Name: monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity measurement in the mouse primary visual cortex
Uploaded: 2020-02-08T15:00:00
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Questo studio è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (81571770, 81771925, 81861128001).

In questo protocollo, i topi maschi C57Bl/6 sono stati ottenuti dall'Istituto di Animali da Laboratorio dell'Accademia di Scienze Mediche del Sichuan e dall'Ospedale Popolare Provinciale del Sichuan. Tutte le procedure di cura e sperimentale per gli animali sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee dell'Università di Electronic Science and Technology of China.
1. Privazione monoculare (MD) al giorno postnatale 28 nei topi
<ol><li>Mettere gli utensili chirurgici, ...

<ol>
	<li>Hubel, D. H., Wiesel, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+monocular+deprivation+in+kittens.">Effects of monocular deprivation in kittens.</a> Naunyn-Schmiedebergs Archiv f&#252;r experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 248 (6), 492-497 (1964).</li><li>Daw, N. W., Fox, K., Sato, H., Czepita, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+period+for+monocular+deprivation+in+the+cat+visual+cortex.">Critical period for monocular deprivation in the cat visual cortex.</a> Journal of Neurophysiology. 67 (1), 197-202 (1992).</li><li>Guire, E. S., Lickey, M. E., Gordon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+period+for+the+monocular+deprivation+effect+in+rats:+assessment+with+sweep+visually+evoked+potentials.">Critical period for the monocular deprivation effect in rats: assessment with sweep visually evoked potentials.</a> Journal of Neurophysiology. 81 (1), 121-128 (1999).</li><li>Wang, L., Sarnaik, R., Rangarajan, K. V., Liu, X., Cang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+receptive+field+properties+of+neurons+in+the+superficial+superior+colliculus+of+the+mouse.">Visual receptive field properties of neurons in the superficial superior colliculus of the mouse.</a> Journal of Neuroscience. 30 (49), 16573-16584 (2010).</li><li>Niell, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Types,+circuits,+and+receptive+fields+in+the+mouse+visual+cortex.">Cell Types, circuits, and receptive fields in the mouse visual cortex.</a> Annual Review of Neuroscience. 38 (1), 413-431 (2015).</li><li>Lee, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+specific+interneurons+improves+V1+feature+selectivity+and+visual+perception.">Activation of specific interneurons improves V1 feature selectivity and visual perception.</a> Nature. 488 (8), 379-383 (2012).</li><li>Cossell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+organization+of+excitatory+synaptic+strength+in+primary+visual+cortex.">Functional organization of excitatory synaptic strength in primary visual cortex.</a> Nature. 518 (2), 399-403 (2015).</li><li>Lacaruso, M. F., Gasler, L. T., Hofer, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+organization+of+visual+space+in+primary+visual+cortex.">Synaptic organization of visual space in primary visual cortex.</a> Nature. 547 (7), 449-452 (2017).</li><li>Metin, C., Godement, P., Imbert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+primary+visual+cortex+in+the+mouse:+Receptive+field+properties+and+functional+organization.">The primary visual cortex in the mouse: Receptive field properties and functional organization.</a> Experimental Brain Research. 69 (3), 594-612 (1988).</li><li>Marshel, J. H., Garrett, M. E., Nauhaus, I., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+specialization+of+seven+mouse+visual+cortical+areas.">Functional specialization of seven mouse visual cortical areas.</a> Neuron. 72 (6), 1040-1054 (2011).