Name: reduced complications after arterial reconnection in a rat model of orthotopic liver transplantation
Uploaded: 2020-11-07T13:00:00
Duration: 8 min 39 s
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这项研究的资金来自UHN的多器官移植项目，以及多伦多将军和多伦多西部基金会的支持。

作者没有什么可透露的。

小动物肝移植模型对于理解移植免疫力和确定新的治疗策略32年十分重要。理想的小动物肝移植模型复制人类程序的所有步骤，包括动脉瘤病。解释大鼠OLT模型的结果可能具有挑战性，因为大多数版本没有纳入HA性腺病步骤，这导致更高的并发症和发病率42。一些重建程序已经使用肾动脉，这需要切除肾脏27。该协议避免器官切除，因为它超出了人类程序中的情况。
动脉重建也可以通过操纵大鼠大动脉31进行。然而，这些方法需要广泛解剖和夹紧大动脉。如果夹紧时间延长，则接受大鼠的不良结果与近端缺血43有关。在人类中，LT手术技术涉及接受者胃肠动脉（GDA）的结扎和分裂。然而，啮齿动物的生理和解剖特征使使用这种技术移植更具生理挑战性，并可能导致并发症（即胰腺和胆管35 和胆汁泄漏44的坏死）。该协议中的动脉重新连接旨在规避这一挑战，保持管道血流，并改善接受者的结果。
前文27日曾介绍过使用套管和支架技术重建大鼠HA。在此技术中，支架用作导轨，动脉从供体腹腔躯干重建为接受者普通HA。然后，接收方共同的HA被解剖，接收方GDA被捆绑在27。因此，对接受者BD和胰腺头部下部的血液供应可能会受到影响。据认为，这一区域的附带循环往往提供血液流向胆管不足。例如，此协议首先使用微血管夹对接收方 GDA 进行测试，然后划分接收方 BD。在 GDA 夹紧时，分裂的 BD 不会出血。拆下 GDA 夹具后，观察到 BD 的轻快出血。该协议，保持良好的流量到分裂的接受者胆管，保护接受者肝脏组织的生理，提供足够的肝血液灌注和防止后OLT低氧肝损伤。
在供体方面，HA支架在移植准备期间通过从腹腔躯干、左胃动脉和血状动脉创建一个补丁，轻松插入腹腔躯干。支架可以通过宽阔的开口插入，这比尝试单独将支架插入腹腔后备箱难度要小。已发现 24 G 是用于 HA 支架的理想尺寸。支架的长度应为 1.0-1.5 mm 长，因为它充当一个敞开的门，使接收者的适当 HA 能够轻松拉入捐赠者的共同 HA。仔细注意10-0 ethilon缝合线的位置，通过这种连接的血液永远不会直接接触支架，并且接受者适当的HA会保护它从内部，减少并发症的风险。重要的是，捐赠者的HA从未被夹住，以避免血管膜。通过让捐赠者GDA开放，评估动脉重建的成功。一旦重建完成，成功的动脉瘤病就可从供体GDA中产生良好的血液流动。
在此协议中，与其他协议类似，SHVC 重新连接是最慢的步骤，并最终决定肝阶段的持续时间。随着肝病时间延长，缺血性损伤和肝功能障碍的风险增加45。OLT 大鼠模型的另一个关键组成部分是移植物、支架和袖口的大小。如果移植物太小，移植物可能会扭曲或翻转，阻碍血管连接。支架和袖口的大小可能需要根据年龄、性别、体重和大鼠的应变进行调整。这里使用的袖口的大小选择如前所述28，并使用了控制老鼠大小的袖口大小。随和期间（迄今为止：中位数 = 手术后133天，手术后最少=115天，手术后最多=161天），没有痛苦或并发症的迹象（即肝充血、水肿、腹水、腹水或血肿）。需要进一步研究，以确定PV和 IHVC的合适大小，各种大鼠菌株的年龄在和性别都值得。
这个修改的老鼠OLT协议使用3D打印袖口的PV和 IHVC，如前面所述的39，40。,40现有的PV和 IHVC 连接方法包括微缝合技术32、袖口技术46和微缝合临时夹板技术47。选择了3D打印袖口技术，因为它允许袖口的大小根据大鼠应变进行标准化，易于准备和使用。可以同时打印大量具有相同尺寸的袖口。袖口的外表面有两个凹槽，用于固定领带并防止滑倒。尾部也融入袖口设计，以便于操作袖口。总体而言，人们认为，采用 3D 打印袖口可缩短肝时间，从而提高 OLT 程序的成功率和可重复性。确定该技术也缩短了手术学习曲线。
最后，所述方案通过结合动脉重联步骤建立了一种与人体肝移植更相似的模型。该协议可以适应研究肝移植的许多免疫学和外科方面，并可以作为一个模型来测试与移植相关的新型治疗干预。

