Name: using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers
Uploaded: 2020-01-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

लेखक इस विधि पर प्रारंभिक प्रशिक्षण के लिए डॉ फुयुहिको तमनोई और बिन्ह वु का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं । डॉ ईवा कोजिओलेक के साथ विचार-विमर्श इस दृष्टिकोण को अनुकूलित करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है और इसकी बहुत सराहना की गई है । यह काम निम्नलिखित स्रोतों से धन के बिना संभव नहीं होता: तंबाकू से संबंधित रोग अनुसंधान कार्यक्रम पोस्टडॉक्टोरल फैलोशिप (27FT-0023, एसीएस के लिए), रक्षा विभाग (DoD) अंडाशय कैंसर अनुसंधान कार्यक्रम (W81XWH-17-1-0160), NCI/NIH (1R21CA216770), तंबाकू से संबंधित रोग अनुसंधान कार्यक्रम उच्च प्रभाव पायलट पुरस्कार (27IR-0016), और UCLA संस्थागत समर्थन, जिसमें जेसीसीसी बीज अनुदान (एनसीआई/एनआईएच पी30सीए016042) और अनुसंधान के लिए कुलपति के कार्यालय से एलडब्ल्यू को 3आर अनुदान शामिल है ।

यहां प्रस्तुत किए गए सभी प्रयोगों की समीक्षा की गई और कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, लॉस एंजिल्स (यूसीएलए) में उपयुक्त नैतिक समितियों द्वारा अनुमोदित किया गया । डीईचिन्हित, प्राथमिक मानव ट्यूमर के उपयो...

