष्ठीय क्षेत्र से बालों को हटाने के लिए एक इलेक्ट्रिक शेवर का उपयोग करें और उजागर त्वचा पर डिपिलेटरी क्रीम की एक पतली परत लागू करें। 20 से 60 सेकंड के बाद, गर्म पानी में गीला धुंध के साथ बालों और अतिरिक्त लोशन को हटा दें। पूर्ण मोटाई उत्तेजना घाव सर्जरी के लिए, पहले माउस के मध्य पृष्ठीय क्षेत्र में निरंतर रिलीज बुप्रेनोरफिन के प्रति किलोग्राम 0.6 से एक मिलीग्राम इंजेक्ट करने के लिए 25 गेज सुई का उपयोग करें और तीन वैकल्पिक बाँझ बीटाडीन और अल्कोहल स्वैब्स के साथ एक परिपत्र तरीके से सर्जिकल साइट को मिटा दें।सर्जिकल साइट पर एक प्लास्टिक चिपटना लपेटो कपड़ा रखें और त्वचा तना हुआ कौडली खिंचाव । जब त्वचा सूख जाती है, तो बाएं पृष्ठीय एपिडर्मिस के माध्यम से प्रारंभिक चीरा लगाने के लिए बाँझ छह मिलीमीटर व्यास की त्वचा बायोप्सी पंच का उपयोग करें, इसके बाद दाहिने पृष्ठीय एपिडर्मिस पर एक दूसरा चीरा लगाया जाता है। बाईं उल्लिखित घाव क्षेत्र के केंद्र से त्वचा को तम्बू करने के लिए संदंश का उपयोग करें और एपिडर्मल और डर्मल परतों को उत्पादित करने के लिए कैंची का उपयोग करें।सममित उत्तेजना घाव बनाने के लिए सही उल्लिखित घाव क्षेत्र पर चीरा दोहराने के बाद, बाँझ खारा के 50 माइक्रोलीटर के साथ दोनों घावों को धोएं। जब शल्य चिकित्सा साइट और आसपास की त्वचा सूख गई है, एक पारदर्शी फिल्म ड्रेसिंग के साथ घावों और dorsum को कवर और पूर्ण recumbency तक निगरानी के साथ एक हीटिंग पैड पर एक साफ पिंजरे में माउस जगह है । सर्जरी के 24 घंटे बाद, फिर से एनेस्थेटाइज्ड माउस का वजन करें और दोनों फ्लैंक में पूर्व-गर्म बाँझ 0.9% सोडियम क्लोराइड के 250 माइक्रोलीटर के साथ जानवर को चमड़े के इंजेक्शन दें।इसके बाद, ल्यूमिनेसेंट पी. एएरगिनोसा स्ट्रेन सस्पेंशन के 100 माइक्रोलीटर को 27 गेज सुई से लैस 500 माइक्रोलीटर ट्यूबरक्यूलिन सेफ्टी कैप सिरिंज में लोड करें और प्रत्येक घाव में पारदर्शी फिल्म ड्रेसिंग के माध्यम से बैक्टीरिया निलंबन के 40 माइक्रोलीटर इंजेक्ट करें। सुनिश्चित करें कि बैक्टीरियल निलंबन अच्छी तरह से मिश्रित है और पारदर्शी ड्रेसिंग बरकरार है। सुनिश्चित करें कि आप सुई बेज़ेल साइड अप के साथ केवल एक बार पारदर्शी ड्रेसिंग पंचर करते हैं।फिर माउस को निगरानी के साथ एक हीटिंग पेज पर अपने पिंजरे में वापस करें और पिंजरे के फर्श पर खाद्य छर्रों के बीच उच्च कैलोरी पोषण पूरक पेस्ट सैंडविच प्रदान करें। एक पौंड आगर प्लेट पर शेष इनोकुलम प्लेट और कालोनियों गिनती के लिए बैक्टीरिया है कि प्रशासित किया गया है की संख्या की पुष्टि करने के लिए । संक्रमित घावों के वीवो इमेजिंग में, इमेजिंग उपकरण से चूहों के परिवहन के लिए जैव सुरक्षा स्तर दो रोकथाम प्रोटोकॉल का पालन करें और इमेजिंग कक्ष के भीतर प्रवण स्थिति में एनेस्थेटाइज्ड माउस रखें।इमेजिंग सॉफ्टवेयर में, प्रयोग के लिए उपयुक्त के रूप में जोखिम समय, बिनिंग, एफ-स्टॉप और देखने के क्षेत्र निर्धारित करें। इसके बाद, घाव स्थल पर ब्याज का एक क्षेत्र बनाएं और प्रति सेकंड फोटॉनों में औसत पता चला प्रवाह को मापें। पृष्ठभूमि को मापने के लिए, इमेजिंग प्लेटफॉर्म पर एक यादृच्छिक क्षेत्र पर रुचि का क्षेत्र बनाएं और प्रति सेकंड फोटॉनों की पृष्ठभूमि संख्या को घटाएं।प्रयोग के अंत में, एक जैव सुरक्षा कैबिनेट में, बाँझ कैंची का उपयोग करें और घाव बिस्तरों को उत्पादित करने के लिए संदंश और बाँझ PBS के एक मिलीलीटर में 1.5 मिलीलीटर पॉलीप्रोपाइलीन ट्यूब में प्रत्येक बिस्तर रखें। घाव के ऊतकों को कैंची से कीमा बना लें और दो घंटे तक प्रति मिनट 300 घूर्णन में चार डिग्री सेल्सियस पर शेकर पर ऊतक के टुकड़ों को इनक्यूबेट करें। इनक्यूबेशन के अंत में, भंवर 10 सेकंड के लिए प्रत्येक ट्यूब से पहले क्रमिक पीबीएस में जीवाणु बहिस्त्राव पतला और पौंड आगार पर पतला जीवाणु बहिस्त्राव चढ़ाना बैक्टीरियल बोझ की मात्रा निर्धारित करने के लिए ।इमेजिंग ऑप्टिकल सिस्टम का उपयोग करके प्राप्त इस प्रतिनिधि छवि से पता चलता है कि इस मॉडल का परिणाम पता लगाने योग्य ल्यूमिनेसेंस है। इस प्रयोग में, संक्रमण तीन पोस्ट टीका पर नुकीला और दोनों बायोल्यूमिनेसेंस और कॉलोनी गिनती के आधार पर सात दिन के बाद टीका कायम है । घाव से अलग बैक्टीरिया की संस्कृति आगे प्रदर्शित करता है कि प्रति घाव इकाइयों को बनाने वाली मात्रात्मक कॉलोनी का पता लगाया गया चिकनाई के साथ सहसंबंधित है।हालांकि इंजेक्शन के तुरंत बाद एक प्रारंभिक तेजी से वजन घटाने है, खारा इंजेक्शन और पूरक पोषण चूहों को उनके प्रारंभिक वजन में बहाल कर सकते हैं। गणना टीका खुराक जिसमें से 50% घाव काफी संक्रमित हो जाएंगे, को मिलीलीटर प्रति दूसरी कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों के लिए लगभग 7.7 गुना 10 होना निर्धारित किया गया है। चौथी कॉलोनी में एक गुना से अधिक खुराक 100% संक्रमण दर में परिणामस्वरूप चौथी कॉलोनी बनाने वाली इकाइयां होती हैं।स्यूडोमोनास एरुगिनोसा के लिए नए संभावित उपचारों की जांच करने के लिए घायल और टीका प्रक्रियाओं के बाद विभिन्न सामयिक और प्रणालीगत उपचार लागू किए जा सकते हैं। स्यूडोमोनास एरुगिनोसा और संक्रमित चूहों के साथ सभी काम शोधकर्ता के संस्थागत जैव सुरक्षा और पशु उपयोग समिति के दिशा-निर्देशों के अनुसार बीएसएल-2 सुरक्षा सावधानियों के साथ आयोजित किया जाना चाहिए ।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