全球肝病负担继续增加，从2005年到2013年，与肝病有关的死亡人数增加了30%。,2肝移植通常是最终肝病患者的唯一途径。肝脏是第二频繁的移植固体器官，从2015年到2016年，全球进行的肝脏移植数量增加了7.25%。1,2尽管其流行，移植后存活率,已停滞不前3，4，5。,45报告15年患者存活率为53%，20年患者存活率可低至21%，为,3、5。虽然有令人兴奋的新的免疫生物学倡议，可能导致新的治疗和改善的临床结果，还没有一个可靠的小动物模型来测试他们。
大鼠OLT模型已广泛应用于肝移植研究，包括,,,,,排斥6、7、8、9、10、7免疫耐受性11、移植缺血-再灌9,10注损伤12、免疫抑制13、胆道树损伤6814、15、16、17。14151617然而，该模型目前形式的缺点是其高术后发病率和死亡率18，19。18,这是一个与人体手术相左的严重缺点，它损害了从模型20中得出临床相关结论的能力。
此外，这种发病率的很大一部分可归因于肝动脉（HA）的缺失或不完善。18。虽然是人类肝移植的关键一步，但技术困难往往会损害大鼠OLT模型中的HA重新连接。因此，胆管（BD）的动脉瘤病是脆弱的，导致胆汁泄漏和BD坏死率高21。除了胆道并发症的高发病率22，动脉流入的缺乏改变了移植后移植肝脏的生理状况23，供体肝移植缺氧24和肝损伤观察在发炎叶19，25，26。19,25,26没有动脉连接的鼠OLT也倾向于促进纤维化27。下面描述的大鼠OLT协议通过将一个简单的HA重建步骤与先前公布的大鼠OLT方法28结合，解决了这些问题，从而保存了肝硬化瘤并提高了存活率。
肝移植分为三个阶段：（1）从供体中提取肝移植，（2）制备供体肝移植，（3）用肝移植置换接受肝脏。该过程涉及五个解剖结构的操作：超前低劣的静脉（SHVC），门户静脉（PV），下部低劣的静脉（IHVC），肝动脉（HA）和胆管（BD）。
大鼠的OLT首先由李等人采用SHVC、PV和 IHVC的微缝合性腺瘤，以及BD29的拉直技术。这个模型后来通过使用双袖口技术在1979年30改进。从那时起，提出了几种替代技术，其中大多数侧重于静脉动脉瘤，并使用双袖口技术与一些修改31。虽然HA性腺病以前在大鼠OLT模型中曾用微松、袖口,和宫内套管26、31、32、33、34,31,32,33等技术进行过描述，但这些技术往往需要训练有素的显微外科技能，显著改变大鼠生理，并受血栓形成和/或胆汁并发症27、35,的阻碍。
此外，手术选择也可以影响肝时间（从PV夹紧到通过重组的PV再灌注）的时间，这对大鼠肝移植的成功至关重要。具体来说，高存活率观察到的肝时间为15-20分钟36，30分钟36是成功的上限37，38。38因此，该方法的目标是实现一种侵入性更小、更容易采用的手术鼠OLT模型，该模型能够重新连接肝动脉，促进移植肝脏的高效灌注，维持输液管，保持接受者的生理状况。
这里详细说明了本修订协议的所有步骤，包括操作供体肝脏的腹腔躯干，以及使用 1） 1.5 mm 支架执行与接受者适当的 HA 的外腰套连接， 2） 用于 SHVC 重建的运行缝合线，3） 两个 3D 打印塑料袖口用于 PV 和 IHVC 重建 39、40、4） 用于 HA39,18、27、41,27,41和 5 的微血管套接重新连接，前文描述的 BD 支架技术 28。40还包括两个额外的步骤：通过PV的冷冲洗，和抗生素方案，是基于以前的发现17。这种优化的OLT协议最大限度地减少了周程并发症和发病率，并更密切地模型了人类肝移植中采用的手术手术。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10-0 Ethilon</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2830G</td>
			<td>10-0 Ethilon Black 1X5&#34; BV100-4 Taper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>B302995</td>
			<td>Luer-Lok Tip, Sterile, Disposable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>B309628</td>
			<td>Luer-Lok Tip, Sterile, Disposable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>B301031</td>
			<td>Luer-Lok Tip, Sterile, Disposable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D Printed Cuff for IHVC</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Custom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D Printed Cuff for PV</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Custom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D Printed Holder for IHVC</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Custom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D Printed Holder for PV</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Custom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>B309657</td>
			<td>Luer-Lok Tip, Sterile, Disposable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Sofsilk</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>GS-835</td>
			<td>Wx coded braided silk, 30&#34;, Suture 1-Needle 26 mm Length 1/2 Circle Taper Point Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 Monocryl</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y433H</td>
			<td>Undyed Monofilament 1X27&#34; TF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>B309646</td>
			<td>Luer-Lok Tip, Sterile, Disposable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 Silk</td>
			<td>Teleflex Medical</td>
			<td>103-S</td>
			<td>Black</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Prolene</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2775G</td>
			<td>8-0 Prolene Blue 1X24&#34; BV130-5 EVP Double Armed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barraquer Micro Needle Holder Without Catch</td>
			<td>Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td>FD231R</td>
			<td>Curved 120 mm, 4 3/4&#8243;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barraquer Needle Holder, Extra Fine Jaws 8.0mm, Curved With Out Lock</td>
