Name: using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers
Uploaded: 2020-01-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

De auteurs willen Dr. Fuyuhiko Tamanoi en Binh Vu bedanken voor de initiële training over deze methode. Discussies met Dr Eva Koziolek zijn instrumenteel geweest in het optimaliseren van deze aanpak en zijn zeer gewaardeerd. Dit werk zou niet mogelijk zijn geweest zonder financiering uit de volgende bronnen: de Tabak-Gerelateerde Ziekte Research Program Postdoctoral Fellowship (27FT-0023, ACS), het Ministerie van Defensie (DoD) Ovarian Cancer Research Program (W81XWH-17-1-0160), NCI / NIH (1R21CA216770), Tabak-Gerelateerde Ziekte Research Program High Impact Pilot Award (27IR-0016), en institutionele UCLA ondersteuning, waaronder een JCCC Seed Grant (NCI/NIH P30CA016042) en een 3R Grant van Office of the Vice Chancellor for Research aan LW.

Alle experimenten die hierin werden gepresenteerd werden beoordeeld en goedgekeurd door de juiste ethische commissies aan de Universiteit van Californië, Los Angeles (UCLA). Het gebruik van gedeidentificeerde, primaire menselijke tumoren is goedgekeurd door de UCLA Institutional Review Board (Protocolnummers 17-000037, 17-001169 en 11-001363). Bij UCLA is onderzoek van het Comité voor dieronderzoek niet nodig voor experimenten met kippenembryo's; protocol goedkeuring is alleen vereist wanneer de eieren zullen worden ui...

