Name: monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity measurement in the mouse primary visual cortex
Uploaded: 2020-02-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex at JoVE.com

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81571770, 81771925, 81861128001) tarafından desteklenmiştir.

Bu protokolde Erkek C57Bl/6 fareler, Sichuan Tıp Bilimleri Akademisi Laboratuvar Hayvanları Enstitüsü ve Sichuan İl Halk Hastanesi'nden temin edilmiştir. Tüm hayvan bakımı ve deneysel prosedürler Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi, Çin Elektronik Bilimler ve Teknoloji Üniversitesi tarafından onaylandı.
1. Farelerde doğum sonrası 28 günde monoküler yoksunluk (MD)
<ol><li>Cerrahi aletler, dikiş iğnesi (0,25 mm çap, dize çapı 0,07 mm) ve pamuklu bezleri alüminy...

<ol>
	<li>Hubel, D. H., Wiesel, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+monocular+deprivation+in+kittens.">Effects of monocular deprivation in kittens.</a> Naunyn-Schmiedebergs Archiv f&#252;r experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 248 (6), 492-497 (1964).</li><li>Daw, N. W., Fox, K., Sato, H., Czepita, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+period+for+monocular+deprivation+in+the+cat+visual+cortex.">Critical period for monocular deprivation in the cat visual cortex.</a> Journal of Neurophysiology. 67 (1), 197-202 (1992).</li><li>Guire, E. S., Lickey, M. E., Gordon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+period+for+the+monocular+deprivation+effect+in+rats:+assessment+with+sweep+visually+evoked+potentials.">Critical period for the monocular deprivation effect in rats: assessment with sweep visually evoked potentials.</a> Journal of Neurophysiology. 81 (1), 121-128 (1999).</li><li>Wang, L., Sarnaik, R., Rangarajan, K. V., Liu, X., Cang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+receptive+field+properties+of+neurons+in+the+superficial+superior+colliculus+of+the+mouse.">Visual receptive field properties of neurons in the superficial superior colliculus of the mouse.</a> Journal of Neuroscience. 30 (49), 16573-16584 (2010).</li><li>Niell, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Types,+circuits,+and+receptive+fields+in+the+mouse+visual+cortex.">Cell Types, circuits, and receptive fields in the mouse visual cortex.</a> Annual Review of Neuroscience. 38 (1), 413-431 (2015).</li><li>Lee, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+specific+interneurons+improves+V1+feature+selectivity+and+visual+perception.">Activation of specific interneurons improves V1 feature selectivity and visual perception.</a> Nature. 488 (8), 379-383 (2012).</li><li>Cossell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+organization+of+excitatory+synaptic+strength+in+primary+visual+cortex.">Functional organization of excitatory synaptic strength in primary visual cortex.</a> Nature. 518 (2), 399-403 (2015).</li><li>Lacaruso, M. F., Gasler, L. T., Hofer, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+organization+of+visual+space+in+primary+visual+cortex.">Synaptic organization of visual space in primary visual cortex.</a> Nature. 547 (7), 449-452 (2017).</li><li>Metin, C., Godement, P., Imbert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+primary+visual+cortex+in+the+mouse:+Receptive+field+properties+and+functional+organization.">The primary visual cortex in the mouse: Receptive field properties and functional organization.</a> Experimental Brain Research. 69 (3), 594-612 (1988).</li><li>Marshel, J. H., Garrett, M. E., Nauhaus, I., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+specialization+of+seven+mouse+visual+cortical+areas.">Functional specialization of seven mouse visual cortical areas.</a> Neuron. 72 (6), 1040-1054 (2011).</li><li>Gordon, J. A., Stryker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+plasticity+of+binocular+responses+in+the+primary+visual+cortex+of+the+mouse.">Experience-dependent plasticity of binocular responses in the primary visual cortex of the mouse.</a> The Journal of Neuroscience. 16 (10), 3274-3286 (1996).