Name: application of membrane and cell wall selective fluorescent dyes for live-cell imaging of filamentous fungi
Uploaded: 2019-11-28T15:00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Application of Membrane and Cell Wall Selective Fluorescent Dyes for Live-Cell Imaging of Filamentous Fungi at JoVE.com

Благодарим Тирольский научный фонд (TWF) за предоставление гранта #256524 AL, Венскому научно-техническому фонду (WWTF) за предоставление гранта #LS13-086 СЗ, а также Фонду публикаций Университета Инсбрука за поддержку публикации открытого доступа. Авторы также благодарят кафедру зоологии Университета Инсбрука за предоставление конфокального лазерного сканирующего микроскопа Leica TCS SP5 II.

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов и ничего раскрывать не приходится.

Эта статья продолжает новаторскую работу, которая установила использование различных флуоресцентных красителей в качестве жизненно важных маркеров органеллы для нитевидных грибов в начале 2000-х2,4,43, и попытки обсудить фотофизические и клеточные биологические свойства FM красителей и отдельных красителей клеточной стенки более подробно, чем раньше. Особенно в отношении нежелательных клеточных эффектов, таких как насыщение мембраны или повреждение клеточной стенки, которые происходят выше определенных концентраций красителя. То, что раньше считалось нетоксичным на клеточном уровне, в настоящее время считается токсичным на молекулярном уровне. Даже если эти эффекты могут быть очень тонкими и непосредственно не очевидны очевидные изменения в органеллы или клеточного поведения, любое возможное вмешательство применения красителя, кроме визуализации, должно быть сведено к минимуму для исследования родной молекулярной функции. К счастью, улучшенная чувствительность и квантовая эффективность современных детекторов, таких как кремниевые лавинные фотодиодные детекторы (Si-APDs)44 или детектор зоны Airyscan45,облегчают использование еще более низких количеств красителей, чем раньше. Другой ключевой целью статьи является пример со-изображения свойства этих красителей с другими фторофорами, самое главное, те из GFP как наиболее часто используемый флуоресцентный белок в биологии. Это должно помочь в разработке изображений экспериментов, которые направлены на корреляцию субклеточной динамики локализации флуоресцентных белков синтеза к тем из грибковых клеточных стенок, плазменной мембраны или эндо- и экзоцитоза путь и т.д.
Изображение в естественных и свободных от стресса условиях является ключом к получению достоверных данных. Некоторые практические соображения, касающиеся культуры среды и подготовки образцов целью обеспечения отправной точки для поиска оптимальных условий, которые позволяют без артефактов, долгое время наблюдения здоровых, неподчеркнутых клеток с самым высоким S / N-коэффициент возможно для любого данного образца. Универсального способа получения надежных и значимых результатов визуализации не существует. Подходу присущи, что биологические различия в выборке, субъективность и ожидания микроскопа, а также обработка изображений оказывают значительное влияние соответственно на сбор и интерпретацию данных. Таким образом, практический опыт микроскопа, ее / его интимные знания о клеточной биологии гриба под следствием, а также умелый образец подготовки для создания условий, как "естественный" и ненарушенный, как это возможно в лабораторных условиях, имеют первостепенное значение для приобретения и оценки изображений данных, которые правдиво отражает изученных клеточных явлений. Как правило, возникновение нежелательных побочных эффектов флуоресцентных красителей, начиная от тонких и, следовательно, не очевидно видимых активации плазменной мембраны или клеточной стенки ремоделирования путей реакции на стресс к простой цитотоксичной индукции клеточного автолизиса, может быть только надежно предотвращено путем применения низкой концентрации красителей No 2 мкм.
Применение флуоресцентных красителей просто, но их специфика плохо характеризуется. Ключевой силой использования флуоресцентных красителей является подготовитечная простота экспериментальных протоколов. Культивирование и отбор проб гриба, добавление красителя (ы), и монтаж на стадии микроскопа (с практикой) просто. Корректировка основных настроек визуализации, включая возбуждение и длину волн выбросов, время экспозиции, настройки временных курсов и т.д., следовать простым биофизическим правилам микроскопа и биологическим правилам используемых флуоресцентных красителей внутри клеток. Таблица 1 предназначена для поддержки выявления наиболее подходящей комбинации красителей или красителей для экспериментов. Кроме того, флуоресцентные красители по разумной цене, легко доступны с надежным высоким качеством и, таким образом, обеспечить высоко воспроизводимое применение.
