Name: using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers
Uploaded: 2020-01-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

ويود المؤلفان أن يشكرا الدكتور فويوهيكو تامانوي وبينه فو على التدريب الأولي على هذه الطريقة. وكانت المناقشات مع الدكتورة إيفا كوزيوليك مفيدة في تحسين هذا النهج وحظيت بتقدير كبير. لم يكن هذا العمل ممكناً بدون تمويل من المصادر التالية: زمالة ما بعد الدكتوراه في برنامج أبحاث الأمراض المرتبطة بالتبغ (27FT-0023، إلى ACS)، وزارة الدفاع (وزارة الدفاع) برنامج أبحاث سرطان المبيض (W81XWH-17-1-0160)، NCI/NIH (1R21CA216770)، برنامج أبحاث الأمراض المرتبطة بالتبغ جائزة تجريبية عالية التأثير (27IR-0016)، والدعم المؤسسي في جامعة كاليفورنيا، بما في ذلك منحة بذور JCCC (NCI/NIH P30CA016042) ومنحة 3R من مكتب نائب المستشار للبحوث إلى LW.

تم استعراض جميع التجارب المعروضة هنا والموافقة عليها من قبل اللجان الأخلاقية المناسبة في جامعة كاليفورنيا ، لوس أنجلوس (UCLA). تمت الموافقة على استخدام الأورام البشرية الأولية غير المحددة من قبل مجلس المراجعة المؤسسية في جامعة كاليفورنيا (أرقام البروتوكول 17-000037 و 17-001169 و 11-001363). في جامعة كال?...