</li><li>McGee, A. W., Yang, Y., Fischer, Q. S., Daw, N. W., Strittmatter, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-driven+plasticity+of+visual+cortex+limited+by+myelin+and+Nogo+receptor.">Experience-driven plasticity of visual cortex limited by myelin and Nogo receptor.</a> Science. 309 (5744), 2222-2226 (2005).</li><li>Sawtell, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptor-dependent+ocular+dominance+plasticity+in+adult+visual+cortex.">NMDA receptor-dependent ocular dominance plasticity in adult visual cortex.</a> Neuron. 38 (6), 977-985 (2003).</li><li>Hofer, S. B., Mrsic-Flogel, T. D., Bonhoeffer, T., Hubener, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+experience+enhances+plasticity+in+adult+visual+cortex.">Prior experience enhances plasticity in adult visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 9 (12), 127-132 (2006).</li><li>Crozier, R. A., Wang, Y., Liu, C., Bear, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deprivation-induced+synaptic+depression+by+distinct+mechanisms+in+different+layers+of+mouse+visual+cortex.">Deprivation-induced synaptic depression by distinct mechanisms in different layers of mouse visual cortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (4), 1383-1388 (2007).</li><li>Tagawa, Y., Kanold, P. O., Majdan, M., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+periods+of+functional+ocular+dominance+plasticity+in+mouse+visual+cortex.">Multiple periods of functional ocular dominance plasticity in mouse visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 8 (3), 380-388 (2005).</li><li>Lickey, M. E., Pham, T. A., Gordon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swept+contrast+visual+evoked+potentials+and+their+plasticity+following+monocular+deprivation+in+mice.">Swept contrast visual evoked potentials and their plasticity following monocular deprivation in mice.</a> Vision Research. 44, 3381-3387 (2004).</li><li>Cang, J., Kalatsky, V. A., Lowel, S., Stryker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+the+intrinsic+signal+as+a+measure+of+cortical+plasticity+in+the+mouse.">Optical imaging of the intrinsic signal as a measure of cortical plasticity in the mouse.</a> Vision Neuroscience. 22 (5), 685-691 (2005).</li><li>Khan, I. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+different+suturing+techniques+for+cystotomy+closure+in+canines.">Evaluation of different suturing techniques for cystotomy closure in canines.</a> Journal of Animal &amp; Plant Sciences. 23 (4), 981-985 (2013).</li><li>Weisman, D. L., Smeak, D. D., Birchard, S. J., Zweigart, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+continuous+suture+pattern+with+a+simple+interrupted+pattern+for+enteric+closure+in+dogs+and+cats:+83+cases+(1991-1997).">Comparison of a continuous suture pattern with a simple interrupted pattern for enteric closure in dogs and cats: 83 cases (1991-1997).</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 214 (10), 1507-1510 (1999).</li><li>Heneghan, C. P. H., Thornton, C., Navaratnarajah, M., Jones, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+isoflurane+on+the+auditory+evoked+response+in+man.">Effect of isoflurane on the auditory evoked response in man.</a> BJA: British Journal of Anaesthesia. 59 (3), 277-282 (1987).</li><li>Mitzdorf, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+source-density+method+and+application+in+cat+cerebral+cortex:+investigation+of+evoked+potentials+and+EEG+phenomenal.">Current source-density method and application in cat cerebral cortex: investigation of evoked potentials and EEG phenomenal.</a> Physiological Reviews. 65 (1), 37-100 (1985).</li></ol>

Biz MD ve ölçüm OD plastisite için tek bir birim kayıt ile ayrıntılı bir protokol sıyoruz. Bu protokol görsel nörolojide yaygın olarak kullanılmaktadır. MD protokolü karmaşık olmasa da, dikkatle takip edilmesi gereken bazı kritik cerrahi prosedürler vardır. İlk olarak, dikiş kalitesini sağlayan iki önemli ayrıntı vardır. Dikişler göz kapağının medial kısmında yoğunlaşmışsa dikiş yeterince kararlıdır. Ayrıca, gözün yeniden açılmasını önlemek için düğümün stabilitesini ...

