Name: using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers
Uploaded: 2020-01-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

Forfatterne ønsker at takke Dr. Fuyuhiko Tamanoi og Binh Vu for den indledende uddannelse på denne metode. Drøftelser med Dr. Eva Koziolek har været medvirkende til at optimere denne tilgang og har været meget værdsat. Dette arbejde ville ikke have været muligt uden finansiering fra følgende kilder: Tobaksrelaterede Sygdomme Research Program Postdoctoral Fellowship (27FT-0023, til ACS), Department of Defense (DoD) Ovariecancer Research Program (W81XWH-17-1-0160), NCI / NIH (1R21CA216770), Tobak-Relaterede Sygdomme Research Program High Impact Pilot Award (27IR-0016), og UCLA institutionel støtte, herunder et JCCC Seed Grant (NCI/NIH P30CA016042) og et 3R-tilskud fra vicekansler for forskning til LW.

Alle de eksperimenter, der præsenteres heri, blev gennemgået og godkendt af de relevante etiske udvalg ved University of California, Los Angeles (UCLA). Brugen af identificerede, primære menneskelige tumorer er blevet godkendt af UCLA Institutional Review Board (Protokol numre 17-000037, 17-001169, og 11-001363). På UCLA er animal research committee gennemgang ikke påkrævet for forsøg med kylling embryoner; protokolgodkendelse er kun påkrævet, når æggene udklækkes. Men bedste praksis, såsom AVMA's retningsli...

