Name: a delayed inoculation model of chronic pseudomonas aeruginosa wound infection
Uploaded: 2020-02-20T12:30:00
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Il vettore di costruzione luminescente pUT-Tn5-EM7-lux-Km1 è stato un dono gracile di J. Hardy. Gli schemi sono stati creati con BioRender.com. Ringraziamo il laboratorio di G. Gurtner per i loro consigli sul modello di infezione da ferita. Ringraziamo anche T. Doyle dello Stanford Center for Innovation in In Vivo Imaging per la sua esperienza tecnica. Questo lavoro è stato sostenuto dalle sovvenzioni R21AI13370, R21AI13340, R01AI12492093, e le sovvenzioni di Stanford SPARK, il Falk Medical Research Trust e la Cystic Fibrosis Foundation (CFF) a P.L.B. C.R.D è stata supportata da T32AI0007502. Una Gabilan Stanford Graduate Fellowship for Science and Engineering e una Lubert Stryer Bio-X Stanford Interdisciplinary Graduate Fellowship hanno supportato J.M.S.

Tutti i metodi qui descritti sono stati approvati dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) della Stanford University.
1. Preparazione e crescita dei batteri
<ol><li>Condurre tutto il lavoro con P. aeruginosa e gli animali con precauzioni BSL-2 in base al comitato istituzionale per la biosicurezza del ricercatore e alle linee guida del comitato per l'uso degli animali. Eseguire tutti i passaggi qui descritti che coinvolgono P. aeruginosa, compresa l'inoculazi...

<ol>
	<li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair and Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).</li><li>Serra, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+wound+infections:+the+role+of+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus.">Chronic wound infections: the role of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus.</a> Expert Review of Anti-infective Therapy. 13 (5), 605-613 (2015).</li><li>Obritsch, M. D., Fish, D. N., MacLaren, R., Jung, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nosocomial+infections+due+to+multidrug-resistant+Pseudomonas+aeruginosa:+epidemiology+and+treatment+options.">Nosocomial infections due to multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa: epidemiology and treatment options.</a> Pharmacotherapy. 25 (10), 1353-1364 (2005).</li><li>Secor, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filamentous+Bacteriophage+Produced+by+Pseudomonas+aeruginosa+Alters+the+Inflammatory+Response+and+Promotes+Noninvasive+Infection+In+Vivo.">Filamentous Bacteriophage Produced by Pseudomonas aeruginosa Alters the Inflammatory Response and Promotes Noninvasive Infection In Vivo.</a> Infection and Immunity. 85 (1), (2017).</li><li>Rice, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biofilm+life+cycle+and+virulence+of+Pseudomonas+aeruginosa+are+dependent+on+a+filamentous+prophage.">The biofilm life cycle and virulence of Pseudomonas aeruginosa are dependent on a filamentous prophage.</a> The ISME Journal. 3 (3), 271-282 (2009).</li><li>Bayes, H. K., Ritchie, N., Irvine, S., Evans, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+early+Pseudomonas+aeruginosa+lung+disease+with+transition+to+chronic+infection.">A murine model of early Pseudomonas aeruginosa lung disease with transition to chronic infection.</a> Scientific Reports. 6, 35838 (2016).</li><li>van Gennip, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+polymorphonuclear+leukocytes+and+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+on+silicone+implants+in+vivo.">Interactions between polymorphonuclear leukocytes and Pseudomonas aeruginosa biofilms on silicone implants in vivo.</a> Infection and Immunity. 80 (8), 2601-2607 (2012).</li><li>Tr&#248;strup, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+aggravates+skin+inflammatory+response+in+BALB/c+mice+in+a+novel+chronic+wound+model.">Pseudomonas aeruginosa biofilm aggravates skin inflammatory response in BALB/c mice in a novel chronic wound model.</a> Wound Repair and Regeneration. 21 (2), 292-299 (2013).</li><li>Zhao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+study+of+delayed+wound+healing+in+a+biofilm-challenged+diabetic+mouse+model.">Time course study of delayed wound healing in a biofilm-challenged diabetic mouse model.</a> Wound Repair and Regeneration. 20 (3), 342-352 (2012).</li><li>Brubaker, A. L., Rendon, J. L., Ramirez, L., Choudhry, M. A., Kovacs, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+neutrophil+chemotaxis+and+infiltration+contributes+to+delayed+resolution+of+cutaneous+wound+infection+with+advanced+age.">Reduced neutrophil chemotaxis and infiltration contributes to delayed resolution of cutaneous wound infection with advanced age.</a> Journal of Immunolology. 190 (4), 1746-1757 (2013).</li><li>Watters, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+perturb+wound+resolution+and+antibiotic+tolerance+in+diabetic+mice.">Pseudomonas aeruginosa biofilms perturb wound resolution and antibiotic tolerance in diabetic mice.</a> Medical Microbiology and Immunology. 202 (2), 131-141 (2013).</li><li>Lee, C., Kerrigan, C. L., Picard-Ami, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclophosphamide-induced+neutropenia:+effect+on+postischemic+skin-flap+survival.">Cyclophosphamide-induced neutropenia: effect on postischemic skin-flap survival.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 89 (6), 1092-1097 (1992).</li><li>Sweere, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+response+to+Chronic+Pseudomonas+aeruginosa+wound+infection+in+immunocompetent+mice.">The immune response to Chronic Pseudomonas aeruginosa wound infection in immunocompetent mice.</a> Advances in Wound Care. , (2019).</li><li>Sweere, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacteriophage+trigger+antiviral+immunity+and+prevent+clearance+of+bacterial+infection.">Bacteriophage trigger antiviral immunity and prevent clearance of bacterial infection.</a> Science. 363 (6434), (2019).</li></ol>