Двумя основными ограничениями использования мембранной или клеточной стенки селективных флуоресцентных красителей являются (часто) ограниченные знания их точных окрашивающих свойств, которые в большинстве случаев являются неспецифическими на органелле и молекулярном уровне, и их концентрацией зависимых нежелательных побочных эффектов. FM красители специфичны для липидных двухслойных, участвующих в эндо- и экзоцитоза. Однако, точно какие субклеточные органеллы становятся последовательно помечены в тестируемых условиях не сразу очевидно и требует сравнения различных вариантов FM красителя, и совместное маркировка с дополнительными органель-специфических маркеров. Предпочтение FM 1-43 для митохондриальных мембран, по сравнению с FM 4-64, является одним из примеров. Селективные красители клеточной стенки отображают различную специфичность для трех основных полимеров грибковой клеточной стенки. CFW считается неспецифическим пятном для глюканов и хитина, SPF считается наиболее избирательным для глюканов, а CR считается весьма избирательным для к- и хитинов. Информация о привязке специфики ПФС к грибковым клеточным полисахаридов стенки в настоящее время отсутствует. На какое соотношение, какое соотношение грибковых клеточных полимеров наиболее эффективно помечены при заданной концентрации красителя в исследуемых грибковых видов не легко ответить, и применение подробных измерений, приобретенных in vitro или in vivo в других организмах или других грибковых видов должны быть рассмотрены очень тщательно. К сожалению, эта информация является редким и сильно рассеяны в литературе35,42,46. Более поздние записи, которые будут следовать на предыдущих исследованиях33, чтобы обеспечить новое понимание точных свойств окрашивания признакам красителей специально в грибах в настоящее время не доступны.
Контроль изображений имеет важное значение для точной оценки шаблонов окрашивания и клеточных реакций. Вероятно, наиболее сложной частью, однако, является знать клеточной биологии гриба так хорошо, что зарегистрированные изменения в субклеточной локализации мембраны и клеточной стенки селективных флуоресцентных красителей, изменения в клеточной архитектуры или гифальный рисунок роста может исключительно и уверенно быть связаны с предполагаемыми последствиями экспериментального лечения. Для этого, очень важно иметь хорошие элементы управления наряду с любым новым экспериментом изображения живых клеток. К ним относятся необработанный дикий тип в качестве отрицательного контроля изображений, чтобы исключить фоновую аутофлуоресценцию и шум детектора из приобретенного изображения, и иметь морфологический компаратор при работе с мутантами. Кроме того, положительный контроль изображения, например, штамм, который выражает GFP или RFP в цитоплазме или другой известный флуоресцентный маркер белка, имеет важное значение для установки интенсивности возбуждения света до необходимого минимума и контроля жизнеспособности клетки. Как только эти элементы управления установлены, использование флуоресцентных красителей не ограничивается только задачами визуализации, но их концентрационно-зависимая динамика окрашивания, а также зависящие от концентрации побочные эффекты могут быть аналитически использованы; например, для количественного мониторинга биосинтеза клеточной стенки в режиме реального времени или для выявления мутантов конкретных фенотипов в восприимчивости анализы47.
Улучшенные будущие приложения зависят от детального функционального анализа красительных окрашивающих свойств. Основная текущая задача заключается в дальнейшем совершенствовании и автоматизации количественного анализа изображений в целях продвижения функциональной оценки субклеточной динамики мембраны и селективных флуоресцентных красителей клеточной стенки в нитевидных грибах. Для этого сначала требуются обширные количественные исследования совместной локализации этих красителей с известными маркерами полимера органеллы и клеточной стены в сочетании с штаммами мутантов, которых не хватает в конкретных транспортных путях или в которых отсутствуют конкретные структурные компоненты. Несколько маркеров эндоцитоза для сравнительного анализа с FM красителей доступны48,49, и в отношении еще плохо характеризуется связывания особенности клеточной стенки красителей в грибах, применение флуоресцентно помечены клекан-специфических антител50 может обеспечить одну возможность для решения этой проблемы.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BRAND cell counting chamber</td>
			<td>Merck</td>
			<td>BR718005</td>
			<td>Thoma format</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcofluor White M2R</td>
			<td>Merck/Sigma-Aldrich</td>
			<td>F3543</td>
			<td>cell wall dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CFI Plan Apo VC 60x/1.2 NA XC WI</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MRD07602</td>
