Name: monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity measurement in the mouse primary visual cortex
Uploaded: 2020-02-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex at JoVE.com

Deze studie werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (81571770, 81771925, 81861128001).

In dit protocol werden mannelijke C57Bl/6 muizen verkregen van het Institute of Laboratory Animals van de Sichuan Academy of Medical Sciences en het Sichuan Provincial People's Hospital. Alle dierverzorging en experimentele procedures werden goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee, University of Electronic Science and Technology of China.
1. Monoculaire ontbering (MD) op postnatale dag 28 bij muizen
<ol><li>Doe de chirurgische gereedschappen, de hechtingsnaald (0,25 ...

<ol>
	<li>Hubel, D. H., Wiesel, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+monocular+deprivation+in+kittens.">Effects of monocular deprivation in kittens.</a> Naunyn-Schmiedebergs Archiv f&#252;r experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 248 (6), 492-497 (1964).</li><li>Daw, N. W., Fox, K., Sato, H., Czepita, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+period+for+monocular+deprivation+in+the+cat+visual+cortex.">Critical period for monocular deprivation in the cat visual cortex.</a> Journal of Neurophysiology. 67 (1), 197-202 (1992).</li><li>Guire, E. S., Lickey, M. E., Gordon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+period+for+the+monocular+deprivation+effect+in+rats:+assessment+with+sweep+visually+evoked+potentials.">Critical period for the monocular deprivation effect in rats: assessment with sweep visually evoked potentials.</a> Journal of Neurophysiology. 81 (1), 121-128 (1999).</li><li>Wang, L., Sarnaik, R., Rangarajan, K. V., Liu, X., Cang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+receptive+field+properties+of+neurons+in+the+superficial+superior+colliculus+of+the+mouse.">Visual receptive field properties of neurons in the superficial superior colliculus of the mouse.</a> Journal of Neuroscience. 30 (49), 16573-16584 (2010).</li><li>Niell, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Types,+circuits,+and+receptive+fields+in+the+mouse+visual+cortex.">Cell Types, circuits, and receptive fields in the mouse visual cortex.</a> Annual Review of Neuroscience. 38 (1), 413-431 (2015).</li><li>Lee, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+specific+interneurons+improves+V1+feature+selectivity+and+visual+perception.">Activation of specific interneurons improves V1 feature selectivity and visual perception.</a> Nature. 488 (8), 379-383 (2012).</li><li>Cossell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+organization+of+excitatory+synaptic+strength+in+primary+visual+cortex.">Functional organization of excitatory synaptic strength in primary visual cortex.</a> Nature. 518 (2), 399-403 (2015).</li><li>Lacaruso, M. F., Gasler, L. T., Hofer, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+organization+of+visual+space+in+primary+visual+cortex.">Synaptic organization of visual space in primary visual cortex.</a> Nature. 547 (7), 449-452 (2017).</li><li>Metin, C., Godement, P., Imbert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+primary+visual+cortex+in+the+mouse:+Receptive+field+properties+and+functional+organization.">The primary visual cortex in the mouse: Receptive field properties and functional organization.</a> Experimental Brain Research. 69 (3), 594-612 (1988).</li><li>Marshel, J. H., Garrett, M. E., Nauhaus, I., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+specialization+of+seven+mouse+visual+cortical+areas.">Functional specialization of seven mouse visual cortical areas.</a> Neuron. 72 (6), 1040-1054 (2011).