Monoküler görme yoksunluğu V1 plastisiteyi incelemek için mükemmel bir deneysel paradigmadır. Nöral gelişimde görsel deneyimin önemini incelemek için, David Hubel ve Torsten Wiesel1,2 çeşitli zaman noktalarında ve zaman değişen dönemlerde bir göz normal görme yoksun kedi yavruları. Daha sonra v1'de yoksun ve yoksun olmayan gözler için tepki yoğunluğundaki değişiklikleri gözlemlediler. Sonuçları, ilk üç ay içinde kapatılan göze tepki veren anormal derecede düşük sayıda nöron olduğunu gösterdi. Ancak, yavru nöronlar gelen tepkiler bir yıl boyunca kapalı dikişli normal bir yetişkin kedi gözü ile her bakımdan aynı kaldı, ve yavru kurtarıldı değildi. Erişkin kedilerde MD OD plastisite neden olamaz. Bu nedenle, V1 kablolama üzerinde görsel deneyim etkisi geliştirme kısa, iyi tanımlanmış aşamasında güçlüdür, önce ve sonra aynı uyaranların daha az etkisi var. Görsel girişe yatkınlığın arttığı bir evre, görsel kortekste kritik dönem olarak bilinir.
Fare bir nokturnal hayvan olmasına rağmen, fare V1 bireysel nöronlar kedilerde bulunan nöronlar benzer özelliklere sahip3,4,5. Son yıllarda, transgenik teknolojinin hızlı gelişimi ile, görsel nörobilim çalışmaların giderek artan sayıda deneysel bir model olarak fareler kullanmış6,7,8. Fare görsel çalışmalarda, nörologlar farelerin genetik makyaj üzerinde kontrol sağlayan mutantlar ve nakavt fare hatları kullanın. Farelerv1 od kolonları olmamasına rağmen, V1 dürbün bölgesindeki tek nöronlar önemli OD özellikleri göstermektedir. Örneğin, çoğu hücre ipsilateral stimülasyon daha kontralateral stimülasyon daha güçlü yanıt. Kritik dönemde bir gözün geçici olarak kapanması OD indeksdağılımında9,10,11'deönemli bir değişime neden olur. Bu nedenle, MD nöral gelişimsel bozukluklar dahil genlerin in vivo kortikal plastisite nasıl etkilediğini araştırmak için bir OD plastisite modeli kurmak için kullanılabilir.
Burada, MD için deneysel bir yöntem sokulduk ve monoküler görme yoksunluğu sırasında OD plastisitedeki değişimi analiz etmek için yaygın olarak kullanılan bir yöntem (elektrofizyolojik kayıt) öneriyoruz. Yöntem yaygın 20 yılı aşkın bir süredir birçok laboratuvarda12,13,14,15,16için kullanılmaktadır. Kronik görsel uyarılmış potansiyel (VEP) kayıt17ve içsel optik görüntüleme (IOI)18gibi OD plastisite ölçümünde kullanılan diğer yöntemler de vardır. Bu akut yöntemin önemli avantajı takip etmek kolay olmasıdır, ve sonuçlar son derece güvenilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>502 glue</td>
			<td>M&#38;G Chenguang Stationery Co., Ltd.</td>
			<td>AWG97028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquizition card</td>
			<td>National Instument</td>
			<td>PCI-6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>G-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplifier</td>
			<td>A-M system</td>
			<td>Model 1800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine</td>
			<td>Aladdin Bio-Chem Technology Co., Ltd</td>
			<td>A135946-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Stereotaxic Apparatus</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>68001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cohan-Vannas spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Contact Lenses Solutions</td>
			<td>Beijing Dr. Lun Eye Care Products Co., Ltd.</td>
			<td>GM17064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Henan Guangderun Medical Instruments Co.,Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine needle holder</td>
			<td>SuZhou Stronger Medical Instruments Co.,Ltd</td>
			<td>CZQ1370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>53320A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>53072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>#5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Stryker</td>
			<td>TP 700 T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illuminator</td>
			<td>Motic China Group Co., Ltd.</td>
			<td>MLC-150C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>R510-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LCD monitor</td>
			<td>Philips (China) Investment Co., Ltd.</td>
			<td>39PHF3251/T3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>SOPTOP</td>
			<td>SZMT1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noninvasive Vital Signs Monitor</td>
			<td>Mouseox</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil hydraulic micromanipulator</td>
			<td>NARISHIGE International Ltd.</td>
			<td>PC-5N06022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petrolatum Eye Gel</td>
			<td>Dezhou Yile Disinfection Technology Co., Ltd.</td>
			<td>17C801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spike2</td>
			<td>Cambridge Electronic Design, Cambridge, UK</td>
			<td>Spike2 Version 9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>54010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td>
			<td>54002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Needle</td>
			<td>Ningbo Medical Co.,Ltd</td>
			<td>3/8 arc 2.5*8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten Electrode</td>
			<td>FHC, Inc</td>
			<td>L504-01B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylocaine</td>
			<td>Huaqing</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity measurement in the mouse primary visual cortex

