Name: monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity measurement in the mouse primary visual cortex
Uploaded: 2020-02-08T15:00:00
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이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단에 의해 지원 되었다 (81571770, 81771925, 81861128001).

이 프로토콜에서, 남성 C57Bl/6 마우스는 사천 의학 아카데미와 쓰촨 성 인민 병원의 실험실 동물 연구소에서 얻은. 모든 동물 관리 및 실험 절차는 중국 전자 과학 기술 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인되었습니다.
1. 생후 28일째 에 단안 박탈 (MD) 마우스
<ol><li>수술 도구, 봉합바늘 (직경 0.25 mm, 문자열 직경 0.07 mm) 및 면봉을 알루미늄 상자에 넣고 0.5 시간 동?...

<ol>
	<li>Hubel, D. H., Wiesel, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+monocular+deprivation+in+kittens.">Effects of monocular deprivation in kittens.</a> Naunyn-Schmiedebergs Archiv f&#252;r experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 248 (6), 492-497 (1964).</li><li>Daw, N. W., Fox, K., Sato, H., Czepita, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+period+for+monocular+deprivation+in+the+cat+visual+cortex.">Critical period for monocular deprivation in the cat visual cortex.</a> Journal of Neurophysiology. 67 (1), 197-202 (1992).</li><li>Guire, E. S., Lickey, M. E., Gordon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+period+for+the+monocular+deprivation+effect+in+rats:+assessment+with+sweep+visually+evoked+potentials.">Critical period for the monocular deprivation effect in rats: assessment with sweep visually evoked potentials.</a> Journal of Neurophysiology. 81 (1), 121-128 (1999).</li><li>Wang, L., Sarnaik, R., Rangarajan, K. V., Liu, X., Cang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+receptive+field+properties+of+neurons+in+the+superficial+superior+colliculus+of+the+mouse.">Visual receptive field properties of neurons in the superficial superior colliculus of the mouse.</a> Journal of Neuroscience. 30 (49), 16573-16584 (2010).</li><li>Niell, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Types,+circuits,+and+receptive+fields+in+the+mouse+visual+cortex.">Cell Types, circuits, and receptive fields in the mouse visual cortex.</a> Annual Review of Neuroscience. 38 (1), 413-431 (2015).</li><li>Lee, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+specific+interneurons+improves+V1+feature+selectivity+and+visual+perception.">Activation of specific interneurons improves V1 feature selectivity and visual perception.</a> Nature. 488 (8), 379-383 (2012).</li><li>Cossell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+organization+of+excitatory+synaptic+strength+in+primary+visual+cortex.">Functional organization of excitatory synaptic strength in primary visual cortex.</a> Nature. 518 (2), 399-403 (2015).</li><li>Lacaruso, M. F., Gasler, L. T., Hofer, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+organization+of+visual+space+in+primary+visual+cortex.">Synaptic organization of visual space in primary visual cortex.</a> Nature. 547 (7), 449-452 (2017).</li><li>Metin, C., Godement, P., Imbert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+primary+visual+cortex+in+the+mouse:+Receptive+field+properties+and+functional+organization.">The primary visual cortex in the mouse: Receptive field properties and functional organization.</a> Experimental Brain Research. 69 (3), 594-612 (1988).</li><li>Marshel, J. H., Garrett, M. E., Nauhaus, I., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+specialization+of+seven+mouse+visual+cortical+areas.">Functional specialization of seven mouse visual cortical areas.</a> Neuron. 72 (6), 1040-1054 (2011).</li><li>Gordon, J. A., Stryker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+plasticity+of+binocular+responses+in+the+primary+visual+cortex+of+the+mouse.">Experience-dependent plasticity of binocular responses in the primary visual cortex of the mouse.</a> The Journal of Neuroscience. 16 (10), 3274-3286 (1996).