</li><li>Gordon, J. A., Stryker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+plasticity+of+binocular+responses+in+the+primary+visual+cortex+of+the+mouse.">Experience-dependent plasticity of binocular responses in the primary visual cortex of the mouse.</a> The Journal of Neuroscience. 16 (10), 3274-3286 (1996).</li><li>McGee, A. W., Yang, Y., Fischer, Q. S., Daw, N. W., Strittmatter, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-driven+plasticity+of+visual+cortex+limited+by+myelin+and+Nogo+receptor.">Experience-driven plasticity of visual cortex limited by myelin and Nogo receptor.</a> Science. 309 (5744), 2222-2226 (2005).</li><li>Sawtell, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptor-dependent+ocular+dominance+plasticity+in+adult+visual+cortex.">NMDA receptor-dependent ocular dominance plasticity in adult visual cortex.</a> Neuron. 38 (6), 977-985 (2003).</li><li>Hofer, S. B., Mrsic-Flogel, T. D., Bonhoeffer, T., Hubener, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+experience+enhances+plasticity+in+adult+visual+cortex.">Prior experience enhances plasticity in adult visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 9 (12), 127-132 (2006).</li><li>Crozier, R. A., Wang, Y., Liu, C., Bear, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deprivation-induced+synaptic+depression+by+distinct+mechanisms+in+different+layers+of+mouse+visual+cortex.">Deprivation-induced synaptic depression by distinct mechanisms in different layers of mouse visual cortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (4), 1383-1388 (2007).</li><li>Tagawa, Y., Kanold, P. O., Majdan, M., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+periods+of+functional+ocular+dominance+plasticity+in+mouse+visual+cortex.">Multiple periods of functional ocular dominance plasticity in mouse visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 8 (3), 380-388 (2005).</li><li>Lickey, M. E., Pham, T. A., Gordon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swept+contrast+visual+evoked+potentials+and+their+plasticity+following+monocular+deprivation+in+mice.">Swept contrast visual evoked potentials and their plasticity following monocular deprivation in mice.</a> Vision Research. 44, 3381-3387 (2004).</li><li>Cang, J., Kalatsky, V. A., Lowel, S., Stryker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+the+intrinsic+signal+as+a+measure+of+cortical+plasticity+in+the+mouse.">Optical imaging of the intrinsic signal as a measure of cortical plasticity in the mouse.</a> Vision Neuroscience. 22 (5), 685-691 (2005).</li><li>Khan, I. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+different+suturing+techniques+for+cystotomy+closure+in+canines.">Evaluation of different suturing techniques for cystotomy closure in canines.</a> Journal of Animal &amp; Plant Sciences. 23 (4), 981-985 (2013).</li><li>Weisman, D. L., Smeak, D. D., Birchard, S. J., Zweigart, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+continuous+suture+pattern+with+a+simple+interrupted+pattern+for+enteric+closure+in+dogs+and+cats:+83+cases+(1991-1997).">Comparison of a continuous suture pattern with a simple interrupted pattern for enteric closure in dogs and cats: 83 cases (1991-1997).</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 214 (10), 1507-1510 (1999).</li><li>Heneghan, C. P. H., Thornton, C., Navaratnarajah, M., Jones, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+isoflurane+on+the+auditory+evoked+response+in+man.">Effect of isoflurane on the auditory evoked response in man.</a> BJA: British Journal of Anaesthesia. 59 (3), 277-282 (1987).</li><li>Mitzdorf, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+source-density+method+and+application+in+cat+cerebral+cortex:+investigation+of+evoked+potentials+and+EEG+phenomenal.">Current source-density method and application in cat cerebral cortex: investigation of evoked potentials and EEG phenomenal.</a> Physiological Reviews. 65 (1), 37-100 (1985).</li></ol>