			<td>water immersion objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CFI Plan Apo VC 60x/1.2 NA XC WI</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MRD07602</td>
			<td>water immersion objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Congo Red</td>
			<td>Merck/Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6277</td>
			<td>cell wall dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>VWR</td>
			<td>8,36,73,230</td>
			<td>organic solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse TE2000-E with C1 scanning unit</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>custom configuration</td>
			<td>inverted laser scanning confocal microscope used to acquire example data 2 and 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse TE2000-U with Bio-Rad Radiance 2100 scannig unit</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>custom configuration</td>
			<td>inverted laser scanning confocal microscope used to acquire example data 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FM 1-43</td>
			<td>Merck/Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6814</td>
			<td>membrane dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FM 4-64</td>
			<td>Merck/Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6689</td>
			<td>membrane dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beads</td>
			<td>Rettberg</td>
			<td>1340691030</td>
			<td>3 mm glass beads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass cover slips</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>BB02400600A113MNT0</td>
			<td>24 x 60 # 1 glass cover slips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCX PL APO 63x/1.3 NA Glyc</td>
			<td>Leica</td>
			<td>15506353</td>
			<td>glycerol immersion objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 510 Meta</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>custom configuration</td>
			<td>inverted laser scanning confocal microscope used to acquire example data 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M9 Minimal Medium</td>
			<td>Merck/Sigma-Aldrich</td>
			<td>M6030</td>
			<td>generic fungal growth medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-slide 8-well</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>80826</td>
			<td>ibiTreat #1.5 polymer coverslip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Miracloth</td>
			<td>Merck/Millipore</td>
			<td>475855-1R</td>
			<td>polyester filtration material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>8,21,472</td>
			<td>92 x 16 mm culture dish w/o cams</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phytagel</td>
			<td>Merck/Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8169</td>
			<td>transparent gelling agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plan Apochromat 63x/1.4 NA Oil DIC</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>440762-9904-000</td>
			<td>oil immersion objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pontamine Fast Scarlet 4B</td>
			<td>Merck/Sigma-Aldrich</td>
			<td>212490</td>
			<td>cell wall dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potato Dextrose Agar (PDA)</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>213400</td>
			<td>fungal growth medium for T. atroviride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potato Dextrose Broth (PDB)</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>254920</td>
			<td>fungal growth medium for T. atroviride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reaction tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72,706</td>
			<td>1.5 mL SafeSeal tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>5518016</td>
			<td>Cutfix sterile scalpel #23</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw cap tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>6,25,54,502</td>
			<td>15 mL polypropylene tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solophenyl Flavine 7GFE 500</td>
			<td>CIBA</td>
			<td>1485385V6</td>
			<td>cell wall dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SynaptoGreen C4</td>
			<td>Biotum</td>
			<td>70020</td>
			<td>membrane dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SynaptoRed C2</td>
			<td>Biotum</td>
			<td>70021</td>
			<td>membrane dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe membrane filter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>723-9945</td>
			<td>0.45 &#181;m SFCA syringe filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCS SP5 II</td>
			<td>Leica</td>
			<td>custom configuration</td>
			<td>inverted laser scanning confocal microscope used to acquire example data 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vogel&#39;s Minimal Medium (VMM)</td>
			<td>FGSC</td>
			<td>Fungal Genetics Stock Centre</td>
			<td>fungal growth medium for N. crassa</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