			<td>Rumex International Co.</td>
			<td>8-025T</td>
			<td>Small Size, Titanium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barraquer Needle Holder, Fine Jaws 12.0mm, Curved With Out Lock</td>
			<td>Rumex International Co.</td>
			<td>8-021T</td>
			<td>Small Size, Titanium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insyte Autoguard BC 22 GA x 1.00 IN</td>
			<td>BD Angiocath / Autoguard</td>
			<td>382523</td>
			<td>22 G x 1.00&#34; (0.9 mm x 25 mm) Wingless catheter, 37 mL/min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BDPrecisionGlide Single-use Needles: Regular Bevel - Regular Wall.</td>
			<td>BD</td>
			<td>B305106</td>
			<td>PrecisionGlide stainless-steel needles with translucent, color-coded, polypropylene hubs. 22 G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Precisionglide Syringe Needle 21G</td>
			<td>BD</td>
			<td>305167</td>
			<td>Gauge 21, length 1.5 inch, hypodermic needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Precisionglide Syringe Needle 30G</td>
			<td>BD</td>
			<td>305128</td>
			<td>Gauge 30, length 1 inch, hypodermic needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Solution by Purdue Products LP</td>
			<td>Purdue Products Lp</td>
			<td>67618-150-17</td>
			<td>10% povidone&#8211;iodine topical solution USP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacaine Injection BP 0.5%</td>
			<td>SteriMax Inc.</td>
			<td>DIN:02443694</td>
			<td>0.5% (100mg/20mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Tying Forceps</td>
			<td>Duckworth &#38; Kent</td>
			<td>2-501E</td>
			<td>6mm tying platforms, straight shafts, flat handle, length 88mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DC Temperature Controller</td>
			<td>FHC Inc.</td>
			<td>40-90-8D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DK Iris Scissors (Curved)</td>
			<td>Duckworth &#38; Kent</td>
			<td>1-211B</td>
			<td>Blunt tips, cut length 4mm, tip to pivot length 11mm, round handle, length 107mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 200 proof (100%), USP, Decon Labs</td>
			<td>Decon Labs, Inc.</td>
			<td>2716</td>
			<td>Dilute to 70% with d2H2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Adjustable Wire Retractor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>17004-05</td>
			<td>Maximum spread: 3.5cm, Depth 5cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harvard Apparatus Isoflurane Funnel-Fill Vaporizer</td>
			<td>Harvard Appartus Limited</td>
			<td>34-1040SV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin LEO(heparin sodium)</td>
			<td>LEO Pharma Inc.</td>
			<td>DIN:00453811</td>
			<td>10,000 i.u./10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice-Pak</td>
			<td>Cryopak</td>
			<td>FIP88016</td>
			<td>4.00 in. x 7.00 in., thickness 1.50 inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane United States Pharmacopeia (USP) 99.9%</td>
			<td>Piramal Healthcare Limited</td>
			<td>DIN: 02231929</td>
			<td>250 mL, Inhalation Anesthetic, NDC 66794-017-25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Khaw Transconjunctival Adjustable Suture Control Forceps</td>
			<td>Duckworth &#38; Kent</td>
			<td>2-502N</td>
			<td>5mm highly polished tying platforms, straight shafts, flat handle, length 84mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactate Ringer&#39;s Injected USP, 1000mL</td>
			<td>Baxter Co.</td>
			<td>DIN: 00061085</td>
			<td>JB2324</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McPherson Tying Forceps</td>
			<td>Duckworth &#38; Kent</td>
			<td>2-500E</td>