</li><li>Gordon, J. A., Stryker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+plasticity+of+binocular+responses+in+the+primary+visual+cortex+of+the+mouse.">Experience-dependent plasticity of binocular responses in the primary visual cortex of the mouse.</a> The Journal of Neuroscience. 16 (10), 3274-3286 (1996).</li><li>McGee, A. W., Yang, Y., Fischer, Q. S., Daw, N. W., Strittmatter, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-driven+plasticity+of+visual+cortex+limited+by+myelin+and+Nogo+receptor.">Experience-driven plasticity of visual cortex limited by myelin and Nogo receptor.</a> Science. 309 (5744), 2222-2226 (2005).</li><li>Sawtell, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptor-dependent+ocular+dominance+plasticity+in+adult+visual+cortex.">NMDA receptor-dependent ocular dominance plasticity in adult visual cortex.</a> Neuron. 38 (6), 977-985 (2003).</li><li>Hofer, S. B., Mrsic-Flogel, T. D., Bonhoeffer, T., Hubener, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+experience+enhances+plasticity+in+adult+visual+cortex.">Prior experience enhances plasticity in adult visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 9 (12), 127-132 (2006).</li><li>Crozier, R. A., Wang, Y., Liu, C., Bear, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deprivation-induced+synaptic+depression+by+distinct+mechanisms+in+different+layers+of+mouse+visual+cortex.">Deprivation-induced synaptic depression by distinct mechanisms in different layers of mouse visual cortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (4), 1383-1388 (2007).</li><li>Tagawa, Y., Kanold, P. O., Majdan, M., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+periods+of+functional+ocular+dominance+plasticity+in+mouse+visual+cortex.">Multiple periods of functional ocular dominance plasticity in mouse visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 8 (3), 380-388 (2005).</li><li>Lickey, M. E., Pham, T. A., Gordon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swept+contrast+visual+evoked+potentials+and+their+plasticity+following+monocular+deprivation+in+mice.">Swept contrast visual evoked potentials and their plasticity following monocular deprivation in mice.</a> Vision Research. 44, 3381-3387 (2004).</li><li>Cang, J., Kalatsky, V. A., Lowel, S., Stryker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+the+intrinsic+signal+as+a+measure+of+cortical+plasticity+in+the+mouse.">Optical imaging of the intrinsic signal as a measure of cortical plasticity in the mouse.</a> Vision Neuroscience. 22 (5), 685-691 (2005).</li><li>Khan, I. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+different+suturing+techniques+for+cystotomy+closure+in+canines.">Evaluation of different suturing techniques for cystotomy closure in canines.</a> Journal of Animal &amp; Plant Sciences. 23 (4), 981-985 (2013).</li><li>Weisman, D. L., Smeak, D. D., Birchard, S. J., Zweigart, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+continuous+suture+pattern+with+a+simple+interrupted+pattern+for+enteric+closure+in+dogs+and+cats:+83+cases+(1991-1997).">Comparison of a continuous suture pattern with a simple interrupted pattern for enteric closure in dogs and cats: 83 cases (1991-1997).</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 214 (10), 1507-1510 (1999).</li><li>Heneghan, C. P. H., Thornton, C., Navaratnarajah, M., Jones, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+isoflurane+on+the+auditory+evoked+response+in+man.">Effect of isoflurane on the auditory evoked response in man.</a> BJA: British Journal of Anaesthesia. 59 (3), 277-282 (1987).</li><li>Mitzdorf, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+source-density+method+and+application+in+cat+cerebral+cortex:+investigation+of+evoked+potentials+and+EEG+phenomenal.">Current source-density method and application in cat cerebral cortex: investigation of evoked potentials and EEG phenomenal.</a> Physiological Reviews. 65 (1), 37-100 (1985).</li></ol>