application of membrane and cell wall selective fluorescent dyes for live-cell imaging of filamentous fungi

Применение мембраны и клеточной стенки селективных флуоресцентных красителей для анализа живой клетки изображения органеллы динамики в грибковых клетках началось два десятилетия назад и с тех пор продолжает вносить большой вклад в наше понимание нитевидных грибковых Образ жизни. В этой статье содержится практическое руководство по использованию двух мембранных красителей FM 1-43 и FM 4-64 и четырехклеточных стенок пятна Calcofluor White M2R, Solophenyl Flavine 7GFE 500, Pontamine Fast Scarlet 48 и Congo Red. Основное внимание уделяется их низкой дозы применения для выяснения артефактов, свободной окрашивания, их со-изображения свойства, и их количественной оценки. Представленные методы применимы ко всем нитевидным грибковым образцам, которые могут быть подготовлены описанными способами. Фундаментальные подходы к окрашиванию могут служить отправной точкой для адаптации к видам, которые могут потребовать различных условий культивирования. Во-первых, биофизические и биохимические свойства рассматриваются как их понимание имеет важное значение для использования этих красителей, как действительно жизненно важные флуоресцентные пятна. Во-вторых, представлены пошаговые протоколы, в которых подробно описывается подготовка различных грибковых типов образцов для флуоресцентной визуализации живых клеток. Наконец, эксперименты иллюстрируют различные подходы к: (1) выявление дефектов в пространственно-временной организации эндоцитоза у генетических мутантов, (2) сравнительно характеризуют общую и четкую солокализацию целевых белков с маркировкой GFP в эндоцитарном пути, (3) определить морфогенетические дефекты стенки клеток в генетическом мутант, и (4) контролировать биогенеза клеточной стенки в режиме реального времени.

Watch this Scientific Journal Video about Application of Membrane and Cell Wall Selective Fluorescent Dyes for Live-Cell Imaging of Filamentous Fungi at JoVE.com

Application of Membrane and Cell Wall Selective Fluorescent Dyes for Live-Cell Imaging of Filamentous Fungi

Жизненно важные флуоресцентные красители являются важными инструментами для анализа живой клетки изображения в современной биологии грибковых клеток. В этой статье подробно описано применение установленных и менее известных флуоресцентных красителей для отслеживания динамики плазменной мембраны, эндо-/экзоцитоза и морфогенеза клеточной стенки в нитевидных грибах.

Применение Membrane и клеточной стенки селективные флуоресцентные красители для Live-Cell Imaging filamentous Грибы

The application of membrane and cell wall selective fluorescent dyes for live-cell imaging analyses of organelle dynamics in fungal cells started two ...