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Jackson, S. J., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+tissue+models+in+cancer+research:+looking+beyond+the+mouse.">Human tissue models in cancer research: looking beyond the mouse.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 10 (8), 939-942 (2017).</li><li>Cheon, D. J., Orsulic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Models+of+Cancer.">Mouse Models of Cancer.</a> Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 6 (1), 95-119 (2011).</li><li>. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2016 Available from: <a target="_blank" href="https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/">https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/</a> (2018)</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chicken+chorioallantoic+membrane+angiogenesis+model.">Chicken chorioallantoic membrane angiogenesis model.</a> Methods Molecular Biology. 843, 47-57 (2012).</li><li>Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chicken+chorioallantoic+membrane+model+in+biology,+medicine+and+bioengineering.">The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering.</a> Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).</li><li>Lokman, N. A., Elder, A. S., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+as+an+in+vivo+model+to+study+the+effect+of+newly+identified+molecules+on+ovarian+cancer+invasion+and+metastasis.">Chick chorioallantoic membrane (CAM) assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis.</a> International Journal of Molecular Science. 13 (8), 9959-9970 (2012).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay:+A+3D+Animal+Model+for+Study+of+Human+Nasopharyngeal+Carcinoma.">Chick Chorioallantoic Membrane Assay: A 3D Animal Model for Study of Human Nasopharyngeal Carcinoma.</a> PLoS ONE. 10 (6), e0130935 (2015).</li><li>Deryugina, E. I., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+systems+to+study+and+visualize+human+tumor+cell+metastasis.">Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis.</a> Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1119-1130 (2008).</li><li>Shoin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Embryo+Assay+as+Chemosensitivity+Test+for+Malignant+Glioma.">Chick Embryo Assay as Chemosensitivity Test for Malignant Glioma.</a> Japanese Journal of Cancer Research. 82 (10), 1165-1170 (1991).</li><li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model.">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proceedings of the National Academy of Science U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li><li>Kavaliauskait&#279;, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Sodium+Valproate+on+the+Glioblastoma+U87+Cell+Line+Tumor+Development+on+the+Chicken+Embryo+Chorioallantoic+Membrane+and+on+EZH2+and+p53+Expression.">The Effect of Sodium Valproate on the Glioblastoma U87 Cell Line Tumor Development on the Chicken Embryo Chorioallantoic Membrane and on EZH2 and p53 Expression.</a> BioMed Research International. 2017, 12 (2017).</li><li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Histone+Methyltransferase+EZH2+Mediates+Tumor+Progression+on+the+Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay,+a+Novel+Model+of+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma.">The Histone Methyltransferase EZH2 Mediates Tumor Progression on the Chick Chorioallantoic Membrane Assay, a Novel Model of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma.</a> Translational Oncology. 6 (3), 273-281 (2013).</li><li>Rudy, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Wnt+pathway+inhibition+of+human+squamous+cell+carcinoma+growth+and+metastasis+in+the+chick+chorioallantoic+model.">In vivo Wnt pathway inhibition of human squamous cell carcinoma growth and metastasis in the chick chorioallantoic model.</a> Journal of Otolaryngology - Head &amp; Neck Surgery. 45 (1), 26 (2016).</li><li>Canale, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-27+inhibits+pediatric+B-acute+lymphoblastic+leukemia+cell+spreading+in+a+preclinical+model.">Interleukin-27 inhibits pediatric B-acute lymphoblastic leukemia cell spreading in a preclinical model.</a> Leukemia. 25, 1815 (2011).</li><li>Loos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino-functionalized+nanoparticles+as+inhibitors+of+mTOR+and+inducers+of+cell+cycle+arrest+in+leukemia+cells.">Amino-functionalized nanoparticles as inhibitors of mTOR and inducers of cell cycle arrest in leukemia cells.</a> Biomaterials. 35 (6), 1944-1953 (2014).</li><li>Rovithi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+bioluminescent+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+models+for+primary+pancreatic+cancer+cells:+a+platform+for+drug+testing.">Development of bioluminescent chick chorioallantoic membrane (CAM) models for primary pancreatic cancer cells: a platform for drug testing.</a> Scientific Reports. 7, 44686 (2017).</li><li>Majern&#237;k, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Insights+into+the+Effect+of+Hyperforin+and+Photodynamic+Therapy+with+Hypericin+on+Chosen+Angiogenic+Factors+in+Colorectal+Micro-Tumors+Created+on+Chorioallantoic+Membrane.">Novel Insights into the Effect of Hyperforin and Photodynamic Therapy with Hypericin on Chosen Angiogenic Factors in Colorectal Micro-Tumors Created on Chorioallantoic Membrane.</a> International Journal of Molecular Science. 20 (12), 3004 (2019).</li><li>Swadi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimising+the+chick+chorioallantoic+membrane+xenograft+model+of+neuroblastoma+for+drug+delivery.">Optimising the chick chorioallantoic membrane xenograft model of neuroblastoma for drug delivery.</a> BMC Cancer. 18 (1), 28 (2018).</li><li>Klingenberg, M., Becker, J., Eberth, S., Kube, D., Wilting, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+as+an+in+vivo+xenograft+model+for+Burkitt+lymphoma.">The chick chorioallantoic membrane as an in vivo xenograft model for Burkitt lymphoma.</a> BMC Cancer. 14 (1), 339 (2014).</li><li>Avram, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+A375+human+melanoma+models+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+and+Balb/c+nude+mice.">Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice.</a> Oncology Reports. 38 (1), 89-99 (2017).</li><li>Zabielska-Koczywas, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+as+an+in+vivo+model+to+study+morphological+and+histopathological+features+of+feline+fibrosarcomas.">3D chick embryo chorioallantoic membrane model as an in vivo model to study morphological and histopathological features of feline fibrosarcomas.</a> BMC Veterinary Research. 13 (1), 201 (2017).</li><li>Skowron, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+assay+to+study+treatment+approaches+in+urothelial+carcinoma.">Applying the chicken embryo chorioallantoic membrane assay to study treatment approaches in urothelial carcinoma.</a> Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations. 35 (9), e511-e523 (2017).</li><li>Jefferies, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+imaging+of+engineered+human+tumors+in+the+living+chicken+embryo.">Non-invasive imaging of engineered human tumors in the living chicken embryo.</a> Scientific Reports. 7 (1), 4991 (2017).</li><li>Taizi, M., Deutsch, V. R., Leitner, A., Ohana, A., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+rapid+in+vivo+system+for+testing+therapeutics+on+human+leukemias.">A novel and rapid in vivo system for testing therapeutics on human leukemias.</a> Experimental Hematology. 34 (12), 1698-1708 (2006).</li><li>Strojnik, T., Kavalar, R., Barone, T. A., Plunkett, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+model+and+immunohistochemical+comparison+of+U87+human+glioblastoma+cell+xenografts+on+the+chicken+chorioallantoic+membrane+and+in+rat+brains.">Experimental model and immunohistochemical comparison of U87 human glioblastoma cell xenografts on the chicken chorioallantoic membrane and in rat brains.</a> Anticancer Research. 30 (12), 4851-4860 (2010).</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+model+for+tumor+biology.">The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology.</a> Experimental Cell Research. 328 (2), 314-324 (2014).</li><li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non-integrating+Lentiviral+Approach+Overcomes+Cas9-Induced+Immune+Rejection+to+Establish+an+Immunocompetent+Metastatic+Renal+Cancer+Model.">A Non-integrating Lentiviral Approach Overcomes Cas9-Induced Immune Rejection to Establish an Immunocompetent Metastatic Renal Cancer Model.</a> Molecular Therapy - Methods &amp; Clinical Development. 9, 203-210 (2018).</li></ol>