Monoküler görme yoksunluğu primer görsel kortikal yanıt plastisite indüklemek için mükemmel bir deneysel paradigmadır. Genel olarak, korteksin bir uyarıcıya karşı kontralateral göze tepkisi, farenin birincil görsel korteksinin (V1) binoküler segmentindeki ipsilateral gözün tepkisinden çok daha güçlüdür. Memelikritik dönemde, kontralateral göz dikiş contralateral göz stimülasyonu V1 hücrelerinin hızlı bir yanıt kaybına neden olacaktır. Transgenik teknolojilerin sürekli gelişimi ile, daha fazla çalışma oküler hakimiyeti belirli genlerin etkilerini incelemek için deneysel modeller olarak transgenik fareler kullanıyor (OD) plastisite. Bu çalışmada, monoküler görme yoksunluğu için ayrıntılı protokoller sunmakta ve Fare V1'de OD plastisitedeki değişimi hesaplıyoruz. Kritik dönemde 4 gün boyunca monoküler yoksunluk (MD) sonrası, her nöronun oryantasyon ayar eğrileri ölçülür ve V1'deki dört nöronun tuning eğrileri ipsilateral ve kontralateral gözlerin uyarılması arasında karşılaştırılır. Kontralateral sapma indeksi (CBI) OD plastisite derecesini belirtmek için her hücrenin oküler OD puanı kullanılarak hesaplanabilir. Bu deneysel teknik kritik dönemde OD plastisiten nöral mekanizmalarının incelenmesi ve nöral gelişimde belirli genlerin rollerinin incelenmesi için önemlidir. En önemli sınırlama, akut çalışmanın aynı farenin nöral plastisitedeki değişimi farklı bir zamanda araştırmayamaz olmasıdır.

Burada açıklanan deneysel sonuçlar, kritik dönemde (P19-P32) yoksun ve yoksun bir fareden başarılı MD ve OD plastisite ölçümleri sağlar. Şekil 1, MD'den 4 gün sonra ipsilateral ve kontralateral gözdeki yanıtları karşılaştırmak için binoküler bölge V1'den 4. Şekil 2, ipsilateral ve kontralateral gözleri uyaran başak sıralama ve oryantasyon alet ölçümlerini gösterir. Başak sıralama için, başak şablonu ani ana bileşen ağırlık...

Watch this Scientific Journal Video about Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex at JoVE.com

Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex

Burada, kritik dönemde görsel plastisitenin nöral mekanizmalarının incelenmesinde önemli yöntemler olan monoküler görme yoksunluğu ve oküler hakimiyet plastisite analizi için ayrıntılı protokoller ve spesifik genlerin görsel gelişim.

