Name: monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity measurement in the mouse primary visual cortex
Uploaded: 2020-02-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex at JoVE.com

מחקר זה היה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81571770, 81771925, 81861128001).

בפרוטוקול זה, זכר C57Bl/6 עכברים התקבלו מהמכון של בעלי חיים מעבדה של האקדמיה בסצ למדעי הרפואה והאנשים הפרובינציאלי של סצ'ואן החולים. כל טיפול בעלי חיים והליכים ניסיוניים אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים והשתמש, אוניברסיטת המדע האלקטרוני וטכנולוגיה של סין.
1. מניעת ח...

<ol>
	<li>Hubel, D. H., Wiesel, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+monocular+deprivation+in+kittens.">Effects of monocular deprivation in kittens.</a> Naunyn-Schmiedebergs Archiv f&#252;r experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 248 (6), 492-497 (1964).</li><li>Daw, N. W., Fox, K., Sato, H., Czepita, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+period+for+monocular+deprivation+in+the+cat+visual+cortex.">Critical period for monocular deprivation in the cat visual cortex.</a> Journal of Neurophysiology. 67 (1), 197-202 (1992).</li><li>Guire, E. S., Lickey, M. E., Gordon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+period+for+the+monocular+deprivation+effect+in+rats:+assessment+with+sweep+visually+evoked+potentials.">Critical period for the monocular deprivation effect in rats: assessment with sweep visually evoked potentials.</a> Journal of Neurophysiology. 81 (1), 121-128 (1999).</li><li>Wang, L., Sarnaik, R., Rangarajan, K. V., Liu, X., Cang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+receptive+field+properties+of+neurons+in+the+superficial+superior+colliculus+of+the+mouse.">Visual receptive field properties of neurons in the superficial superior colliculus of the mouse.</a> Journal of Neuroscience. 30 (49), 16573-16584 (2010).</li><li>Niell, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Types,+circuits,+and+receptive+fields+in+the+mouse+visual+cortex.">Cell Types, circuits, and receptive fields in the mouse visual cortex.</a> Annual Review of Neuroscience. 38 (1), 413-431 (2015).</li><li>Lee, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+specific+interneurons+improves+V1+feature+selectivity+and+visual+perception.">Activation of specific interneurons improves V1 feature selectivity and visual perception.</a> Nature. 488 (8), 379-383 (2012).</li><li>Cossell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+organization+of+excitatory+synaptic+strength+in+primary+visual+cortex.">Functional organization of excitatory synaptic strength in primary visual cortex.</a> Nature. 518 (2), 399-403 (2015).</li><li>Lacaruso, M. F., Gasler, L. T., Hofer, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+organization+of+visual+space+in+primary+visual+cortex.">Synaptic organization of visual space in primary visual cortex.</a> Nature. 547 (7), 449-452 (2017).</li><li>Metin, C., Godement, P., Imbert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+primary+visual+cortex+in+the+mouse:+Receptive+field+properties+and+functional+organization.">The primary visual cortex in the mouse: Receptive field properties and functional organization.</a> Experimental Brain Research. 69 (3), 594-612 (1988).</li><li>Marshel, J. H., Garrett, M. E., Nauhaus, I., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+specialization+of+seven+mouse+visual+cortical+areas.">Functional specialization of seven mouse visual cortical areas.</a> Neuron. 72 (6), 1040-1054 (2011).</li><li>Gordon, J. A., Stryker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+plasticity+of+binocular+responses+in+the+primary+visual+cortex+of+the+mouse.">Experience-dependent plasticity of binocular responses in the primary visual cortex of the mouse.