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	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Jackson, S. J., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+tissue+models+in+cancer+research:+looking+beyond+the+mouse.">Human tissue models in cancer research: looking beyond the mouse.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 10 (8), 939-942 (2017).</li><li>Cheon, D. J., Orsulic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Models+of+Cancer.">Mouse Models of Cancer.</a> Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 6 (1), 95-119 (2011).</li><li>. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2016 Available from: <a target="_blank" href="https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/">https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/</a> (2018)</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chicken+chorioallantoic+membrane+angiogenesis+model.">Chicken chorioallantoic membrane angiogenesis model.</a> Methods Molecular Biology. 843, 47-57 (2012).</li><li>Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chicken+chorioallantoic+membrane+model+in+biology,+medicine+and+bioengineering.">The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering.</a> Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).</li><li>Lokman, N. A., Elder, A. S., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+as+an+in+vivo+model+to+study+the+effect+of+newly+identified+molecules+on+ovarian+cancer+invasion+and+metastasis.">Chick chorioallantoic membrane (CAM) assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis.</a> International Journal of Molecular Science. 13 (8), 9959-9970 (2012).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay:+A+3D+Animal+Model+for+Study+of+Human+Nasopharyngeal+Carcinoma.">Chick Chorioallantoic Membrane Assay: A 3D Animal Model for Study of Human Nasopharyngeal Carcinoma.</a> PLoS ONE. 10 (6), e0130935 (2015).</li><li>Deryugina, E. I., Quigley, J. 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F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Wnt+pathway+inhibition+of+human+squamous+cell+carcinoma+growth+and+metastasis+in+the+chick+chorioallantoic+model.">In vivo Wnt pathway inhibition of human squamous cell carcinoma growth and metastasis in the chick chorioallantoic model.</a> Journal of Otolaryngology - Head &amp; Neck Surgery. 45 (1), 26 (2016).</li><li>Canale, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-27+inhibits+pediatric+B-acute+lymphoblastic+leukemia+cell+spreading+in+a+preclinical+model.">Interleukin-27 inhibits pediatric B-acute lymphoblastic leukemia cell spreading in a preclinical model.</a> Leukemia. 25, 1815 (2011).</li><li>Loos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino-functionalized+nanoparticles+as+inhibitors+of+mTOR+and+inducers+of+cell+cycle+arrest+in+leukemia+cells.">Amino-functionalized nanoparticles as inhibitors of mTOR and inducers of cell cycle arrest in leukemia cells.</a> Biomaterials. 35 (6), 1944-1953 (2014).</li><li>Rovithi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+bioluminescent+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+models+for+primary+pancreatic+cancer+cells:+a+platform+for+drug+testing.">Development of bioluminescent chick chorioallantoic membrane (CAM) models for primary pancreatic cancer cells: a platform for drug testing.</a> Scientific Reports. 7, 44686 (2017).</li><li>Majern&#237;k, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Insights+into+the+Effect+of+Hyperforin+and+Photodynamic+Therapy+with+Hypericin+on+Chosen+Angiogenic+Factors+in+Colorectal+Micro-Tumors+Created+on+Chorioallantoic+Membrane.">Novel Insights into the Effect of Hyperforin and Photodynamic Therapy with Hypericin on Chosen Angiogenic Factors in Colorectal Micro-Tumors Created on Chorioallantoic Membrane.</a> International Journal of Molecular Science. 20 (12), 3004 (2019).</li><li>Swadi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimising+the+chick+chorioallantoic+membrane+xenograft+model+of+neuroblastoma+for+drug+delivery.">Optimising the chick chorioallantoic membrane xenograft model of neuroblastoma for drug delivery.</a> BMC Cancer. 18 (1), 28 (2018).</li><li>Klingenberg, M., Becker, J., Eberth, S., Kube, D., Wilting, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+as+an+in+vivo+xenograft+model+for+Burkitt+lymphoma.">The chick chorioallantoic membrane as an in vivo xenograft model for Burkitt lymphoma.</a> BMC Cancer. 14 (1), 339 (2014).</li><li>Avram, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+A375+human+melanoma+models+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+and+Balb/c+nude+mice.">Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice.</a> Oncology Reports. 38 (1), 89-99 (2017).</li><li>Zabielska-Koczywas, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+as+an+in+vivo+model+to+study+morphological+and+histopathological+features+of+feline+fibrosarcomas.">3D chick embryo chorioallantoic membrane model as an in vivo model to study morphological and histopathological features of feline fibrosarcomas.</a> BMC Veterinary Research. 13 (1), 201 (2017).</li><li>Skowron, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+assay+to+study+treatment+approaches+in+urothelial+carcinoma.">Applying the chicken embryo chorioallantoic membrane assay to study treatment approaches in urothelial carcinoma.</a> Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations. 35 (9), e511-e523 (2017).</li><li>Jefferies, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+imaging+of+engineered+human+tumors+in+the+living+chicken+embryo.">Non-invasive imaging of engineered human tumors in the living chicken embryo.</a> Scientific Reports. 7 (1), 4991 (2017).</li><li>Taizi, M., Deutsch, V. R., Leitner, A., Ohana, A., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+rapid+in+vivo+system+for+testing+therapeutics+on+human+leukemias.">A novel and rapid in vivo system for testing therapeutics on human leukemias.</a> Experimental Hematology. 34 (12), 1698-1708 (2006).</li><li>Strojnik, T., Kavalar, R., Barone, T. A., Plunkett, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+model+and+immunohistochemical+comparison+of+U87+human+glioblastoma+cell+xenografts+on+the+chicken+chorioallantoic+membrane+and+in+rat+brains.">Experimental model and immunohistochemical comparison of U87 human glioblastoma cell xenografts on the chicken chorioallantoic membrane and in rat brains.</a> Anticancer Research. 30 (12), 4851-4860 (2010).</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+model+for+tumor+biology.">The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology.</a> Experimental Cell Research. 328 (2), 314-324 (2014).</li><li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non-integrating+Lentiviral+Approach+Overcomes+Cas9-Induced+Immune+Rejection+to+Establish+an+Immunocompetent+Metastatic+Renal+Cancer+Model.">A Non-integrating Lentiviral Approach Overcomes Cas9-Induced Immune Rejection to Establish an Immunocompetent Metastatic Renal Cancer Model.</a> Molecular Therapy - Methods &amp; Clinical Development. 9, 203-210 (2018).</li></ol>

कैम मॉडल का उपयोग करके ट्यूमर विस्तार और engraftment वीवो पशु मॉडल में मौजूदा की तुलना में अधिक तेजी से और सीधे नमूदार ट्यूमर विकास की अनुमति देता है। इसके अलावा, उपकरणों की प्रारंभिक खरीद पूरी होने के बाद लाग?...