</li><li>McGee, A. W., Yang, Y., Fischer, Q. S., Daw, N. W., Strittmatter, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-driven+plasticity+of+visual+cortex+limited+by+myelin+and+Nogo+receptor.">Experience-driven plasticity of visual cortex limited by myelin and Nogo receptor.</a> Science. 309 (5744), 2222-2226 (2005).</li><li>Sawtell, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptor-dependent+ocular+dominance+plasticity+in+adult+visual+cortex.">NMDA receptor-dependent ocular dominance plasticity in adult visual cortex.</a> Neuron. 38 (6), 977-985 (2003).</li><li>Hofer, S. B., Mrsic-Flogel, T. D., Bonhoeffer, T., Hubener, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+experience+enhances+plasticity+in+adult+visual+cortex.">Prior experience enhances plasticity in adult visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 9 (12), 127-132 (2006).</li><li>Crozier, R. A., Wang, Y., Liu, C., Bear, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deprivation-induced+synaptic+depression+by+distinct+mechanisms+in+different+layers+of+mouse+visual+cortex.">Deprivation-induced synaptic depression by distinct mechanisms in different layers of mouse visual cortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (4), 1383-1388 (2007).</li><li>Tagawa, Y., Kanold, P. O., Majdan, M., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+periods+of+functional+ocular+dominance+plasticity+in+mouse+visual+cortex.">Multiple periods of functional ocular dominance plasticity in mouse visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 8 (3), 380-388 (2005).</li><li>Lickey, M. E., Pham, T. A., Gordon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swept+contrast+visual+evoked+potentials+and+their+plasticity+following+monocular+deprivation+in+mice.">Swept contrast visual evoked potentials and their plasticity following monocular deprivation in mice.</a> Vision Research. 44, 3381-3387 (2004).</li><li>Cang, J., Kalatsky, V. A., Lowel, S., Stryker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+the+intrinsic+signal+as+a+measure+of+cortical+plasticity+in+the+mouse.">Optical imaging of the intrinsic signal as a measure of cortical plasticity in the mouse.</a> Vision Neuroscience. 22 (5), 685-691 (2005).</li><li>Khan, I. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+different+suturing+techniques+for+cystotomy+closure+in+canines.">Evaluation of different suturing techniques for cystotomy closure in canines.</a> Journal of Animal &amp; Plant Sciences. 23 (4), 981-985 (2013).</li><li>Weisman, D. L., Smeak, D. D., Birchard, S. J., Zweigart, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+continuous+suture+pattern+with+a+simple+interrupted+pattern+for+enteric+closure+in+dogs+and+cats:+83+cases+(1991-1997).">Comparison of a continuous suture pattern with a simple interrupted pattern for enteric closure in dogs and cats: 83 cases (1991-1997).</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 214 (10), 1507-1510 (1999).</li><li>Heneghan, C. P. H., Thornton, C., Navaratnarajah, M., Jones, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+isoflurane+on+the+auditory+evoked+response+in+man.">Effect of isoflurane on the auditory evoked response in man.</a> BJA: British Journal of Anaesthesia. 59 (3), 277-282 (1987).</li><li>Mitzdorf, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+source-density+method+and+application+in+cat+cerebral+cortex:+investigation+of+evoked+potentials+and+EEG+phenomenal.">Current source-density method and application in cat cerebral cortex: investigation of evoked potentials and EEG phenomenal.</a> Physiological Reviews. 65 (1), 37-100 (1985).</li></ol>

우리는 MD에 대한 상세한 프로토콜을 제시하고 단일 단위 기록에 의해 OD 가소성을 측정합니다. 이 프로토콜은 시각 신경 과학에 널리 사용됩니다. MD 프로토콜은 복잡하지 않지만 신중하게 따라야하는 몇 가지 중요한 수술 절차가 있습니다. 첫째, 스티치의 품질을 보장하는 두 가지 중요한 세부 사항이 있습니다. 바늘이 눈꺼풀의 내측 부분에 집중되어있는 경우 봉합사는 충분히 안정적입니다. 또?...