توسيع الورم وتطعيم باستخدام نموذج CAM يسمح نمو الورم أسرع ويمكن ملاحظته مباشرة من الموجودة في نماذج الحيوانات الحي. وبالإضافة إلى ذلك، فإن التكاليف تكون أقل بكثير بمجرد الانتهاء من الشراء الأولي للمعدات، لا سيما بالمقارنة مع تكلفة الفئران التي لا تنقصها المناعة. تسمح الحالة الأولية المنق?...

وقد عملت الفئران ككائن تقليدي نموذجي لدراسة الأمراض البشرية، بما في ذلك الأورام الخبيثة. كما الثدييات، فإنها تشترك في العديد من أوجه التشابه مع البشر. وقد سمحت درجة عالية من التشابه الجيني التلاعب المعدلة وراثيا من جينوم الماوس لتوفير نظرة هائلة في السيطرة الجينية للأمراض البشرية1. وقد أدت الخبرة الواسعة في التعامل مع الفئران وتجريبها في كونها النموذج المفضل للبحوث الطبية الحيوية. ومع ذلك ، بالإضافة إلى المخاوف الأخلاقية والعلمية بشأن نماذج المورين ، فإنها يمكن أن تكون مكلفة للغاية وتستغرق وقتًا طويلاً2،3. يمكن أن يستغرق تطور الأورام أسابيع أو حتى أشهر. السكن في مؤسسة نموذجية وحدها يمكن أن تعمل في مئات إلى آلاف الدولارات في حين أن الأورام تتطور. سرطان المبيض هو مثال على هذا العيب لأن نموه في نماذج مورين يمكن أن يستغرق أشهرا بسهولة. التأخير في التقدم البحثي يحتمل أن تؤثر على مرضى سرطان المبيض منخفضة باستمرار 5 سنوات معدل البقاء على قيد الحياة من 47٪ فقط (أي زيادة في البقاء على قيد الحياة فقط 10٪ على مدى 30 عاما)4. وبالمثل، تشكل سرطانات المسالك البولية (سرطانات الكلى والبروستاتا والمثانة) 19% من جميع حالات السرطان في الولايات المتحدة و11% من الوفيات المرتبطة بالسرطان4. وهكذا، فإن رواية في الجسم الحي لنهج لدراسة أمراض النساء وسرطان المسالك البولية يمكن أن توفر مختبر الكثير من الوقت، والعمل، والمال، حتى لو تم تطبيق هذا النموذج فقط على تجارب الفحص الأولي. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يؤثر تسارع نتائج البحوث الناتج عن ذلك بشكل كبير على 177,000 شخص يتم تشخيصهم بهذه السرطانات سنويًا.
نموذج كام الدجاج يقدم العديد من المزايا التي تعالج القضايا المذكورة أعلاه. نموذج شعبي لدراسة تولد الأوعية5،6، غزو الخلايا السرطانية7،8، والانبثاث7،9، وقد تم بالفعل استخدام نموذج الفرخ الجنين CAM لدراسة العديد من أشكال السرطان ، بما في ذلك الورم الدبقي10،11،12، سرطان الخلايا الحرشفية الرأس والرقبة13،14، سرطان الدم15،16، سرطان البنكرياس17، و سرطان القولون والمستقيم18. بالإضافة إلى ذلك، تم إنشاء نماذج CAM للورم الأرومي العصبي19، سرطان الغدد الليمفاوية بيركيت20، سرطان الجلد21، والفيساركوما القطط22. وقد قدمت الدراسات السابقة أيضا تطعيم سرطان المثانة23 وخطوط خلايا سرطان البروستاتا24، ولكن مع تفاصيل بروتوكول محدودة. ليس فقط البيض أرخص بكثير من الفئران ، ولكنها تنتج أيضا نتائج قابلة للاستنساخ للغاية25،26. أنها تظهر تطور الأوعية الدموية السريع، ويمكن أن يحدث تطعيم الورم في أسرع بضعة أيام وتصور طوليا من خلال النافذة المفتوحة. مع الإطار الزمني 21 يوما بين تخصيب البويضة والفقس، يمكن الانتهاء من التجارب في غضون أسابيع قليلة. وعلاوة على ذلك، فإن انخفاض التكلفة، ومحدودية الاحتياجات السكنية، وصغر الحجم يسمحان بسهولة بإجراء تجارب واسعة النطاق من شأنها أن تكون مانعة لدراسات الفئران.
لذلك ، سعينا إلى تحسين نموذج CAM لتطعيم سرطانات أمراض النساء والمسالك البولية. نظرًا لحالة نقص المناعة لجنين الدجاج المبكر27، يمكن زرع كل من الخلايا الماوسية والبشرية بسهولة. على هذا النحو، نجحنا في تطعيم سرطانالمبيض والكلى والبروستاتا والمثانة. لكل من هذه الأنواع من الأورام, CAM يقبل بسهولة المورين المنشأة و / أو خطوط خلايا الورم البشري. الأهم من ذلك، يمكن أن الأنسجة الورم البشري الأولية حصادها حديثا أيضا إينجرافمنالمن الخلايا المهضمة أو قطع من الأنسجة الصلبة مع معدلات عالية من النجاح. كل من هذه الأنواع السرطان ومصادر الخلايا يتطلب التحسين، والتي نشارك هنا.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>-010 Teflon (PTFE) White 55 Duro Shore D O-Rings</td>
			<td>The O-Ring Store</td>
			<td>TEF010</td>
			<td>Nonstick ring for cell seeding. 1/4&#34;ID X 3/8&#34;OD X 1/16&#34;CS Polytetrafluoroethylene (PTFE).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C4-2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3314</td>
			<td>Human prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CWR22Rv1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CWR cells were the kind gift of Dr. David Agus (Keck Medicine of University of Southern California)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 8/18 Antibody (C-51)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-44929-0.02mg</td>
			<td>Used at a dilution of 1:100 for immunohistochemical analysis of human ovarian CAM tumors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin Firefly, potassium salt</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Curved; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4-3/4 in. Overall Length</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS6703</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved scissors would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max Tool Kit</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>8050-N/18</td>