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Jackson, S. J., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+tissue+models+in+cancer+research:+looking+beyond+the+mouse.">Human tissue models in cancer research: looking beyond the mouse.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 10 (8), 939-942 (2017).</li><li>Cheon, D. J., Orsulic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Models+of+Cancer.">Mouse Models of Cancer.</a> Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 6 (1), 95-119 (2011).</li><li>. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2016 Available from: <a target="_blank" href="https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/">https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/</a> (2018)</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chicken+chorioallantoic+membrane+angiogenesis+model.">Chicken chorioallantoic membrane angiogenesis model.</a> Methods Molecular Biology. 843, 47-57 (2012).</li><li>Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chicken+chorioallantoic+membrane+model+in+biology,+medicine+and+bioengineering.">The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering.</a> Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).</li><li>Lokman, N. A., Elder, A. S., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+as+an+in+vivo+model+to+study+the+effect+of+newly+identified+molecules+on+ovarian+cancer+invasion+and+metastasis.">Chick chorioallantoic membrane (CAM) assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis.</a> International Journal of Molecular Science. 13 (8), 9959-9970 (2012).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay:+A+3D+Animal+Model+for+Study+of+Human+Nasopharyngeal+Carcinoma.">Chick Chorioallantoic Membrane Assay: A 3D Animal Model for Study of Human Nasopharyngeal Carcinoma.</a> PLoS ONE. 10 (6), e0130935 (2015).</li><li>Deryugina, E. I., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+systems+to+study+and+visualize+human+tumor+cell+metastasis.">Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis.</a> Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1119-1130 (2008).</li><li>Shoin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Embryo+Assay+as+Chemosensitivity+Test+for+Malignant+Glioma.">Chick Embryo Assay as Chemosensitivity Test for Malignant Glioma.</a> Japanese Journal of Cancer Research. 82 (10), 1165-1170 (1991).</li><li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model.">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proceedings of the National Academy of Science U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li><li>Kavaliauskait&#279;, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Sodium+Valproate+on+the+Glioblastoma+U87+Cell+Line+Tumor+Development+on+the+Chicken+Embryo+Chorioallantoic+Membrane+and+on+EZH2+and+p53+Expression.">The Effect of Sodium Valproate on the Glioblastoma U87 Cell Line Tumor Development on the Chicken Embryo Chorioallantoic Membrane and on EZH2 and p53 Expression.</a> BioMed Research International. 2017, 12 (2017).</li><li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Histone+Methyltransferase+EZH2+Mediates+Tumor+Progression+on+the+Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay,+a+Novel+Model+of+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma.">The Histone Methyltransferase EZH2 Mediates Tumor Progression on the Chick Chorioallantoic Membrane Assay, a Novel Model of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma.</a> Translational Oncology. 6 (3), 273-281 (2013).</li><li>Rudy, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Wnt+pathway+inhibition+of+human+squamous+cell+carcinoma+growth+and+metastasis+in+the+chick+chorioallantoic+model.">In vivo Wnt pathway inhibition of human squamous cell carcinoma growth and metastasis in the chick chorioallantoic model.</a> Journal of Otolaryngology - Head &amp; Neck Surgery. 45 (1), 26 (2016).</li><li>Canale, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-27+inhibits+pediatric+B-acute+lymphoblastic+leukemia+cell+spreading+in+a+preclinical+model.">Interleukin-27 inhibits pediatric B-acute lymphoblastic leukemia cell spreading in a preclinical model.</a> Leukemia. 25, 1815 (2011).