Vi presentiamo un protocollo dettagliato per MD e la misurazione della plasticità OD per singola unità di registrazione. Questo protocollo è ampiamente utilizzato nelle neuroscienze visive. Anche se il protocollo MD non è complicato, ci sono alcune procedure chirurgiche critiche che devono essere seguite con attenzione. In primo luogo, ci sono due dettagli importanti che garantiscono la qualità delle cuciture. La sutura è sufficientemente stabile se i punti sono concentrati nella parte mediale della palpebra. Inolt...

La privazione visiva monoculare è un eccellente paradigma sperimentale per esaminare la plasticità V1. Per studiare l'importanza dell'esperienza visiva nello sviluppo neurale, David Hubel e Torsten Wiesel1,2 gattini privati della visione normale in un occhio in vari punti temporali e per diversi periodi di tempo. Hanno poi osservato i cambiamenti nell'intensità di risposta in V1 per gli occhi privati e non privati. I loro risultati hanno mostrato un numero anormalmente basso di neuroni che reagiscono all'occhio che era stato suturato chiuso nei primi tre mesi. Tuttavia, le risposte dei neuroni nei gattini sono rimaste identiche sotto tutti gli aspetti a quelle dell'occhio di un gatto adulto normale che è stato suturato chiuso per un anno, e i gattini non si sono ripresi. La MD nei gatti adulti non può indurre la plasticità OD. Pertanto, l'impatto dell'esperienza visiva sul cablaggio V1 è forte durante una breve fase di sviluppo ben definita, prima e dopo la quale gli stessi stimoli hanno meno influenza. Tale fase di maggiore suscettibilità all'input visivo è nota come periodo critico nella corteccia visiva.
Anche se il topo è un animale notturno, i singoli neuroni nel topo V1 hanno proprietà simili ai neuroni presenti nei gatti3,4,5. Negli ultimi anni, con il rapido sviluppo della tecnologia transgenica, un numero crescente di studi in neuroscienze visive ha utilizzato i topi come modello sperimentale6,7,8. Negli studi visivi sui topi, i neuroscienziati usano mutanti e linee di topo da urlo, che consentono il controllo sulla composizione genetica dei topi. Anche se i topi V1 mancano di colonne OD, singoli neuroni nella zona binoculare V1 mostrano proprietà OD significative. Ad esempio, la maggior parte delle cellule risponde più fortemente alla stimolazione contralaterale che alla stimolazione ipsilaterale. La chiusura temporanea di un occhio durante il periodo critico induce un cambiamento significativo nella distribuzione dell'indice OD9,10,11. Pertanto, MD può essere utilizzato per stabilire un modello di plasticità OD per studiare come i geni coinvolti nei disturbi dello sviluppo neurale influenzano la plasticità corticale in vivo.
Qui, introduciamo un metodo sperimentale per MD e suggeriamo un metodo comunemente usato (registrazione elettrofisiologica) per analizzare il cambiamento nella plasticità OD durante la privazione visiva monoculare. Il metodo è stato ampiamente utilizzato in molti laboratori per più di 20 anni12,13,14,15,16. Ci sono altri metodi utilizzati per misurare la plasticità OD pure, come la registrazione cronica visual e evoked potential (VEP)17, e l'imaging ottico intrinseco (IOI)18. Il vantaggio significativo di questo metodo acuto è che è facile da seguire e i risultati sono straordinariamente affidabili.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>502 glue</td>
			<td>M&#38;G Chenguang Stationery Co., Ltd.</td>
			<td>AWG97028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquizition card</td>
			<td>National Instument</td>
			<td>PCI-6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>G-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplifier</td>
			<td>A-M system</td>
			<td>Model 1800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine</td>
			<td>Aladdin Bio-Chem Technology Co., Ltd</td>
			<td>A135946-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Stereotaxic Apparatus</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>68001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cohan-Vannas spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Contact Lenses Solutions</td>
			<td>Beijing Dr. Lun Eye Care Products Co., Ltd.</td>
			<td>GM17064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Henan Guangderun Medical Instruments Co.,Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine needle holder</td>
			<td>SuZhou Stronger Medical Instruments Co.,Ltd</td>
			<td>CZQ1370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>53320A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>53072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>#5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Stryker</td>
			<td>TP 700 T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illuminator</td>
			<td>Motic China Group Co., Ltd.</td>
			<td>MLC-150C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>R510-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LCD monitor</td>
			<td>Philips (China) Investment Co., Ltd.</td>
			<td>39PHF3251/T3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>SOPTOP</td>
			<td>SZMT1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noninvasive Vital Signs Monitor</td>
			<td>Mouseox</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil hydraulic micromanipulator</td>
			<td>NARISHIGE International Ltd.</td>
			<td>PC-5N06022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petrolatum Eye Gel</td>
			<td>Dezhou Yile Disinfection Technology Co., Ltd.</td>
			<td>17C801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spike2</td>
			<td>Cambridge Electronic Design, Cambridge, UK</td>
			<td>Spike2 Version 9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>54010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>54002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Needle</td>
			<td>Ningbo Medical Co.,Ltd</td>
			<td>3/8 arc 2.5*8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten Electrode</td>
			<td>FHC, Inc</td>
			<td>L504-01B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylocaine</td>
			<td>Huaqing</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity measurement in the mouse primary visual cortex