			<td>This kit contains all necessary tools.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertilized chicken eggs (Rhode Island Red - Brown, Lab Grade)</td>
			<td>AA Lab Eggs Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>A local egg supplier would need to be identified, as this supplier only delivers regionally.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HT-1376</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1472</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hovabator Genesis 1588 Deluxe Egg Incubator Combo Kit</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>HB1588D-NONE-1102-1588-1357</td>
			<td>Other egg incubators may be used, but their reliability would need to be verified. After implantation, a cell incubator with the CO2 disabled may also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ID8</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Not commercially available, please see PMID: 10753190.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incu-Bright Cool Light Egg Candler</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>1102</td>
			<td>Other candlers may be used; however, this is preferred among those that we have tested. This candler is included in the aforementioned incubator kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps, 10cm, Curved, Serrated, 0.8mm tips</td>
			<td>World Precision Instrument</td>
			<td>15915</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved forceps would work as well. Multiple brands have been used for this method.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Clipper Distributing</td>
			<td>0010250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina II In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Membrane Matrix HC; LDEV-Free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354248</td>
			<td>Extracellular matrix solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MyC-CaP</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3255</td>
			<td>Murine prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Pipet-Aid XP Pipette Controller</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>4-000-101</td>
			<td>Any similar pipet controller would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Hypodermic Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td>This is provided as an example. Any 18G needle would work similarly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RENCA</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semken Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11008-13</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar forceps or another style that suits researcher preference would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SKOV3</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-77</td>
			<td>Human ovarian cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72914</td>
			<td>This is provided as an example. The forceps used for pulling away the shell for bioluminescence imaging are approximately 12.8 cm long with 3 mm-wide tips.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cotton Balls</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-456-885</td>
			<td>This is provided as an example. Any sterile cotton balls would suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stirring Rods with Rubber Policeman; 5mm diameter, 6 in. length</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>GRPL06</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar glass stir rods would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T24</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-4</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Transparent Dressing Original Frame Style 2 3/8&#34; x 2 3/4&#34;</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>21272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dishes, 10 cm diameter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar, sterile 10-cm dish may be used. Tissue culture treatment is not necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Clear Laboratory Tubing - 1/4 x 3/8 x 1/16 wall (50 feet)</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>AACUN017</td>
			<td>This is provided as an example. Any similarly sized tubing would work as well.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers