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Jackson, S. J., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+tissue+models+in+cancer+research:+looking+beyond+the+mouse.">Human tissue models in cancer research: looking beyond the mouse.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 10 (8), 939-942 (2017).</li><li>Cheon, D. J., Orsulic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Models+of+Cancer.">Mouse Models of Cancer.</a> Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 6 (1), 95-119 (2011).</li><li>. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2016 Available from: <a target="_blank" href="https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/">https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/</a> (2018)</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chicken+chorioallantoic+membrane+angiogenesis+model.">Chicken chorioallantoic membrane angiogenesis model.</a> Methods Molecular Biology. 843, 47-57 (2012).</li><li>Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chicken+chorioallantoic+membrane+model+in+biology,+medicine+and+bioengineering.">The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering.</a> Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).</li><li>Lokman, N. A., Elder, A. S., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+as+an+in+vivo+model+to+study+the+effect+of+newly+identified+molecules+on+ovarian+cancer+invasion+and+metastasis.">Chick chorioallantoic membrane (CAM) assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis.</a> International Journal of Molecular Science. 13 (8), 9959-9970 (2012).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay:+A+3D+Animal+Model+for+Study+of+Human+Nasopharyngeal+Carcinoma.">Chick Chorioallantoic Membrane Assay: A 3D Animal Model for Study of Human Nasopharyngeal Carcinoma.</a> PLoS ONE. 10 (6), e0130935 (2015).</li><li>Deryugina, E. I., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+systems+to+study+and+visualize+human+tumor+cell+metastasis.">Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis.</a> Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1119-1130 (2008).</li><li>Shoin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Embryo+Assay+as+Chemosensitivity+Test+for+Malignant+Glioma.">Chick Embryo Assay as Chemosensitivity Test for Malignant Glioma.</a> Japanese Journal of Cancer Research. 82 (10), 1165-1170 (1991).</li><li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model.">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proceedings of the National Academy of Science U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li><li>Kavaliauskait&#279;, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Sodium+Valproate+on+the+Glioblastoma+U87+Cell+Line+Tumor+Development+on+the+Chicken+Embryo+Chorioallantoic+Membrane+and+on+EZH2+and+p53+Expression.">The Effect of Sodium Valproate on the Glioblastoma U87 Cell Line Tumor Development on the Chicken Embryo Chorioallantoic Membrane and on EZH2 and p53 Expression.</a> BioMed Research International. 2017, 12 (2017).</li><li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Histone+Methyltransferase+EZH2+Mediates+Tumor+Progression+on+the+Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay,+a+Novel+Model+of+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma.">The Histone Methyltransferase EZH2 Mediates Tumor Progression on the Chick Chorioallantoic Membrane Assay, a Novel Model of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma.</a> Translational Oncology. 6 (3), 273-281 (2013).</li><li>Rudy, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Wnt+pathway+inhibition+of+human+squamous+cell+carcinoma+growth+and+metastasis+in+the+chick+chorioallantoic+model.">In vivo Wnt pathway inhibition of human squamous cell carcinoma growth and metastasis in the chick chorioallantoic model.</a> Journal of Otolaryngology - Head &amp; Neck Surgery. 45 (1), 26 (2016).</li><li>Canale, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-27+inhibits+pediatric+B-acute+lymphoblastic+leukemia+cell+spreading+in+a+preclinical+model.">Interleukin-27 inhibits pediatric B-acute lymphoblastic leukemia cell spreading in a preclinical model.</a> Leukemia. 25, 1815 (2011).</li><li>Loos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino-functionalized+nanoparticles+as+inhibitors+of+mTOR+and+inducers+of+cell+cycle+arrest+in+leukemia+cells.">Amino-functionalized nanoparticles as inhibitors of mTOR and inducers of cell cycle arrest in leukemia cells.</a> Biomaterials. 35 (6), 1944-1953 (2014).</li><li>Rovithi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+bioluminescent+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+models+for+primary+pancreatic+cancer+cells:+a+platform+for+drug+testing.">Development of bioluminescent chick chorioallantoic membrane (CAM) models for primary pancreatic cancer cells: a platform for drug testing.</a> Scientific Reports. 7, 44686 (2017).</li><li>Majern&#237;k, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Insights+into+the+Effect+of+Hyperforin+and+Photodynamic+Therapy+with+Hypericin+on+Chosen+Angiogenic+Factors+in+Colorectal+Micro-Tumors+Created+on+Chorioallantoic+Membrane.">Novel Insights into the Effect of Hyperforin and Photodynamic Therapy with Hypericin on Chosen Angiogenic Factors in Colorectal Micro-Tumors Created on Chorioallantoic Membrane.</a> International Journal of Molecular Science. 20 (12), 3004 (2019).</li><li>Swadi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimising+the+chick+chorioallantoic+membrane+xenograft+model+of+neuroblastoma+for+drug+delivery.">Optimising the chick chorioallantoic membrane xenograft model of neuroblastoma for drug delivery.</a> BMC Cancer. 18 (1), 28 (2018).</li><li>Klingenberg, M., Becker, J., Eberth, S., Kube, D., Wilting, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+as+an+in+vivo+xenograft+model+for+Burkitt+lymphoma.">The chick chorioallantoic membrane as an in vivo xenograft model for Burkitt lymphoma.</a> BMC Cancer. 14 (1), 339 (2014).</li><li>Avram, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+A375+human+melanoma+models+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+and+Balb/c+nude+mice.">Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice.</a> Oncology Reports. 38 (1), 89-99 (2017).</li><li>Zabielska-Koczywas, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+as+an+in+vivo+model+to+study+morphological+and+histopathological+features+of+feline+fibrosarcomas.">3D chick embryo chorioallantoic membrane model as an in vivo model to study morphological and histopathological features of feline fibrosarcomas.</a> BMC Veterinary Research. 13 (1), 201 (2017).</li><li>Skowron, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+assay+to+study+treatment+approaches+in+urothelial+carcinoma.">Applying the chicken embryo chorioallantoic membrane assay to study treatment approaches in urothelial carcinoma.</a> Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations. 35 (9), e511-e523 (2017).</li><li>Jefferies, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+imaging+of+engineered+human+tumors+in+the+living+chicken+embryo.">Non-invasive imaging of engineered human tumors in the living chicken embryo.</a> Scientific Reports. 7 (1), 4991 (2017).</li><li>Taizi, M., Deutsch, V. R., Leitner, A., Ohana, A., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+rapid+in+vivo+system+for+testing+therapeutics+on+human+leukemias.">A novel and rapid in vivo system for testing therapeutics on human leukemias.</a> Experimental Hematology. 34 (12), 1698-1708 (2006).</li><li>Strojnik, T., Kavalar, R., Barone, T. A., Plunkett, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+model+and+immunohistochemical+comparison+of+U87+human+glioblastoma+cell+xenografts+on+the+chicken+chorioallantoic+membrane+and+in+rat+brains.">Experimental model and immunohistochemical comparison of U87 human glioblastoma cell xenografts on the chicken chorioallantoic membrane and in rat brains.</a> Anticancer Research. 30 (12), 4851-4860 (2010).</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+model+for+tumor+biology.">The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology.</a> Experimental Cell Research. 328 (2), 314-324 (2014).</li><li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non-integrating+Lentiviral+Approach+Overcomes+Cas9-Induced+Immune+Rejection+to+Establish+an+Immunocompetent+Metastatic+Renal+Cancer+Model.">A Non-integrating Lentiviral Approach Overcomes Cas9-Induced Immune Rejection to Establish an Immunocompetent Metastatic Renal Cancer Model.</a> Molecular Therapy - Methods &amp; Clinical Development. 9, 203-210 (2018).</li></ol>

