Name: monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity measurement in the mouse primary visual cortex
Uploaded: 2020-02-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex at JoVE.com

Denne undersøgelse blev støttet af National Natural Science Foundation of China (81571770, 81771925, 81861128001).

I denne protokol blev mandlige C57Bl/6 mus hentet fra Institute of Laboratory Animals of Sichuan Academy of Medical Sciences og Sichuan Provincial People's Hospital. Al dyrepleje og forsøgsprocedurer blev godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee, University of Electronic Science and Technology i Kina.
1. Monokulær afsavn (MD) på postnatal dag 28 i mus
<ol><li>Sæt de kirurgiske værktøjer, suturnålen (0,25 mm diameter, strengdiameter 0,07 mm) og vatpinde i en aluminiumska...

<ol>
	<li>Hubel, D. H., Wiesel, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+monocular+deprivation+in+kittens.">Effects of monocular deprivation in kittens.</a> Naunyn-Schmiedebergs Archiv f&#252;r experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 248 (6), 492-497 (1964).</li><li>Daw, N. W., Fox, K., Sato, H., Czepita, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+period+for+monocular+deprivation+in+the+cat+visual+cortex.">Critical period for monocular deprivation in the cat visual cortex.</a> Journal of Neurophysiology. 67 (1), 197-202 (1992).</li><li>Guire, E. S., Lickey, M. E., Gordon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+period+for+the+monocular+deprivation+effect+in+rats:+assessment+with+sweep+visually+evoked+potentials.">Critical period for the monocular deprivation effect in rats: assessment with sweep visually evoked potentials.</a> Journal of Neurophysiology. 81 (1), 121-128 (1999).</li><li>Wang, L., Sarnaik, R., Rangarajan, K. V., Liu, X., Cang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+receptive+field+properties+of+neurons+in+the+superficial+superior+colliculus+of+the+mouse.">Visual receptive field properties of neurons in the superficial superior colliculus of the mouse.</a> Journal of Neuroscience. 30 (49), 16573-16584 (2010).</li><li>Niell, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Types,+circuits,+and+receptive+fields+in+the+mouse+visual+cortex.">Cell Types, circuits, and receptive fields in the mouse visual cortex.</a> Annual Review of Neuroscience. 38 (1), 413-431 (2015).</li><li>Lee, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+specific+interneurons+improves+V1+feature+selectivity+and+visual+perception.">Activation of specific interneurons improves V1 feature selectivity and visual perception.</a> Nature. 488 (8), 379-383 (2012).</li><li>Cossell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+organization+of+excitatory+synaptic+strength+in+primary+visual+cortex.">Functional organization of excitatory synaptic strength in primary visual cortex.</a> Nature. 518 (2), 399-403 (2015).</li><li>Lacaruso, M. F., Gasler, L. T., Hofer, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+organization+of+visual+space+in+primary+visual+cortex.">Synaptic organization of visual space in primary visual cortex.</a> Nature. 547 (7), 449-452 (2017).</li><li>Metin, C., Godement, P., Imbert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+primary+visual+cortex+in+the+mouse:+Receptive+field+properties+and+functional+organization.">The primary visual cortex in the mouse: Receptive field properties and functional organization.</a> Experimental Brain Research. 69 (3), 594-612 (1988).</li><li>Marshel, J. H., Garrett, M. E., Nauhaus, I., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+specialization+of+seven+mouse+visual+cortical+areas.">Functional specialization of seven mouse visual cortical areas.</a> Neuron. 72 (6), 1040-1054 (2011).