نماذج الماوس هي الاختبارات القياسية في دراسات السرطان في الجسم الحي. ومع ذلك، أدت التكلفة والوقت والاعتبارات الأخلاقية إلى دعوات لبديل في نماذج السرطان في الجسم الحي. يوفر نموذج غشاء الدجاج (CAM) بديلًا سريعًا وغير مكلف يسمح بالتصور المباشر لتطور الورم ومناسب للتصوير في الجسم الحي. على هذا النحو، سعينا لتطوير بروتوكول الأمثل لتطعيم الأورام النسائية والمسالك البولية في هذا النموذج، الذي نقدم هنا. ما يقرب من 7 أيام بعد الإخصاب ، يتم نقل خلية الهواء إلى الجانب الوعائي من البيض ، حيث يتم إنشاء فتحة في القشرة. ثم يمكن أن الأورام من المورين وخطوط الخلايا البشرية والأنسجة الأولية أن تتطعيم. وعادة ما تزرع هذه في خليط من مصفوفة خارج الخلية والمتوسطة لتجنب التشتت الخلوي وتوفير الدعم الغذائي حتى الخلايا تجنيد إمدادات الأوعية الدموية. قد تنمو الأورام بعد ذلك لمدة تصل إلى 14 يومًا إضافيًا قبل تفقيس البيض. من خلال زرع الخلايا المنقولة بشكل ثابت مع لوسيفيراز اليراعة ، يمكن استخدام التصوير الحيوي للكشف الحساس عن نمو الورم على الغشاء والخلايا السرطانية المنتشرة في جميع أنحاء الجنين. يمكن استخدام هذا النموذج لدراسة الورم والغزو والانبثاث والفعالية العلاجية. نموذج CAM الدجاج يتطلب وقتا أقل بكثير والموارد المالية بالمقارنة مع نماذج المورين التقليدية. نظرًا لأن البويضات لا تُحصى المناعة وتتسم بالمناعة، فمن المحتمل أن يتم زرع الأنسجة من أي كائن حي دون الحيوانات المعدلة وراثياً المكلفة (مثل الفئران) اللازمة لزرع الأنسجة البشرية. ومع ذلك، فإن العديد من مزايا هذا النموذج يمكن أن تكون أيضا القيود، بما في ذلك وقت توليد الورم القصير وحالة مناعة/مناعة متسامحة. بالإضافة إلى ذلك، على الرغم من أن جميع أنواع الأورام المعروضة هنا في engraft نموذج غشاء chorioallantoic الدجاج، يفعلون ذلك مع درجات متفاوتة من نمو الورم.