We presenteren een gedetailleerd protocol voor MD en het meten van OD plasticiteit door single unit opname. Dit protocol wordt veel gebruikt in de visuele neurowetenschappen. Hoewel het MD-protocol niet ingewikkeld is, zijn er enkele kritieke chirurgische ingrepen die zorgvuldig moeten worden gevolgd. Ten eerste zijn er twee belangrijke details die de kwaliteit van de stiksels garanderen. De hechting is voldoende stabiel als de steken geconcentreerd zijn in het mediale gedeelte van het ooglid. Bovendien wordt 3 μL lijm ...

Monoculaire visuele ontbering is een uitstekend experimenteel paradigma om V1 plasticiteit te onderzoeken. Om het belang van visuele ervaring in neurale ontwikkeling te bestuderen, David Hubel en Torsten Wiesel1,2 beroofde kittens van normaal zicht in een oog op verschillende tijdstippen en voor verschillende perioden van tijd. Vervolgens zagen ze de veranderingen in de reactieintensiteit in V1 voor de achtergestelde en niet-achtergestelde ogen. Hun resultaten toonden een abnormaal laag aantal neuronen reageren op het oog dat was gehecht gesloten in de eerste drie maanden. Echter, de reacties van de neuronen in de kittens bleef identiek in alle opzichten aan die van een normale volwassen kat het oog dat werd gehecht gesloten voor een jaar, en de kittens niet herstellen. MD bij volwassen katten kan geen OD plasticiteit veroorzaken. Daarom is de impact van visuele ervaring op V1 bedrading sterk tijdens een korte, goed gedefinieerde fase van ontwikkeling, voor en na welke dezelfde stimuli minder invloed hebben. Een dergelijke fase van verhoogde gevoeligheid voor visuele input staat bekend als de kritieke periode in de visuele cortex.
Hoewel de muis is een nachtdier, individuele neuronen in muis V1 hebben vergelijkbare eigenschappen als neuronen gevonden in katten3,4,5. In de afgelopen jaren, met de snelle ontwikkeling van transgene technologie, hebben een toenemend aantal studies in de visuele neurowetenschappen muizen gebruikt als experimenteel model6,7,8. In muis visuele studies, neurowetenschappers gebruiken mutanten en knock-out muislijnen, die controle over de genetische samenstelling van de muizen mogelijk te maken. Hoewel muizen V1 geen OD-kolommen hebben, vertonen enkele neuronen in de V1-verrekijkerzone significante OD-eigenschappen. De meeste cellen reageren bijvoorbeeld sterker op contralaterale stimulatie dan op ipsilaterale stimulatie. Tijdelijke sluiting van één oog tijdens de kritieke periode leidt tot een aanzienlijke verschuiving in de OD-indexverdeling9,10,11. Daarom kan MD worden gebruikt om een OD-plasticiteitsmodel op te zetten om te onderzoeken hoe genen die betrokken zijn bij neurale ontwikkelingsstoornissen corticale plasticiteit in vivo beïnvloeden.
Hier introduceren we een experimentele methode voor MD en stellen we een veelgebruikte methode (elektrofysiologische opname) voor om de verandering in OD-plasticiteit te analyseren tijdens monoculaire visuele deprivatie. De methode wordt al meer dan 20 jaar op grote schaal gebruikt in veel laboratoria12,13,14,15,16. Er zijn andere methoden die worden gebruikt bij het meten van de OD plasticiteit ook, zoals chronische visuele opgeroepen potentieel (VEP) opname17, en intrinsieke optische beeldvorming (IOI)18. Het grote voordeel van deze acute methode is dat het gemakkelijk te volgen is, en de resultaten zijn opmerkelijk betrouwbaar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>502 glue</td>
			<td>M&#38;G Chenguang Stationery Co., Ltd.</td>
			<td>AWG97028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquizition card</td>
			<td>National Instument</td>
			<td>PCI-6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>G-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplifier</td>
			<td>A-M system</td>
			<td>Model 1800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine</td>
			<td>Aladdin Bio-Chem Technology Co., Ltd</td>
			<td>A135946-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Stereotaxic Apparatus</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>68001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cohan-Vannas spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Contact Lenses Solutions</td>
			<td>Beijing Dr. Lun Eye Care Products Co., Ltd.</td>
			<td>GM17064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Henan Guangderun Medical Instruments Co.,Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine needle holder</td>
			<td>SuZhou Stronger Medical Instruments Co.,Ltd</td>
			<td>CZQ1370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>53320A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>53072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>#5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Stryker</td>
			<td>TP 700 T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illuminator</td>
			<td>Motic China Group Co., Ltd.</td>
			<td>MLC-150C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>R510-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LCD monitor</td>
			<td>Philips (China) Investment Co., Ltd.</td>
			<td>39PHF3251/T3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>SOPTOP</td>
			<td>SZMT1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noninvasive Vital Signs Monitor</td>
			<td>Mouseox</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil hydraulic micromanipulator</td>
			<td>NARISHIGE International Ltd.</td>
			<td>PC-5N06022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petrolatum Eye Gel</td>
			<td>Dezhou Yile Disinfection Technology Co., Ltd.</td>
			<td>17C801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spike2</td>
			<td>Cambridge Electronic Design, Cambridge, UK</td>
			<td>Spike2 Version 9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>54010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>54002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Needle</td>
			<td>Ningbo Medical Co.,Ltd</td>
			<td>3/8 arc 2.5*8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten Electrode</td>
			<td>FHC, Inc</td>
			<td>L504-01B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylocaine</td>
			<td>Huaqing</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity measurement in the mouse primary visual cortex

