Name: in vivo infection with leishmania amazonensis to evaluate parasite virulence in mice
Uploaded: 2020-02-20T13:00:00
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Wir danken Prof. Dr. Niels Olsen Saraiva Cémara vom Tierzentrum des Instituts für Biomedizinische Wissenschaften der Universität von Sao Paulo für die Unterstützung und Prof. Dr. Silvia Reni Uliana für die Bereitstellung der Glasgewebemühle. Diese Arbeit wurde von der Sao Paulo Research Foundation (FAPESP - MFLS' Grant 2017/23933-3) unterstützt.

Alle experimentellen Verfahren wurden vom Tierpflege- und Verwendungsausschuss des Instituts für Biowissenschaften der Universität Von Sao Paulo (CEUA 342/2019) genehmigt und in Übereinstimmung mit den Empfehlungen und den Richtlinien für die Pflege und Verwendung von Labortieren des Bundesstaates Sao Paulo (Lei Estadual 11.977, de 25/08/2005) und der brasilianischen Regierung (Lei Federal 11.794, de 08/10/2008). Alle in den Abschnitten 1-5 beschriebenen Schritte sollten aseptisch in laminaren Strömungsschränken du...

Der in diesem Protokoll beschriebene In-vivo-Infektionstest ermöglicht es jedem Forscher, in vivo kutane Leishmaniose unter Berücksichtigung der Wirts-Parasiten-Interaktion in einem systemischen Szenario zu bewerten. Diese Assays wurden von vielen Gruppen22,24,27,29,31,32,34,<su...