Tumorexpansie en -engraftment met behulp van het CAM-model maakt een snellere en direct waarneembare tumorgroei mogelijk dan bestaande in vivo diermodellen. Bovendien zijn de kosten aanzienlijk lager zodra de eerste aankoop van apparatuur is voltooid, vooral in vergelijking met de kosten van immuungecompromitteerde muizen. De eerste, immuungecompromitteerde toestand van kippenembryo's maakt het gemakkelijk mogelijk engraftment van menselijk en murineweefsel. Zelfs met deze sterke punten heeft het CAM-model beperkingen. D...

Muizen hebben gediend als het klassieke model organisme voor de studie van menselijke ziekten, met inbegrip van maligniteit. Als zoogdieren, ze delen veel overeenkomsten met de mens. Hun hoge mate van genetische gelijkenis heeft transgene manipulatie van het muizengenoom toegestaan om een enorm inzicht te geven in de genetische bestrijding van menselijke ziekten1. Uitgebreide ervaring in de behandeling van en experimenteren met muizen heeft geresulteerd in hun zijn het model van keuze voor biomedisch onderzoek. Echter, in aanvulling op de ethische en wetenschappelijke bezorgdheid met betrekking tot murine modellen, kunnen ze ook vrij duur en tijdrovend2,3. De ontwikkeling van tumoren kan weken of zelfs maanden duren. De huisvesting bij een typische instelling alleen kan draaien in de honderden tot duizenden dollars, terwijl tumoren zich ontwikkelen. Eierstokkanker is een voorbeeld van dit nadeel, omdat de groei van murine modellen kan gemakkelijk maanden duren. Vertragingen in de voortgang van het onderzoek hebben mogelijk gevolgen voor de aanhoudend lage overlevingskans van 5 jaar van 5 jaar van patiënten met eierstokkanker (d.w.z. een toename van de overleving van slechts 10% over 30 jaar)4. Op dezelfde manier vormen urologische kankers (nier-, prostaat- en blaaskanker) 19% van alle kankergevallen in de Verenigde Staten en 11% van de sterfgevallen in verband met kanker4. Zo kan een nieuwe in vivo benadering van gynaecologische en urologische kankers een laboratorium veel tijd, arbeid en geld besparen, zelfs als dit model alleen wordt toegepast op eerste screeningexperimenten. Bovendien kan de resulterende versnelling van de onderzoeksresultaten aanzienlijke gevolgen hebben voor de 177.000 personen gediagnosticeerd met deze kankers per jaar.
Het kip CAM model biedt vele voordelen die de bovengenoemde problemen aanpakken. Een populair model voor het bestuderen van angiogenese5,6, tumorcel invasie7,8, en metastase7,9, het kuiken embryo CAM model is al gebruikt om vele vormen van kanker te bestuderen, waaronder glioom10,11,12, hoofd en nek plaveiselcelcarcinoom13,14,leukemie15,16, alvleesklierkanker17, en colorectale kanker18. Daarnaast zijn CAM-modellen gegenereerd voor neuroblastoom19, Burkitt lymfoom20, melanoom21, en feline fibrosarcoma22. Eerdere studies hebben ook gepresenteerd engraftment van blaaskanker23 en prostaatkanker cel lijnen24, maar met beperkte protocol details. Eieren zijn niet alleen veel goedkoper dan muizen, maar produceren ook zeer reproduceerbare resultaten25,26. Ze tonen een snelle vasculatuur ontwikkeling, en tumor engraftment kan optreden in zo snel als een paar dagen en worden in de lengterichting gevisualiseerd door het open venster. Met het 21 dagen tijdsbestek tussen eibevruchting en uitkomen, kunnen experimenten binnen een paar weken worden voltooid. Bovendien, de lage kosten, beperkte huisvesting behoeften, en kleine omvang gemakkelijk mogelijk grootschalige experimenten die onbetaalbaar zou zijn voor muis studies.
Daarom hebben we geprobeerd om het CAM-model te optimaliseren voor de engraftment van gynaecologische en urologische kankers. Door de immunogecompromitteerde status van het vroege kippenembryo27kunnen zowel muis- als menselijke cellen gemakkelijk worden geïmplanteerd. Als zodanig hebben we met succes geënt eierstokkanker, nier-, prostaat- en blaaskanker. Voor elk van deze tumortypes accepteert de CAM gemakkelijk gevestigde murine- en/of menselijke tumorcellijnen. Belangrijk is dat vers geoogste primaire menselijke tumorweefsels ook kunnen enten van verteerde cellen of stukken vast weefsel met een hoog succespercentage. Elk van deze soorten kanker en celbronnen vereist optimalisatie, die we hier delen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>-010 Teflon (PTFE) White 55 Duro Shore D O-Rings</td>
			<td>The O-Ring Store</td>
			<td>TEF010</td>
			<td>Nonstick ring for cell seeding. 1/4&#34;ID X 3/8&#34;OD X 1/16&#34;CS Polytetrafluoroethylene (PTFE).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C4-2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3314</td>
			<td>Human prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CWR22Rv1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CWR cells were the kind gift of Dr. David Agus (Keck Medicine of University of Southern California)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 8/18 Antibody (C-51)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-44929-0.02mg</td>
			<td>Used at a dilution of 1:100 for immunohistochemical analysis of human ovarian CAM tumors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin Firefly, potassium salt</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Curved; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4-3/4 in. Overall Length</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS6703</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved scissors would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max Tool Kit</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>8050-N/18</td>
			<td>This kit contains all necessary tools.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertilized chicken eggs (Rhode Island Red - Brown, Lab Grade)</td>
			<td>AA Lab Eggs Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>A local egg supplier would need to be identified, as this supplier only delivers regionally.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HT-1376</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1472</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hovabator Genesis 1588 Deluxe Egg Incubator Combo Kit</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>HB1588D-NONE-1102-1588-1357</td>
			<td>Other egg incubators may be used, but their reliability would need to be verified. After implantation, a cell incubator with the CO2 disabled may also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ID8</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Not commercially available, please see PMID: 10753190.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incu-Bright Cool Light Egg Candler</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>1102</td>
			<td>Other candlers may be used; however, this is preferred among those that we have tested. This candler is included in the aforementioned incubator kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps, 10cm, Curved, Serrated, 0.8mm tips</td>
			<td>World Precision Instrument</td>
			<td>15915</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved forceps would work as well. Multiple brands have been used for this method.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Clipper Distributing</td>
			<td>0010250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina II In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Membrane Matrix HC; LDEV-Free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354248</td>
			<td>Extracellular matrix solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MyC-CaP</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3255</td>
			<td>Murine prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Pipet-Aid XP Pipette Controller</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>4-000-101</td>
			<td>Any similar pipet controller would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Hypodermic Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td>This is provided as an example. Any 18G needle would work similarly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RENCA</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semken Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11008-13</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar forceps or another style that suits researcher preference would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SKOV3</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-77</td>
			<td>Human ovarian cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72914</td>
			<td>This is provided as an example. The forceps used for pulling away the shell for bioluminescence imaging are approximately 12.8 cm long with 3 mm-wide tips.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cotton Balls</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-456-885</td>
			<td>This is provided as an example. Any sterile cotton balls would suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stirring Rods with Rubber Policeman; 5mm diameter, 6 in. length</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>GRPL06</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar glass stir rods would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T24</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-4</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Transparent Dressing Original Frame Style 2 3/8&#34; x 2 3/4&#34;</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>21272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dishes, 10 cm diameter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar, sterile 10-cm dish may be used. Tissue culture treatment is not necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Clear Laboratory Tubing - 1/4 x 3/8 x 1/16 wall (50 feet)</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>AACUN017</td>
			<td>This is provided as an example. Any similarly sized tubing would work as well.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers

Muismodellen zijn de benchmarktests voor in vivo kankerstudies. Kosten, tijd en ethische overwegingen hebben echter geleid tot oproepen tot alternatieve in vivo kankermodellen. Het kipchorioallantoïsche membraan (CAM) model biedt een goedkoop, snel alternatief dat directe visualisatie van tumorontwikkeling mogelijk maakt en geschikt is voor in vivo beeldvorming. Als zodanig probeerden we een geoptimaliseerd protocol te ontwikkelen voor het enten van gynaecologische en urologische tumoren in dit model, dat we hier presenteren. Ongeveer 7 dagen na bevruchting wordt de luchtcel verplaatst naar de gevasculariseerde kant van het ei, waar een opening in de schaal wordt gecreëerd. Tumoren uit murine en menselijke cellijnen en primaire weefsels kunnen dan worden geënt. Deze zijn meestal gezaaid in een mengsel van extracellulaire matrix en medium om cellulaire verspreiding te voorkomen en bieden voedingsstoffen ondersteuning totdat de cellen werven een vasculaire levering. Tumoren kunnen dan groeien tot een extra 14 dagen voorafgaand aan de eieren uitkomen. Door het implanteren van cellen stabiel getrans-transduced met firefly luciferase, bioluminescentie beeldvorming kan worden gebruikt voor de gevoelige detectie van tumorgroei op het membraan en kankercel verspreid over het embryo. Dit model kan mogelijk worden gebruikt om tumorigeniciteit, invasie, metastase en therapeutische effectiviteit te bestuderen. De kip CAM model vergt aanzienlijk minder tijd en financiële middelen in vergelijking met traditionele murine modellen. Omdat de eieren immuungecompromitteerd en immuuntolerant zijn, kunnen weefsels van elk organisme mogelijk worden geïmplanteerd zonder kostbare transgene dieren (bijvoorbeeld muizen) die nodig zijn voor implantatie van menselijke weefsels. Echter, veel van de voordelen van dit model kan potentieel ook beperkingen, met inbegrip van de korte tumor generatie tijd en immunogecompromitteerde / immuun tolerante status. Bovendien, hoewel alle tumortypes hier engraft in de kip chorioallantoic membraan model, ze doen dit met verschillende mate van tumorgroei.

Tot nu toe hebben we deze methode van implantatie succesvol gevonden voor eierstokkanker, nier-, prostaat- en blaaskanker. Elk werd geoptimaliseerd om specifieke voorwaarden voor implantatie te identificeren, hoewel er flexibiliteit kan zijn. Van de geteste tumortypes was de groei van eierstokkanker veel minder uitgesproken en meestal niet zichtbaar zonder de hulp van bioluminescentiebeeldvorming(figuur 1). Echter, een versteviging van de CAM kan worden gevoe...

Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

We presenteren het kipchorioallantoïsche membraanmodel als een alternatief, transplanteerbaar, in vivo model voor de engraftment van gynaecologische en urologische kankercellijnen en tumoren die door de patiënt zijn afgeleid.

Met behulp van de Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model om gynaecologische en urologische kankers studie

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...