</li><li>Gordon, J. A., Stryker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+plasticity+of+binocular+responses+in+the+primary+visual+cortex+of+the+mouse.">Experience-dependent plasticity of binocular responses in the primary visual cortex of the mouse.</a> The Journal of Neuroscience. 16 (10), 3274-3286 (1996).</li><li>McGee, A. W., Yang, Y., Fischer, Q. S., Daw, N. W., Strittmatter, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-driven+plasticity+of+visual+cortex+limited+by+myelin+and+Nogo+receptor.">Experience-driven plasticity of visual cortex limited by myelin and Nogo receptor.</a> Science. 309 (5744), 2222-2226 (2005).</li><li>Sawtell, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptor-dependent+ocular+dominance+plasticity+in+adult+visual+cortex.">NMDA receptor-dependent ocular dominance plasticity in adult visual cortex.</a> Neuron. 38 (6), 977-985 (2003).</li><li>Hofer, S. B., Mrsic-Flogel, T. D., Bonhoeffer, T., Hubener, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+experience+enhances+plasticity+in+adult+visual+cortex.">Prior experience enhances plasticity in adult visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 9 (12), 127-132 (2006).</li><li>Crozier, R. A., Wang, Y., Liu, C., Bear, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deprivation-induced+synaptic+depression+by+distinct+mechanisms+in+different+layers+of+mouse+visual+cortex.">Deprivation-induced synaptic depression by distinct mechanisms in different layers of mouse visual cortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (4), 1383-1388 (2007).</li><li>Tagawa, Y., Kanold, P. O., Majdan, M., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+periods+of+functional+ocular+dominance+plasticity+in+mouse+visual+cortex.">Multiple periods of functional ocular dominance plasticity in mouse visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 8 (3), 380-388 (2005).</li><li>Lickey, M. E., Pham, T. A., Gordon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swept+contrast+visual+evoked+potentials+and+their+plasticity+following+monocular+deprivation+in+mice.">Swept contrast visual evoked potentials and their plasticity following monocular deprivation in mice.</a> Vision Research. 44, 3381-3387 (2004).</li><li>Cang, J., Kalatsky, V. A., Lowel, S., Stryker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+the+intrinsic+signal+as+a+measure+of+cortical+plasticity+in+the+mouse.">Optical imaging of the intrinsic signal as a measure of cortical plasticity in the mouse.</a> Vision Neuroscience. 22 (5), 685-691 (2005).</li><li>Khan, I. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+different+suturing+techniques+for+cystotomy+closure+in+canines.">Evaluation of different suturing techniques for cystotomy closure in canines.</a> Journal of Animal &amp; Plant Sciences. 23 (4), 981-985 (2013).</li><li>Weisman, D. L., Smeak, D. D., Birchard, S. J., Zweigart, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+continuous+suture+pattern+with+a+simple+interrupted+pattern+for+enteric+closure+in+dogs+and+cats:+83+cases+(1991-1997).">Comparison of a continuous suture pattern with a simple interrupted pattern for enteric closure in dogs and cats: 83 cases (1991-1997).</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 214 (10), 1507-1510 (1999).</li><li>Heneghan, C. P. H., Thornton, C., Navaratnarajah, M., Jones, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+isoflurane+on+the+auditory+evoked+response+in+man.">Effect of isoflurane on the auditory evoked response in man.</a> BJA: British Journal of Anaesthesia. 59 (3), 277-282 (1987).</li><li>Mitzdorf, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+source-density+method+and+application+in+cat+cerebral+cortex:+investigation+of+evoked+potentials+and+EEG+phenomenal.">Current source-density method and application in cat cerebral cortex: investigation of evoked potentials and EEG phenomenal.</a> Physiological Reviews. 65 (1), 37-100 (1985).</li></ol>