Leishmanien sind weltweit weit verbreitete parasitäre Infektionskrankheiten, die in Entwicklungsländern eine wichtige Herausforderung darstellen und von der Weltgesundheitsorganisation1,2als eine der wichtigsten vernachlässigten Tropenkrankheiten anerkannt werden. Die Leishmanien sind durch haut-, schleimhaut- und/oder viszerale Manifestationen gekennzeichnet. Kutane Leishmaniose wird in der Regel durch L. amazonensis, L. mexicana, L. braziliensis, L. guyanensis, L. major, L. tropica und L. aethiopica3verursacht. Diese Form der Krankheit ist oft Selbstheilung beim Menschen aufgrund der Induktion der schützenden zellulären Immunantwort. Jedoch, die zelluläre Immunantwort kann fehlschlagen, und die Krankheit kann zu verbreiten cutaneous Leishmaniasisfortschreiten 4,5. Aufgrund der Vielfalt unter den Leishmanien-Arten und dem genetischen Hintergrund der Wirtszeit gibt es keinen Impfstoff6,7. Behandlungsmöglichkeiten sind auch begrenzt, da die meisten der derzeit verfügbaren Medikamente entweder teuer, toxisch und/oder kann langfristige Behandlung erfordern8,9. Außerdem gab es Berichte über Arzneimittelresistenz entogen gegen die verfügbaren Behandlungen10,11.
Der Erreger der Leishmanien ist der protozoische Parasit Leishmanien. Der Parasit stellt zwei verschiedene morphologische Formen in seinem Lebenszyklus dar: Promastigoten, die flagellated Form in Sandfliegen gefunden; und Amastigoten, die intrazelluläre Form, die in den parasitopholen Vakuolen des Säugetierwirts Makrophagen12,13gefunden wird. Die Fähigkeit von Amastigotes, trotz der Abwehrmechanismen der Makrophagen des Wirbeltierwirts einzudringen, zu überleben und zu replizieren, unterliegt vielen Studien14,15,16,17. Daher haben mehrere Forschungsgruppen In-vitro-Makrophagen-Infektionstests beschrieben, um die Auswirkungen spezifischer Umweltfaktoren sowie von Parasiten- und Wirtsgenen auf die Parasiteninfektiosität zu bewerten. Dieser Test bietet mehrere Vorteile, wie die Fähigkeit, Studien an ein Format mit hohem Durchsatz anzupassen, einen relativ kürzeren Zeitraum, um Ergebnisse zu erzielen, und eine geringere Anzahl von Labortieren, die18geopfert wurden. Die Ergebnisse von In-vitro-Assays sind jedoch begrenzt, da sie nicht immer in vivo-Studien14,19,20,21replizieren. In-vivo-Assays bieten einen systemischen physiologischen Überblick über die Wirts-Parasiten-Interaktion, die durch In-vitro-Assays nicht vollständig nachgeahmt werden kann. Zum Beispiel können immunologische Studien durch immunhistochemische Assays aus gesammelten Fußpolstergewebeabschnitten oder sogar von poplitealen Lymphknoten zur Analyse der wiedergewonnenen Immunzellen durchgeführt werden22.
Tiere werden oft als Modell für menschliche Krankheiten in der biologischen und biomedizinischen Forschung verwendet, um die zugrunde liegenden physiologischen Mechanismen der Krankheiten besser zu verstehen23. Im Falle der Leishmaniose beeinflussen die Route, der Ort oder die Dosis der Impfung das Krankheitsergebnis24,25,26,27. Darüber hinaus werden Anfälligkeit und Resistenz gegen die Infektion bei Menschen und Mäusen stark durch den genetischen Hintergrund des Wirts und Parasiten4,5,22,28,29,30,31reguliert. BALB/c-Mäuse sind sehr anfällig für L. amazonensis kutane Infektionen, die ein schnelles Krankheitsverlauf mit der Verbreitung der Parasiten an die Lymphknoten, Milz und Leber32zeigen. Da die Krankheit zu kutanen Metastasen fortschreiten kann, kann die Infektion tödlich sein. Im Gegensatz dazu entwickeln C57BL/6-Mäuse häufig chronische Läsionen mit anhaltenden Parasitenbelastungen in L. amazonensis-Infektions-Assays 33. Dabei wurde eine L. amazonensis-Infektion mit dieser speziellen Mausart als ein ausgezeichnetes Modell zur Untersuchung chronischer Formen der hautnaheleishmaniosen Beim Menschen angesehen, da sie das Krankheitsverlaufbesser imitiert als das BALB/c-Mäuseinfektionsmodell5,34.
Daher schlagen wir vor, dass die murine in vivo-Infektion eine nützliche Methode für Leishmanenvirulenz physiologische Studien für menschliche Krankheiten ist, die eine systemische Ansicht der Wirts-Parasiten-Interaktion ermöglichen. Bei der Begutachtung der etablierten Assays22präsentieren wir hier ein zusammengestelltes Schritt-für-Schritt-Protokoll der In-vivo-Infektion von C57BL/6-Mäusen mit L. amazonensis, das die Parasitendifferenzierung in axtische Amastigoten, Mäusefußpad-Hautimpfung, Läsionsentwicklung und Parasitenlastbestimmung umfasst. Dieses Protokoll kann an andere Mäusestämme und Leishmanienarten angepasst werden, die kutane Leishmanien verursachen. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die hier vorgestellte Methode entscheidend für die Identifizierung neuerAnti-Leishmanie-Medikamentenziele und -impfstoffe sowie in physiologischen Studien des Wirts immun- und metabolische Reaktionen auf Leishmanien-Infektionen ist.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>Greiner bio-ne</td>
			<td>655180</td>
			<td>A flat-bottom plate for limiting dilution assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>adenine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8626</td>
			<td>Supplement added to M199 cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>caliper</td>