			<td>6mm tying platforms, straight shafts, flat handle, length 90mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors - 14.5 cm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14024-14</td>
			<td>Straight Sharp/Blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Kitzmiller Clamp</td>
			<td>Scanlan</td>
			<td>3003-630</td>
			<td>Jaw length 23mm, Length 11cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope-Leica M525 F20</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td>No catalog number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-woven Gauze Sponges</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-028-556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen-Hegar with Suture Cutter</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12002-14</td>
			<td>15 mm cutting edge, 2mm jaw surface - 14cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptixCare Eye Lube, 25gm</td>
			<td>OptixCare</td>
			<td>ES-KE8O-69U1</td>
			<td>Formerly Optixcare Surgical Eye Lubricant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Piperacillin sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8396</td>
			<td>Penicillin analog</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puritan 3&#34; Standard Cotton Swab w/Wooden Handle</td>
			<td>Puritan Medical Products Company LLC</td>
			<td>803-WC</td>
			<td>Regular Cotton Tipped Applicator with Wooden Handle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round Handled Needle Holder Straight w/ Lock</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12075-12</td>
			<td>Round handles allow easy fingertip adjustments - 12.5cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shea Scissors Curved Blunt</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14105-12</td>
			<td>Transplant scissors with light and delicate pattern - 12cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Micro Serrefines Curved - 4mm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18055-06</td>
			<td>Jaw length 4mm, Jaw width 0.75mm, Total length 16mm, Jaw pressure 125g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Micro Serrefines Curved - 6mm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18055-05</td>
			<td>Jaw length 6mm, Jaw width 1mm, Total length 17mm, Jaw pressure 100g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Micro Serrefines Straight - 6mm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18055-03</td>
			<td>Jaw length 6mm, Jaw width 1mm, Total length 15mm, Jaw pressure 100g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Platform</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Custom, magnetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SurgiVet Vaporstick Anesthesia Machine</td>
			<td>General Anesthetic Services, Inc</td>
			<td>V7015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T/Pump Localized Therapy</td>
			<td>Stryker</td>
			<td></td>
			<td>TP700 Series</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum-Pressure Pump</td>
			<td>Barnant Co.</td>
			<td>400-1901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Scissors with Microserrations Straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15070-08</td>
			<td>Cutting edge: 5mm, Tip diameter: 0.1mm - 8.5cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetergesic Buprenorphine</td>
			<td>Ceva Animal Health Ltd</td>
			<td>NAC No.:12380352</td>
			<td>0.324 mg/ml buprenorphine hydochloride Solution for Injection for Dogs and Cats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetroson V-10 Bipolar Electrosurgical Unit</td>
			<td>Summit Hill Laboratories</td>
			<td></td>
			<td>No catalog number</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