Vi præsenterer en detaljeret protokol for MD og måling OD plasticitet ved enkelt enhed optagelse. Denne protokol er meget udbredt i visuel neurovidenskab. Selv om MD-protokollen ikke er kompliceret, er der nogle kritiske kirurgiske procedurer, der skal følges nøje. For det første er der to vigtige detaljer, der sikrer kvaliteten af syningen. Suturen er tilstrækkelig stabil, hvis stingene er koncentreret i den mediale del af øjenlåget. Desuden påføres 3 μL lim på knudens hoved for at øge knudens stabilitet fo...

Monocular visuel afsavn er en fremragende eksperimenterende paradigme til at undersøge V1 plasticitet. At studere betydningen af visuel erfaring i neurale udvikling, David Hubel og Torsten Wiesel1,2 berøvet killinger af normal vision i det ene øje på forskellige tidspunkter og i forskellige perioder. De observerede derefter ændringerne i responsintensiteten i V1 for de dårligt stillede og ikke-berøvede øjne. Deres resultater viste et unormalt lavt antal neuroner reagerer på øjet, der var blevet sutured lukket i de første tre måneder. Men svarene fra neuroner i killingerne forblev identiske i alle henseender til dem af en normal voksen katøje, der blev sutured lukket i et år, og killingerne ikke komme sig. MD hos voksne katte kan ikke fremkalde OD plasticitet. Derfor er virkningen af visuel erfaring på V1 ledninger er stærk i en kort, veldefineret fase af udviklingen, før og efter hvilken de samme stimuli har mindre indflydelse. En sådan fase af øget modtagelighed for visuelle input er kendt som den kritiske periode i visuel cortex.
Selv om musen er en natlig dyr, individuelle neuroner i mus V1 har lignende egenskaber til neuroner findes i katte3,4,5. I de seneste år, med den hurtige udvikling af transgene teknologi, et stigende antal undersøgelser i visuel neurovidenskab har brugt mus som en eksperimentel model6,7,8. I visuelle undersøgelser i mus bruger neuroforskere mutanter og knockout muselinjer, som giver kontrol over musenes genetiske sammensætning. Selvom mus V1 mangler OD kolonner, enkelt neuroner i V1 kikkertzone viser betydelige OD egenskaber. For eksempel reagerer de fleste celler stærkere på kontralateral stimulation end på ipsilateral stimulation. Midlertidig lukning af det ene øje i den kritiske periode medfører et betydeligt skift i OD-indeksfordelingen9,10,11. Derfor, MD kan bruges til at etablere en OD plasticitet model til at undersøge, hvordan gener involveret i neurale udviklingsforstyrrelser indflydelse kortikal plasticitet in vivo.
Her introducerer vi en eksperimentel metode til MD og foreslår en almindeligt anvendt metode (elektrofysiologisk optagelse) til at analysere ændringen i OD plasticitet under monokulær visuel afsavn. Metoden har været meget udbredt i mange laboratorier i mere end 20 år12,13,14,15,16. Der er andre metoder, der anvendes til måling af OD plasticitet samt, såsom kronisk visuelle fremkaldte potentiale (VEP) optagelse17, og iboende optisk billeddannelse (IOI)18. Den betydelige fordel ved denne akutte metode er, at det er let at følge, og resultaterne er bemærkelsesværdigt pålidelige.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>502 glue</td>
			<td>M&#38;G Chenguang Stationery Co., Ltd.</td>
			<td>AWG97028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquizition card</td>
			<td>National Instument</td>
			<td>PCI-6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>G-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplifier</td>
			<td>A-M system</td>
			<td>Model 1800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine</td>
			<td>Aladdin Bio-Chem Technology Co., Ltd</td>
			<td>A135946-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Stereotaxic Apparatus</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>68001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cohan-Vannas spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Contact Lenses Solutions</td>
			<td>Beijing Dr. Lun Eye Care Products Co., Ltd.</td>
			<td>GM17064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Henan Guangderun Medical Instruments Co.,Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine needle holder</td>
			<td>SuZhou Stronger Medical Instruments Co.,Ltd</td>
			<td>CZQ1370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>53320A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>53072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>#5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Stryker</td>
			<td>TP 700 T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illuminator</td>
			<td>Motic China Group Co., Ltd.</td>
			<td>MLC-150C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>R510-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LCD monitor</td>
			<td>Philips (China) Investment Co., Ltd.</td>
			<td>39PHF3251/T3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>SOPTOP</td>
			<td>SZMT1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noninvasive Vital Signs Monitor</td>
			<td>Mouseox</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil hydraulic micromanipulator</td>
			<td>NARISHIGE International Ltd.</td>
			<td>PC-5N06022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petrolatum Eye Gel</td>
			<td>Dezhou Yile Disinfection Technology Co., Ltd.</td>
			<td>17C801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spike2</td>
			<td>Cambridge Electronic Design, Cambridge, UK</td>
			<td>Spike2 Version 9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>54010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>54002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Needle</td>
			<td>Ningbo Medical Co.,Ltd</td>
			<td>3/8 arc 2.5*8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten Electrode</td>
			<td>FHC, Inc</td>
			<td>L504-01B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylocaine</td>
			<td>Huaqing</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity measurement in the mouse primary visual cortex