			<td>Mitutoyo</td>
			<td>700-118-20</td>
			<td>A caliper to measure the thickness of footpad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell culture flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353014</td>
			<td>A 25 cm2 volume cell culture flask to cultivate Leishmania parasite</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5804R</td>
			<td>An equipament used for separating samples based on its density</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator 34 &#176;C</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3110</td>
			<td>An incubator for amastigotes differentiation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>K50237083820</td>
			<td>A disinfectant for general items</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12657-029</td>
			<td>Supplement added to M199 cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass tissue grinder tube</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>3431 E04</td>
			<td>A tube to collect and disrupt infected footpad tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glucose</td>
			<td>Synth</td>
			<td>G1008.01.AH</td>
			<td>Supplement added to M199 cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism Software</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td>A software used to plot the data and calculate statistical significance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H-2250</td>
			<td>Supplement added to M199 cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Promega</td>
			<td>H5303</td>
			<td>Supplement added to M199 cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubator 25 &#176;C</td>
			<td>Fanem</td>
			<td>347CD</td>
			<td>An incubator for promastigotes cultivation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>TMS</td>
			<td>An equipament used to visual analyze the promastigote and amastigote cultures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>An inhalant anesthetics for mice (3-5%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>laminar flow cabinet</td>
			<td>Veco</td>
			<td>VLFS-09</td>
			<td>A biosafety cabinet used for aseptical work area</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M199 cell culture media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31100-035</td>
			<td>A cell culture media for Leishmania cultivation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microcentrifuge tube</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT150C</td>
			<td>A microtube used for sample collection, processing and storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>multichanel pipette</td>
			<td>Labsystems</td>
			<td>F61978</td>
			<td>A multichannel pipette used for limiting dilution assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Merck</td>
			<td>6329</td>
			<td>Supplement added to M199 cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S8045</td>
			<td>Supplement added to M199 cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neubauer chamber</td>
			<td>HBG</td>
			<td>2266</td>
			<td>A hemocytometer to count the parasite suspension</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>optical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>E200</td>
			<td>An optical equipament used to count parasite</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>349</td>
			<td>A flexible and resistant plastic to seal the plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin/streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Supplement added to M199 cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>TPP</td>
			<td>93100</td>
			<td>A sterile dish to dissect the footpad tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pipetman kit</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F167360</td>
			<td>A micropipette kit containing four pipettors (P2 P20 P200 P1000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scale</td>
			<td>Quimis</td>
			<td>BG2000</td>
			<td>An equipament used to weigh collected footpad lesions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scalpel</td>
			<td>Solidor</td>
			<td>10237580026</td>
			<td>A scalpel to cut and collect footpad tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>serological pipette 10 mL</td>
			<td>Nest</td>
			<td>327001</td>
			<td>A sterile pipette used for transfering mililiter volumes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tips</td>
			<td>Axygen</td>
			<td></td>
			<td>A pipette tip used for transfering microliter volumes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15250-061</td>
			<td>A dye used to count viable parasites</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypticase peptone</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td>Supplement added to M199 cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tuberculin syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>305945</td>
			<td>A syringe with 27G needle to inoculate the parasite suspension</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo infection with leishmania amazonensis to evaluate parasite virulence in mice