Мембранные и клеточные стенки селективных флуоресцентных красителей являются важными инструментами для анализа динамики органелл и живых грибковых клеток. Наши протоколы обеспечивают необходимую теоретическую основу и практические руководящие принципы для применения выбора этих красителей, как действительно жизненно важные пятна. Ключевым моментом для этого является использование очень низких концентраций красителей, которые не вызывают клеточных артефактов, связанных с насыщением или токсичностью красителя, обеспечивая при этом хороший сигнал к шумовым соотношениям для высококачественной, долгосрочной визуализации живых клеток.С коллегами из кафедры ядерной медицины медицинского университета, мы недавно использовали эти методы окрашивания для разработки нового подхода для изображения управляемой диагностики aapergillosis. Способность контролировать мембранные и клеточные стено стенки структур в режиме реального времени имеет решающее значение для определения динамики поглощения экспериментального соединения наркотиков. Чтобы начать эту процедуру, сначала получите подготовленную прекультуру.Используйте стерильный скальпель, чтобы вырезать небольшой агар блок, который несет неспоруляции мицелия из колонии края прекультуры. Поместите агар-блок в центр свежей, твердой средней пластины для прививки экспериментальной культуры. Инкубировать экспериментальную культуру в соответствии со стадией развития, предназначенной для инкубации.Подготовка образцов несколько деликатна, а оптимизация настроек приобретения изображений довольно сложна. Визуальная демонстрация обеих процедур, сопровождаемая устным объяснением, значительно облегчает реплицируемость. Чтобы смонтировать образцы, держите чистый 24 на 60 миллиметров стеклянный покров скольжения готовы и добавить 18 микролитров жидкости минимальный средний или физиологический раствор соли на центр.Добавьте два микролитров подготовленного 20 микромолярского красителя рабочего раствора в жидкость в центре крышки скольжения и хорошо перемешать, трубя вверх и вниз несколько раз, избегая при этом производства пузырьков воздуха. Используя чистый скальпель, вырежьте образец размером 15 на 15 миллиметров с периферии колонии и поместите его вертикально рядом со средним падением на крышку скольжения. Используйте скальпель для поддержки верхнего края блока и пальцем, чтобы держать заднюю сторону блока на месте.Затем медленно опустите бок, неся мицелий на жидкость. Навемите подготовленный образец на сцену микроскопа. Во-первых, отрегулируйте основные настройки приобретения изображений, чтобы зафиксировать динамику положения в отдельных hyphae, как указано в текстовом протоколе.Для анализа поглощения эндоцитоза проконсультируйтесь с первой цифрой и таблицей одного из текстовых протоколов, чтобы определить наилучшие настройки возбуждения и выбросов для FM 143 или FM 464, которые доступны в системе микроскопии и соответствующим образом настроить эти настройки в системе. Начните запись изображения с помощью ранее скорректированных настроек и оцените результаты. Затем оптимизируйте настройки получения изображения до пространственного и временного разрешения, необходимого для захвата аспекта плазменной мембраны или динамики эндоцитоза, на который ориентирован эксперимент.Для динамики клеточной стенки проконсультируйтесь с рисунком четыре и таблицей одного из текстового протокола, чтобы определить наилучшие настройки возбуждения и выбросов для прикладного красителя клеточной стенки и соответствующим образом настроить настройки на системе микроскопии. Начните запись изображения с помощью ранее скорректированных настроек и оцените результаты. Затем оптимизируйте настройки захвата изображения до пространственного и временного разрешения, необходимого для захвата аспекта морфогенеза клеточной стенки, на который ориентирован эксперимент.Помимо визуализации клеточных процессов, живая клеточная визуализация позволяет получать количественную информацию из записанных данных. В примере анализа поглощения FM 464 грибковые образцы культивируются как колонии и устанавливаются методом перевернутого агара блока. Анализы выявили дефекты в пространственно-временной организации эндоцитоза при удалении генов и чрезмерной экспрессии генов мутантов грибкового специфического белка SFP 2 триходермы андровирида.Здесь показаны примеры совместного окрашивания FM 464 флуоресцентных белков синтеза, нацеленных на эндоцитные отсеки. Это совместное окрашивание используется для связи субклеточного распределения двух расширенных зеленых флуоресцентных белков помечены трансмембранных белков, SFP 2 и GPR 1, к эндоцитическому пути в триходермы атровирид. Пример совместного окрашивания FM 464 для выявления морфогенетических различий показывает, что это совместное окрашивание позволяет дальнейшее отношение субклеточной динамики локализации flourescently помечены BUD-6 полярности комплексный белок до конца некоторых процессов, зависящих от торговли людьми, таких как образование септы и поляризованной гипхал-наконечник роста.Он также характеризует различия в субклеточной организации и гипхал-архитектуры между диким типом и мутант штаммов neurospora crassa. Представитель окрашивания клеточных стенок показывает, что различные свойства взаимодействия кальцифтор белый, solophenyl флавин, и конго красный с полимерами клеточной стенки выделить морфогенетические различия между дельта SFP 2 мутант и дикий тип штамма триходермы андровирид. Увеличение клеточной стенки стресс, нанесенный повышенной концентрации красителя происходит быстрее и более выраженным в мутант по сравнению с диким типом.Кроме того, те же изображения позволяют количественно определить морфогенетические различия в отношении диаметра гипхала и расстояния перегородки между обоими штаммами. Представитель в режиме реального времени мониторинга биосинтеза клеточной стенки показывает, что очень низкая концентрация кальцифлюора белой предотвращает насыщение клеточной стенки молекулами красителя и позволяет количественно в режиме реального времени контролировать биосинтез клеточной стенки. Это показывает, что осаждение нового материала стены клетки не является однородным, но очень быстро реагирует на локализованные физические нагрузки в результате относительного перемещения одной клетки на клетку к клетке привязанности до дермалинфузии в neurospora crassa.Чем меньше, тем больше. Используйте как можно меньше красителя, чтобы исключить вмешательство флуоресцентного маркера в клеточные процессы. После этой процедуры, восстановление flourescence после фото-отбеливания эксперименты могут быть выполнены для количественной оценки транспорта и биогенеза кинетики.Первое введение мембраны и клеточных стенок, окрашивающих нитеозные грибы в начале тысячелетия, в буквальном смысле произвело революцию в том, как мы смотрим на грибы. Calcofluor белый может вызвать раздражение глаз и классифицируется cancerigen. Конго красный является раковым и тератогенным, поэтому, пожалуйста, носить глаз и кожи защиты при обработке этих красителей.