De engraftment van tumoren op de kip chorioallantoïsche membraan, of CAM, kan worden gebruikt voor studies van tumorheiciteit, werkzaamheid van de behandeling of cellulaire crosstalk. Deze methode maakt kosteneffectieve snelle tumorgroei mogelijk in een immunotolerante in vivo setting. Met behulp van het CAM-model kunnen nieuwe therapeutische benaderingen snel worden getest met behulp van cellijnen of zelfs tumormonsters van patiënten.De meest cruciale aspecten van dit protocol zijn het waarborgen van een goede CAM-vorming en het niet verstoren van de CAM of vasculatuur tijdens het openen van de eieren. Zet op ontwikkelingsdag zeven of acht, wanneer de CAM zich volledig heeft ontwikkeld, de eierdraaier uit en plaats ongeveer één tot drie eieren in het eierrek in de bioveiligheidskast. Met de lichten uitgeschakeld, plaats een ei candler tegen de eierschaal te identificeren en markeren van de locatie van de luchtcel van een ei, dan verplaatsen van het ei candler over de schelp om een groot bloedvat netwerk te vinden, het draaien van het ei als dat nodig is.Een ideale vasculatuur zal vertakken in de buurt van het midden van het ei. Gebruik een marker om de vasculatuur te traceren die gebruikt moet worden voor implantatie. Gebruik na het weer inschakelen van het licht in de kap een draadloos draaigereedschap dat is uitgerust met een slijpsteen voor siliciumcarbide om een klein gaatje in de schaal direct boven het midden van de luchtcel te boren.Wanneer het grootste deel van de schelp is verwijderd, maar met witte binnenmembraan intact, boor een ander klein gat waar de vasculaire venster zal worden geopend zoals net aangetoond. Wanneer het tweede gat klaar is, gebruik dan een 18-meter naald om het witte binnenste membraan voorzichtig door te prikken over de luchtcel en vasculatuur en zorg ervoor dat het witte binnenste membraan, maar niet de CAM, in het geheel van het geboorde gebied wordt verstoord. Met de kap weer uit, gebruik maken van het ei candler om te controleren of de luchtcel is overgebracht van het einde van het ei naar het gebied over de vasculatuur.Plaats indien nodig vacuümbuis die in een pipetregelaar rond het gat over de oorspronkelijke luchtcel wordt geplaatst en breng voorzichtig zuigkracht aan in korte uitbarstingen om de luchtcel te verplaatsen. Markeer de omtrek van de nieuwe locatie van de luchtcel ongeveer 0,5 centimeter binnen de lucht CAM grens en bevestig een stuk verpakkingstape net groot genoeg om het gat over de nieuwe luchtcel te dekken. Na de voorbereiding van de andere twee eieren zoals net aangetoond, terug de eieren naar de broedmachine en open eventuele extra eieren voor het experiment in groepen van een tot drie, zoals aangetoond.Wanneer alle eieren zijn geopend, breng een tot drie eieren met verplaatste luchtcellen naar het eierrek in een bioveiligheidskast en gebruik een draadloos draaigereedschap uitgerust met een cirkelvormig snijwiel om een kleine lijn over de luchtcelgrens volledig door de cel te snijden zonder de CAM of vasculatuur te verstoren. Met behulp van gebogen schaar, snijd rond de resterende luchtcel om een venster in de schaal te creëren en de levensvatbaarheid van het embryo te controleren. Levensvatbare embryo's tonen een uitgebreide vasculatuur, heldere albumine, embryobeweging en/of een zichtbare hartslag.In niet-levensvatbare embryo's kan de CAM ondoorzichtig lijken met weinig of geen bloedvaten aanwezig en de embryo's kunnen klein of afwezig zijn zonder beweging of hartslag. Met behulp van Semkin tangen, trek kleine stukjes katoen uit een steriele katoenen bal en voorzichtig dep de CAM oppervlak van de levensvatbare embryo's om eventuele shell stof en puin te verwijderen, dan de shell opening te bedekken met een kwart stuk van zes bij zeven centimeter transparante film dressing zonder de CAM aan te raken en de eieren terug te keren naar de incubator met het