Leishmania spp. sind protozoische Parasiten, die Leishmanien verursachen, Krankheiten, die ein breites Spektrum klinischer Manifestationen von haut- bis viszeralen Läsionen darstellen. Derzeit sind schätzungsweise 12 Millionen Menschen weltweit mit Leishmania infiziert, und über 1 Milliarde Menschen sind von infektionsgefährdet. Leishmania amazonensis ist in Mittel- und Südamerika endemisch und führt in der Regel zur hautförmigen Form der Krankheit, die in einem Tiermodell direkt visualisiert werden kann. Daher sind L. amazonensis Stämme gute Modelle für kutane Leishmaniose-Studien, weil sie auch leicht in vitro kultiviert werden können. C57BL/6-Mäuse imitieren die l. amazonensisgetriebeneKrankheitsprogression, die beim Menschen beobachtet wurde, und gelten als eines der besten Mäusestämme modellieren für kutane Leishmaniose. Im Wirbeltierwirt bewohnen diese Parasiten Makrophagen trotz der Abwehrmechanismen dieser Zellen. Mehrere Studien verwenden In-vitro-Makrophagen-Infektionstests, um die Parasiteninfektiosität unter verschiedenen Bedingungen zu bewerten. Der In-vitro-Ansatz beschränkt sich jedoch auf ein isoliertes Zellsystem, das die Reaktion des Organismus außer Acht lässt. Hier stellen wir eine in vivo murinierte Infektionsmethode zusammen, die einen systemischen physiologischen Überblick über die Wirts-Parasiten-Wechselwirkung bietet. Das detaillierte Protokoll zur In-vivo-Infektion von C57BL/6-Mäusen mit L. amazonensis umfasst die Parasitendifferenzierung in infektiöse Amastigoten, Mäusefootpad-Kutane-Impfung, Läsionsentwicklung und Parasitenlastbestimmung. Wir schlagen diese etablierte Methode als die am besten geeignete Methode für physiologische Studien des Wirts Immun- und Stoffwechselreaktionen auf hautnahe Leishmaniose vor.

Leishmania protozoan Parasiten existieren in zwei Entwicklungsformen während ihres Lebenszyklus in wirbellosen und Wirbeltier wirte: Promastigoten, die proliferative Formen im Lumen der weiblichen Sandfliege gefunden; und Amastigoten, die proliferativen Formen, die in den parasitophorischen Vakuolen der Säugetier-Wirtszellen gefunden werden. Promastigoten haben einen langgestreckten Körper von etwa 1,5 m Breite und 20 m Länge, wobei ein Flagellum typischerweise aus der vorder...