Research

JoVE Journal

Biology

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

Маркировка стволовых клеток с флуоресцентными красителями для неинвазивного обнаружения оптических изображений с

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Selective Labelling of Cell-surface Proteins using CyDye DIGE Fluor Minimal Dyes

Селективный маркировки на поверхности клеток белков, используя CyDye ПГЛП Fluor Минимальная Красители

Surface  proteins are central to the cell's ability to react to its environment and to interact with neighboring cells. They are known to be inducers of ...

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

Живая изображений Сотовые Ф-актина Динамика через Флуоресцентный Спекл микроскопия (FSM)

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Fluorescent Labeling of COS-7 Expressing SNAP-tag Fusion Proteins for Live Cell Imaging

Флуоресцентная маркировка COS-7 выражая SNAP-теги Белки Fusion для живых изображений сотовый

SNAP-tag and CLIP-tag protein labeling systems enable the specific, covalent attachment of molecules, including fluorescent dyes, to a protein of interest ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

Живых изображений сотовый событий раннего этапа Аутофагия: Omegasomes и на последующий период

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...

Intravital Microscopy for Imaging Subcellular Structures in Live Mice Expressing Fluorescent Proteins

Прижизненные микроскопия для визуализации субклеточных структур в живых мышей, экспрессирующих флуоресцентные белки

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, ...

G Protein-selective GPCR Conformations Measured Using FRET Sensors in a Live Cell Suspension Fluorometer Assay

G Белково-селективные GPCR Конформации Измеряется с использованием FRET датчиков в прямом эфире клеточной суспензии Флуорометр Пробирной

F&#1255;rster resonance energy transfer (FRET)-based studies have become increasingly common in the investigation of GPCR signaling. Our research group ...

Studying the Protein Quality Control System of D. discoideum Using Temperature-controlled Live Cell Imaging

Studying the Protein Quality Control System of D. discoideum Using Temperature-controlled Live Cell Imaging

Изучение белка качества системы управления<em&gt; D. discoideum</em&gt; Использование Терморегулируемая живых изображений сотовый

The complex lifestyle of the social amoebae Dictyostelium discoideum makes it a valuable model for the study of various biological processes. Recently, we ...

Live-cell Imaging of Platelet Degranulation and Secretion Under Flow

Live-cell Imaging дегрануляции и секреции тромбоцитов под потоком

Blood platelets are essential players in hemostasis, the formation of thrombi to seal vascular breaches. They are also involved in thrombosis, the ...

Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures

Визуализация субклеточных структур в живых клетках сверхвысокого разрешения

There has long been a crucial tradeoff between spatial and temporal resolution in imaging. Imaging beyond the diffraction limit of light has traditionally ...