reduced complications after arterial reconnection in a rat model of orthotopic liver transplantation

大鼠正畸肝移植（OLT）模型是研究急性和慢性排斥的有力工具。然而，由于缺乏动脉重联，它并不是人类肝移植的完整表现。这里描述的是一个修改后的移植程序，包括整合肝动脉（HA）重新连接，导致移植结果的显著改善。医管局平均肝期为12分钟及14秒，可改善移植肝脏的灌注，使长期受助者存活率由37.5%提高至88.2%。该协议包括使用3D打印袖口和持有人连接门户静脉和红外线劣质静脉卡瓦。它可以用于研究肝移植的多个方面，从免疫反应和感染到程序的技术方面。通过采用微血管技术结合一种简单实用的动脉重接方法，这种经过改良的大鼠OLT协议密切模仿人类肝移植的方方面面，将成为有价值的临床相关研究模型。

在使用上述方案28建立非HA性腺酸虫大鼠OLT模型时，我们的团队在手术后21天和60天分别观察到50%和37.5%的存活率。虽然一些组28日报告了没有HA性腺酸中毒的长期存活率高，但这些早期结果突出了没有动脉流入的缺点。相比之下，优化的HA重新连接程序显著提高了长期存活率，从37.5%增加到88.2%（p = 0.015）（图6）。
对没有HA重新连接（手术后第6天和13天）的移植动物的代表性子集进行组织学分析，发现有百分坏死缺氧肝损伤的迹象（图7）。广泛的肝坏死与这些动物中丙氨酸氨基转移酶（ALT）和阿斯巴酸氨基转移酶（AST）水平的升高有关（图7）。相比之下，移植的小鼠与HA重新连接没有肝损伤的迹象，和组织学分析显示，正常的肝膜结构与有组织的阿西尼，叶（例如，中央静脉和门户三合体与肝静脉），动脉和胆管（图7）。
虽然在23次单独操作中平均肝时间是可以接受的（12分钟和14秒[± 78 s]），但非HA重新连接模型的存活率最终仍有可能随着实践的增加而得到改善。然而，值得注意的是，在没有HA重新连接的情况下移植的四只动物中，有三只（长期存活）在手术后的第56天、第96天和111天因遇险而安乐死。此外，对肝脏的组织学分析揭示了低氧肝损伤后的反应性变化，包括明显的胆管增殖、围体纤维化和炎症，以及扭曲的肝硬化（补充图2）。低氧肝损伤的形态特征的存在证实了HA重接对有效肝灌注和正常功能的重要发现。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig1.jpg"> 图1：3D打印袖口设计的示意图，用于门户静脉和红外线劣质静脉卡瓦。 第一个领带在靠近手柄 （iii） 的凹槽 （ii） 中拧紧，第二个领带拧紧在离手柄最远的凹槽 （i） 中。外径为（iv） 2.38 mm 用于入口静脉 （PV），2.15 mm 用于下部劣质静脉 （IHVC）。光伏的内径为（v）1.74 mm，IHVC 为 1.38 mm。PV 的长度为 （vi） 2.60 mm，IHVC 的长度为 2.15 mm（所有 3D 打印材料的确切规格见 补充材料）。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig1large.jpg" target="_blank">请单击此处查看此图的较大版本。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig2.jpg"> 图2：肝动脉支架插入移植。 （A） 腹腔干干（i）的开口端通过切割腹腔动脉到左胃动脉而变宽，从而暴露了普通HA的分叉。（二） BD支架在提取捐赠鼠肝之前系上绑。（三） PV袖口和（iv）IHVC袖口通过将容器的两端折叠在袖口上来插入和绑住。（B） （i） 要插入 HA 支架，外露的常见 HA 会用钳子拉伸多次。（C） （i） HA 支架牢固地放置在公共 HA 中，并 8-0 捆绑在一起普罗内。（D） （i） HA 支架用 （ii） 林格的乳酸盐溶液 （BD + 胆管， IHVC = 下部低劣的静脉卡瓦， HA = 肝动脉） 冲洗。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig2large.jpg" target="_blank">请单击此处查看此图的较大版本。