</li><li>Loos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino-functionalized+nanoparticles+as+inhibitors+of+mTOR+and+inducers+of+cell+cycle+arrest+in+leukemia+cells.">Amino-functionalized nanoparticles as inhibitors of mTOR and inducers of cell cycle arrest in leukemia cells.</a> Biomaterials. 35 (6), 1944-1953 (2014).</li><li>Rovithi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+bioluminescent+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+models+for+primary+pancreatic+cancer+cells:+a+platform+for+drug+testing.">Development of bioluminescent chick chorioallantoic membrane (CAM) models for primary pancreatic cancer cells: a platform for drug testing.</a> Scientific Reports. 7, 44686 (2017).</li><li>Majern&#237;k, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Insights+into+the+Effect+of+Hyperforin+and+Photodynamic+Therapy+with+Hypericin+on+Chosen+Angiogenic+Factors+in+Colorectal+Micro-Tumors+Created+on+Chorioallantoic+Membrane.">Novel Insights into the Effect of Hyperforin and Photodynamic Therapy with Hypericin on Chosen Angiogenic Factors in Colorectal Micro-Tumors Created on Chorioallantoic Membrane.</a> International Journal of Molecular Science. 20 (12), 3004 (2019).</li><li>Swadi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimising+the+chick+chorioallantoic+membrane+xenograft+model+of+neuroblastoma+for+drug+delivery.">Optimising the chick chorioallantoic membrane xenograft model of neuroblastoma for drug delivery.</a> BMC Cancer. 18 (1), 28 (2018).</li><li>Klingenberg, M., Becker, J., Eberth, S., Kube, D., Wilting, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+as+an+in+vivo+xenograft+model+for+Burkitt+lymphoma.">The chick chorioallantoic membrane as an in vivo xenograft model for Burkitt lymphoma.</a> BMC Cancer. 14 (1), 339 (2014).</li><li>Avram, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+A375+human+melanoma+models+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+and+Balb/c+nude+mice.">Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice.</a> Oncology Reports. 38 (1), 89-99 (2017).</li><li>Zabielska-Koczywas, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+as+an+in+vivo+model+to+study+morphological+and+histopathological+features+of+feline+fibrosarcomas.">3D chick embryo chorioallantoic membrane model as an in vivo model to study morphological and histopathological features of feline fibrosarcomas.</a> BMC Veterinary Research. 13 (1), 201 (2017).</li><li>Skowron, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+assay+to+study+treatment+approaches+in+urothelial+carcinoma.">Applying the chicken embryo chorioallantoic membrane assay to study treatment approaches in urothelial carcinoma.</a> Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations. 35 (9), e511-e523 (2017).</li><li>Jefferies, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+imaging+of+engineered+human+tumors+in+the+living+chicken+embryo.">Non-invasive imaging of engineered human tumors in the living chicken embryo.</a> Scientific Reports. 7 (1), 4991 (2017).</li><li>Taizi, M., Deutsch, V. R., Leitner, A., Ohana, A., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+rapid+in+vivo+system+for+testing+therapeutics+on+human+leukemias.">A novel and rapid in vivo system for testing therapeutics on human leukemias.</a> Experimental Hematology. 34 (12), 1698-1708 (2006).</li><li>Strojnik, T., Kavalar, R., Barone, T. A., Plunkett, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+model+and+immunohistochemical+comparison+of+U87+human+glioblastoma+cell+xenografts+on+the+chicken+chorioallantoic+membrane+and+in+rat+brains.">Experimental model and immunohistochemical comparison of U87 human glioblastoma cell xenografts on the chicken chorioallantoic membrane and in rat brains.</a> Anticancer Research. 30 (12), 4851-4860 (2010).</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+model+for+tumor+biology.">The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology.</a> Experimental Cell Research. 328 (2), 314-324 (2014).</li><li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non-integrating+Lentiviral+Approach+Overcomes+Cas9-Induced+Immune+Rejection+to+Establish+an+Immunocompetent+Metastatic+Renal+Cancer+Model.">A Non-integrating Lentiviral Approach Overcomes Cas9-Induced Immune Rejection to Establish an Immunocompetent Metastatic Renal Cancer Model.</a> Molecular Therapy - Methods &amp; Clinical Development. 9, 203-210 (2018).</li></ol>