geopende raam naar boven gericht. Gebruik een stuk eierrek, de rand van het ei rotator, of een ander geschikt item om alle eieren die blijven rollen prop.Om de schorsing van de kankercel voor te bereiden op transplantatie, oogst de cellen uit de kankercelcultuur van belang en sediment de cellen door centrifugatie. Aspirate de supernatant en mechanisch resuspend de cellen in het resterende medium. Plaats de celsuspensie op ijs en gebruik een pipet om het volume van de cellen in medium te meten.Vervolgens resuspend de cellen bij een concentratie van een tot twee miljoen cellen in 20 tot 100 microliter van medium aangevuld met 2,7 tot 4 milligram per milliliter extracellulaire matrix en eventuele groeifactoren of andere additieven van belang. Voor kankercel implantatie, met behulp van een anti-aanbakring, plaats maximaal zes eieren worden geïmplanteerd op het eierrek en rol de randen van de transparante film dressing naar het open raam om de film te verwijderen uit de schelpen. Controleer of de eieren levensvatbaar en gezond zijn.Ideale eieren hebben een groot vat met kleinere vertakkingsvaten in het midden van het geopende gebied. Plaats met gebogen iriskrachten een steriele antiaanbakwand op de CAM over het vat, idealiter boven een takpunt. Gebruik een steriele glazen roerstaaf om de CAM voorzichtig te schuren en de kankercelsuspensie in het midden van de ring te schuren.Wanneer alle cellen zijn geleverd, verzegel de opening met een stuk van zes bij zeven centimeter transparante filmdressing en label het ei met een geschikte implantaataanduiding. Plaats de eieren vervolgens stevig in de couveuse met de opening van de schelp rechtop. Om kankercellen te implanteren zonder het gebruik van een anti-aanbakring, de celsuspensie in een geschikte grootte pipetpunt aan te boren en het bovenste gedeelte van de tip voorzichtig uitwerpen van de pipetpunt en plaats de tip horizontaal in een steriele 10 centimeter weefsel kweekschotel.Nadat de tips zijn geladen, plaats de schotel in een 37 graden Celsius incubator gedurende 15 tot 30 minuten, het controleren op polymerisatie na 15 minuten. Een kleine hoeveelheid vloeistof zal meestal lekken als elke tip wordt geplaatst in de schotel. Gebruik deze vloeistof om de omvang van de polymerisatie binnen de tip te schatten.Wanneer de matrix klaar is, plaatst u een tip op een geschikte grootte pipet en druk de zuiger in om de gedeeltelijk gepolymeriseerde celsuspensie op de CAM te dwingen, idealiter over het vertakte punt van een groot goed ontwikkeld vat. Met behulp van deze methoden, zowel menselijke en murine eierstokkanker cellijnen en primaire tumor stukken resulteerde in de succesvolle engraftment van tumoren met morfologieën in overeenstemming met die waargenomen in andere in vivo modellen. Van de geteste tumortypes was de groei van eierstokkanker veel minder uitgesproken en meestal niet zichtbaar zonder de hulp van bioluminescentiebeeldvorming.De effecten van het toevoegen van groeifactoren of hormonen op het moment van implantatie kan ook worden getest met behulp van deze methoden. Voor nierkanker, de implantatie van heldere cel niercelcarcinoom cellen uit gevestigde cellijnen of stukken van primaire menselijke niertumoren produceert snelle, robuuste tumorvorming. Verder, meerdere menselijke en murine prostaatkanker cellijnen en menselijke blaaskanker cellijnen en primaire tumor stukken waren gebruikt om tumoren met behulp van dit model vast te stellen.Het is van cruciaal belang om te voorkomen dat de CAM en de vasculatuur verstoren en ervoor zorgen dat de CAM zich niet aan de schaal houdt tijdens het openen van het raam. Na succesvolle engraftment kan het CAM-model worden gebruikt om de therapeutische werkzaamheid van behandelingen van belang of interacties tussen verschillende celtypen binnen een tumor te beoordelen.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