</a> The Journal of Neuroscience. 16 (10), 3274-3286 (1996).</li><li>McGee, A. W., Yang, Y., Fischer, Q. S., Daw, N. W., Strittmatter, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-driven+plasticity+of+visual+cortex+limited+by+myelin+and+Nogo+receptor.">Experience-driven plasticity of visual cortex limited by myelin and Nogo receptor.</a> Science. 309 (5744), 2222-2226 (2005).</li><li>Sawtell, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptor-dependent+ocular+dominance+plasticity+in+adult+visual+cortex.">NMDA receptor-dependent ocular dominance plasticity in adult visual cortex.</a> Neuron. 38 (6), 977-985 (2003).</li><li>Hofer, S. B., Mrsic-Flogel, T. D., Bonhoeffer, T., Hubener, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+experience+enhances+plasticity+in+adult+visual+cortex.">Prior experience enhances plasticity in adult visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 9 (12), 127-132 (2006).</li><li>Crozier, R. A., Wang, Y., Liu, C., Bear, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deprivation-induced+synaptic+depression+by+distinct+mechanisms+in+different+layers+of+mouse+visual+cortex.">Deprivation-induced synaptic depression by distinct mechanisms in different layers of mouse visual cortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (4), 1383-1388 (2007).</li><li>Tagawa, Y., Kanold, P. O., Majdan, M., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+periods+of+functional+ocular+dominance+plasticity+in+mouse+visual+cortex.">Multiple periods of functional ocular dominance plasticity in mouse visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 8 (3), 380-388 (2005).</li><li>Lickey, M. E., Pham, T. A., Gordon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swept+contrast+visual+evoked+potentials+and+their+plasticity+following+monocular+deprivation+in+mice.">Swept contrast visual evoked potentials and their plasticity following monocular deprivation in mice.</a> Vision Research. 44, 3381-3387 (2004).</li><li>Cang, J., Kalatsky, V. A., Lowel, S., Stryker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+the+intrinsic+signal+as+a+measure+of+cortical+plasticity+in+the+mouse.">Optical imaging of the intrinsic signal as a measure of cortical plasticity in the mouse.</a> Vision Neuroscience. 22 (5), 685-691 (2005).</li><li>Khan, I. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+different+suturing+techniques+for+cystotomy+closure+in+canines.">Evaluation of different suturing techniques for cystotomy closure in canines.</a> Journal of Animal &amp; Plant Sciences. 23 (4), 981-985 (2013).</li><li>Weisman, D. L., Smeak, D. D., Birchard, S. J., Zweigart, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+continuous+suture+pattern+with+a+simple+interrupted+pattern+for+enteric+closure+in+dogs+and+cats:+83+cases+(1991-1997).">Comparison of a continuous suture pattern with a simple interrupted pattern for enteric closure in dogs and cats: 83 cases (1991-1997).</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 214 (10), 1507-1510 (1999).</li><li>Heneghan, C. P. H., Thornton, C., Navaratnarajah, M., Jones, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+isoflurane+on+the+auditory+evoked+response+in+man.">Effect of isoflurane on the auditory evoked response in man.</a> BJA: British Journal of Anaesthesia. 59 (3), 277-282 (1987).</li><li>Mitzdorf, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+source-density+method+and+application+in+cat+cerebral+cortex:+investigation+of+evoked+potentials+and+EEG+phenomenal.">Current source-density method and application in cat cerebral cortex: investigation of evoked potentials and EEG phenomenal.</a> Physiological Reviews. 65 (1), 37-100 (1985).</li></ol>