단안 시각적 박탈은 V1 가소성을 검사하는 우수한 실험 패러다임입니다. 신경 발달에 있는 시각적 경험의 중요성을 공부하기 위하여, 데이비드 Hubel와 Torsten Wiesel1,2 는 다양한 시간 시점에서 그리고 시간의 다양한 기간에 대하여 한 쪽 눈에서 정상 시력의 박탈된 새끼 고양이. 그(것)들은 박탈되고 박탈되지 않은 눈을 위한 V1에 있는 반응 강렬에 있는 변경을 관찰했습니다. 그들의 결과는 처음 3 달에서 닫힌 봉합된 눈에 반응하는 신경의 비정상적으로 낮은 수를 보여주었습니다. 그러나, 새끼 고양이의 뉴런의 반응은 1 년 동안 봉합 된 일반 성인 고양이의 눈과 모든 면에서 동일하게 유지되었으며 새끼 고양이는 회복되지 않았습니다. 성인 고양이의 MD는 OD 가소성을 유발할 수 없습니다. 따라서 V1 배선에 대한 시각적 경험의 영향은 동일한 자극이 덜 영향을 미치기 전과 후에 개발의 짧고 잘 정의된 단계에서 강합니다. 시각적 입력에 대한 감수성의 이러한 단계는 시각적 피질에서 중요한 기간으로 알려져 있다.
마우스는 야행성 동물이지만, 마우스 V1의 개별 뉴런은 고양이3,4,5에서발견되는 뉴런과 유사한 특성을 가지고 있다. 최근에는 형질전환 기술의 급속한 발전과 함께 시각 신경 과학에 대한 연구가 증가함에 따라 마우스를 실험 모델6,7,8로사용하고 있다. 마우스 시각 연구에서 신경 과학자들은 돌연변이와 마우스 라인을 녹아웃하여 마우스의 유전 적 구성을 제어 할 수 있습니다. 마우스 V1에는 OD 컬럼이 없지만 V1 쌍안경 영역의 단일 뉴런은 상당한 OD 특성을 보여줍니다. 예를 들어, 대부분의 세포는 입시측 자극보다 반대측 자극에 더 강하게 반응합니다. 임계 기간 동안 한쪽 눈을 일시적으로 폐쇄하면 OD 지수분포9,10,11에서상당한 변화를 유도한다. 따라서, MD는 신경 발달 장애에 관여하는 유전자가 생체 내에서 피질 가소성에 어떻게 영향을 미치는지 조사하기 위해 OD 가소성 모델을 확립하는 데 사용될 수 있다.
여기서, MD에 대한 실험방법을 소개하고, 단안시각박탈 시 OD 가소성의 변화를 분석하기 위해 일반적으로 사용되는 방법(전기생리학적 기록)을 제안한다. 이 방법은 20 년 이상 많은 실험실에서 널리 사용되어 왔다12,13,14,15,16. 만성 영상 유발 전위(VEP)기록(VEP) 기록(17)및 본질광학 이미징(IOI)18과같은 OD 가소성을 측정하는 데 사용되는 다른 방법도 있다. 이 급성 방법의 중요한 장점은 따라하기 쉽고 결과가 현저하게 신뢰할 수 있다는 것입니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>502 glue</td>
			<td>M&#38;G Chenguang Stationery Co., Ltd.</td>
			<td>AWG97028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquizition card</td>
			<td>National Instument</td>
			<td>PCI-6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>G-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplifier</td>
			<td>A-M system</td>
			<td>Model 1800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine</td>
			<td>Aladdin Bio-Chem Technology Co., Ltd</td>
			<td>A135946-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Stereotaxic Apparatus</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>68001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cohan-Vannas spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Contact Lenses Solutions</td>
			<td>Beijing Dr. Lun Eye Care Products Co., Ltd.</td>
			<td>GM17064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Henan Guangderun Medical Instruments Co.,Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine needle holder</td>
			<td>SuZhou Stronger Medical Instruments Co.,Ltd</td>
			<td>CZQ1370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>53320A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>53072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>#5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Stryker</td>
			<td>TP 700 T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illuminator</td>
			<td>Motic China Group Co., Ltd.</td>
			<td>MLC-150C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>R510-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LCD monitor</td>
			<td>Philips (China) Investment Co., Ltd.</td>
			<td>39PHF3251/T3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>SOPTOP</td>
			<td>SZMT1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noninvasive Vital Signs Monitor</td>
			<td>Mouseox</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil hydraulic micromanipulator</td>
			<td>NARISHIGE International Ltd.</td>
			<td>PC-5N06022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petrolatum Eye Gel</td>
			<td>Dezhou Yile Disinfection Technology Co., Ltd.</td>
			<td>17C801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spike2</td>
			<td>Cambridge Electronic Design, Cambridge, UK</td>
			<td>Spike2 Version 9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>54010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>54002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Needle</td>
			<td>Ningbo Medical Co.,Ltd</td>
			<td>3/8 arc 2.5*8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten Electrode</td>
			<td>FHC, Inc</td>
			<td>L504-01B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylocaine</td>
			<td>Huaqing</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity measurement in the mouse primary visual cortex