Abbiamo sviluppato un nuovo modello di infezione della ferita P. aeruginosa ritardata. La strategia di ritardare l'inoculazione con i batteri fino a 24 h dopo il ferimento eccisionale consente la valutazione delle infezioni della ferita in un lasso di tempo di 1 settimana. Utilizzando un ceppo luminescente di P. aeruginosa, è possibile monitorare la progressione dell'infezione durante il corso di infezione. Il più lungo decorso dell'infezione rispetto ad altri modelli di infezione da P. aeruginosa...

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) è un batterio a forma di asta Gram-negative con crescente rilevanza per la salute umana e la malattia. È responsabile di un'estesa morbilità e mortalità in contesti nosocomiali, in particolare per quanto riguarda le infezioni delle ferite nei pazienti immunocompromessi1,2. L'emergere di ceppi multifarmacoresistenti di questo agente patogeno ha fornito ulteriore impulso per l'indagine sui fattori che contribuiscono alla virulenza Di P. aeruginosa, i meccanismi della resistenza agli antibiotici P. aeruginosa e nuovi metodi per la prevenzione e il trattamento di questa infezione mortale3. Di conseguenza, la necessità di modelli animali di infezione da ferite croniche come strumenti per studiare queste domande di ricerca non è mai stata maggiore.
Purtroppo, molti modelli animali di infezione da P. aeruginosa tendono a simulare l'infezione acuta con rapida risoluzione dell'infezione o il rapido declino a causa della sepsi4,5, che non simula adeguatamente la natura spesso cronica di queste infezioni. Per risolvere questo inconveniente, alcuni modelli utilizzano l'impianto di corpi estranei come perline di agar, impianti in silicone o gel alnati6,7,8. Altri modelli utilizzano topi immunocompromessi a causa dell'età avanzata, dell'obesità o del diabete, o attraverso mezzi farmacologici come la neutropenia indotta da ciclofosofe9,10,11,12. Tuttavia, l'uso di materiali estranei o di ospiti compromessi immunitari probabilmente altera il processo infiammatorio locale, rendendo difficile comprendere la fisiopatologia coinvolta nelle infezioni croniche delle ferite negli ospiti con sistemi immunitari altrimenti normali.
Abbiamo sviluppato un modello cronico di infezione da ferita da P. aeruginosa nei topi che comporta un'inoculazione ritardata con batteri dopo la ferita escisazionale. L'inoculazione ritardata consente esperimenti che valutano il carico batterico che si estende ad almeno 7 giorni. Questo modello apre nuove opportunità per studiare sia la patogenesi che i nuovi trattamenti delle infezioni croniche di P. aeruginosa.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride injection</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>2484457</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 G x 1 sterile needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305195</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G x 1 1/5 sterile needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol swab</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aura Imaging Software</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Purdue Frederick Company</td>
			<td>19-065534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR LAB</td>
			<td>Zoopharm</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J male mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable biopsy punch, 6mm</td>
			<td>Integra</td>
			<td>33-36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors - Tungsten Carbide</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14568-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bead Dry Sterilizer</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>61-0183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Granulated Agar</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP9744</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad</td>
			<td>Milliard</td>
			<td>804879481218</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe with 28 G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lago X Imaging System</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP1426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leur-Lok 1 mL syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Arco Animal Trimmer</td>
			<td>Wahl Professional</td>
			<td>919152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Removal Lotion with Baby Oil</td>
			<td>Church and Dwight</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Available at any pharmacy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octagon Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11041-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS) 1x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Press and Seal Cling Wrap</td>
			<td>Glad</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SafetyGlide Insulin syringe with 30 G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safetyglide Insulin syringe, 1/2 mL, 30 G x 5/16 TW</td>
			<td>BD</td>
			<td>305934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>Ohaus Scout Pro</td>
			<td>SP202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplical Nutritional Supplement</td>
			<td>Henry Schein Animal Health</td>
			<td>29908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm, 6 cm x 7 cm</td>
			<td>3M</td>
			<td>1624W</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a delayed inoculation model of chronic pseudomonas aeruginosa wound infection