אנו מציגים פרוטוקול מפורט עבור MD ומדידת הפלסטיות של OD על ידי הקלטה יחידה אחת. פרוטוקול זה נמצא בשימוש נרחב במדעי המוח החזותי. למרות פרוטוקול MD אינו מסובך, יש כמה הליכים כירורגיים קריטיים שיש לעקוב בזהירות. ראשית, ישנם שני פרטים חשובים המבטיחים את איכות התפרים. תפר הוא יציב מספיק אם התפרים מ?...

מניעת ראייה חד-מולקולרית היא פרדיגמה ניסיונית מצוינת לבדיקת הפלסטיות הV1. כדי ללמוד את חשיבותה של החוויה החזותית בהתפתחות העצבית, דוד הובל וטורסטן ויזל1,2 מונעים מחתולים של ראייה רגילה בעין אחת בנקודות זמן שונות ובמשך פרקי זמן שונים. לאחר מכן הם הבחינו בשינויים בעוצמת התגובה ב-V1 עבור העיניים המקופחים והלא מונעים. התוצאות שלהם הראו מספר נמוך באופן חריג של נוירונים מגיבים לעין שהיה סגור למעלה בשלושת החודשים הראשונים. עם זאת, התגובות של הנוירונים בחתלתולים נשארו זהות בכל המובנים לאלה של עין של חתול בוגר נורמלי שנסגר במשך שנה, והגורים לא התאושש. MD אצל חתולים מבוגרים לא יכול לגרום לפלסטיות. לכן, ההשפעה של החוויה החזותית על החיווט V1 היא חזקה במהלך שלב קצר, מוגדר היטב של פיתוח, לפני ואחריו גירויים אותו יש פחות השפעה. שלב כזה של רגישות מוגברת לקלט חזותי ידוע כתקופה קריטית בקליפת הראייה.
למרות העכבר הוא חיה לילית, נוירונים בודדים בעכבר V1 יש תכונות דומות לנוירונים שנמצאו אצל חתולים3,4,5. בשנים האחרונות, עם ההתפתחות המהירה של הטכנולוגיה הטרנסגנית, מספר גדל והולך של מדעי המוח ויזואלית השתמשו בעכברים כמודל ניסיוני6,7,8. במחקרים חזותיים העכבר, נוירומדענים להשתמש במוטציות קווי העכבר, אשר מאפשרים שליטה על האיפור הגנטי של העכברים. למרות שעכברים V1 מחסור בעמודות OD, נוירונים בודדים באזור המשקפת V1 להראות משמעותי מאפייני OD. לדוגמה, רוב התאים מגיבים חזק יותר לגירוי הצלעות שלהן מאשר לגירוי שצלעות. סגירה זמנית של עין אחת במהלך התקופה הקריטית משרה משמרת משמעותית בהתפלגות המדד OD9,10,11. לכן, MD יכול לשמש כדי ליצור מודל הפלסטיות של OD כדי לחקור כיצד גנים המעורבים בהפרעות התפתחותיות עצביות להשפיע על הפלסטיות הקורטיקלית ב vivo.
כאן, אנו מציגים שיטה ניסיונית ל-MD ומציעים שיטה בשימוש נפוץ (הקלטה אלקטרופיסיולוגית) כדי לנתח את השינוי בפלסטיות של OD במהלך חסך חזותי מונוטוני. השיטה היתה בשימוש נרחב במעבדות רבות במשך יותר מ 20 שנים12,13,14,15,16. ישנן שיטות אחרות המשמשות למדידת הפלסטיות של OD, כמו גם, כגון פוטנציאל כרוני ויזואלי מעורר (VEP) הקלטה17, ו הדמיה אופטית פנימית (ioi)18. היתרון המשמעותי של שיטה חריפה זו הוא שקל לעקוב אחריו, והתוצאות אמינות במידה ניכרת.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>502 glue</td>
			<td>M&#38;G Chenguang Stationery Co., Ltd.</td>
			<td>AWG97028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquizition card</td>
			<td>National Instument</td>
			<td>PCI-6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>G-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplifier</td>
			<td>A-M system</td>
			<td>Model 1800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine</td>
			<td>Aladdin Bio-Chem Technology Co., Ltd</td>
			<td>A135946-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Stereotaxic Apparatus</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>68001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cohan-Vannas spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Contact Lenses Solutions</td>
			<td>Beijing Dr. Lun Eye Care Products Co., Ltd.</td>
			<td>GM17064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Henan Guangderun Medical Instruments Co.,Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine needle holder</td>
			<td>SuZhou Stronger Medical Instruments Co.,Ltd</td>
			<td>CZQ1370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>53320A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>53072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>#5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Stryker</td>
			<td>TP 700 T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illuminator</td>
			<td>Motic China Group Co., Ltd.</td>
			<td>MLC-150C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>R510-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LCD monitor</td>
			<td>Philips (China) Investment Co., Ltd.</td>
			<td>39PHF3251/T3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>SOPTOP</td>
			<td>SZMT1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noninvasive Vital Signs Monitor</td>
			<td>Mouseox</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil hydraulic micromanipulator</td>
			<td>NARISHIGE International Ltd.</td>
			<td>PC-5N06022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petrolatum Eye Gel</td>
			<td>Dezhou Yile Disinfection Technology Co., Ltd.</td>
			<td>17C801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spike2</td>
			<td>Cambridge Electronic Design, Cambridge, UK</td>
			<td>Spike2 Version 9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>54010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>54002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Needle</td>
			<td>Ningbo Medical Co.,Ltd</td>
			<td>3/8 arc 2.5*8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten Electrode</td>
			<td>FHC, Inc</td>
			<td>L504-01B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylocaine</td>
			<td>Huaqing</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity measurement in the mouse primary visual cortex