Tumor ekspansion og engraftment ved hjælp af CAM model tillader hurtigere og direkte observerbare tumor vækst end eksisterende in vivo dyremodeller. Desuden er omkostningerne betydeligt lavere, når det oprindelige køb af udstyr er afsluttet, især sammenlignet med omkostningerne ved immunkompromitterede mus. Den oprindelige, immunkompromitterede tilstand af kylling embryoner let tillader engraftment af humane og murine væv. Selv med disse styrker har CAM-modellen begrænsninger. Den korte tid, der kan være en forde...

Mus har tjent som den klassiske model organisme for studiet af sygdomme hos mennesker, herunder malignitet. Som pattedyr deler de mange ligheder med mennesker. Deres høje grad af genetisk lighed har gjort det muligt for transgen manipulation af musegenomet at give enorm indsigt i den genetiske kontrol af sygdommehos mennesker 1. Omfattende erfaring i håndtering af og eksperimenter med mus har resulteret i, at de er den foretrukne model for biomedicinsk forskning. Men ud over de etiske og videnskabelige bekymringer vedrørende murine modeller, kan de også være ganske dyrt og tidskrævende2,3. Udviklingen af tumorer kan tage uger eller endda måneder. Boligerne på en typisk institution alene kan køre i hundreder til tusindvis af dollars, mens tumorer er ved at udvikle. Kræft i æggestokkene er et eksempel på denne ulempe, fordi dens vækst i murine modeller let kan tage måneder. Forsinkelser i forskningsfremskridt påvirker potentielt kræftpatienter i æggestokkenes vedvarende lave 5-årige overlevelsesrate på kun 47 % (dvs. en stigning i overlevelsen på kun 10 % over 30 år)4. Tilsvarende, urologiske kræftformer (nyre-, prostata- og blærekræft) udgør 19% af alle kræfttilfælde i USA og 11% af kræftrelaterede dødsfald4. Således kan en ny in vivo tilgang til at studere gynækologiske og urologiske kræftformer spare et laboratorium lang tid, arbejdskraft og penge, selv om denne model kun anvendes til indledende screening eksperimenter. Derudover, den resulterende acceleration af forskningsresultater kan påvirke de 177.000 personer diagnosticeret med disse kræftformer årligt.
Kylling CAM model tilbyder mange fordele, der løser de førnævnte spørgsmål. En populær model til at studere angiogenese5,6,tumorcelle invasion7,8,og metastase7,9, chick embryo CAM model er allerede blevet brugt til at studere mange former for kræft, herunder gliom10,11,12, hoved og hals planocellulært karcinom13,14, leukæmi15,16, kræft i bugspytkirtlen17, og kolorektal cancer18. Derudover, CAM modeller er blevet genereret for neuroblastoma19, Burkitt lymfom20, melanom21,og feline fibrosarkom22. Tidligere undersøgelser har også præsenteret engraftment af blærekræft23 og prostatakræft cellelinjer24, men med begrænset protokol detaljer. Ikke alene er æg meget billigere end mus, men de producerer også meget reproducerbare resultater25,26. De viser hurtig vaskulatur udvikling, og tumor engraftment kan forekomme i så hurtigt som et par dage og visualiseres langsgående gennem det åbne vindue. Med 21 dages tidsramme mellem ægbefrugtning og udklækning, kan eksperimenter være afsluttet inden for et par uger. Desuden tillader de lave omkostninger, begrænsede boligbehov og små størrelselet eksperimenter, der ville være uoverkommelige for musestudier.
Derfor forsøgte vi at optimere CAM-modellen til engraftment af gynækologiske og urologiske kræftformer. På grund af den immunkompromitterede status af den tidlige kylling embryo27, både mus og menneskelige celler kan implanteres let. Som sådan har vi med succes podet æggestokkene, nyre, prostata, og blærekræft. For hver af disse tumortyper accepterer CAM let etablerede murine og/eller humane tumorcellelinjer. Vigtigere, friskhøstet primære menneskelige tumorvæv kan også engraft fra enten fordøjet celler eller stykker af fast væv med høje succesrater. Hver af disse kræfttyper og cellekilder kræver optimering, som vi deler her.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>-010 Teflon (PTFE) White 55 Duro Shore D O-Rings</td>
			<td>The O-Ring Store</td>
			<td>TEF010</td>
			<td>Nonstick ring for cell seeding. 1/4&#34;ID X 3/8&#34;OD X 1/16&#34;CS Polytetrafluoroethylene (PTFE).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C4-2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3314</td>
			<td>Human prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CWR22Rv1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CWR cells were the kind gift of Dr. David Agus (Keck Medicine of University of Southern California)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 8/18 Antibody (C-51)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-44929-0.02mg</td>
			<td>Used at a dilution of 1:100 for immunohistochemical analysis of human ovarian CAM tumors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin Firefly, potassium salt</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Curved; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4-3/4 in. Overall Length</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS6703</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved scissors would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max Tool Kit</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>8050-N/18</td>
			<td>This kit contains all necessary tools.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertilized chicken eggs (Rhode Island Red - Brown, Lab Grade)</td>
			<td>AA Lab Eggs Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>A local egg supplier would need to be identified, as this supplier only delivers regionally.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HT-1376</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1472</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hovabator Genesis 1588 Deluxe Egg Incubator Combo Kit</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>HB1588D-NONE-1102-1588-1357</td>
			<td>Other egg incubators may be used, but their reliability would need to be verified. After implantation, a cell incubator with the CO2 disabled may also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ID8</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Not commercially available, please see PMID: 10753190.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incu-Bright Cool Light Egg Candler</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>1102</td>
			<td>Other candlers may be used; however, this is preferred among those that we have tested. This candler is included in the aforementioned incubator kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps, 10cm, Curved, Serrated, 0.8mm tips</td>
			<td>World Precision Instrument</td>
			<td>15915</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved forceps would work as well. Multiple brands have been used for this method.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Clipper Distributing</td>
			<td>0010250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina II In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Membrane Matrix HC; LDEV-Free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354248</td>
			<td>Extracellular matrix solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MyC-CaP</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3255</td>
			<td>Murine prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Pipet-Aid XP Pipette Controller</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>4-000-101</td>
			<td>Any similar pipet controller would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Hypodermic Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td>This is provided as an example. Any 18G needle would work similarly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RENCA</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semken Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11008-13</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar forceps or another style that suits researcher preference would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SKOV3</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-77</td>
			<td>Human ovarian cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72914</td>
			<td>This is provided as an example. The forceps used for pulling away the shell for bioluminescence imaging are approximately 12.8 cm long with 3 mm-wide tips.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cotton Balls</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-456-885</td>
			<td>This is provided as an example. Any sterile cotton balls would suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stirring Rods with Rubber Policeman; 5mm diameter, 6 in. length</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>GRPL06</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar glass stir rods would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T24</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-4</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Transparent Dressing Original Frame Style 2 3/8&#34; x 2 3/4&#34;</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>21272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dishes, 10 cm diameter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar, sterile 10-cm dish may be used. Tissue culture treatment is not necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Clear Laboratory Tubing - 1/4 x 3/8 x 1/16 wall (50 feet)</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>AACUN017</td>
			<td>This is provided as an example. Any similarly sized tubing would work as well.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers