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In Vivo Infection with Leishmania amazonensis to Evaluate Parasite Virulence in Mice

Hier stellen wir ein zusammengestelltes Protokoll zur Bewertung der Hautinfektion von Mäusen mit Leishmania amazonensisvor. Dies ist eine zuverlässige Methode zur Untersuchung der Virrulenz von Parasiten, die eine systemische Ansicht der Wirbeltier-Wirtsreaktion auf die Infektion ermöglicht.

In Vivo-Infektion mit Leishmania amazonensis zur Bewertung der Parasitenvirulenz bei Mäusen

Leishmania spp. are protozoan parasites that cause leishmaniases, diseases that present a wide spectrum of clinical manifestations from cutaneous to ...

Dieses Protokoll eignet sich für die Untersuchung der Virulenz von Leishmania, da es eine systemische Sicht des Wirbeltiers hosten der Hautinfektion bietet. Der Hauptvorteil der Annahme dieses Protokolls ist, dass es Forschern ermöglicht, die Entzündungsreaktion des Wirts und die Parasitenreplikation gleichzeitig zu bewerten. Diese Methode kann verwendet werden, um mehrere Ziele und Behandlungen im Zusammenhang mit Virulenz zu charakterisieren, die neue Erkenntnisse in der hautbedingten Leishmaniose-Kontrolle bringen könnten.Es kann auch auf andere MäuseStämme und Leishmanien-Arten angewendet werden, die kutane Leishmaniose verursachen. Dieser Test hat einige kritische Schritte, wie z. B. die Anforderung von geschultem Personal, das sich mit Mäusen vertraut und Erfahrung in der Durchführung von Subplantar-Injektionen hat, um eine versehentliche Exposition gegenüber infektiösem Material zu vermeiden. Demonstriert wird das Verfahren von Dr.Ricardo Zampieri, einem Techniker aus meinem Labor.Beginnen Sie mit dem Anbau von L.amazonensis promastigotes in einem 25 Zentimeter quadratischen Zellkulturkolben, der 10 Milliliter Pro-Medium enthält, für drei Tage bei 25 Grad Celsius. Nach der Inkubation, Pipette fünf Milliliter logarithmische Wachstumsphase Promastigot Kultur in einen neuen Kolben. Fügen Sie fünf Milliliter Ama-Medium in den Kolben, und inkubieren Sie es bei 34 Grad Celsius für drei bis vier Tage.Teilen Sie die Kultur, indem Sie sie im Verhältnis eins zu drei mit frischem Ama-Medium in einem neuen Kolben verdünnen. Dann inkubieren Sie es für weitere drei bis fünf Tage. Übertragen Sie ein Aliquot der in PBS verdünnten axtischen Amastigoten suspension in eine Neubauer-Kammer und zählen Sie die nicht flagellated Parasiten.Verdünnen Sie dann die Suspension in PBS entsprechend der gewünschten Inokulumdosis und der Anzahl der vorgesehenen Inokulume. Laden Sie eine Tuberkulinspritze mit einer 27-Spur-Nadel mit der vorbereiteten Parasitensuspension. Stellen Sie sicher, dass die Maus vollständig mit einer Zehenprise beästheisiert ist und impfen Sie 50 Mikroliter der Suspension in das Subplantargewebe auf dem linken Hinterfußpad.Zeichnen Sie das Fortschreiten der Läsion einmal pro Woche auf, indem Sie die Dicke der infizierten und nicht infizierten Fußpolster mit einem Bremssattel messen, und berechnen Sie den Dickenunterschied zwischen den beiden Fußpads, um die Läsionsprogression zu bewerten. Fügen Sie einen Milliliter Pro-Medium in ein Glasgewebe-Schleifrohr pro Läsion und wiegen Sie das Rohr. Sprühen Sie 70% Ethanol auf das Fußpad zur Desinfektion und verbrauchen Sie den Fuß des Tieres an seiner Ferse, um das infizierte Fußpolster zu extrahieren.Stellen Sie sicher, dass Schere und Zange sterilisiert werden, indem Sie sie in 70% Ethanol getränkt halten. Legen Sie das Fußpolster in eine sterile Petrischale und sezieren Sie es mit den Zangen und Skalpell. Sammeln Sie alle Weichgewebe und entsorgen Sie die Knochen.Übertragen Sie das gesammelte Gewebe auf das Glasgewebeschleifrohr und wiegen Sie das Rohr erneut, um das Läsionsgewicht zu bestimmen. Homogenisieren Sie das Gewebe 10 Mal mit dem Schleifer für vollständige Gewebestörung, und lassen Sie die Mischung zu begleichen. Sammeln Sie 20 Mikroliter des Überstandes und laden Sie ihn in die erste Kolonne und die erste Spur der 96-Wellplatte, die nach den Manuskriptanweisungen vorbereitet ist.Wiederholen Sie diesen Schritt, damit die nächsten drei Bahnen für jedes Tier Quadruplicate-Ergebnisse haben. Homogenisieren Sie jeden Brunnen 10 Mal mit einer Mehrkanalpipette und übertragen Sie 20 Mikroliter der verdünnten Probe von der ersten in die zweite Spalte. Fahren Sie mit der seriellen Verdünnung fort, bis die letzte Spalte erreicht ist, und entsorgen Sie die letzten 20 Mikroliter der verdünnten Probe.Versiegeln Sie die Platte mit Folie, und bebrüten Sie sie bei 25 Grad Celsius für sieben Tage in einer feuchten Kammer. Analysieren Sie nach der Inkubation die Platte unter einem invertierten Mikroskop, um den letzten parasitenhaltigen Brunnen für jede Spur zu bestimmen. Leishmania protozoan Parasiten existieren in zwei Entwicklungsformen während ihres Lebenszyklus in wirbellosen und Wirbeltieren Wirte: Promastigoten und Amastigoten.Axenische Bedingungen können verschiedene Wirtsumgebungen in vitro simulieren und die Parasitenmorphologie und Lebensfähigkeit erhalten. Axenische Bedingungen für Amastigoten imitieren die saure Umgebung und die erhöhte Temperatur der Wirbeltierwirte. Promastigotes werden unter diesen Bedingungen in Amastigoten differenzieren.Bei einer Übertragung auf neutralen pH-Wert und bei 25 Grad Celsius transformiert, verwandeln sich axtische Amastigoten wieder in Promastigoten. Der Virulenzunterschied des wilden Typs und Leishmania Iron Regulator 1 Knockout-Stämme wurde auf infizierten Maus-Fußpads beobachtet. LIR1 reguliert den intrazellulären Eisengehalt in Leishmanien, vermittelt den Eisenexport und verhindert seine intrazelluläre Akkumulation auf toxische Werte.Der Infektionstest, der den Unterschied in Schwellung und Läsionsprogression beinhaltet, zeigte, dass LIR1 für L.amazonensis in vivo Virulenz unerlässlich ist. Die Parasitenbelastung wurde durch die Durchführung eines begrenzenden Verdünnungstestes aus den infizierten Läsionen bestimmt. Die Läsionen der LIR1-Knockout-infizierten Mäuse enthalten 10 bis sechs mal weniger Parasiten als die der wildartigen Leishmania-infizierten Mäuse, was zeigt, dass das Fehlen von LIR1 die intrazelluläre Replikation der Amastigoten verhindert.Eines der wichtigsten Dinge, die Sie sich merken sollten, wenn Sie dieses Verfahren durchführen, ist die Verwendung von Leishmanienkulturen, die weniger als zehnmal in vitro durchdrungen wurden, um den Verlust der Parasitenvirulenz zu vermeiden. Zusätzlich zu diesem Verfahren können Sie In-vitro-Infektionstests verwenden. Dies ist jedoch eine begrenzte Methode, da sie keinen systemischen physiologischen Überblick über die Wirts-Parasiten-Interaktion bietet.Diese In-vivo-Methode ist der beste Ansatz zur Bewertung systemischer Reaktionen auf kutane Leishmaniose, wie die Quantifizierung von Serumbiomarkern in wiedergewonnenen Wirtgeweben für weitere immunologische Studien.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vivo Infection with Leishmania amazonensis to Evaluate Parasite Virulence in Mice

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In-vivo-Imaging von transgenen Leishmania Parasiten in einer Live-Host

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Measurement of &#947;HV68 Infection in Mice

Measurement of ÃƒÅ½Ã‚Â³HV68 Infection in Mice

Die Messung der γHV68 Infektion bei Mäusen

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human ...

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

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Einsatz von künstlichen Sputum Mittlere bis antibiotische Wirkung gegen die getestet<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; AGB in einen engeren Bezug zu den Mukoviszidose-Lunge

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

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A Parasite Rescue and Transformation Assay auf leishmanientötende Screening gegen intrazelluläre<em&gt; Leishmania donovani</em&gt; Amastigoten in THP1 Menschliche Akute Monozytenleukämie Cell Line

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The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a ...

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