מניעת ראייה מונוקלית היא פרדיגמה ניסיונית מעולה כדי לגרום לפלסטיות העיקרי התגובה החזותית האופטית. באופן כללי, התגובה של הקליפה לעין הצלעות הגירוי הוא הרבה יותר חזק מאשר התגובה של העין הלסילבית בקטע המשקפת של קליפת העכבר העיקרית החזותית (V1). במהלך התקופה הקריטית של היונקים, העין המועלת הצלעות תגרום לאובדן מהיר של התגובה של תאים V1 כדי גירוי העין המקבילה. עם התפתחות מתמשכת של טכנולוגיות טרנסגניים, יותר ויותר מחקרים משתמשים בעכברים טרנסגניים כמו מודלים ניסיוניים לבחון את ההשפעות של גנים ספציפיים על הדומיננטיות העינית (OD) הפלסטיות. במחקר זה, אנו מציגים פרוטוקולים מפורטים עבור חסך חזותי מונוטוני ולחשב את השינוי הפלסטיות הפלסטיות בעכבר V1. לאחר מניעת מונוטוני (MD) עבור 4 ימים במהלך התקופה הקריטית, האוריינטציה כוונון עקומות של כל תא העצב נמדד, ואת עקומות כוונון של שכבה ארבעה נוירונים ב V1 מושווים בין גירוי של העין המוסילתית ואת העיניים שרירי. ניתן לחשב את מדד ההטיה באמצעות הטיה (לח ק) באמצעות הניקוד העינית של כל תא כדי לציין את מידת הפלסטיות של OD. טכניקה ניסיונית זו חשובה ללימוד המנגנונים העצביים של הפלסטיות במהלך התקופה הקריטית ולצורך מדידות התפקידים של גנים ספציפיים בהתפתחות העצבית. המגבלה העיקרית היא שהמחקר החריף אינו יכול לחקור את השינוי בפלסטיות העצבית של אותו עכבר בזמן שונה.

התוצאות הנסיוניות המתוארות כאן מאפשרות מדידות מוצלחות של MD ו-OD מעכבר שאינו משולל מצוקה במהלך התקופה הקריטית (P19 – P32). איור 1 מראה כיצד לבצע הקלטות יחידה יחידה בשכבה 4 מ V1 האזור המשקפת להשוואת התגובות העין והצלעות מוסדרות 4 ימים לאחר MD. איור 2 מראה את המיון ספיי...

Watch this Scientific Journal Video about Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex at JoVE.com

Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex

כאן, אנו מציגים פרוטוקולים מפורטים עבור מניעת ויזואלי מונוטוני וניתוח השליטה בעין הפלסטיות, שהם שיטות חשובות לחקר המנגנונים העצביים של הפלסטיות החזותית במהלך התקופה הקריטית ואת ההשפעות של גנים ספציפיים על פיתוח ויזואלי.

מניעת ויזואלי מונוטוני ושליטה העין הפלסטיות מדידה העכבר קליפת הראיה העיקרית

Monocular visual deprivation is an excellent experimental paradigm to induce primary visual cortical response plasticity. In general, the response of the ...