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सह - संस्कृति के मॉडल Pseudomonas aeruginosa Biofilms लाइव मानव Airway कक्ष पर बढ़ी

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

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Pseudomonas और प्रवाह कक्ष में Saccharomyces cerevisiae Biofilm aeruginosa

Many microbial cells have the ability to form sessile microbial communities defined as biofilms that have altered physiological and pathological ...

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

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शाही सेना के अलगाव Pseudomonas aeruginosa Murine जठरांत्र संबंधी मार्ग बस्तियां

Pseudomonas aeruginosa (PA) infections result in significant morbidity and mortality in hosts with compromised immune systems, such as patients with ...

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

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कृत्रिम थूक मध्यम का प्रयोग खिलाफ टेस्ट एंटीबायोटिक प्रभावकारिता<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; सिस्टिक फाइब्रोसिस फेफड़े अधिक प्रासंगिक शर्तों में

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

लंबी अवधि पुरानी<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</emचूहे में&gt; श्वासनली संक्रमण

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa प्रेरित फेफड़ों की चोट मॉडल

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

माइक्रोबियल समुदायों का अध्ययन<em&gt; Vivo</em&gt;: बीच होस्ट की मध्यस्थता बातचीत का एक मॉडल<em&gt; Candida Albicans</em&gt; और<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; एयरवेज में

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

प्रकाश की ओर आओ: Vivo निगरानी में Pseudomonas aeruginosa एक मधुमेह गंजा Murine मॉडल में क्रोनिक घावों में फिल्म संक्रमण

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

Methods for Detecting Cytotoxic Amyloids Following Infection of Pulmonary Endothelial Cells by Pseudomonas aeruginosa

Methods for Detecting Cytotoxic Amyloids Following Infection of Pulmonary Endothelial Cells by Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa द्वारा फुफ्फुसीय Endothelial कोशिकाओं के संक्रमण के बाद साइटोटोक्सिक Amyloids का पता लगाने के लिए तरीके

Patients who survive pneumonia have elevated death rates in the months following hospital discharge. It has been hypothesized that infection of pulmonary ...

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

स्यूडोमोनास एरुजिनोसा में इन-फ्रेम जीन विलोपन म्यूटेंट की पीढ़ी और संक्रमण के एक साधारण माउस मॉडल में विरुलेंस क्षीणन के लिए परीक्षण

Microorganisms are genetically versatile and diverse and have become a major source of many commercial products and biopharmaceuticals. Though some of ...