Monocular visuel afsavn er en fremragende eksperimenterende paradigme til at fremkalde primære visuelle kortikale reaktion plasticitet. Generelt er cortex reaktion på det kontralaterale øje på en stimulus meget stærkere end reaktionen fra det ipsilaterale øje i kikkertsegmentet af musens primære visuelle cortex (V1). I den pattedyr kritiske periode, suturering det kontralaterale øje vil resultere i et hurtigt tab af lydhørhed af V1 celler til kontralateraløje stimulation. Med den fortsatte udvikling af transgene teknologier, flere og flere undersøgelser bruger transgene mus som eksperimentelle modeller til at undersøge virkningerne af specifikke gener på okulær dominans (OD) plasticitet. I denne undersøgelse introducerer vi detaljerede protokoller for monokulær visuel afsavn og beregner ændringen i OD-plasticitet i mus V1. Efter monocular afsavn (MD) i 4 dage i den kritiske periode måles orienteringstuningskurverne for hver neuron, og tuningkurverne for lag fire neuroner i V1 sammenlignes mellem stimulering af de ipsilaterale og kontralaterale øjne. Det kontralaterale bias indeks (CBI) kan beregnes ved hjælp af hver celles okulære OD score for at angive graden af OD plasticitet. Denne eksperimentelle teknik er vigtig for at studere de neurale mekanismer OD plasticitet i den kritiske periode og for opmåling rollerne af specifikke gener i neurale udvikling. Den største begrænsning er, at den akutte undersøgelse ikke kan undersøge ændringen i neurale plasticitet af den samme mus på et andet tidspunkt.

De eksperimentelle resultater, der er beskrevet her, muliggør vellykkede MD- og OD-plastikmålinger fra en berøvet og ikke-berøvet mus i den kritiske periode (P19-P32). Figur 1 viser, hvordan du udfører enkeltenhedsoptagelser i lag 4 fra V1 kikkertzonen til sammenligning af respons i det ipsilaterale og kontralaterale øje 4 dage efter MD. Figur 2 viser spike sortering og orientering tuning målinger for at stimulere ipsilaterale og kontralaterale øjne. For...

Watch this Scientific Journal Video about Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex at JoVE.com

Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex

Her præsenterer vi detaljerede protokoller for monokulær visuel afsavn og okulær dominans plasticitet analyse, som er vigtige metoder til at studere de neurale mekanismer af visuel plasticitet i den kritiske periode og virkningerne af specifikke gener på visuel udvikling.

Monocular Visuel afsavn og okulær dominans Plasticity Måling i musen primære visuelle cortex

Monocular visual deprivation is an excellent experimental paradigm to induce primary visual cortical response plasticity. In general, the response of the ...