Musemodeller er benchmarktest for in vivo kræft undersøgelser. Men, omkostninger, tid og etiske overvejelser har ført til opfordringer til alternative in vivo kræftmodeller. Kylling chorioallantoic membran (CAM) model giver en billig, hurtig alternativ, der tillader direkte visualisering af tumor udvikling og er velegnet til in vivo imaging. Som sådan forsøgte vi at udvikle en optimeret protokol til ompodning gynækologiske og urologiske tumorer i denne model, som vi præsenterer her. Ca. 7 dage efterbefrugtning, luftcellen flyttes til den vaskulære side af ægget, hvor en åbning er skabt i skallen. Tumorer fra murine og menneskelige cellelinjer og primære væv kan derefter indpodet. Disse er typisk seedet i en blanding af ekstracellulære matrix og medium for at undgå cellulære spredning og give næringsstof støtte, indtil cellerne rekruttere en vaskulær forsyning. Tumorer kan derefter vokse i op til yderligere 14 dage før æggene ruge. Ved at implantere celler stabilt transduceret med firefly luciferase, bioluminescens imaging kan bruges til følsom påvisning af tumorvækst på membranen og kræftcelle spredes i hele fosteret. Denne model kan potentielt bruges til at studere tumorigenicity, invasion, metastase, og terapeutisk effektivitet. Kylling CAM model kræver betydeligt mindre tid og finansielle ressourcer i forhold til traditionelle murine modeller. Da æggene er immunkompromitterede og immuntolerante, kan væv fra enhver organisme potentielt implanteres uden dyre transgene dyr (f.eks. mus), der kræves til implantation af humane væv. Men, mange af fordelene ved denne model kunne potentielt også være begrænsninger, herunder den korte tumor generation tid og immunkompromitteret / immuntolerant status. Derudover, selv om alle tumor typer præsenteres her engraft i kylling chorioallantoic membran model, de gør det med varierende grader af tumor vækst.

Hidtil har vi fundet denne metode til implantation at være en succes for æggestokkene, nyre, prostata, og blærekræft. Hver blev optimeret til at identificere specifikke betingelser for implantation, selv om der kan være fleksibilitet. Af de testede tumortyper var væksten i æggestokkene langt mindre udtalt og typisk ikke synlig uden hjælp fra bioluminescensbilleddannelse (figur 1). Men en afstivning af CAM kunne mærkes med pincet i området for implan...

Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

Vi præsenterer kylling chorioallantoic membran model som en alternativ, transplanterbar, in vivo model for engraftment af gynækologiske og urologiske kræft cellelinjer og patient-afledte tumorer.

Brug af kylling chorioallantoic membran i Vivo Model til at studere gynækologiske og urologiske kræftformer

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...