Monoculaire visuele ontbering is een uitstekend experimenteel paradigma om primaire visuele corticale respons plasticiteit induceren. In het algemeen is de reactie van de cortex op het contralaterale oog op een stimulus veel sterker dan de respons van het ipsilaterale oog in het verrekijkersegment van de primaire visuele cortex van de muis (V1). Tijdens de zoogdierkritische periode zal het hechten van het contralaterale oog resulteren in een snel verlies van responsiviteit van V1-cellen tot contralaterale oogstimulatie. Met de voortdurende ontwikkeling van transgene technologieën gebruiken steeds meer studies transgene muizen als experimentele modellen om de effecten van specifieke genen op oculaire dominantie (OD) plasticiteit te onderzoeken. In deze studie introduceren we gedetailleerde protocollen voor monoculaire visuele deprivatie en berekenen we de verandering in OD-plasticiteit bij muis V1. Na monoculaire ontbering (MD) gedurende 4 dagen tijdens de kritieke periode, worden de oriëntatiestemkrommen van elk neuron gemeten en worden de stemcurven van laag vier neuronen in V1 vergeleken tussen stimulatie van de ipsilaterale en contralaterale ogen. De contralaterale bias index (CBI) kan worden berekend met behulp van de oculaire OD-score van elke cel om de mate van OD-plasticiteit aan te geven. Deze experimentele techniek is belangrijk voor het bestuderen van de neurale mechanismen van OD plasticiteit tijdens de kritieke periode en voor het onderzoeken van de rollen van specifieke genen in neurale ontwikkeling. De belangrijkste beperking is dat de acute studie de verandering in neurale plasticiteit van dezelfde muis niet op een ander tijdstip kan onderzoeken.

De hier beschreven experimentele resultaten maken succesvolle MD- en OD-plasticiteitsmetingen mogelijk van een beroofde en niet-achtergestelde muis tijdens de kritieke periode (P19-P32). Figuur 1 laat zien hoe single unit opnames uit te voeren in laag 4 van V1 de verrekijker zone voor het vergelijken van reacties in de ipsilaterale en contralaterale oog 4 dagen na MD. Figuur 2 toont de spike sorting en oriëntatie tuning metingen voor het stimuleren van de ipsil...

Watch this Scientific Journal Video about Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex at JoVE.com

Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex

Hier presenteren we gedetailleerde protocollen voor monoculaire visuele ontbering en oculaire dominantie plasticiteit analyse, die belangrijke methoden voor het bestuderen van de neurale mechanismen van visuele plasticiteit tijdens de kritieke periode en de effecten van specifieke genen op visuele ontwikkeling.

Monoculaire visuele ontbering en oculaire dominantie plasticiteit meting in de muis primaire visuele cortex

Monocular visual deprivation is an excellent experimental paradigm to induce primary visual cortical response plasticity. In general, the response of the ...