단안 시각적 박탈은 1 차적인 시각적 피질 반응 가소성을 유도하는 우수한 실험 패러다임입니다. 일반적으로, 자극에 대한 반대측 눈에 대한 피질의 반응은 마우스 1차 시각 피질(V1)의 쌍안경 세그먼트에서의 원소 눈의 반응보다 훨씬 강하다. 포유류 임계 기간 동안, 반대쪽 눈을 봉합하는 것은 반대쪽 눈 자극에 V1 세포의 반응성의 급속한 손실을 초래할 것이다. 형질전환 기술의 지속적인 발달로, 점점 더 많은 연구가 안구 우도 (OD) 가소성에 특정 유전자의 효력을 검토하기 위하여 실험적인 모형으로 형질전환 마우스를 이용하고 있습니다. 이 연구에서는 단안 시각 박탈에 대한 자세한 프로토콜을 소개하고 마우스 V1의 OD 가소성의 변화를 계산합니다. 임계 기간 동안 4일 동안 단각 박탈(MD) 후, 각 뉴런의 배향 튜닝 곡선이 측정되고, V1에서 4개의 뉴런층의 튜닝 곡선이 동측 및 반대눈의 자극 과 반대눈의 자극 사이에서 비교된다. 반대편 바이어스 지수(CBI)는 각 셀의 안구 OD 점수를 사용하여 OD 가소성의 정도를 나타내기 위해 계산할 수 있습니다. 이 실험 기술은 중요한 기간 동안 OD 가소성의 신경 메커니즘을 연구하고 신경 발달에서 특정 유전자의 역할을 조사하는 데 중요합니다. 주요 제한은 급성 연구가 다른 시간에 동일한 마우스의 신경 가소성의 변화를 조사 할 수 없다는 것입니다.

여기에 설명된 실험 결과는 중요한 기간 동안 박탈되고 박탈되지 않은 마우스로부터 성공적인 MD 및 OD 가소성 측정을 가능하게 합니다(P19-P32). 도 1은 MD 후 4일 후 의 원소 및 반대쪽 눈의 반응을 비교하기 위한 쌍안경 영역 V1로부터의 층 4에서 단일 단위 기록을 수행하는 방법을 나타낸다. 그림 2는 입시및 반대측 눈을 자극하기 위한 스파이크 정렬 및 ?...

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Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex

여기에서, 우리는 중요한 기간 도중 시각 가소성의 신경 기계장치를 공부하기 위한 중요한 방법인 단안 시각 박탈 및 안구 지배적 가소성 분석을 위한 상세한 프로토콜을 제시하고 특정 유전자의 효력에 시각적 인 개발.