קיפוח ראייה חד-תאי הוא פרוטוקול ניסיוני מצוין כדי לגרום לפלסטיות ראשונית של תגובה קליפת המוח החזותית. בדרך כלל, נוירונים במקטע המשקפת של קליפת הראייה העיקרית בעכבר מגיבים כפליים חזק לגירוי של העין ההפוכה כמו לעין ipsilateral. עם זאת, תפר לעצום את העין ההפוכה במהלך התקופה הקריטית עבור פלסטיות דומיננטיות עינית לגרום לאובדן מהיר של היענות על ידי נוירונים V1 לגירוי העין ההפוכה וגם ואחריו עלייה לאחר מכן בתגובה לעין ipsilateral.כאן, אנו מציגים את הפרוטוקול הניסיוני עבור קיפוח חד מולקולרי ולהציע שיטה נפוצה לנתח את המגמה של דומיננטיות העין במהלך קיפוח חזותי. שים את הכלים הכירורגיים בקופסת אלומיניום ו autoclave אותם תחת 120 מעלות צל"ש במשך חצי שעה. הכינו תות 2% בקומקום אמבט מים והמשיכו לשמור עליו ב-75 מעלות צל כיפת ים.יש למרוח שכבה דקה של משחת עיניים על שתי העיניים. מתחת למיקרוסקופ האנטומי עם תאורה, לתפור את העפעפיים. לעשות בערך ארבעה תפרים.הפוך שניים עד שלושה צמתים של הליך המשנה. החל שלושה microliters של דבק ייבוש מיידי 502 על ראש הצומת כדי להגביר את היציבות של הצומת. ואז לחתוך את החוט קצר מספיק.כאשר העכבר ער לחלוטין, מניחים אותם בכלוב מעצר מופרד. לפני הקלטה אלקטרופיזיולוגית, השתמש isoflurane כדי להרדום את העכבר. הסר את התפרים ולחשוף את גלגל העין.בזהירות לקצץ את העפעף. לשטוף את העיניים עם פתרונות עדשות מגע ולבדוק את העיניים לבהירות. ניתן להשתמש רק בעכבר עם מצב טוב של גלגלי העיניים.לאחר הרדמה של העכבר, מקם את העכבר על מסגרת סטריאוטוקסית. השתמש כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף לאורך כל ההליך. החל את משחת העין על פני השטח של העיניים כדי לשמור אותו לח.הסר את השיער של העכבר כדי לחשוף את העור שלה. חתוך שמונה מילימטרים כפול שמונה מילימטרים של שטח העור בין שתי האוזניים כדי לחשוף את הגולגולת ולהסיר את רקמת הקרקפת. ואז להסיר את רקמת החיבור overlying עם מי חמצן.לקדוח חור בגולגולת מעל המוח הקטן. תקן בורג עצם קטן בחור כהפניה. בצע גולגולת קטנה בקוטר של מילימטר אחד באזור משקפת V1.הסר בזהירות את שבר הגולגולת מבלי לפגוע במוח. מכסים את המשטח קליפת המוח חשוף עם 2% agarose כדי למנוע ייבוש. תקן אלקטרודה טונגסטן על המסגרת הסטריאוטוקסית.מניחים את האלקטרודה טונגסטן אנכית על אזור V1 משקפת כדי לוודא כי התאים המתועדים מגיב לשתי העיניים. הגירוי מופרד על ידי 30 מעלות בבלוק אקראי. בכל מדידה הוצגו בסך הכל שלושה עד חמישה בלוקים.מסווה עין אחת עם צלחת פלסטיק לא שקופה. הצג LCD1 למיקום ב 23 ס"מ מעיניים של העכבר. התקדמות מיקרואלקטרוניקה לאט על ידי מיקרומניפולטור שמן הידראולי.עצרו את התקדמות אותות יחס רעש האות הגבוה כאשר האלקטרודה מתקדמת לשכבה 4 ולהתחיל במדידה. אנחנו מגבירים את פעילות ספייק בגורם של 1, 000 ולסנן אותו מ 300 עד 10 קילוהרץ ולאחר מכן לדגום אותו ב 40 קילוהרץ. ואז להסוות את העין השנייה ולמדוד את התגובה של העין ההתמדה.אותות הנמדדים על ידי אלקטרודות בודדות הם פעילויות אוכלוסייה. השתמש בתוכנה כדי להפריד קוצים של תאים שונים. ראשית, לסנן את האות מ 500 ל 5, 000 הרץ.הגדר שני סמנים, אחד להטיה חיובית ואחד עבור קוצים הטיה שלילית. כוונן תבניות ספייק. הגדר את אזור התבניות שבו הוא מציג את הווריאציה הגדולה ביותר בין מחלקות שונות של קוצים.השתמש בניתוח רכיבים ראשיים כדי להפריד אותם לאשכולות. סווג את הקוצים של גבול באמצעות אלגוריתם K פירושו. לתאם את האוריינטציה עם קצב ירי ספייק ולתכנן את עקומות כוונון הכיוון עבור העיניים ipsilateral ו contralateral.לאחר מכן לחשב את אינדקס OD עבור תאים בודדים המייצג את התגובה הנוגדנית ו ipsilateral להקצות ציון OD עבור כל תא על פי אינדקס OD. חשב את אינדקס ההטיה ההיפר-צדדית בהתאם לנוסחה. דיאגרמה זו מציגה את עקומות כוונון האוריינטציה של העין ההפוכלית והנוגדנית בעכבר חד-תאי מקופח ובלתי מפוקח.פרוטוקול זה מאפשר קיפוח חזותי חד-תאי מוצלח ומדידת דומיננטיות עינית מעכבר מקופח ועכבר לא מפוצל בתקופה קריטית. אנחנו רק הראינו לך איך להשיג את הניסוי הזה וניתחנו את השינוי בדומיננטיות העין במהלך קיפוח חזותי. במהלך הניסוי, חשוב להימנע מזיהום בתהליך התפירה ובאינטראקציה תוך הקלטה אלקטרופיזיולוגית.תודה שצפית בוידאו שלנו.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