Den engraftment af tumorer på kylling chorioallantoic membran, eller CAM, kan bruges til undersøgelser af tumorigenicity, behandling effekt eller cellulære krydstale. Denne metode tillader omkostningseffektiv hurtig tumorvækst i en immunotolerant in vivo indstilling. Ved hjælp af CAM-modellen kan nye terapeutiske tilgange hurtigt testes ved hjælp af cellelinjer eller endda patienttumorprøver.De mest afgørende aspekter af denne protokol er at sikre korrekt CAM-dannelse og ikke forstyrre CAM eller vaskulaturen, mens æggene åbnes. På udviklingsdagen syv eller otte, når CAM'en er fuldt udviklet, skal du slukke for æggets rotator og placere ca. et til tre æg i ægolen i biosikkerhedsskabet. Med lysene slukket, skal du placere et æg lysestager mod æggeskallen til at identificere og markere placeringen af luftcellen af et æg, derefter flytte ægget lysestager over skallen for at finde et stort blodkar netværk, roterende ægget efter behov.En ideel vaskulatur vil gren nær midten af ægget. Brug en markør til at spore den vaskulatur, der skal anvendes til implantation. Når du har skruet lyset i hætten igen, skal du bruge et trådløst roterende værktøj udstyret med en siliciumcarbid slibesten til at bore et lille hul i skallen direkte over midten af luftcellen.Når det meste af skallen er fjernet, men med hvid indre membran intakt, bore et andet lille hul, hvor det vaskulære vindue vil blive åbnet som netop påvist. Når det andet hul er klar, skal du bruge en 18 gauge nål til forsigtigt at gennembore den hvide indre membran over luftcellen og vaskulaturen, idet der skal være en pasning af, at den hvide indre membran, men ikke CAM, forstyrres i hele det borede område. Når emhætten er slukket igen, skal du bruge æggetslysen til at kontrollere, at luftcellen er blevet overført fra enden af ægget til området over vaskulaturen.Hvis det er nødvendigt, placere vakuumslange indsat i en pipette controller omkring hullet over den oprindelige luftcelle og forsigtigt anvende suge i korte byger til at flytte luftcellen. Marker omridset af den nye placering af luftcellen ca. 0,5 centimeter inde i luft-CAM-grænsen, og fastgør et stykke emballagetape lige stor nok til at dække hullet over den nye luftcelle. Efter at have forberedt de to andre æg som blot påvist, returneres æggene til rugemaskinen, og eventuelle yderligere æg til forsøget åbnes i grupper på en til tre som påvist.Når alle æggene er åbnet, overføres et til tre æg med flyttede luftceller til ægolen i et biosikkerhedsskab, og der anvendes et trådløst roterende værktøj udstyret med et cirkulært skærehjul til at skære en lille linje over luftcellegrænsen helt gennem cellen uden at forstyrre CAM eller vaskulaturen. Ved hjælp af buet saks skæres omkring den resterende luftcelle for at skabe et vindue i skallen og kontrollere embryoets levedygtighed. Levedygtige embryoner vil vise en omfattende vaskulatur, klar albumin, embryo bevægelse, og / eller en synlig hjerteslag.I ikke-levedygtige embryoner kan CAM forekomme uigennemsigtig med få, hvis nogen, beholdere til stede, og embryonerne kan være små eller fraværende uden bevægelse eller et hjerteslag. Brug Semkin scelint, trække små stykker bomuld fra en steril vat og forsigtigt blot CAM overfladen af de levedygtige embryoner til at fjerne enhver shell støv og snavs, derefter dække skallen åbning med en fjerdedel stykke seks af syv centimeter gennemsigtig film dressing uden at røre CAM og returnere æggene til rugemaskinen med det åbne vindue vender opad. Brug et stykke æg rack, kanten af ægget rotator, eller en anden egnet element til at prop eventuelle æg, der holder rullende.For at forberede kræft celle suspension til transplantation, høste cellerne fra kræft celle kultur af interesse og sediment cellerne ved centrifugering. Inspirer supernatanten og opspjæn dem mekanisk cellerne i restmediet. Placer cellesuspensionen på is og brug en pipette til at måle mængden af celler i medium.Derefter resuspenderede cellerne i en koncentration af en til to millioner celler i 20 til 100 mikroliter af medium suppleret med 2,7 til 4 mg / milliliter ekstracellulære matrix og eventuelle vækstfaktorer eller andre tilsætningsstoffer af interesse. For kræft celle implantation, ved hjælp af en non-stick ring, placere op til seks æg, der skal implanteres på ægget rack og rulle kanterne af den gennemsigtige film dressing mod det åbne vindue for at fjerne filmen fra skallerne. Kontroller, om æggene er levedygtige og sunde.Ideelle æg vil have et stort fartøj med mindre forgrening fartøjer i midten af det åbne område. Ved hjælp af buede irisforpinceser skal du placere en steril non-stick ring på CAM'et over fartøjet ideelt over et grenspunkt. Brug en steril glasrørstang til forsigtigt at abrade CAM og pipette kræftcellesuspensionen ind i midten af ringen.Når alle cellerne er leveret, forsegles åbningen med et kvart stykke seks gange syv centimeter gennemsigtig filmforbinding og mærkes ægget med en passende implantatbetegnelse. Læg derefter æggene sikkert i inkubatoren med åbningen af skallen vendt oprejst. At implantere kræftceller uden brug af en non-stick ring, aspirere celle suspension i en passende størrelse pipette spids og holde den øverste del af spidsen forsigtigt skubbe pipetten spidsen og placere spidsen vandret i en steril 10 centimeter væv kultur parabol.Når spidserne er blevet indlæst, skal du placere skålen i en 37 grader Celsius inkubator i 15 til 30 minutter, kontrollere for polymerisering efter 15 minutter. En lille mængde væske vil typisk sive ud, da hver spids er placeret i skålen. Brug denne væske til at vurdere omfanget af polymeriseringen i spidsen.Når matrixen er klar, skal du placere en spids på en pipette i passende størrelse og trykke stemplet ned for at tvinge den delvist polymeriserede celleaffjedring på CAM ideelt over det forgrenede punkt på et stort veludviklet kar. Ved hjælp af disse metoder, både menneskelige og murine kræft i æggestokkene cellelinjer og primære tumor stykker resulterede i en vellykket engraftment af tumorer med morfologier i overensstemmelse med dem, der observeres i andre in vivo modeller. Af de testede tumortyper, kræft i æggestokkene vækst var langt mindre udtalt og typisk ikke synlig uden hjælp fra bioluminescens imaging.Virkningerne af at tilføje vækstfaktorer eller hormoner på tidspunktet for implantation kan også testes ved hjælp af disse metoder. For nyrekræft, implantation af klare celle nyrecellekarcinom celler fra etablerede cellelinjer eller stykker fra primære menneskelige nyretumorer producerer hurtig, robust tumordannelse. Yderligere, flere menneskelige og murine prostatakræft cellelinjer og menneskelige blærekræft cellelinjer og primære tumor stykker var blevet brugt til at etablere tumorer ved hjælp af denne model.Det er afgørende at undgå at forstyrre CAM og vaskulaturen og sikre, at CAM'et ikke overholder skallen, mens vinduet åbnes. Efter en vellykket engraftment, CAM-modellen kan bruges til at vurdere den terapeutiske effekt af behandlinger af interesse eller interaktioner mellem forskellige celletyper i en tumor.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