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) è un grave agente patogeno nosocomial e crescente rilevanza per la salute umana e le malattie, in particolare nell'impostazione di infezioni croniche delle ferite nei pazienti diabetici e ricoverati in ospedale. Vi è un'urgente necessità di modelli di infezione cronica per aiutare nello studio della patogenesi delle ferite e nello sviluppo di nuove terapie contro questo agente patogeno. Qui, descriviamo un protocollo che utilizza l'inoculazione ritardata 24 ore dopo la ferita escissionale a tutto spessore. L'infezione della matrice provvisoria della ferita presente in questo momento previene la rapida staccazione o la diffusione dell'infezione e stabilisce invece un'infezione cronica della durata di 7-10 giorni senza la necessità di impiantare materiali estranei o di soppressione immunitaria. Questo protocollo imita un tipico decorso temporale di infezione post-operatoria negli esseri umani. L'uso di un ceppo luminescente di P. aeruginosa (PAO1:lux) consente una valutazione giornaliera quantitativa del carico batterico per le infezioni da ferite da P. aeruginosa. Questo nuovo modello può essere uno strumento utile nello studio della patogenesi batterica e nello sviluppo di nuove terapie per le infezioni croniche della ferita P. aeruginosa.

Utilizzando un ceppo luminescente di PAO1 con un plasmide che codifica il luxABCDE reporter system (PAO1:lux), abbiamo eseguito la ferita eccisionale sui topi, inoculato queste ferite con planctonico P. aeruginosa 24 h più tardi, e onere batterico nel tempo(Figura 1 e Figura 2). Un'immagine rappresentativa ottenuta utilizzando un sistema ottico di imaging dimostra che questo modello produce luminescenza rilevabile (<str...

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A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

Descriviamo un protocollo di inoculazione ritardata per generare infezioni croniche delle ferite nei topi immunocompetenti.

Un modello di inoculazione ritardata dell'infezione cronica di Pseudomonas aeruginosa Wound

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of ...

