Name: using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers
Uploaded: 2020-01-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

המחברים רוצים להודות לד ר פויוקו טאנוק ובין וו להכשרה הראשונית בשיטה זו. שיחות עם ד ר אווה Koziolek היו אינסטרומנטלי באופטימיזציה גישה זו והיה מוערך מאוד. עבודה זו לא היה אפשרי ללא מימון מן המקורות הבאים: מחקר טבק הקשורים לתוכנית המחקר פוסט דוקטורט (27FT-0023, כדי ACS), מחלקת ההגנה (משרד ההגנה) סרטן השחלות תוכנית המחקר (W81XWH-17-1-0160), NCI/NIH (1R21CA216770), מחקר הקשורות לטבק תוכנית פיילוט השפעה גבוהה טייס (27FT-0016), ואת התמיכה המוסדית UCLA, כולל מענק הזרע JCCC (NCI/NIH P30CA016042) ו-3R מענק מהמשרד של סגן הקנצלר למחקר LW.

כל הניסויים שהוצגו בזאת נבדקו ואושרו על ידי הוועדות האתיות המתאימות באוניברסיטת קליפורניה, לוס אנג'לס (UCLA). השימוש deidentified, גידולים אנושיים העיקרי אושרה על ידי הלוח המוסדי באוניברסיטת UCLA (מספרי פרוטוקול 17-000037, 17-001169, ו 11-001363). ב UCLA, מחקר בעלי חיים סקירה ועדת אינו נדרש לניסויים באמצעות עוברי עו?...