ייצור ושימוש בLentivirus לתאי סלקטיבי transduce הראשי oligodendrocyte מבשר ל<em&gt; במבחנה</em&gt; מבחני myelination

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

Generating Primary Fibroblast Cultures from Mouse Ear and Tail Tissues

תרבויות יצירה ראשיות פיברובלסטים מרקמות אוזן וזנב עכבר

Primary cells are derived directly from tissue and are thought to be more representative of the physiological state of cells in vivo than established cell ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

הדמיה חיה של עכבר משניים פיוז &#39;ן

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

ניתוח Immunofluorescent מכתים של פטריות הגוף והנפש ומה קולט אור נוירונים במוח למבוגרים דרוזופילה melanogaster

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

הערכה של פציעה-induced הזדקנות ביולוגית, In Vivo התכנות בשריר השלד

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

פוטון רב זמן לשגות הדמיה כדי להמחיש את התפתחות בזמן אמת: ויזואליזציה של העברת תאי הרכס העצבי עוברי דג זברה

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Culturing תאי אפיתל הפיגמנט ברשתית על מודל לשעבר Vivo של הממברנה של ברוך בן אנוש

Aside from vitamins and antioxidants recommended by the Age-Related Eye Disease Study, there is no effective therapy for &#34;dry,&#34;&#160;or atrophic ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

אינדוקציה ואימות של הזדקנות ביולוגית הסלולר העיקרי בתאי אדם

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

להמחיש את צומת ואת צלחת Notochordal Gastrulating עוברי העכבר באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סריקה כל הר Immunofluorescence

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

ויזואליזציה של Sulcus עינית הממונה במהלך מופרה רזבורה rerio

Congenital ocular coloboma is a genetic disorder that is typically observed as a cleft in the inferior aspect of the eye resulting from incomplete choroid ...