Questo protocollo è significativo perché descrive un modello per l'infezione cronica della ferita pseudomonas aeruginosa senza la necessità di impianto di materiale estraneo o soppressione immunitaria. L'inoculazione ritardata con Pseudomonas aeruginosa 24 ore dopo il mento escizionale a pieno spessore protalls la rapida clearance e diffusione dei batteri, stabilendo un'infezione che dura da sette a 10 giorni. Questo modello unico sarà uno strumento utile per le indagini sulla patogenesi batterica, sulle interazioni patogene ospiti e sullo sviluppo di nuove terapie per le infezioni croniche della ferita da Pseudomonas aeruginosa.Ad assistermi in una dimostrazione della procedura sarà Dan Liu, uno studente di medicina del Laboratorio Bollyky. Prima di iniziare la procedura, pesare un mouse anestetizzato di otto-12 settimane per ottenere un peso di base e posizionare il mouse nella posizione prona. Dopo aver confermato una mancanza di risposta al riflesso del pedale, iniettare per via sottocutanea il mouse con 250 microlitri di cloruro di sodio sterile pre-riscaldato allo 0,9% su ciascun fianco.Utilizzare un rasoio elettrico per rimuovere i capelli dalla zona dorsale del mouse e applicare un sottile strato di crema depilatoria sulla pelle esposta. Dopo 20-60 secondi, rimuovere i capelli e la lozione in eccesso con garza inumidita in acqua tiepida. Per la chirurgia della ferita escizionale a pieno spessore, utilizzare prima un ago calibro 25 per iniettare per via sottocutanea da 0,6 a un milligrammi per chilogrammo di buprenorfina a rilascio prolungato nella zona medio-dorsale del mouse e pulire il sito chirurgico in modo circolare con tre betadine sterili alternative e tamponi di alcol.Posizionare un drap di plastica avvolgente sul sito chirurgico e allungare la pelle tesa caudally. Quando la pelle si è asciugata, utilizzare un pugno sterile per la biopsia cutanea di sei millimetri di diametro per fare un'incisione iniziale attraverso l'epidermide dorsale sinistra, seguita da una seconda incisione sull'epidermide dorsale destra. Usa le forcep per tendere la pelle dal centro dell'area della ferita delineata a sinistra e usa le forbici per asportare gli strati epidermico e dermico.Dopo aver ripetuto l'incisione sulla zona della ferita delineata a destra per creare ferite esciciionali simmetriche, lavare entrambe le ferite con 50 microlitri di soluzione salina sterile. Quando il sito chirurgico e la pelle circostante si sono asciugati, coprire le ferite e il dorsum con una medicazione trasparente del film e posizionare il mouse in una gabbia pulita su una pastiglia riscaldante con monitoraggio fino a piena rimo clemenza. 24 ore dopo l'intervento, pesare nuovamente il topo riaestetizzato e iniettare l'animale per via sottocutanea con 250 microlitri di cloruro di sodio sterile preri riscaldato allo 0,9% su entrambi i fianchi.Successivamente, caricare 100 microlitri della sospensione del ceppo luminescente P.aeruginosa in una siringa a cappuccio di sicurezza tubercorina da 500 microlitri dotata di un ago calibro 27 e iniettare 40 microlitri di sospensione batterica attraverso la medicazione trasparente del film in ogni ferita. Assicurarsi che la sospensione batterica sia ben miscelata e che la medicazione trasparente sia intatta. Assicurarsi di forare la medicazione trasparente una sola volta con il lato della lunetta dell'ago verso l'alto.Quindi riportare il mouse nella sua gabbia su una pagina di riscaldamento con monitoraggio e fornire pasta di integratori alimentari ipercalorici sandwich tra pellet alimentari sul pavimento della gabbia. Placcare l'inoculo rimanente su una piastra di agar LB e contare le colonie per confermare il numero di batteri che sono stati somministrati. Per l'imaging in vivo delle ferite infette, seguire il livello di biosicurezza due protocolli di contenimento per il trasporto dei topi da e verso lo strumento di imaging e posizionare il topo anestetizzato nella posizione prona all'interno della camera di imaging.Nel software di imaging, impostare il tempo di esposizione, il binning, l'f-stop e il campo visivo in base alle esigenze dell'esperimento. Successivamente, creare una regione di interesse nel sito della ferita e misurare il flusso medio rilevato nei fotoni al secondo. Per misurare lo sfondo, creare un'area di interesse su un'area casuale sulla piattaforma di imaging e sottrarre il numero di sfondo dei fotoni al secondo.Alla fine dell'esperimento, in un armadietto di sicurezza bio, utilizzare forbici sterili e forcep per asportare i letti avvolti e posizionare ogni letto in un millilitro di PBS sterile in un tubo di polipropilene da 1,5 millilitri. Tritare il tessuto della ferita con le forbici e incubare i pezzi di tessuto su uno shaker a quattro gradi Celsius in 300 rotazioni al minuto per due ore. Al termine dell'incubazione, vortice per ogni tubo per 10 secondi prima di diluire serialmente l'effluente batterico in PBS e placcare l'effluente batterico diluito sull'agar LB per quantificare il carico batterico.Questa immagine rappresentativa ottenuta utilizzando un sistema ottico di imaging dimostra che questo modello si traduce in luminescenza rilevabile. In questo esperimento, l'infezione raggiunse il picco al terzo giorno dopo l'inoculazione e persistette sette giorni dopo l'inoculazione basata sia sulla bioluminescenza che sul conteggio delle colonie. La coltura dei batteri isolati dalla ferita dimostra inoltre che le unità quantificate di formazione della colonia per ferita sono correlate alla luminescenza rilevata.Sebbene ci sia una rapida perdita di peso iniziale immediatamente dopo l'iniezione, le iniezioni saline e la nutrizione supplementare possono riportare i topi al loro peso iniziale. La dose calcolata di inoculazione di cui il 50% delle ferite sarà sostanzialmente infettata è stata determinata in circa 7,7 volte 10 alla seconda colonia formando unità per millilitro. Dosi superiori a uno per 10 alla quarta colonia che forma unità per millilitro si traducono in un tasso di infezione del 100%.Vari trattamenti topici e sistemici possono essere applicati dopo le procedure di mento e inoculazione per indagare nuove potenziali terapie per Pseudomonas aeruginosa. Tutto il lavoro con Pseudomonas aeruginosa e topi infetti deve essere condotto con precauzioni di sicurezza BSL-2 in conformità con le linee guida istituzionali del comitato per la biosicurezza e l'uso degli animali del ricercatore.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

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Ricerca

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