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Jackson, S. J., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+tissue+models+in+cancer+research:+looking+beyond+the+mouse.">Human tissue models in cancer research: looking beyond the mouse.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 10 (8), 939-942 (2017).</li><li>Cheon, D. J., Orsulic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Models+of+Cancer.">Mouse Models of Cancer.</a> Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 6 (1), 95-119 (2011).</li><li>. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2016 Available from: <a target="_blank" href="https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/">https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/</a> (2018)</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chicken+chorioallantoic+membrane+angiogenesis+model.">Chicken chorioallantoic membrane angiogenesis model.</a> Methods Molecular Biology. 843, 47-57 (2012).</li><li>Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chicken+chorioallantoic+membrane+model+in+biology,+medicine+and+bioengineering.">The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering.</a> Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).</li><li>Lokman, N. A., Elder, A. S., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+as+an+in+vivo+model+to+study+the+effect+of+newly+identified+molecules+on+ovarian+cancer+invasion+and+metastasis.">Chick chorioallantoic membrane (CAM) assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis.</a> International Journal of Molecular Science. 13 (8), 9959-9970 (2012).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay:+A+3D+Animal+Model+for+Study+of+Human+Nasopharyngeal+Carcinoma.">Chick Chorioallantoic Membrane Assay: A 3D Animal Model for Study of Human Nasopharyngeal Carcinoma.</a> PLoS ONE. 10 (6), e0130935 (2015).</li><li>Deryugina, E. I., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+systems+to+study+and+visualize+human+tumor+cell+metastasis.">Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis.</a> Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1119-1130 (2008).</li><li>Shoin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Embryo+Assay+as+Chemosensitivity+Test+for+Malignant+Glioma.">Chick Embryo Assay as Chemosensitivity Test for Malignant Glioma.</a> Japanese Journal of Cancer Research. 82 (10), 1165-1170 (1991).</li><li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model.">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proceedings of the National Academy of Science U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li><li>Kavaliauskait&#279;, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Sodium+Valproate+on+the+Glioblastoma+U87+Cell+Line+Tumor+Development+on+the+Chicken+Embryo+Chorioallantoic+Membrane+and+on+EZH2+and+p53+Expression.">The Effect of Sodium Valproate on the Glioblastoma U87 Cell Line Tumor Development on the Chicken Embryo Chorioallantoic Membrane and on EZH2 and p53 Expression.</a> BioMed Research International. 2017, 12 (2017).</li><li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Histone+Methyltransferase+EZH2+Mediates+Tumor+Progression+on+the+Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay,+a+Novel+Model+of+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma.">The Histone Methyltransferase EZH2 Mediates Tumor Progression on the Chick Chorioallantoic Membrane Assay, a Novel Model of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma.</a> Translational Oncology. 6 (3), 273-281 (2013).</li><li>Rudy, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Wnt+pathway+inhibition+of+human+squamous+cell+carcinoma+growth+and+metastasis+in+the+chick+chorioallantoic+model.">In vivo Wnt pathway inhibition of human squamous cell carcinoma growth and metastasis in the chick chorioallantoic model.</a> Journal of Otolaryngology - Head &amp; Neck Surgery. 45 (1), 26 (2016).</li><li>Canale, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-27+inhibits+pediatric+B-acute+lymphoblastic+leukemia+cell+spreading+in+a+preclinical+model.">Interleukin-27 inhibits pediatric B-acute lymphoblastic leukemia cell spreading in a preclinical model.</a> Leukemia. 25, 1815 (2011).</li><li>Loos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino-functionalized+nanoparticles+as+inhibitors+of+mTOR+and+inducers+of+cell+cycle+arrest+in+leukemia+cells.">Amino-functionalized nanoparticles as inhibitors of mTOR and inducers of cell cycle arrest in leukemia cells.</a> Biomaterials. 35 (6), 1944-1953 (2014).</li><li>Rovithi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+bioluminescent+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+models+for+primary+pancreatic+cancer+cells:+a+platform+for+drug+testing.">Development of bioluminescent chick chorioallantoic membrane (CAM) models for primary pancreatic cancer cells: a platform for drug testing.</a> Scientific Reports. 7, 44686 (2017).</li><li>Majern&#237;k, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Insights+into+the+Effect+of+Hyperforin+and+Photodynamic+Therapy+with+Hypericin+on+Chosen+Angiogenic+Factors+in+Colorectal+Micro-Tumors+Created+on+Chorioallantoic+Membrane.">Novel Insights into the Effect of Hyperforin and Photodynamic Therapy with Hypericin on Chosen Angiogenic Factors in Colorectal Micro-Tumors Created on Chorioallantoic Membrane.</a> International Journal of Molecular Science. 20 (12), 3004 (2019).</li><li>Swadi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimising+the+chick+chorioallantoic+membrane+xenograft+model+of+neuroblastoma+for+drug+delivery.">Optimising the chick chorioallantoic membrane xenograft model of neuroblastoma for drug delivery.</a> BMC Cancer. 18 (1), 28 (2018).</li><li>Klingenberg, M., Becker, J., Eberth, S., Kube, D., Wilting, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+as+an+in+vivo+xenograft+model+for+Burkitt+lymphoma.">The chick chorioallantoic membrane as an in vivo xenograft model for Burkitt lymphoma.</a> BMC Cancer. 14 (1), 339 (2014).</li><li>Avram, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+A375+human+melanoma+models+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+and+Balb/c+nude+mice.">Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice.</a> Oncology Reports. 38 (1), 89-99 (2017).</li><li>Zabielska-Koczywas, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+as+an+in+vivo+model+to+study+morphological+and+histopathological+features+of+feline+fibrosarcomas.">3D chick embryo chorioallantoic membrane model as an in vivo model to study morphological and histopathological features of feline fibrosarcomas.</a> BMC Veterinary Research. 13 (1), 201 (2017).</li><li>Skowron, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+assay+to+study+treatment+approaches+in+urothelial+carcinoma.">Applying the chicken embryo chorioallantoic membrane assay to study treatment approaches in urothelial carcinoma.</a> Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations. 35 (9), e511-e523 (2017).</li><li>Jefferies, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+imaging+of+engineered+human+tumors+in+the+living+chicken+embryo.">Non-invasive imaging of engineered human tumors in the living chicken embryo.</a> Scientific Reports. 7 (1), 4991 (2017).</li><li>Taizi, M., Deutsch, V. R., Leitner, A., Ohana, A., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+rapid+in+vivo+system+for+testing+therapeutics+on+human+leukemias.">A novel and rapid in vivo system for testing therapeutics on human leukemias.</a> Experimental Hematology. 34 (12), 1698-1708 (2006).</li><li>Strojnik, T., Kavalar, R., Barone, T. A., Plunkett, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+model+and+immunohistochemical+comparison+of+U87+human+glioblastoma+cell+xenografts+on+the+chicken+chorioallantoic+membrane+and+in+rat+brains.">Experimental model and immunohistochemical comparison of U87 human glioblastoma cell xenografts on the chicken chorioallantoic membrane and in rat brains.</a> Anticancer Research. 30 (12), 4851-4860 (2010).</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+model+for+tumor+biology.">The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology.</a> Experimental Cell Research. 328 (2), 314-324 (2014).</li><li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non-integrating+Lentiviral+Approach+Overcomes+Cas9-Induced+Immune+Rejection+to+Establish+an+Immunocompetent+Metastatic+Renal+Cancer+Model.">A Non-integrating Lentiviral Approach Overcomes Cas9-Induced Immune Rejection to Establish an Immunocompetent Metastatic Renal Cancer Model.</a> Molecular Therapy - Methods &amp; Clinical Development. 9, 203-210 (2018).</li></ol>