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig3.jpg"> 图3：使用3D打印支架进行红外线劣质维纳卡瓦连接。 （A） （i） PV 使用与 IHVC 连接相同的技术进行连接。嫁接物 （ii） 夹在 （iii） IHVC 袖口上方。接收者 IHVC 开口 （iv） 在开口的两侧缝合到 3D 打印支架，以保持其拉伸打开。一个松散的 （v） 7-0 丝绸被绑在收件人 IHVC 周围。（B） 移植物 IHVC 的袖口 （i） 插入接收者 IHVC 中。松动的领带现在拧紧了。（C） 夹子被拆下，（i） 3D 打印支架用剪刀分离。（D） 另外 （i） 7-0 丝绸在连接周围绑着，如果不安全，但通常一条领带就足够了（PV = 门户静脉，IHVC = 红外线劣质的维纳卡瓦）。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig3large.jpg" target="_blank">请单击此处查看此图的较大版本。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig4.jpg"> 图4：肝动脉的微血管套连接。 （A） （i） BD 支架未连接到接收方。（二） HA 支架放置在移植物中，与 （iv） 接受者的适当 HA 相连。（iii） PV 已连接。（B） 10-0 ethilon 与 （i） 弯曲的针通过 HA 支架绘制到接收者 HA 开口端的两侧。（C） 10-0 ethilon 通过 HA 支架拉回;因此，接收者适当的HA像套管一样通过支架。（D） （i） 一旦接收者的适当 HA 被拉入支架，然后将 10-0 ethilon 的领带拉入首次穿过 HA 支架的部分的支架中。（E） 此处显示的是（B）、 （ C ） 和 （D） 中描述的 HA 性腺病的示意图 （BD= 胆管、HA = 肝动脉、PV = 门户静脉）。*通过将腹腔动脉切到左胃动脉，腹腔干干的开口端变宽。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig4large.jpg" target="_blank">请单击此处查看此图的较大版本。</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig5.jpg"> 图5：使用两个支架连接胆管。 （A） （i） 移植 BD 支架插入接收方 BD，辅助 （ii） 支架松散地绑在接收方的 BD 开口位置。 （iii） PV 在 BD 连接之前连接，该连接位于 BD 后面。 （B） 接收方 BD 末端的支架被移除，用作加宽开口，以 （i） 插入与移植物相连的 BD 支架。（C） 松散固定接收支架的领带现在用于连接，（i） 另一个 7-0 丝绸用于牢固地保持支架到位，以避免支架滑倒或扭曲。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig5large.jpg" target="_blank">请单击此处查看此图的较大版本。</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig6.jpg"> 图6：移植百分比存活率。 正畸大鼠肝移植无HA重新连接（n = 8）和HA重新连接（n = 17）。动物在移植后被密切跟踪肝衰竭和/或感染的迹象至少60天。手术后未出现并发症的老鼠被视为幸存者（*p = 0.015，根据卡普兰-迈尔估计[长等级测试]计算）。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig6large.jpg" target="_blank">请单击此处查看此图的较大版本。</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig7.jpg"> 图7：肝脏组织病理学评估。 代表性的血氧素和 eosin 染色部分在动物 （A） 没有和 （B） 与肝动脉 （HA） 重新连接在第 6 天和 13 天后肝移植 （LTx）.（C） 正常肝硬化显示门户三合（门户静脉，动脉和胆管），包括中央静脉的球状体，和acini。门户三合会旁边的肝细胞是1区肝细胞;球内中央静脉旁边的肝细胞为3区肝细胞;区域1和3之间的肝细胞是区域2肝细胞（ALT = 丙氨酸氨基转移酶，AST = 阿斯巴酸氨基转移酶，CV = 中央静脉）。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig7large.jpg" target="_blank">请单击此处查看此图的较大版本。</a>