حتى الآن ، وجدنا أن هذه الطريقة في الزرع ناجحة لسرطان المبيض والكلى والبروستاتا والمثانة. تم تحسين كل منها لتحديد شروط محددة للزرع ، على الرغم من أنه قد تكون هناك مرونة. من أنواع الورم المختبرة ، كان نمو سرطان المبيض أقل وضوحًا ولا يظهر عادة ً دون مساعدة من التصوير الحيوي<s...

Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

نقدم نموذج غشاء chorioallantoic الدجاج كبديل، قابل للزرع، في نموذج الجسم الحي لتطعيم خطوط خلايا سرطان النساء والمسالك البولية والأورام المشتقة من المريض.

استخدام غشاء Chorioallantoic الدجاج في نموذج Vivo لدراسة أمراض النساء وسرطان المسالك البولية

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...

ويمكن استخدام engraftment من الأورام على الغشاء الكوراليالنتويكي الدجاج، أو CAM، لدراسات الأورام، وفعالية العلاج أو عبر الخلوية. هذه الطريقة تسمح فعالة من حيث التكلفة نمو الورم السريع في المُناعته للمناعة في وضع الجسم الحي. باستخدام نموذج CAM، يمكن اختبار الأساليب العلاجية الجديدة بسرعة باستخدام خطوط الخلايا أو حتى عينات الورم المريض.الجوانب الأكثر أهمية من هذا البروتوكول هي ضمان تشكيل CAM السليم وعدم تعطيل CAM أو الأوعية الدموية أثناء فتح البيض. في يوم النمو سبعة أو ثمانية عندما تم تطوير CAM بالكامل، إيقاف دوار البيض ووضع ما يقرب من واحد إلى ثلاث بيضات في رف البيض في مجلس الوزراء السلامة البيولوجية. مع إطفاء الأنوار ، ضع شمعة بيض ضد قشرة البيض لتحديد وتحديد موقع خلية الهواء لبيضة واحدة ، ثم تحريك شمعة البيض فوق القشرة للعثور على شبكة كبيرة من الأوعية الدموية ، وتناوب البيضة حسب الضرورة.سوف تتفرع الأوعية الدموية المثالي بالقرب من منتصف البيض. استخدم علامة لتتبع الأوعية الدموية لاستخدامها في الزرع. بعد العودة على ضوء في غطاء محرك السيارة، واستخدام أداة دوارة لاسلكية مزودة حجر طحن كربيد السيليكون لحفر حفرة صغيرة في قذيفة مباشرة فوق مركز الخلية الهوائية.عندما تم إزالة معظم قذيفة ولكن مع غشاء داخلي أبيض سليمة، حفر ثقب صغير آخر حيث سيتم فتح نافذة الأوعية الدموية كما أظهرت للتو. عندما تكون الحفرة الثانية جاهزة، استخدم إبرة قياس 18 لاختراق الغشاء الداخلي الأبيض بلطف فوق خلية الهواء والأوعية الدموية مع الحرص على أن الغشاء الداخلي الأبيض، ولكن ليس CAM، يتم تعطيله في جميع أنحاء المنطقة المحفورة بأكملها. مع ضوء غطاء محرك السيارة مرة أخرى، استخدم شمعة البيض للتحقق من أن خلية الهواء قد تم نقلها من نهاية البيض إلى المنطقة على الأوعية الدموية.إذا لزم الأمر، ضع فراغ أنابيب إدراجها في وحدة تحكم ماصة حول ثقب على خلية الهواء الأصلي وتطبيق بلطف شفط في رشقات نارية قصيرة لتحريك خلية الهواء. وضع علامة على الخطوط العريضة للموقع الجديد من خلية الهواء ما يقرب من 0.5 سنتيمتر داخل الحدود CAM الهواء وإصلاح قطعة من التعبئة الشريط فقط كبيرة بما يكفي لتغطية ثقب على خلية الهواء الجديدة. بعد إعداد البيضين الآخرين كما هو موضح للتو ، أعد البيض إلى الحاضنة وفتح أي بيض إضافي للتجربة في مجموعات من واحد إلى ثلاثة كما هو موضح.عندما تم فتح كل البيض، نقل واحد إلى ثلاث بيضات مع خلايا الهواء المنقولة إلى رف البيض في مجلس الوزراء السلامة الحيوية واستخدام أداة دوارة لاسلكية مزودة عجلة قطع دائرية لقطع خط صغير على حدود الخلية الهوائية تماما من خلال الخلية دون تعطيل كام أو الأوعية الدموية. باستخدام مقص منحني، قطع حول خلية الهواء المتبقية لإنشاء نافذة في قذيفة والتحقق من صلاحية الجنين. سوف الأجنة قابلة للحياة عرض الأوعية الدموية واسعة النطاق، الألبومين واضحة، حركة الجنين، و / أو ضربات القلب مرئية.