הרחבת הגידול וחרט באמצעות מודל מצלמת ההיתרים מהירה יותר הנצפה ישירות הגידול מאשר קיים בדגמי בעלי חיים vivo. בנוסף, עלויות הן נמוכות באופן משמעותי לאחר הרכישה הראשונית של ציוד הושלם, במיוחד כאשר בהשוואה לעלות של עכברים הפרוצים החיסונית. המצב הראשוני והחיסוני של עוברי העוף מתיר בקלות את מצבה ...

עכברים שימשו כאורגניזם מודל קלאסי לחקר מחלות אנוש, כולל ממאירות. כיונקים, הם חולקים. דמיון רב לבני אדם רמה גבוהה שלהם של דמיון גנטי אפשרה מניפולציה הטרנסגניים של הגנום העכבר כדי לספק תובנה עצומה לתוך השליטה הגנטית של מחלות האדם1. ניסיון רב בטיפול של וניסויים עם עכברים הביא להיות מודל הבחירה למחקר ביו רפואי. עם זאת, בנוסף חששות מוסרית ומדעית לגבי דגמי murine, הם יכולים גם להיות יקרים למדי זמן רב2,3. התפתחות של גידולים יכול לקחת שבועות או אפילו חודשים. הדיור במוסד אופייני בלבד יכול לרוץ במאות עד אלפי דולרים בעוד גידולים מתפתחים. סרטן השחלות הוא דוגמה של חיסרון זה משום הצמיחה שלה במודלים murine יכול בקלות לקחת חודשים. עיכובים התקדמות מחקר פוטנציאלי להשפיע על סרטן השחלות חולים ' בהתמדה נמוכה הישרדות שיעור 5 שנים של רק 47% (כלומר, עלייה בהישרדות של רק 10% מעל 30 שנים)4. באופן דומה, סרטן אורולוגי (כליות, ערמונית, וסרטן שלפוחית השתן) מהווים 19% של כל המקרים הסרטניים בארצות הברית ו -11% של מקרי מוות הקשורים לסרטן4. כך, רומן בגישה vivo ללמוד סרטן גינקולוגית ואורולוגיים יכול להציל מעבדה משמעותית זמן, עבודה, וכסף, גם אם מודל זה מיושם רק ניסויים הראשונית ההקרנה. בנוסף, ההאצה המתקבלת של ממצאי מחקר יכול להשפיע באופן משמעותי על 177,000 אנשים שאובחנו עם סרטן אלה מדי שנה.
מודל CAM עוף מציע יתרונות רבים הנוגעים בסוגיות הנ ל. מודל פופולרי כדי ללמוד אנגיוגנזה5,6, הפלישה תא הגידול7,8, גרורות7,9, מודל העובר אפרוח מצלמת כבר שימש ללמוד צורות רבות של סרטן, כולל glioma10,11,12, הראש והצוואר קרצינומה של תאים13,14, לוקמיה15,16, סרטן הלבלב17, ו סרטן המעי הגס18. בנוסף, מודלים קאם נוצרו עבור נוירובלסטומה19, לימפומה בורקיט20, מלנומה21, וחתולים פיברוסרקומה22. מחקרים קודמים הציגו גם חרט סרטן שלפוחית השתן23 ו סרטן הערמונית קווי התאים24, אבל עם פרטי פרוטוקול מוגבל. לא רק שהביצים זולות בהרבה מעכברים, אבל הן גם מפיקות תוצאות מאוד מובנות25,26. הם מראים פיתוח מהיר של ואסילטורה, והתפתחות הגידול יכולה להתרחש מהר ככל כמה ימים ולהיות דמיינו longitudinally דרך החלון הפתוח. עם מסגרת הזמן 21 יום בין הפריה ביצה הבקיעה, ניסויים ניתן להשלים בתוך כמה שבועות. יתרה מזאת, העלות הנמוכה, צורכי הדיור המוגבלים, וגודל קטן מאפשרים בקלות ניסויים בקנה מידה גדול שיהיה מיועד ללימודי העכבר.
לכן, ביקשו למטב את מודל CAM עבור החרט של גינקולוגית ואורולוגית סרטן. בשל המצב החיסוני של העובר הקודם עוף27, שני העכבר ואת התאים האנושיים יכול להיות מושתל בקלות. ככזה, יש לנו בהצלחה לחרט מנופה השחלות, כליות, ערמונית, וסרטן שלפוחית השתן. עבור כל אחד מסוגי הגידולים האלה, מצלמת בקלות מקבל הוקמה murine ו/או האדם תאים הגידול קווי. חשוב מכך, שנקטפו טרי רקמות הגידול האנושי העיקרי יכול גם לעבור מתוך תאים מתעכל או פיסות של רקמה מוצקה עם שיעור גבוה של הצלחה. כל אחד מסוגי הסרטן האלה ומקורות התא דורש אופטימיזציה, אשר אנו חולקים כאן.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>-010 Teflon (PTFE) White 55 Duro Shore D O-Rings</td>
			<td>The O-Ring Store</td>
			<td>TEF010</td>
			<td>Nonstick ring for cell seeding. 1/4&#34;ID X 3/8&#34;OD X 1/16&#34;CS Polytetrafluoroethylene (PTFE).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C4-2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3314</td>
			<td>Human prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CWR22Rv1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CWR cells were the kind gift of Dr. David Agus (Keck Medicine of University of Southern California)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 8/18 Antibody (C-51)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-44929-0.02mg</td>
			<td>Used at a dilution of 1:100 for immunohistochemical analysis of human ovarian CAM tumors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin Firefly, potassium salt</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Curved; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4-3/4 in. Overall Length</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS6703</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved scissors would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max Tool Kit</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>8050-N/18</td>