마우스 1 차 적인 시각 피 질에 있는 단안 시각 박탈 및 안구 우세 가소성 측정

Monocular visual deprivation is an excellent experimental paradigm to induce primary visual cortical response plasticity. In general, the response of the ...

단안 시각적 박탈은 1 차적인 시각적 피질 반응 가소성을 유도하는 우수한 실험 프로토콜입니다. 일반적으로, 마우스내 1차 시각 피질의 쌍안경 세그먼트에 있는 뉴런은 ipsilateral 눈과 마찬가지로 모순된 눈의 자극에 약 2배 강하게 반응한다. 그러나, 안구 우도 가소성에 대한 임계 기간 동안 콘트라탈 눈을 종료 봉합은 반대로 눈 자극에 V1 뉴런에 의한 반응의 급속한 손실의 결과 또한 ipsilateral 눈의 반응에 후속 증가에 선행.여기서, 우리는 단안 박탈을 위한 실험 프로토콜을 소개하고 시각적 박탈 도중 안구 지배의 추세를 분석하기 위하여 일반적으로 이용되는 방법을 건의합니다. 수술 도구를 알루미늄 상자에 넣고 섭씨 120도 이하로 반 시간 동안 오토클레이브하십시오. 수조 주전자에 2 % 아가로즈 용액을 준비하고 섭씨 75도에서 유지하십시오.두 눈에 눈 연고의 얇은 층을 적용합니다. 조명을 가진 해부학 현미경의 밑에, 눈꺼풀을 봉합합니다. 약 4 개의 바늘을 만듭니다.스레드의 2~3개의 노드를 만듭니다. 노드의 안정성을 높이기 위해 노드 의 머리에 인스턴트 건조 접착제 502의 세 마이크로 리터를 적용합니다. 그런 다음 스레드를 충분히 짧게 자른다.마우스가 완전히 깨어있을 때 분리 된 유지 케이지에 넣습니다. 전기 생리학적 기록 전에 이소플루란을 사용하여 마우스를 마취하십시오. 바늘을 제거하고 안구를 노출합니다.눈꺼풀을 조심스럽게 다듬습니다. 콘택트렌즈 용액으로 눈을 씻어내고 눈을 확인하여 선명도를 확인합니다. 안구의 상태가 양호한 마우스만 사용할 수 있습니다.마우스를 마취한 후 마우스를 스테레오탁스 프레임에 놓습니다. 가열 패드를 사용하여 시술 내내 체온을 유지합니다. 눈 표면에 눈 연고를 바르면 촉촉하게 유지하십시오.마우스의 머리카락을 제거하여 피부를 노출합니다. 두개골을 드러내고 두피 조직을 제거하기 위해 두 귀 사이에 8 밀리미터의 피부 면적을 곱한 8 밀리미터를 절개하십시오. 그런 다음 과산화수소와 오버리 결합 조직을 제거합니다.소뇌 위의 두개골에 구멍을 뚫습니다. 구멍에 작은 골격 나사를 참조로 고정합니다. V1 쌍안경 영역에서 직경 1mm의 작은 두개골 절제술을 수행합니다.조심스럽게 뇌를 다치게하지 않고 두개골 조각을 제거합니다. 노출된 피질 표면을 2%의 아가로즈로 덮어 건조를 방지합니다. 스테레오탁스 프레임에 텅스텐 전극을 고정합니다.텅스텐 전극을 쌍안경 V1 부위에 수직으로 배치하여 기록 된 세포가 양쪽 눈에 반응하는지 확인합니다. 자극은 무작위 블록에서 30도 구분됩니다. 각 측정에 총 3~5개의 블록이 제시되었다.투명하지 않은 플라스틱 플레이트로 한쪽 눈을 가시합니다. 마우스의 눈에서 23센티미터 에 배치 LCD1을 제시합니다. 오일 유압 마이크로 조작기에 의해 천천히 미세 전극을 진행합니다.전극이 4층으로 진행되고 측정을 시작할 때 높은 신호 잡음 비 신호의 진행을 중지합니다. 스파이크 활동을 1, 000의 비율로 증폭시키고 300에서 10 킬로헤르츠로 필터링한 다음 40 킬로헤르츠에서 샘플링합니다. 그런 다음 다른 눈을 가리고 반대쪽 눈의 반응을 측정합니다.단일 전극으로 측정된 신호는 인구 활동입니다. 소프트웨어를 사용하여 다른 셀의 스파이크를 분리합니다. 먼저 신호를 500내지 5, 000 헤르츠로 필터링한다.두 커서를 설정, 긍정적 인 편향에 대한 하나 와 부정적인 편향 스파이크에 대한 하나. 스파이크 템플릿을 설정합니다. 다양한 스파이크 클래스 간에 가장 큰 변형을 표시하는 템플릿 영역을 설정합니다.주 구성 요소 분석을 사용하여 클러스터로 분리합니다. K수단 알고리즘을 사용하여 경계의 스파이크를 분류합니다. 방향을 스파이크 발사 속도와 상관 관계를 지정하고 ipsilateral 및 반대로 눈을 위한 방향 튜닝 곡선을 플롯합니다.그런 다음 OD 인덱스에 따라 각 셀에 대한 OD 점수를 할당하는 단면 및 ipsilateral 응답을 나타내는 단일 셀에 대한 OD 인덱스를 계산합니다. 수식에 따라 반대 편향 지수를 계산합니다. 이 다이어그램은 단안경 박탈 및 박탈되지 않은 마우스의 입시측 및 단면 눈의 방향 튜닝 곡선을 보여줍니다.이 프로토콜은 중요한 기간에 박탈된 마우스와 박탈되지 않은 마우스로부터 성공적인 단반 적정 박탈 및 안구 지배 측정을 가능하게 합니다. 우리는 방금이 실험을 수행하는 방법을 보여 주었고 시각적 박탈 시 안구 지배의 변화를 분석했습니다. 실험 중, 전기 생리학적 기록 동안 봉합 과정 및 상호 작용에서 감염을 피하는 것이 중요하다.우리의 비디오를 보고 주셔서 감사합니다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