Fare Birincil Görsel Kortekste Monoküler Görme Yoksunluğu ve Oküler Baskınlık Plastisite Ölçümü

Monocular visual deprivation is an excellent experimental paradigm to induce primary visual cortical response plasticity. In general, the response of the ...

Monoküler görme yoksunluğu primer görsel kortikal yanıt plastisite indüklemek için mükemmel bir deneysel protokoldür. Normalde, fare birincil görsel korteks in dürbün segmentinde nöronlar ipsilateral göz olarak kontralateral göz uyarılması yaklaşık iki kat daha güçlü yanıt. Ancak, dikiş oküler hakimiyet plastisite için kritik dönemde kontralateral göz kapalı contralateral göz stimülasyon V1 nöronlar tarafından hızlı yanıt kaybı ve aynı zamanda ipsilateral göz yanıtı nda bir sonraki artış takip neden.Burada, monoküler yoksunluk için deneysel protokolü tanıtmak ve görsel yoksunluk sırasında oküler hakimiyeti eğilimi analiz etmek için yaygın olarak kullanılan bir yöntem önermek. Cerrahi aletleri alüminyum bir kutuya koyun ve yarım saat boyunca 120 santigrat derecenin altına koyun. Su banyosu nda %2 agarose çözeltisi hazırlayın ve 75 santigrat derecede saklayın.Her iki göze ince bir göz merhemi tabakası uygulayın. Aydınlatma ile anatomik mikroskop altında, göz kapakları dikiş. Yaklaşık dört dikiş at.İş parçacığının 2-3 düğümünü yapın. Düğümün stabilitesini artırmak için düğümün başına üç mikrolitre instant kurutma tutkal 502 uygulayın. Sonra yeterince kısa iplik kesti.Fare tamamen uyanık olduğunda, onları ayrı bir tutma kafesine yerleştirin. Elektrofizyolojik kayıttan önce fareyi anestezik için isoflurane kullanın. Dikişleri çıkarın ve göz küresini ortaya çıkarın.Göz kapağını dikkatlice kırpın. Kontakt lens çözümleri ile gözleri temizleyin ve netlik için gözleri kontrol edin. Sadece göz bebeklerinin iyi durumda olan faresi kullanılabilir.Fareyi uyuşdurarak dıktan sonra fareyi stereotaksik bir çerçeveye yerleştirin. Prosedür boyunca vücut ısısını korumak için bir ısıtma yastığı kullanın. Nemli tutmak için göz merhemini göz yüzeyine uygulayın.Cildini ortaya çıkarmak için farenin saçını çıkarın. Kafatasını ortaya çıkarmak ve kafa derisi dokusunu çıkarmak için her iki kulak arasındaki sekiz milimetrelik deri ile çarpılarak sekiz milimetrelik bir deri eğimi. Sonra hidrojen peroksit ile örten bağ dokusu kaldırın.Beyincik üzerinde kafatasında bir delik aç. Referans olarak delikküçük bir kemik vida düzeltmek. V1 dürbün bölgesinde çapı bir milimetre küçük bir kraniyotomi gerçekleştirin.Dikkatle beyin zarar vermeden kafatası parçası çıkarın. Kurumasını önlemek için açık kortikal yüzeyin %2 agarose ile kaplayın. Stereotaksik çerçeve üzerinde bir tungsten elektrot düzeltmek.Kaydedilen hücrelerin her iki göze de tepki verdiğinden emin olmak için tungsten elektrodu dikey olarak dürbün V1 bölgesine yerleştirin. Uyarıcı rastgele bir blokta 30 derece ile ayrılır. Her ölçümde toplam üç ila beş blok sunuldu.Şeffaf olmayan plastik plaka ile maske bir göz. Farenin gözlerinden 23 santimetre pozisyona LCD1'i sunun. Yağ hidrolik mikromanipülatör tarafından yavaş yavaş mikroelektrot ilerletin.Elektrot dördüncü katmana ilerlediğinde ilerlemeyi durdurun yüksek sinyal gürültü oranı sinyalini durdurun ve ölçüme başlayın. Başak aktivitelerini 1,000'lik bir faktörle yükseltiyoruz ve 300 ile 10 kilohertz arasında filtreleyip 40 kilohertz'de örnekliyoruz. Sonra diğer gözü maskeleyin ve kontralateral gözün tepkisini ölçün.Tek elektrotlarla ölçülen sinyaller popülasyon aktiviteleridir. Farklı hücrelerin ani artışlarını ayırmak için yazılımı kullanın. İlk olarak, 500 ila 5, 000 hertz arasında sinyal filtre.Biri pozitif sapma, diğeri negatif sapma aniları için olmak üzere iki imleç ayarlayın. Başak şablonları ayarlayın. Farklı ani artış sınıfları arasındaki en büyük varyasyonu gösterdiği şablonalanını ayarlayın.Kümeler halinde ayırmak için ana bileşenler çözümlemesi kullanın. K algoritması kullanarak bir sınırın ani artışlarını sınıflandırmak. Oryantasyonu ani ateşleme hızıyla ilişkilendirin ve ipsilateral ve kontralateral gözler için oryantasyon akort eğrilerini çizin.Daha sonra, kontralateral ve ipsilateral yanıtı temsil eden tek hücreler için OD indeksi hesaplamak OD indeksi göre her hücre için bir OD puanı atamak. Formüle göre kontralateral önyargı dizini hesaplayın. Bu diyagram, monoküler yoksun ve yoksun olmayan farede ipsilateral ve kontralateral gözün yön tuning eğrilerini gösterir.Bu protokol, kritik dönemde yoksun ve yoksun bir fareden başarılı monoküler görme yoksunluğu ve göz hakimiyeti ölçümü sağlar. Size bu deneyi nasıl başarabileceğinizi gösterdik ve görsel yoksunluk sırasında göz seli değişimini analiz ettik. Deney sırasında, elektrofizyolojik kayıt sırasında dikiş işlemi ve etkileşiminde enfeksiyondan kaçınmak önemlidir.Videomuzu izlediğiniz için teşekkürler.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Üretim ve seçici transduce İlköğretim Oligodendrosit Öncü Hücreler için Lentivirüste kullanımı için<em&gt; İn Vitro</em&gt; Myelinasyon Tahliller