			<td>This kit contains all necessary tools.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertilized chicken eggs (Rhode Island Red - Brown, Lab Grade)</td>
			<td>AA Lab Eggs Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>A local egg supplier would need to be identified, as this supplier only delivers regionally.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HT-1376</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1472</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hovabator Genesis 1588 Deluxe Egg Incubator Combo Kit</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>HB1588D-NONE-1102-1588-1357</td>
			<td>Other egg incubators may be used, but their reliability would need to be verified. After implantation, a cell incubator with the CO2 disabled may also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ID8</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Not commercially available, please see PMID: 10753190.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incu-Bright Cool Light Egg Candler</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>1102</td>
			<td>Other candlers may be used; however, this is preferred among those that we have tested. This candler is included in the aforementioned incubator kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps, 10cm, Curved, Serrated, 0.8mm tips</td>
			<td>World Precision Instrument</td>
			<td>15915</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved forceps would work as well. Multiple brands have been used for this method.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Clipper Distributing</td>
			<td>0010250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina II In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Membrane Matrix HC; LDEV-Free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354248</td>
			<td>Extracellular matrix solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MyC-CaP</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3255</td>
			<td>Murine prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Pipet-Aid XP Pipette Controller</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>4-000-101</td>
			<td>Any similar pipet controller would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Hypodermic Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td>This is provided as an example. Any 18G needle would work similarly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RENCA</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semken Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11008-13</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar forceps or another style that suits researcher preference would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SKOV3</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-77</td>
			<td>Human ovarian cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72914</td>
			<td>This is provided as an example. The forceps used for pulling away the shell for bioluminescence imaging are approximately 12.8 cm long with 3 mm-wide tips.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cotton Balls</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-456-885</td>
			<td>This is provided as an example. Any sterile cotton balls would suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stirring Rods with Rubber Policeman; 5mm diameter, 6 in. length</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>GRPL06</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar glass stir rods would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T24</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-4</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Transparent Dressing Original Frame Style 2 3/8&#34; x 2 3/4&#34;</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>21272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dishes, 10 cm diameter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar, sterile 10-cm dish may be used. Tissue culture treatment is not necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Clear Laboratory Tubing - 1/4 x 3/8 x 1/16 wall (50 feet)</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>AACUN017</td>
			<td>This is provided as an example. Any similarly sized tubing would work as well.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers

מודלים עכבר הם בדיקות בחינת ביצועים עבור בלימודי סרטן vivo. עם זאת, עלות, זמן, שיקולים אתית הובילו שיחות חלופיות לvivo מודלים סרטניים. הקרום כוראלאלי ממברנה (CAM) המודל מספק חלופה זולה, מהירה המאפשרת ויזואליזציה ישירה של פיתוח הגידול מתאים הדמיה vivo. ככזה, ביקשו לפתח פרוטוקול מיטבי לחרט גינקולוגית ולהפוך גידולים אורולוגיים למודל זה, אשר אנו מציגים כאן. כ 7 ימים הפריה, תא האוויר מועבר לצד הvascularized של הביצה, שם נוצר פתח במעטפת. גידולים ממורין וקווי התאים האנושיים רקמות ראשיות ניתן לאחר מכן מצטלבים. אלה הם בדרך כלל שנזרע תערובת של מטריקס ובינוניות ובינוניים כדי למנוע פיזור הסלולר ולספק תמיכה מזינים עד התאים לגייס אספקת כלי דם. גידולים עשויים לצמוח לאחר מכן עד 14 ימים נוספים לפני בקיעה ביצה. על ידי שתילת תאים באופן בלתי נשכח עם גחלילית לוציפראז, הדמיה ביולומינסנציה יכול לשמש לאיתור רגיש של גידול בקרום והסרטן להתפשט לאורך העובר. מודל זה יכול לשמש לחקר הטווריגניות, פלישה, גרורות, ויעילות טיפולית. מודל מצלמת עוף דורש פחות זמן ומשאבים פיננסיים בהשוואה למודלים murine מסורתיים. מכיוון שהביצים הן בעיות חיסוני ועמידות חיסונית, רקמות מכל אורגניזם יכול להיות מושתל ללא בעלי חיים הטרנסגניים יקרים (למשל, עכברים) נדרש עבור השרשה של רקמות האדם. עם זאת, רבים מהיתרונות של מודל זה יכול להיות גם מגבלות, כולל את זמן הגידול הקצר הדור החיסוני/החיסונית המצב העמידות. בנוסף, למרות כל סוגי הגידולים המוצגים כאן בתוך מודל הקרום כוראלאלי העוף ממברנה, הם עושים זאת עם דרגות שונות של צמיחת הגידול.