<img alt="Supplementary Figure 1" src="/files/ftp_upload/60628/60628suppfig1.jpg"> 补充图1：支架和袖口尺寸。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628suppfig1large.jpg" target="_blank">请单击此处查看此图的较大版本。</a>
<img alt="Supplementary Figure 2" src="/files/ftp_upload/60628/60628suppfig2.jpg"> 补充图2：肝脏组织病理学评估显示肝硬化功能中断。 在 Ltx 之后的第 54 天、第 96 天和 111 天， 没有 Ha 重新连接的动物中代表赤氧树脂素和 eosin 染色部分。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628suppfig2large.jpg" target="_blank">请点击这里查看这个数字的更大版本。</a>
补充材料1：波尔塔袖口200g - 支持2.0。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary1.stl" target="_blank">请单击此处查看此文件（右键单击以下载）。</a>
补充材料2：卡瓦袖口200g - 支持2.0。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary2.stl" target="_blank">请单击此处查看此文件（右键单击以下载）。</a>
补充材料3：肝脏缩回器200g。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary3.stl" target="_blank">请单击此处查看此文件（右键单击以下载）。</a>
辅助材料 4：后架 - 1.2。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary4.stl" target="_blank">请单击此处查看此文件（右键单击以下载）。</a>
补充材料 5：卡瓦 150g - 2.1.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary5.stl" target="_blank">请单击此处查看此文件（右键单击以下载）。</a>
补充材料6：波尔塔1.4.1。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary6.stl" target="_blank">请单击此处查看此文件（右键单击以下载）。</a>
补充材料7：持有人手臂麦吉尔。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary7.stl" target="_blank">请单击此处查看此文件（右键单击以下载）。</a>
补充材料 8： 支架迷你臂 LAB.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary8.stl" target="_blank">请单击此处查看此文件（右键单击以下载）。</a>
辅助材料 9：支架和手臂软部分 1.3。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary9.stl" target="_blank">请单击此处查看此文件（右键单击以下载）。</a>
辅助材料 10：支架底座 - 3.1。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary10.stl" target="_blank">请单击此处查看此文件（右键单击以下载）。</a>