Cokultur Analyser til Undersøgelse makrofag og Mikroglia Stimulering af glioblastoma Invasion

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

Det<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginære Disc Tumor Model: Visualisering og Kvantificering af genekspression og tumorindtrængen Brug Genetic Mosaics

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

Live-Imaging til at studere på mikrotubulus Dynamisk Ustabilitet i taxan-resistent brystkræft

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Påvisning af mitokondrier membran potentiale til at studere CLIC4 Knockdown-induceret HN4 celle apoptose In Vitro

Depletion of the mitochondrial membrane potential (MMP, &#916;&#936;m) is considered the earliest event in the apoptotic cascade. It even occurs ahead of ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR vurdering af pH, pO2, Redox Status, og koncentrationen af fosfat og glutathion i Tumor mikromiljø

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Acellulær og cellulære Lung Model til at studere Tumor metastaser

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Opnåelse kræft stamceller kugler fra gynækologiske og brystkræft tumorer

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

Sammenligning metastatisk klar celle renal celle karcinom model etableret i mus nyre og på Kylling Chorioallantoic Membran

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

Brug computer-baseret billedanalyse til at forbedre kvantificeringen af lungemetastase i 4T1 Breast Cancer Model

Breast cancer is a devastating malignancy, accounting for 40,000 female deaths and 30% of new female cancer diagnoses in the United States in 2019 alone. ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

Opdagelsen af metastatiske regulatorer ved hjælp af en hurtig og kvantitativ intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...