עד כה, מצאנו את השיטה הזאת של השרשה כדי להצליח עבור סרטן השחלות, כליה, ערמונית, ושלפוחית השתן. כל אחד מהם היה מיטבי כדי לזהות תנאים ספציפיים לשרשה, למרות שייתכנו גמישות. של סוגי גידולים נבדק, הצמיחה סרטן השחלות היה הרבה פחות מבוטא ובדרך כלל לא גלוי ללא סיוע של הדמיה ביולומינ...

Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

אנו מציגים את המודל ממברנה העוף כוראואליאלי כחלופה, השתלה שולחן, במודל vivo עבור החרט של גינקולוגית ואורולוגית תאים לסרטן וגידולים הנגזר החולה.

שימוש בקרום כוראלאלי ממברנה במודל Vivo כדי ללמוד גינקולוגית ואורולוגיים סרטן

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...

חריטה של גידולים על קרום העוף chorioallantoic, או CAM, ניתן להשתמש במחקרים של tumorigenicity, יעילות הטיפול או crosstalk הסלולר. שיטה זו מאפשרת גידול מהיר חסכוני בהגדרה אימונוטוולרנטית ב vivo. באמצעות מודל CAM, גישות טיפוליות חדשניות ניתן לבדוק במהירות באמצעות קווי תאים או אפילו דגימות גידול החולה.ההיבטים המכריעים ביותר של פרוטוקול זה הם הבטחת היווצרות מצלמת נאותה ולא לשבש את CAM או כלי דם בעת פתיחת הביצים. ביום התפתחותי שבע או שמונה כאשר CAM התפתחה במלואה, לכבות את מסובב הביצים ולהחנות כ 1-3 ביצים לתוך מתלה הביצים בארון biosafety. עם האורות כבויים, מניחים נר ביצה על קליפת הביצה כדי לזהות ולסמן את המיקום של תא האוויר של ביצה אחת, ולאחר מכן להזיז את נר הביצה מעל הקליפה כדי למצוא רשת כלי דם גדולה, סיבוב הביצה לפי הצורך.כלי דם אידיאלי יתענף ליד אמצע הביצה. השתמש בסמן כדי לעקוב אחר כלי הדם שישמש להשתלה. לאחר הפניית האור למכסה המנוע, השתמש בכלי סיבובי אלחוטי המצויד באבן שחיקה של קרביד סיליקון כדי לקדוח חור קטן במעטפת ישירות מעל מרכז תא האוויר.כאשר רוב הקליפה הוסרה אך עם קרום פנימי לבן שלם, לקדוח עוד חור קטן שבו חלון כלי הדם ייפתח כפי שהודגם רק. כאשר החור השני מוכן, השתמש במחט מד 18 כדי לנקב בעדינות את הממברנה הפנימית הלבנה מעל תא האוויר ואת כלי הדם דואג כי הממברנה הפנימית הלבנה, אבל לא את CAM, הוא שיבש לאורך כל האזור שנקדח. עם אור מכסה המנוע כבוי שוב, להשתמש בנר הביצה כדי לוודא כי תא האוויר הועבר מקצה הביצה לאזור מעל כלי הדם.במידת הצורך, מניחים צינורות ואקום מוכנס לתוך בקר פיפטה סביב החור מעל תא האוויר המקורי בעדינות להחיל יניקה בפרץ קצר כדי להזיז את תא האוויר. סמן את קווי המתאר של המיקום החדש של תא האוויר כ 0.5 ס"מ בתוך גבול מצלמת האוויר ולתקן חתיכת סרט אריזה רק גדול מספיק כדי לכסות את החור מעל תא האוויר החדש. לאחר הכנת שתי הביצים האחרות כפי שהודגם זה הרגע, החזירו את הביצים לאנקובטור ופתחו כל ביצים נוספות לניסוי בקבוצות של אחת עד שלוש כפי שהוכח.כאשר כל הביצים נפתחו, להעביר אחת עד שלוש ביצים עם תאי אוויר שהועברו אל מתלה הביצה בארון biosafety ולהשתמש בכלי סיבובי אלחוטי מצויד גלגל חיתוך עגול לחתוך קו קטן מעל גבול תא האוויר לחלוטין דרך התא מבלי לשבש את CAM או vasculature. באמצעות מספריים מעוגלים, לחתוך סביב תא האוויר הנותר כדי ליצור חלון במעטפת ולאמת את הכדאיות של העובר. עוברים בני קיימא יציגו כלי דם נרחבים, אלבומין ברור, תנועת עוברים ו/או פעימות לב נראות לעין.