La privazione visiva monoculare è un eccellente paradigma sperimentale per indurre la plasticità della risposta corticale visiva primaria. In generale, la risposta della corteccia all'occhio contralaterale a uno stimolo è molto più forte della risposta dell'occhio ipsilaterale nel segmento binoculare della corteccia visiva primaria del topo (V1). Durante il periodo critico dei mammiferi, suturare l'occhio contralaterale si tradurrà in una rapida perdita di reattività delle cellule V1 alla stimolazione oculare contralaterale. Con il continuo sviluppo di tecnologie transgeniche, sempre più studi utilizzano topi transgenici come modelli sperimentali per esaminare gli effetti di specifici geni sulla plasticità della dominanza oculare (OD). In questo studio, introduciamo protocolli dettagliati per la privazione visiva monoculare e calcoliamo il cambiamento nella plasticità OD nel mouse V1. Dopo la deprivazione monoculare (MD) per 4 giorni durante il periodo critico, vengono misurate le curve di accordatura dell'orientamento di ogni neurone e le curve di accordatura dei neuroni di strato quattro in V1 vengono confrontate tra la stimolazione degli occhi ipsilaterali e contralaterale. L'indice di distorsione cotralaterale (CBI) può essere calcolato utilizzando il punteggio OD oculare di ogni cella per indicare il grado di plasticità OD. Questa tecnica sperimentale è importante per studiare i meccanismi neurali della plasticità OD durante il periodo critico e per esaminare i ruoli di geni specifici nello sviluppo neurale. La limitazione principale è che lo studio acuto non può studiare il cambiamento nella plasticità neurale dello stesso topo in un momento diverso.

I risultati sperimentali qui descritti consentono misurazioni di plasticità MD e OD di successo da un topo privato e non privo durante il periodo critico (P19-P32). Nella Figura 1 viene illustrato come eseguire registrazioni di unità singole nello strato 4 di V1 la zona binoculare per confrontare le risposte nell'occhio ipsilaterale e contralaterale 4 giorni dopo MD. La figura 2 mostra le misurazioni di sintonizzazione dei picchi e dell'orientamento per stimol...

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Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex

Qui, presentiamo protocolli dettagliati per la deprivazione visiva monoculare e l'analisi della plasticità della dominanza oculare, che sono metodi importanti per studiare i meccanismi neurali della plasticità visiva durante il periodo critico e gli effetti di geni specifici su sviluppo visivo.

Deprivazione visiva monoculare e misurazione della plasticità della dominanza oculare nella Corteccia visiva primaria del mouse

Monocular visual deprivation is an excellent experimental paradigm to induce primary visual cortical response plasticity. In general, the response of the ...