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

Generating Primary Fibroblast Cultures from Mouse Ear and Tail Tissues

Fare Kulak ve Kuyruk Dokular Yaratma İlköğretim Fibroblast Kültürleri

Primary cells are derived directly from tissue and are thought to be more representative of the physiological state of cells in vivo than established cell ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

Fare İkincil Palin Füzyonunun Canlı Görüntüsü

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Diseksiyon ve mantar vücut immünfloresan boyama ve yetişkin Drosophila melanogaster beynindeki nöronlar Photoreceptor

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Yaralanma kaynaklı yaşlanma ve In Vivo kas iskelet yeniden programlama değerlendirilmesi

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Geliştirme gerçek zamanlı olarak görselleştirmek için çoklu foton zaman atlamalı görüntüleme: nöral Crest hücrelerde geçirme Zebra balığı embriyo görselleştirme

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Bir Ex Vivo modeli yaşlı insan Bruch'ın membran bir retina Pigment epitel hücrelerinin kültürü

Aside from vitamins and antioxidants recommended by the Age-Related Eye Disease Study, there is no effective therapy for &#34;dry,&#34;&#160;or atrophic ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

İndüksiyon ve birincil insan hücrelerinde hücresel yaşlanma doğrulama

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Düğüm ve Notochordal plaka Gastrulating fare embriyo Tarama elektron mikroskobu ve bütün Dağı ayirt kullanarak görselleştirme

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Çift oküler sulkus görselleştirme Danio rerio embriyogenez sırasında

Congenital ocular coloboma is a genetic disorder that is typically observed as a cleft in the inferior aspect of the eye resulting from incomplete choroid ...