בעוברים שאינם ניתנים לשימוש, CAM עשוי להיראות אטום עם מעטים, אם בכלל, כלי קיים העוברים עשויים להיות קטנים או נעדרים ללא תנועה או פעימות לב. באמצעות מטליות סמקין, למשוך חתיכות קטנות של כותנה מכדור כותנה סטרילי בעדינות כתם את פני השטח CAM של העוברים קיימא כדי להסיר את כל אבק פגז ופסולת, ולאחר מכן לכסות את פתיחת הקליפה עם חתיכה אחת של שישה על שבעה סנטימטרים שקוף הסרט ההלבשה מבלי לגעת CAM ולהחזיר את הביצים לאנקובטור עם החלון נפתח פונה למעלה. השתמש חתיכת מתלה ביצה, הקצה של מסובב הביצה, או פריט מתאים אחר כדי לתמוך כל ביצים לשמור מתגלגל.כדי להכין השעיית תאים סרטניים להשתלה, לקצור את התאים מתרבות התאים הסרטניים של עניין ומעים את התאים על ידי צנטריפוגה. שאף את העל-טבעי ולחץ מחדש מכנית על התאים במדיום השיורי. מניחים את ההשעיה התא על קרח ולהשתמש פיפטה כדי למדוד את נפח התאים באמצעי.לאחר מכן בצע שימוש חוזר בתאים בריכוז של אחד עד שני מיליון תאים ב 20 עד 100 microliters של בינוני בתוספת 2.7 עד 4 מיליגרם למטריצה חוץ תאית מיליליטר וכל גורמי גדילה או תוספים אחרים של עניין. להשתלת תאים סרטניים, באמצעות טבעת שאינה מקל, מניחים עד שש ביצים להיות מושתלים על מתלה הביצים ולגלגל את הקצוות של הסרט השקוף להתלבש לכיוון החלון הפתוח כדי להסיר את הסרט מן הקונכיות. בדוק אם הביצים הן קיימא ובריאות.ביצים אידיאליות יהיו כלי גדול עם כלי הסתעפות קטנים יותר בתוך מרכז השטח שנפתח. באמצעות מדפים קשתית מעוקלת, מניחים טבעת סטרילית שאינה מקל על CAM מעל כלי השיט באופן אידיאלי מעל נקודת ענף. השתמש מוט ערבוב זכוכית סטרילית בעדינות שוחקים את CAM ו pipette ההשעיה תא סרטן למרכז הטבעת.כאשר כל התאים נמסרו, לאטום את הפתח עם חתיכה של רבע אחד של שישה על שבעה סנטימטרים שקוף הסרט ההלבשה ולתייג את הביצה עם ייעוד שתל מתאים. לאחר מכן מניחים את הביצים בבטחה באינקובטור עם פתיחת הקליפה הפונה זקוף. כדי להשתיל תאים סרטניים ללא שימוש בטבעת שאינה מקל, שאף את ההשעיה התא לתוך קצה פיפטה בגודל מתאים והחזקת החלק העליון של הקצה בזהירות להוציא את קצה פיפטה ולהמקם את הקצה אופקית לתוך צלחת סטרילית 10 ס"מ רקמות תרבות.לאחר שהטיפים נטענו, מניחים את המנה באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס למשך 15 עד 30 דקות, בודקים פולימריזציה לאחר 15 דקות. כמות קטנה של נוזל בדרך כלל לדלוף החוצה כמו כל קצה ממוקם בצלחת. השתמש בנוזל זה כדי להעריך את היקף הפולימריזציה בתוך הקצה.כאשר המטריצה מוכנה, מניחים קצה אחד על פיפטה בגודל מתאים ומדכאים את הבוכנה כדי לאלץ את מתלי התאים המפולגים חלקית אל ה- CAM באופן אידיאלי מעל הנקודה המסועפות של כלי גדול ומפותח. בשיטות אלה, הן קווי תאים סרטניים של סרטן השחלות האנושית והן מורין וחתיכות הגידול העיקריות הביאו לחריטה מוצלחת של גידולים עם מורפולוגיות התואמות לאלה שנצפו במודלים אחרים של vivo. מתוך סוגי הגידולים שנבדקו, צמיחת סרטן השחלות הייתה הרבה פחות בולטת ובדרך כלל לא נראתה ללא סיוע של הדמיה bioluminescence.ההשפעות של הוספת גורמי גדילה או הורמונים בזמן ההשתלה ניתן לבדוק גם באמצעות שיטות אלה. עבור סרטן הכליות, ההשתלה של תאים צלולים תאי הכליה קרצינומה של תאים מקווי תאים הוקמה או חתיכות מגידולים כליות אנושיים ראשוניים מייצרת היווצרות גידול מהירה וחזקה. כמו כן, מספר קווי תאים סרטניים של סרטן הערמונית האנושית ומורין וקווי תאים סרטניים בשלפוחית השתן האנושית וחתיכות הגידול העיקריות שימשו לביסוס גידולים באמצעות מודל זה.זה חיוני כדי למנוע שיבוש CAM ואת כלי הדם ולוודא כי CAM אינו לדבוק הקליפה בעת פתיחת החלון. לאחר חריטה מוצלחת, מודל CAM יכול לשמש כדי להעריך את היעילות הטיפולית של טיפולים של עניין או אינטראקציות בין סוגי תאים שונים בתוך הגידול.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