في الأجنة غير القابلة للحياة، قد تظهر كام مبهمة مع عدد قليل من الأوعية، إن وجدت، وقد تكون الأجنة صغيرة أو غائبة دون حركة أو نبضات قلب. باستخدام ملقط Semkin، سحب قطع صغيرة من القطن من كرة القطن العقيمة ولطخ بلطف سطح كام من الأجنة قابلة للحياة لإزالة أي الغبار قذيفة والحطام، ثم تغطية فتحة قذيفة مع قطعة ربع من ستة في سبعة سنتيمترات فيلم شفافة خلع الملابس دون لمس CAM وإعادة البيض إلى الحاضنة مع نافذة مفتوحة تواجه. استخدام قطعة من رف البيض، حافة دوار البيض، أو عنصر آخر مناسب لدعم أي البيض التي تبقي المتداول.لإعداد تعليق الخلايا السرطانية لزرعها، حصاد الخلايا من ثقافة الخلايا السرطانية من الفائدة ورواسب الخلايا عن طريق الطرد المركزي. استلهمت من فوق الطاقة و إعادة ميكانيكيا الخلايا في الوسط المتبقية. ضع تعليق الخلية على الجليد واستخدم ماصة لقياس حجم الخلايا في المتوسط.ثم إعادة تركيز الخلايا بتركيز من واحد إلى مليوني خلية في 20 إلى 100 ميكرولترات من المتوسطة تستكمل مع 2.7 إلى 4 ملليغرام لكل ملليلتر مصفوفة خارج الخلية وأي عوامل نمو أو إضافات أخرى من الفائدة. لزرع الخلايا السرطانية، وذلك باستخدام حلقة غير عصا، وضع ما يصل إلى ست بيضات ليتم زرعها على رف البيض ولفة حواف فيلم شفاف خلع الملابس نحو النافذة المفتوحة لإزالة الفيلم من قذائف. تحقق من ما إذا كان البيض قابلًا للحياة وصحيًا.سوف البيض المثالي يكون وعاء كبير مع أصغر متفرعة السفن داخل وسط المنطقة المفتوحة. باستخدام ملقط قزحية منحنية منحنية، وضع حلقة غير عصا العقيمة على CAM على السفينة بشكل مثالي على نقطة فرع. استخدام قضيب اثارة الزجاج المعقم لbrade بلطف CAM والماصات تعليق خلية السرطان في وسط الحلبة.عندما تم تسليم جميع الخلايا، ختم الافتتاح مع قطعة ربع من ستة في سبعة سنتيمترات فيلم شفافة خلع الملابس وتسمية البيض مع تعيين زرع المناسبة. ثم وضع البيض بشكل آمن في الحاضنة مع فتح قذيفة التي تواجه تستقيم. لزرع الخلايا السرطانية دون استخدام حلقة غير لاصقة، يُطرّع تعليق الخلية إلى طرف ماصات بحجم مناسب ويحمل الجزء العلوي من الحافة إخراج طرف الماصات بعناية ووضع الطرف أفقيًا في طبق زراعة الأنسجة المعقم 10 سنتيمتر.بعد تحميل النصائح ، ضع الطبق في حاضنة درجة 37 درجة مئوية لمدة 15 إلى 30 دقيقة ، والتحقق من البلمرة بعد 15 دقيقة. وهناك كمية صغيرة من السائل تسرب عادة كما يتم وضع كل طرف في الطبق. استخدم هذا السائل لتقدير مدى البلمرة داخل الطرف.عندما تكون المصفوفة جاهزة، ضع طرفًا واحدًا على ماصة بحجم مناسب وينكض المكبس لإجبار تعليق الخلية البلمرة جزئياً على CAM بشكل مثالي على نقطة متفرعة من وعاء كبير متطور. باستخدام هذه الطرق، كل من الإنسان و murine خطوط سرطان المبيض وقطع الورم الأولية أسفرت عن نجاح engraftment من الأورام مع morphologies تتفق مع تلك التي لوحظت في نماذج أخرى في الجسم الحي. من أنواع الأورام المختبرة، كان نمو سرطان المبيض أقل وضوحًا بكثير وعادةً ما لا يظهر دون مساعدة تصوير الإضاءة الحيوية.ويمكن أيضا أن تكون آثار إضافة عوامل النمو أو الهرمونات في وقت زرع اختبار باستخدام هذه الطرق. لسرطان الكلى، زرع خلايا سرطان الخلايا الكلوية واضحة من خطوط الخلايا المنشأة أو قطع من أورام الكلى البشرية الأولية تنتج سريعة، وتشكيل الورم قوية. وعلاوة على ذلك، تم استخدام العديد من الإنسان وsine البروستاتا خطوط الخلايا السرطانية والخطوط البشرية سرطان الخلايا وقطع الورم الأولية لإنشاء الأورام باستخدام هذا النموذج.من الأهمية بمكان تجنب تعطيل CAM والأوعية الدموية والتأكد من أن CAM لا تلتزم بـ shell أثناء فتح النافذة. بعد نجاح engraftment، يمكن استخدام نموذج CAM لتقييم الفعالية العلاجية للعلاجات ذات الاهتمام أو التفاعلات بين أنواع الخلايا المختلفة داخل الورم.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