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Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

本研究的目标是修改大鼠正畸肝移植模型，以更好地代表人类肝移植，提高接受者存活率。提出的方法通过将供体肝脏的常用肝动脉与接受者肝脏的适当的肝动脉连接，重新建立肝动脉流入。

矫形肝移植大鼠模型中动脉重联后并发症减少

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

大鼠正畸肝移植模型是研究肝移植多方面的有力工具。从感染的免疫反应，到程序的技术方面。该技术的主要优点是，它可以减少并发症，更好地代表肝移植，提高接受者的生存。这种经过改良的大鼠正畸肝移植方案密切模仿人类肝移植的方方面面，将作为可变和临床相关的研究模型。我们希望通过视觉演示，观众可以学习所有的细节，缩短学习曲线，掌握这种技术所需的显微外科技能。将300个国际单位的肝素钠注射到麻醉的12至14周大大鼠的肝内劣质静脉注射后，在胆管分叉下做5毫米切口，并将胆管支架插入普通胆管。用一个 7-0 丝连字固定支架，在切口上方 1 毫米，在分叉下方 10 毫米固定一个连体。切断两根领带之间的胆管，露出适当的肝动脉。将胃肠动脉分成两个7-0丝状连体，露出左胃动脉、腹腔动脉和腹腔躯干。然后切断动脉之间的左胃动脉、血状动脉和腹腔躯干。使用装有 21.5 量针的 20 毫升注射器，将 20 毫升 4 摄氏度的林格乳酸溶液缓慢注射到入口静脉中。为了准备供体肝脏，切开腹腔躯干、静脉动脉和左胃动脉的分叉，形成更大的动脉袖口，通过袖口将1.5毫米长的24米动脉支架插入供体普通肝动脉。然后用 8 - 0 固定支架聚丙烯连结，用林格的乳酸溶液冲洗支架。露出12至14周大大鼠接受者入口静脉后，将接受者胆管分在瓷砖分叉下方0.5厘米处，并将胆管支架插入到深肠普通胆管中。暴露左、中、右肝动脉，将血管与肝动脉分叉绑在一起。切断动脉接近肝脏上方的领带，并放置一长薄纱布后，超级肝劣质静脉卡瓦。将 3D 打印的肝内静脉卡瓦架放在肝内静脉卡瓦卡后面，并使用 Tenno 不可吸收的单丝缝合线将 3D 打印手柄的末端缝在一起。松散地将 7-0 丝线字系在 3D 打印支架下方的肝内静脉和门户静脉之间，并夹紧 3D 打印卡瓦架下方右肾静脉下方的肝内静脉。将入口静脉夹在 pyloric 静脉的上方和 3D 打印的 PV 支架下方。使用三毫升注射器与27量针连接，通过门户静脉的分叉冲洗两毫升37摄氏度林格的乳酸溶液，并夹住肝脏上方的超级肝静脉注射夹。然后切入夹下尽可能靠近肝脏，并切在3D打印持有人上方，为门户静脉和肝间静脉间静脉卡瓦切去接受者肝脏。对于供体肝移植，在接受者体腔内小心地定位供体肝脏，以便形成上圆圆的肿瘤。将供体入口静脉袖口插入接收者入口静脉，并拧紧 7-0 丝带。从超级肝静脉中取下创伤夹，并取出入口静脉的微血管夹。用热血重新注入肝脏后，将供体内静脉注射插入接受者肝内静脉卡瓦，用 7-0 丝带固定血管。然后取出供体内肝静脉卡瓦夹，然后再取出接收者剪辑。要进行动脉瘤，切断供体中超出支架的腹腔躯干部分，并夹紧接受者适当的肝动脉。切断端端的领带和容器周围的任何额外组织。并使用林格的乳酸溶液冲洗供体和接受者容器末端的流明。使用弯曲的针，通过供体肝动脉的左侧放置 10-0 ethilon 缝合线，在支架的外孔上方 2.5 毫米，并通过支架的端部进行。将接收者适当的肝动脉从血管左侧的血管孔下方 0.5 毫米的血管转换到动脉右侧。将下一个缝合线从内到外，从内到外，从支架孔与原缝合相同，在10-0不可吸收的单丝两端拉起，将接受者适当的肝动脉向上滑动，并插入肝动脉支架。然后将 10 - 0 不可吸收的单丝与自身绑在供体肝动脉上。冲洗接受者和供体胆管，并将供体胆管插入接受者胆管。然后拧紧以前放在接受者胆管周围的领带。在这个具有代表性的实验中，非肝动脉瘤大鼠正畸肝移植模型分别显示21天和60天后，50%和37.5%的存活率。相比之下，优化的肝动脉重新连接程序显著提高了长期存活率。对没有肝动脉重新连接的移植动物的代表性子集进行组织学分析，发现移植后第6天和第13天出现低氧肝损伤与中央球状坏死的迹象。广泛的肝坏死与这些动物中丙氨酸免疫转移和阿斯巴蒂氨基转移酶水平的极其升高有关。相比之下，肝动脉重接移植的大鼠没有肝损伤的迹象，组织学分析显示肝膜结构正常，有组织性、肺、动脉和胆管。此外，非肝动脉重新连接模型大鼠对肝脏进行组织学分析后发现，低氧肝损伤后反应性变化。包括市场胆管增殖，围兜纤维化和炎症，和扭曲的肝硬化。该协议可以适应研究肝移植的许多免疫学和外科方面，并可以作为一个模型，测试与移植相关的新型治疗干预措施。

Research

JoVE Journal

Medicine

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科研

医学

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Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

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大鼠原位肝移植

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat ...

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部分原位肝移植大鼠模型的肝动脉重建的外科手术

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应用新型磁吻合技术 Suprahepatic 腔静脉重建大鼠原位肝移植模型的研究

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Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

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Left Lung Orthotopic Transplantation in a Juvenile Porcine Model for ESLP

ESLP幼猪模型中的左肺原位移植

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