चूहों ने मानव रोगों के अध्ययन के लिए क्लासिक मॉडल जीव के रूप में कार्य किया है, जिसमें द्रोह भी शामिल है । स्तनधारियों के रूप में, वे मनुष्यों के साथ कई समानताएं साझा करते हैं। उनकी उच्च स्तर की आनुवंशिक समानता ने माउस जीनोम के ट्रांसजेनिक हेरफेर की अनुमति दी है ताकि मानव रोगों के आनुवंशिक नियंत्रण के बारे में अत्यधिक जानकारी प्रदान की जा सके। चूहों के साथ हैंडलिंग और प्रयोग में व्यापक अनुभव के परिणामस्वरूप उनके जैव चिकित्सा अनुसंधान के लिए पसंद का मॉडल है। हालांकि, मूत्र मॉडल के बारे में नैतिक और वैज्ञानिक चिंताओं के अलावा, वे काफी महंगे और समय लेने वाले2,3 भी हो सकतेहैं। ट्यूमर के विकास में सप्ताह या महीनों भी लग सकते हैं। अकेले एक ठेठ संस्था में आवास डॉलर के हजारों के लिए सैकड़ों में चला सकते हैं, जबकि ट्यूमर विकसित कर रहे हैं । ओवेरियन कैंसर इस खामी का एक उदाहरण है क्योंकि मूत्र मॉडल में इसकी वृद्धि में आसानी से महीनों लग सकते हैं। अनुसंधान प्रगति में देरी संभावित प्रभाव अंडाशय कैंसर रोगियों ' लगातार कम 5 साल के जीवित रहने की दर केवल ४७% (यानी, 30 साल से अधिक केवल 10% के अस्तित्व में वृद्धि)4। इसी तरह, यूरोलॉजिकल कैंसर (गुर्दे, प्रोस्टेट, और मूत्राशय के कैंसर) संयुक्त राज्य अमेरिका में सभी कैंसर के मामलों का 19% और कैंसर से संबंधित मौतों का 11% का गठन4। इस प्रकार, स्त्री रोग और मूत्र संबंधी कैंसर का अध्ययन करने के लिए वीवो दृष्टिकोण में एक उपन्यास एक प्रयोगशाला काफी समय, श्रम और धन को बचा सकता है, भले ही यह मॉडल केवल प्रारंभिक स्क्रीनिंग प्रयोगों पर लागू हो। इसके अतिरिक्त, अनुसंधान निष्कर्षों के परिणामस्वरूप त्वरण काफी १७७,००० इन कैंसर के साथ सालाना का निदान व्यक्तियों को प्रभावित कर सकता है ।
चिकन कैम मॉडल कई फायदे प्रदान करता है जो उपरोक्त मुद्दों को संबोधित करते हैं। एंजियोजेनेसिस5,6,ट्यूमर सेल आक्रमण7,8,और मेटास्तासिस7,9का अध्ययन करने के लिए एक लोकप्रिय मॉडल, चिक भ्रूण कैम मॉडल का उपयोग पहले से ही कैंसर के कई रूपों का अध्ययन करने के लिए किया जा चुका है, जिसमें ग्लियोमा10,11,12,सिर और गर्दन स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा13,14,ल्यूकीमिया15,16,अग्नाशय का कैंसर17,और कोलोरेक्टल कैंसर18. इसके अतिरिक्त, न्यूरोब्लास्टोमा19,बर्किट लिंफोमा20,मेलानोमा21और फेलिन फाइब्रोसारकोमा22के लिए कैम मॉडल उत्पन्न किए गए हैं। पूर्व अध्ययनों में मूत्राशय के कैंसर23 और प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइनों24का एनग्राफमेंट भी प्रस्तुत किया गया है, लेकिन सीमित प्रोटोकॉल विवरण के साथ। न केवल चूहों की तुलना में अंडे बहुत सस्ते होते हैं, बल्कि वे25,26के अत्यधिक प्रजनन योग्य परिणाम भी पैदा करते हैं। वे तेजी से वास्कुलचर विकास दिखाते हैं, और ट्यूमर एनग्राफमेंट कुछ दिनों के रूप में जल्दी हो सकता है और खुली खिड़की के माध्यम से देशवासी कल्पना की जा सकती है। अंडे निषेचन और हैचिंग के बीच 21 दिन की समय सीमा के साथ, प्रयोगों को कुछ हफ्तों के भीतर पूरा किया जा सकता है। इसके अलावा, कम लागत, सीमित आवास की जरूरत है, और छोटे आकार आसानी से बड़े पैमाने पर प्रयोगों की अनुमति है कि माउस अध्ययन के लिए निषेधात्मक होगा ।
इसलिए, हमने स्त्री रोग और मूत्र कैंसर के एनग्राफमेंट के लिए कैम मॉडल को अनुकूलित करने की मांग की। जल्दी चिकन भ्रूण27की इम्यूनोसमझौता स्थिति के कारण, माउस और मानव कोशिकाओं दोनों को आसानी से प्रत्यारोपित किया जा सकता है। जैसे, हमने ओवेरियन, किडनी, प्रोस्टेट और मूत्राशय के कैंसर को सफलतापूर्वक एनग्राफेड किया है। इन ट्यूमर प्रकार ों में से प्रत्येक के लिए, कैम आसानी से स्थापित मूत्र और/या मानव ट्यूमर सेल लाइनों को स्वीकार करता है । महत्वपूर्ण बात, हौसले से काटा प्राथमिक मानव ट्यूमर ऊतकों भी या तो पचा कोशिकाओं या सफलता की उच्च दरों के साथ ठोस ऊतक के टुकड़े से engraft कर सकते हैं । इन कैंसर प्रकारों और कोशिका स्रोतों में से प्रत्येक अनुकूलन की आवश्यकता है, जो हम यहां साझा करते हैं ।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>-010 Teflon (PTFE) White 55 Duro Shore D O-Rings</td>
			<td>The O-Ring Store</td>
			<td>TEF010</td>
			<td>Nonstick ring for cell seeding. 1/4&#34;ID X 3/8&#34;OD X 1/16&#34;CS Polytetrafluoroethylene (PTFE).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C4-2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3314</td>
			<td>Human prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CWR22Rv1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CWR cells were the kind gift of Dr. David Agus (Keck Medicine of University of Southern California)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 8/18 Antibody (C-51)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-44929-0.02mg</td>
			<td>Used at a dilution of 1:100 for immunohistochemical analysis of human ovarian CAM tumors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin Firefly, potassium salt</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Curved; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4-3/4 in. Overall Length</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS6703</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved scissors would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max Tool Kit</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>8050-N/18</td>