Coculture Testen om te studeren macrofagen en microglia Stimulatie van glioblastoma Invasion

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disc Tumor Model: visualisatie en kwantificering van genexpressie en Tumor Invasiviteit met behulp van genetische Mozaïeken

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

Live-Imaging om te studeren microtubuli Dynamic Instabiliteit in taxaan-resistente borstkankers

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Detectie van Mitochondria membraanpotentiaal CLIC4 Knockdown-geïnduceerde HN4 cel Apoptosis om te studeren In Vitro

Depletion of the mitochondrial membrane potential (MMP, &#916;&#936;m) is considered the earliest event in the apoptotic cascade. It even occurs ahead of ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR beoordeling van pH, pO2, Redox Status, en concentraties van fosfaat en glutathion in de communicatie van de Tumor

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Acellulair en cellulaire Lung Model studie Tumor uitzaaiingen

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Het verkrijgen van kanker stamcelbollen van gynaecologische en borstkankertumoren

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

Vergelijking van uitgezaaide Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model opgericht in muisnier en op Kip Chorioallantoic Membraan

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

Computergebaseerde beeldanalyse gebruiken om de kwantificering van longmetastase in het 4T1 Breast Cancer Model te verbeteren

Breast cancer is a devastating malignancy, accounting for 40,000 female deaths and 30% of new female cancer diagnoses in the United States in 2019 alone. ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

Ontdekking van gemetastaseerde regulatoren met behulp van een snel en kwantitatief intravital chick chorioallantoic membraanmodel

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...