La privazione visiva monoculare è un eccellente protocollo sperimentale per indurre la plasticità della risposta corticale visiva primaria. Normalmente, i neuroni nel segmento binoculare della corteccia visiva primaria nel topo rispondono circa il doppio della stimolazione dell'occhio contralaterale rispetto all'occhio ipsilaterale. Tuttavia, suturando chiuso l'occhio contralaterale durante il periodo critico per la plasticità dominanza oculare si traducono nella rapida perdita di reattività da parte dei neuroni V1 alla stimolazione oculare contralaterale e anche seguita da un successivo aumento della risposta all'occhio ipsilaterale.Qui, introduciamo il protocollo sperimentale per la deprivazione monoculare e suggeriamo un metodo comunemente usato per analizzare la tendenza nella dominanza oculare durante la privazione visiva. Metti gli strumenti chirurgici in una scatola di alluminio e autoclavati sotto i 120 gradi centigradi per mezz'ora. Preparare la soluzione di agarosio al 2% nel bollitore per il bagno d'acqua e mantenerla a 75 gradi centigradi.Applicare un sottile strato di unguento per gli occhi su entrambi gli occhi. Al microscopio anatomico con illuminazione, suturare le palpebre. Fai circa quattro punti.Creare da due a tre nodi del thread. Applicare tre microlitri di colla ad asciugatura istantanea 502 sulla testa del nodo per aumentare la stabilità del nodo. Quindi tagliare il filo abbastanza corto.Quando il topo è completamente sveglio, posizionalo in una gabbia di attesa separata. Prima della registrazione elettrofisiologia, utilizzare l'isoflurane per anestetizzare il mouse. Rimuovere i punti ed esporre il bulbo oculare.Tagliare con cura la palpebra. Lava gli occhi con soluzioni di lenti a contatto e controlla gli occhi per chiarezza. È possibile utilizzare solo il mouse con buone condizioni dei bulbi oculari.Dopo aver anestetizzato il mouse, posizionare il mouse su una cornice stereotassica. Utilizzare una pastiglia riscaldante per mantenere la temperatura corporea durante tutta la procedura. Applicare l'unguento per gli occhi sulla superficie degli occhi per mantenerlo umido.Rimuovere i capelli del mouse per esporre la sua pelle. Incidere un otto millimetri moltiplicato per otto millimetri di area della pelle tra entrambe le orecchie per esporre il cranio e rimuovere il tessuto del cuoio capelluto. Quindi rimuovere il tessuto connettivo sovrascriente con perossido di idrogeno.Praticare un buco nel cranio sopra il cervelletto. Fissare una piccola vite ossea nel foro come riferimento. Eseguire una piccola craniotomia di un millimetro di diametro nella regione binoculare V1.Rimuovere con cura il frammento di cranio senza ferire il cervello. Coprire la superficie corticale esposta con il 2%di agarosio per evitare l'essiccazione. Fissare un elettrodo di tungsteno sul telaio stereotassico.Posizionare l'elettrodo di tungsteno verticalmente sulla regione V1 binoculare per assicurarsi che le cellule registrate reagiscano a entrambi gli occhi. Lo stimolo è separato di 30 gradi in un blocco casuale. In ogni misurazione sono stati presentati da tre a cinque blocchi.Maschera un occhio con una piastra di plastica non trasparente. Presenta LCD1 da posizionare in 23 centimetri dagli occhi del mouse. Far avanzare lentamente il microelettrodo dal micromanipolatore idraulico dell'olio.Interrompere l'avanzamento segnale ad alto rapporto di rumore del segnale quando l'elettrodo è avanzato allo strato quattro e iniziare la misurazione. Amplificamo le attività di spike a un fattore 1.000 e lo filtriamo da 300 a 10 kilohertz e poi lo assaggiamo a 40 kilohertz. Quindi mascherare l'altro occhio e misurare la risposta dell'occhio contralaterale.I segnali misurati da singoli elettrodi sono attività della popolazione. Utilizzare il software per separare picchi di celle diverse. Per prima cosa, filtra il segnale da 500 a 5.000 hertz.Impostare due cursori, uno per la deflessione positiva e uno per i picchi di deflessione negativi. Configurare i modelli di picco. Impostare l'area dei modelli in cui viene visualizzata la variazione maggiore tra le diverse classi di picchi.Utilizzare l'analisi dei componenti principali per separarli in cluster. Classificare i picchi di un limite usando l'algoritmo K means. Correlare l'orientamento con la velocità di fuoco a picco e tracciare le curve di regolazione dell'orientamento per gli occhi ipsilateri e contralaterali.Quindi calcolare l'indice OD per le singole celle che rappresenta la risposta contralaterale e ipsilaterale Assegnare un punteggio OD per ogni cella in base all'indice OD. Calcolare l'indice di distorsione contralaterale in base alla formula. Questo diagramma mostra le curve di regolazione dell'orientamento dell'occhio ipsilaterale e contralaterale nel topo monocolare privato e non privato.Questo protocollo consente di avere successo nella privazione visiva monoculare e nella misurazione della dominanza oculare da un topo privato e non privato in un periodo critico. Vi abbiamo appena mostrato come realizzare questo esperimento e abbiamo analizzato il cambiamento del dominio oculare durante la privazione visiva. Durante l'esperimento, è importante evitare l'infezione nel processo di sutura e l'interazione durante la registrazione elettrofisiologia.Grazie per aver guardato il nostro video.

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Aside from vitamins and antioxidants recommended by the Age-Related Eye Disease Study, there is no effective therapy for &#34;dry,&#34;&#160;or atrophic ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

Induzione e convalida della senescenza cellulare in cellule umane primarie

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Visualizzare il nodo e la piastra Notochordal In embrioni di topo Gastrulating mediante microscopia elettronica a scansione e intero Monte immunofluorescenza

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Visualizzazione del solco superiore oculare durante l'embriogenesi Danio rerio

Congenital ocular coloboma is a genetic disorder that is typically observed as a cleft in the inferior aspect of the eye resulting from incomplete choroid ...