			<td>This kit contains all necessary tools.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertilized chicken eggs (Rhode Island Red - Brown, Lab Grade)</td>
			<td>AA Lab Eggs Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>A local egg supplier would need to be identified, as this supplier only delivers regionally.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HT-1376</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1472</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hovabator Genesis 1588 Deluxe Egg Incubator Combo Kit</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>HB1588D-NONE-1102-1588-1357</td>
			<td>Other egg incubators may be used, but their reliability would need to be verified. After implantation, a cell incubator with the CO2 disabled may also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ID8</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Not commercially available, please see PMID: 10753190.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incu-Bright Cool Light Egg Candler</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>1102</td>
			<td>Other candlers may be used; however, this is preferred among those that we have tested. This candler is included in the aforementioned incubator kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps, 10cm, Curved, Serrated, 0.8mm tips</td>
			<td>World Precision Instrument</td>
			<td>15915</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved forceps would work as well. Multiple brands have been used for this method.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Clipper Distributing</td>
			<td>0010250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina II In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Membrane Matrix HC; LDEV-Free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354248</td>
			<td>Extracellular matrix solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MyC-CaP</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3255</td>
			<td>Murine prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Pipet-Aid XP Pipette Controller</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>4-000-101</td>
			<td>Any similar pipet controller would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Hypodermic Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td>This is provided as an example. Any 18G needle would work similarly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RENCA</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semken Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11008-13</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar forceps or another style that suits researcher preference would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SKOV3</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-77</td>
			<td>Human ovarian cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72914</td>
			<td>This is provided as an example. The forceps used for pulling away the shell for bioluminescence imaging are approximately 12.8 cm long with 3 mm-wide tips.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cotton Balls</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-456-885</td>
			<td>This is provided as an example. Any sterile cotton balls would suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stirring Rods with Rubber Policeman; 5mm diameter, 6 in. length</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>GRPL06</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar glass stir rods would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T24</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-4</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Transparent Dressing Original Frame Style 2 3/8&#34; x 2 3/4&#34;</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>21272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dishes, 10 cm diameter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar, sterile 10-cm dish may be used. Tissue culture treatment is not necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Clear Laboratory Tubing - 1/4 x 3/8 x 1/16 wall (50 feet)</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>AACUN017</td>
			<td>This is provided as an example. Any similarly sized tubing would work as well.</td>
		</tr>
	</tbody>
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using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers

माउस मॉडल वीवो कैंसर अध्ययन में बेंचमार्क परीक्षण हैं। हालांकि, लागत, समय, और नैतिक विचार ों के कारण वीवो कैंसर मॉडल में वैकल्पिक के लिए कॉल किया गया है। चिकन कोरियोएलन्टोइक झिल्ली (सीएएम) मॉडल एक सस्ता, तेजी से विकल्प प्रदान करता है जो ट्यूमर विकास के प्रत्यक्ष दृश्य की अनुमति देता है और वीवो इमेजिंग में उपयुक्त है। जैसे, हमने इस मॉडल में स्त्री रोग और मूत्र संबंधी ट्यूमर को एनग्राफ्टिंग करने के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल विकसित करने की मांग की, जिसे हम यहां प्रस्तुत करते हैं। लगभग 7 दिन पोस्टफर्टिलाइजेशन, एयर सेल को अंडे के संवहनी पक्ष में ले जाया जाता है, जहां खोल में एक उद्घाटन बनाया जाता है। murine और मानव कोशिका लाइनों और प्राथमिक ऊतकों से ट्यूमर तो engrafted किया जा सकता है । ये आम तौर पर सेलुलर फैलाव से बचने के लिए बाह्य मैट्रिक्स और मध्यम के मिश्रण में वरीयता प्राप्त कर रहे हैं और पोषक तत्वों का समर्थन प्रदान करते हैं जब तक कि कोशिकाएं संवहनी आपूर्ति की भर्ती नहीं करतीहैं। ट्यूमर तो अंडे हैचिंग से पहले एक अतिरिक्त 14 दिनों के लिए विकसित हो सकता है । जुगनू लूसिफ़ेरेज़ के साथ कोशिकाओं को प्रत्यारोपित करके, पूरे भ्रूण में फैले झिल्ली और कैंसर कोशिका पर ट्यूमर के विकास के संवेदनशील पता लगाने के लिए बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग का उपयोग किया जा सकता है। इस मॉडल का उपयोग संभावित रूप से ट्यूमर, आक्रमण, मेटाटैसिस और चिकित्सीय प्रभावशीलता का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है। चिकन कैम मॉडल पारंपरिक मूत्र मॉडल की तुलना में काफी कम समय और वित्तीय संसाधनों की आवश्यकता है। क्योंकि अंडे इम्यूनोसमझौता और प्रतिरक्षा सहिष्णु हैं, किसी भी जीव से ऊतकों को संभावित रूप से मानव ऊतकों के प्रत्यारोपण के लिए आवश्यक महंगे ट्रांसजेनिक जानवरों (जैसे, चूहों) के बिना प्रत्यारोपित किया जा सकता है। हालांकि, इस मॉडल के लाभों के कई संभवतः भी सीमाएं हो सकती है, कम ट्यूमर पीढ़ी के समय और इम्यूनोसमझौता/ इसके अतिरिक्त, हालांकि सभी ट्यूमर प्रकार चिकन chorioallantoic झिल्ली मॉडल में यहां प्रस्तुत किया, वे ट्यूमर के विकास की डिग्री बदलती के साथ ऐसा करते हैं ।