Coculture فحوصات لدراسة البلاعم والخلايا الدبقية الصغيرة تحفيز من ورم أرومي دبقي الغزو

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

ال<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; تخيلي ورم القرص نموذج: التصور والكمي للالتعبير الجيني وغزو الورم عن طريق الفسيفساء الوراثية

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

تصوير لايف لدراسة أنيبيب عدم الاستقرار الديناميكي في سرطان الثدي المقاومة للالتاكسين

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

الكشف عن إمكانات غشاء الميتوكوندريا لدراسة CLIC4 HN4 المستحثة بضربه قاضية الخلية المبرمج في المختبر

Depletion of the mitochondrial membrane potential (MMP, &#916;&#936;m) is considered the earliest event in the apoptotic cascade. It even occurs ahead of ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

في فيفو تقييم الجيش الشعبي الثوري لدرجة الحموضة، فس2، حالة الأكسدة والاختزال، وتركيزات الفوسفات والجلوتاثيون في "ورم المكروية"

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

نموذج الرئة اللاخلوي والخلوية لدراسة ورم خبيث

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

الحصول على خلايا السرطان الجذعية من أورام أمراض النساء وسرطان الثدي

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

مقارنة النقيلي واضحة خلية الخلايا الكلوية نموذج سرطان الخلايا المنشأة في الكلى الماوس وعلى غشاء Chorioallantoic الدجاج

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

استخدام تحليل الصور القائم على الكمبيوتر لتحسين القياس الكمي لنقائل الرئة في نموذج سرطان الثدي 4T1

Breast cancer is a devastating malignancy, accounting for 40,000 female deaths and 30% of new female cancer diagnoses in the United States in 2019 alone. ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

اكتشاف المنظمين النقيلي باستخدام نموذج الغشاء السريع والكمي داخل الفرخ Chorioallantoic

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...