Monokulære visuelle afsavn er en fremragende eksperimentel protokol til at fremkalde primær visuel kortikal respons plasticitet. Normalt, neuroner i kikkert segment af den primære visuelle cortex i musen reagerer omkring dobbelt så kraftigt til stimulering af det kontralaterale øje som til det ipsilaterale øje. Men suturering lukke kontralaterale øje i den kritiske periode for okulær dominans plasticitet resultere i den hurtige tab af lydhørhed af V1 neuroner til kontralaterale øje stimulation og også efterfulgt af en efterfølgende stigning i reaktionen på ipsilaterale øje.Her introducerer vi den eksperimentelle protokol for monokulær afsavn og foreslår en almindeligt anvendt metode til at analysere tendensen i okulær dominans under visuel afsavn. Sæt de kirurgiske værktøjer i en aluminium boks og autoklave dem under 120 grader Celsius i en halv time. Forbered 2% agarose opløsning i vandbad kedel og holde det på 75 grader Celsius.Påfør et tyndt lag øjens salve på begge øjne. Under det anatomiske mikroskop med belysning sutur øjenlågene. Lav omkring fire sting.Lav to til tre noder af tråden. Påfør tre mikroliter af øjeblikkelig tørring lim 502 på hovedet af noden for at øge stabiliteten af noden. Skær derefter tråden så kort nok.Når musen er helt vågen, skal du placere dem i et adskilt bur. Før elektrofysiologisk optagelse, bruge isofluran til at bedøve musen. Fjern stingene og udsæt øjeæblet.Trim forsigtigt øjenlåget. Skyl øjnene med kontaktlinser løsninger og kontrollere øjnene for klarhed. Kun musen med god stand af øjne kan bruges.Når musen er bedøvet, skal du placere musen på en stereotaxisk ramme. Brug en varmepude til at opretholde kropstemperaturen under hele proceduren. Påfør øjensvenden på overfladen af øjnene for at holde det fugtigt.Fjern håret af musen for at udsætte sin hud. Incise en otte millimeter ganget med otte millimeter område af huden mellem begge ører til at udsætte kraniet og fjerne hovedbunden væv. Fjern derefter det overliggende bindevæv med brintoverilte.Bor et hul i kraniet over lillehjernen. Fastgør en lille knogleskrue i hullet som reference. Udfør en lille kraniotomi på en millimeter i diameter i V1 kikkertregionen.Fjern forsigtigt kraniefragmentet uden at skade hjernen. Dæk den eksponerede kortikale overflade med 2%agarose for at forhindre tørring. Fix en wolfram elektrode på stereotaxic ramme.Placer wolfram elektroden lodret på kikkert V1 region for at sikre, at de celler, der registreres reagerer på begge øjne. Stimulus er adskilt af 30 grader i en tilfældig blok. I alt tre til fem blokke blev præsenteret i hver måling.Mask det ene øje med uigennemsigtig plastplade. Nuværende LCD1 til position i 23 centimeter fra musens øjne. Fremrykning af mikroelektroden langsomt af den oliehydrauliske mikromanipulator.Stop avancement højt signal støjforhold signal, når elektroden er avanceret til lag fire og start måling. Vi forstærker spike aktiviteter med en faktor på 1.000 og filtrerer det fra 300 til 10 kilohertz og derefter prøve det på 40 kilohertz. Derefter maskere det andet øje og måle kontralaterale øjets reaktion.Signaler målt ved enkelte elektroder er befolkningsaktiviteter. Brug software til at adskille pigge af forskellige celler. Først skal du filtrere signalet fra 500 til 5.000 hertz.Indstil to markører, en for positiv afbøjning og en for negativ afbøjning pigge. Konfigurer spike skabeloner. Angiv det skabelonområde, hvor det viser den største variation mellem forskellige klasser af pigge.Brug hovedkomponentanalyse til at adskille dem i klynger. Klassificere pigge af en grænse ved hjælp af K betyder algoritme. Korrelere orienteringen med spike fyring sats og plot orientering tuning kurver for ipsilaterale og kontralaterale øjne.Beregn derefter OD-indekset for enkelte celler, som repræsenterer det kontralaterale og ipsilaterale svar Tildel en OD-score for hver celle i henhold til OD-indekset. Beregn det kontralaterale bias-indeks i henhold til formlen. Dette diagram viser orienteringsjusteringskurverne for det ipsilaterale og kontralaterale øje i monokulær berøvet og ikke-prisløs mus.Denne protokol muliggør vellykket monokulær visuel afsavn og okulær dominans måling fra en berøvet og en ikke-prisløs mus på kritisk periode. Vi har lige vist dig, hvordan du udfører dette eksperiment, og vi havde analyseret ændringen i okulær dominans under visuel afsavn. Under forsøget er det vigtigt at undgå infektion i suturprocessen og interaktionen, mens den elektrofysiologiske optagelse.Tak for at se vores video.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Produktion og anvendelse af Lentivirus til selektivt at transducere Primary oligodendrocyt precursorceller for<em&gt; In vitro</em&gt; myelinering Analyser

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

Generating Primary Fibroblast Cultures from Mouse Ear and Tail Tissues

Generering Primær fibroblastkulturer fra museøre og hale Væv

Primary cells are derived directly from tissue and are thought to be more representative of the physiological state of cells in vivo than established cell ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissektion og immunfluorescent farvning af champignon krop og fotoreceptor neuroner i voksen Drosophila melanogaster hjerner

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluering af skade-induceret gulne og In Vivo omprogrammering i den skeletmuskulatur

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Multi Photon tid bortfalder Imaging til at visualisere udvikling i realtid: visualisering af overflytning neurale Crest celler i zebrafisk embryoner

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Dyrkning af retinale Pigment epitel celler på en Ex Vivo Model af alderen menneskelige Bruchs membran

Aside from vitamins and antioxidants recommended by the Age-Related Eye Disease Study, there is no effective therapy for &#34;dry,&#34;&#160;or atrophic ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

Induktion og validering af cellulære gulne i primære humane celler

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Visualisere Node og Notochordal plade i Gastrulating mus embryoner ved hjælp af Scanning elektronmikroskopi og hele Mount immunfluorescens

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Visualisering af Superior okulær Sulcus under Danio rerio embryogenese

Congenital ocular coloboma is a genetic disorder that is typically observed as a cleft in the inferior aspect of the eye resulting from incomplete choroid ...