Monoculaire visuele ontbering is een uitstekend experimenteel protocol om primaire visuele corticale respons plasticiteit induceren. Normaal gesproken reageren neuronen in het verrekijkersegment van de primaire visuele cortex in de muis ongeveer twee keer zo sterk op de stimulatie van het contralaterale oog als op het ipsilaterale oog. Echter, hechten sloot het contralaterale oog tijdens de kritieke periode voor oculaire dominantie plasticiteit resulteren in het snelle verlies van responsiviteit door de V1 neuronen aan de contralaterale oogstimulatie en ook gevolgd door een latere toename van de reactie op het ipsilaterale oog.Hier introduceren we het experimentele protocol voor monoculaire ontbering en stellen we een veelgebruikte methode voor om de trend in oculaire dominantie tijdens visuele ontbering te analyseren. Doe de chirurgische gereedschappen in een aluminium doos en autoclave ze onder 120 graden Celsius voor een half uur. Bereid 2%agarose oplossing in water bad waterkoker en houd het op 75 graden Celsius.Breng een dun laagje oogzalf aan op beide ogen. Onder de anatomische microscoop met verlichting, hecht de oogleden. Maak ongeveer vier hechtingen.Maak twee tot drie knooppunten van de draad. Breng drie microliters van instant drogen lijm 502 op het hoofd van het knooppunt om de stabiliteit van het knooppunt te verhogen. Snijd vervolgens de draad zo kort genoeg.Wanneer de muis volledig wakker is, plaats ze in een gescheiden kooi. Vóór elektrofysiologische opname gebruikt u de muis om de muis te verdoven. Verwijder de hechtingen en bloot de oogbol.Zorgvuldig trim het ooglid. Spoel de ogen met contactlenzen oplossingen en controleer de ogen voor duidelijkheid. Alleen de muis met een goede staat van de oogbollen kan worden gebruikt.Na het verdoven van de muis, plaats de muis op een stereotaxic frame. Gebruik een verwarmingskussen om de lichaamstemperatuur gedurende de hele procedure te behouden. Breng de oogzalf aan op het oppervlak van de ogen om het vochtig te houden.Verwijder het haar van de muis om de huid bloot te leggen. Snij een acht millimeter vermenigvuldigd met acht millimeter gebied van de huid tussen beide oren om de schedel bloot te stellen en het hoofdhuidweefsel te verwijderen. Verwijder vervolgens het bovengaande bindweefsel met waterstofperoxide.Boor een gat in de schedel boven het cerebellum. Bevestig een kleine botschroef in het gat als referentie. Voer een kleine craniotomie van een millimeter in diameter in V1 verrekijker regio.Verwijder voorzichtig het schedelfragment zonder de hersenen te kwetsen. Bedek het blootgestelde corticale oppervlak met 2%agarose om te voorkomen dat het drogen. Bevestig een wolfraamelektrode op het stereotaxicframe.Plaats de wolfraamelektrode verticaal op de verrekijker V1-regio om ervoor te zorgen dat de cellen die worden geregistreerd op beide ogen reageert. De stimulus wordt gescheiden door 30 graden in een willekeurig blok. In totaal werden in elke meting drie tot vijf blokken gepresenteerd.Maskeert één oog met niet-transparante plastic plaat. Presenteer LCD1 om in 23 centimeter van de ogen van de muis te positioneren. Vooraf micro-elektroden langzaam door de olie hydraulische micromanipulator.Stop de voortgang van de hoge signaalruisverhouding signaal wanneer de elektrode is gevorderd tot laag vier en start meting. We versterken piekactiviteiten met een factor 1.000 en filteren deze van 300 tot 10 kilohertz en proeven het vervolgens op 40 kilohertz. Mask maskeert vervolgens het andere oog en meet de reactie van het contralaterale oog.Signalen gemeten door enkele elektroden zijn populatie-activiteiten. Gebruik software om pieken van verschillende cellen te scheiden. Filter eerst het signaal van 500 naar 5.000 hertz.Stel twee cursors in, één voor positieve afbuiging en één voor negatieve afbuigingspieken. Spike-sjablonen instellen. Stel het gebied met sjablonen in waar de grootste variatie tussen verschillende klassen van spikes wordt weergegeven.Gebruik de analyse van hoofdonderdelen om ze te scheiden in clusters. Classificeer de pieken van een grens met behulp van het K-middelalgoritme. Correleer de oriëntatie met spike vuursnelheid en plot de oriëntatie tuning curven voor de ipsilaterale en contralaterale ogen.Bereken vervolgens de OD-index voor afzonderlijke cellen die de contralaterale en ipsilaterale respons vertegenwoordigt, Wijs een OD-score voor elke cel toe op basis van de OD-index. Bereken de contralaterale bias-index volgens de formule. Dit diagram toont de oriëntatie tuning curven van de ipsilaterale en contralaterale oog in monoculaire beroofde en niet-onttrofeerde muis.Dit protocol maakt succesvolle monoculaire visuele ontbering en oculaire dominantie meting van een beroofde en een niet-ontprived muis in kritieke periode. We hebben je net laten zien hoe je dit experiment uitvoeren en we hadden de verandering in oculaire dominantie geanalyseerd tijdens visuele ontbering. Tijdens het experiment is het belangrijk om infectie in het hechtingsproces en interactie te voorkomen tijdens elektrofysiologische opname.Bedankt voor het bekijken van onze video.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Productie en gebruik van Lentivirus om selectief transduce Primaire Oligodendrocyte Precursor Cellen voor<em&gt; In Vitro</em&gt; Myelination Testen

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

Generating Primary Fibroblast Cultures from Mouse Ear and Tail Tissues

Genererende Primaire fibroblastculturen van Mouse Oor en de Staart Tissues

Primary cells are derived directly from tissue and are thought to be more representative of the physiological state of cells in vivo than established cell ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissectie en immunefluorescentie kleuring van Mushroom lichaam en fotoreceptor neuronen in de hersenen van de volwassen Drosophila melanogaster

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluatie van schade-geïnduceerde senescentie en In Vivo herprogrammering in de skeletspieren

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Multi foton Time Lapse Imaging te visualiseren van ontwikkeling in realtime: visualisatie van migreren neurale kamcellen in Zebrafish embryo's

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Kweken van de epitheliale cellen van de retinale Pigment op een Ex Vivo Model van leeftijd menselijke Bruch membraan

Aside from vitamins and antioxidants recommended by the Age-Related Eye Disease Study, there is no effective therapy for &#34;dry,&#34;&#160;or atrophic ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

Inductie en validatie van cellulaire senescentie in primaire menselijke cellen

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Visualiseren van het knooppunt en de Notochordal plaat In Gastrulating muis embryo's met behulp van Scanning elektronen microscopie en hele Mount immunofluorescentie

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Visualisatie van de Superior oogbeschadigingen en/of Sulcus (hersenanatomie) tijdens Danio rerio embryogenese

Congenital ocular coloboma is a genetic disorder that is typically observed as a cleft in the inferior aspect of the eye resulting from incomplete choroid ...