생산 및 선택적으로 형질 도입 기본 희소 돌기 아교 세포 전구체 세포에 렌티 바이러스의 사용을위한<em&gt; 체외</em&gt; 수초 분석

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

연구

발생학

Generating Primary Fibroblast Cultures from Mouse Ear and Tail Tissues

마우스 귀와 꼬리 조직에서 생성 차 섬유 아세포 배양

Primary cells are derived directly from tissue and are thought to be more representative of the physiological state of cells in vivo than established cell ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

Mouse Secondary Palate Fusion의 라이브 이미징

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

해 부 및 Immunofluorescent 얼룩의 버섯 몸과 성인 초파리 melanogaster 두뇌 신경 세포 포토 리셉터

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

부상-유도 노화 및 골격 근육에서 프로그래밍을 Vivo에서 의 평가

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

실시간으로 개발을 시각화 하기 위해 다중 광자 시간 경과 영상: 마이그레이션 Zebrafish 태아 신경 크레스트 셀의 시각화

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

세 인간 Bruch 막의 Ex Vivo 모델에서 망막 안료 상피 세포의 배양

Aside from vitamins and antioxidants recommended by the Age-Related Eye Disease Study, there is no effective therapy for &#34;dry,&#34;&#160;or atrophic ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

유도 및 기본 인간 세포에서 세포 노화의 유효성 검사

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

노드 및 스캐닝 전자 현미경 검사 법, 면역 형광 산 전체를 사용 하 여 Gastrulating 마우스 배아에서 Notochordal 접시를 시각화

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Danio rerio Embryogenesis 동안 우수한 눈 고 랑의 시각화

Congenital ocular coloboma is a genetic disorder that is typically observed as a cleft in the inferior aspect of the eye resulting from incomplete choroid ...