מבחני Coculture ללמוד מקרופאג Microglia גירוי של גליובלסטומה הפלישה

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

ה<em&gt; תסיסנית</em&gt; דגם גידול דיסק דמותי: ויזואליזציה וכימות של ביטוי גנים סרטניים הפולשנות שימוש פסיפסים גנטי

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

הדמיה חיה לחקר חוסר יציבות microtubule דינמי סרטן השד עמיד taxane

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

זיהוי של המיטוכונדריה פוטנציאל ממברנה לימודים CLIC4 נוקאאוט-induced HN4 תא אפופטוזיס במבחנה

Depletion of the mitochondrial membrane potential (MMP, &#916;&#936;m) is considered the earliest event in the apoptotic cascade. It even occurs ahead of ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

אין ויוו הערכת EPR pH, pO2, מצב חמצון-חיזור, ואת ריכוזים של פוספט גלוטתיון ב Microenvironment הגידול

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

דגם לונג acellular וסלולריות ללמוד גרורות הגידול

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

קבלת סרטן גזע כדורים מגינקולוגית סרטן השד גידולים

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

השוואת הכליה גרורות תא כליות קרצינומה של תא מודל הוקמה בתוך כליה העכבר על עוף כוראולאלי ממברנה

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

שימוש בניתוח תמונה מבוסס מחשב כדי לשפר את כימות גרורות הריאות במודל סרטן השד 4T1

Breast cancer is a devastating malignancy, accounting for 40,000 female deaths and 30% of new female cancer diagnoses in the United States in 2019 alone. ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

גילוי של רגולטורים גרורתיים באמצעות מודל ממברנה צ'יק תוך-ויאטואי מהיר וכמותי

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...