इस प्रकार अब तक, हमने अंडाशय, गुर्दे, प्रोस्टेट और मूत्राशय के कैंसर के लिए सफल होने के लिए प्रत्यारोपण की इस विधि को पाया है। प्रत्येक को प्रत्यारोपण के लिए विशिष्ट शर्तों की पहचान करने के ?...

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Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

हम स्त्री रोग और मूत्र कैंसर कोशिका लाइनों और रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर के एनग्राफमेंट के लिए वीवो मॉडल में चिकन कोरिओलैंटोइक झिल्ली मॉडल को एक विकल्प, प्रत्यारोपण योग्य के रूप में प्रस्तुत करते हैं।

स्त्री रोग और यूरोलॉजिकल कैंसर का अध्ययन करने के लिए वीवो मॉडल में चिकन कोरिओलांटोइक झिल्ली का उपयोग करना

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...

चिकन कोरियोलाएंटोनिक झिल्ली, या कैम पर ट्यूमर के एनग्रेफ्टमेंट का उपयोग ट्यूमरीजेनिकिटी, उपचार प्रभावकारिता या सेलुलर क्रॉसटॉक के अध्ययन के लिए किया जा सकता है। यह विधि वीवो सेटिंग में इम्यूनोटोलेरेंट में लागत प्रभावी तेजी से ट्यूमर वृद्धि की अनुमति देती है। सीएएम मॉडल का उपयोग करके, उपन्यास चिकित्सीय दृष्टिकोणों को सेल लाइनों या यहां तक कि रोगी ट्यूमर नमूनों का उपयोग करके तेजी से परीक्षण किया जा सकता है।इस प्रोटोकॉल के सबसे महत्वपूर्ण पहलू उचित कैम गठन सुनिश्चित कर रहे हैं और अंडे खोलते समय कैम या वैक्यूलेचर को बाधित नहीं कर रहे हैं। विकास के दिन सात या आठ जब कैम पूरी तरह से विकसित हो गया है, अंडे रोटेटर बंद कर दें और जैवसेफ्टी कैबिनेट में अंडे के रैक में लगभग एक से तीन अंडे रखें। रोशनी बंद होने के साथ, अंडे के खोल के खिलाफ एक अंडा मोमबत्ती रखें ताकि एक अंडे की वायु कोशिका के स्थान की पहचान और निशान लगाया जा सके, फिर अंडे के मोमबत्ती को एक बड़े रक्त वाहिका नेटवर्क को खोजने के लिए खोल पर ले जाएं, अंडे को आवश्यक रूप से घुमाएं।अंडे के बीच के पास एक आदर्श वाक्यूलेचर शाखा होगी। प्रत्यारोपण के लिए उपयोग किए जाने वाले वैक्यूलेचर का पता लगाने के लिए एक मार्कर का उपयोग करें। हुड में प्रकाश पर वापस मोड़ने के बाद, एयर सेल के केंद्र पर सीधे खोल में एक छोटे छेद को ड्रिल करने के लिए सिलिकॉन कार्बाइड पीसने वाले पत्थर के साथ लगे एक कॉर्डलेस रोटरी टूल का उपयोग करें।जब अधिकांश खोल हटा दिए गए हैं, लेकिन सफेद आंतरिक झिल्ली बरकरार होने के साथ, एक और छोटे छेद को ड्रिल करें जहां संवहनी खिड़की को अभी प्रदर्शित के रूप में खोला जाएगा। जब दूसरा छेद तैयार हो जाता है, तो हवा की कोशिका और वाक्यूलेचर पर सफेद आंतरिक झिल्ली को धीरे-धीरे छेदने के लिए 18 गेज सुई का उपयोग करें, यह ध्यान रखें कि सफेद आंतरिक झिल्ली, लेकिन कैम नहीं, ड्रिल किए गए क्षेत्र की संपूर्णता में बाधित होता है। हुड लाइट के साथ फिर से, अंडे के मोमबत्ती का उपयोग यह सत्यापित करने के लिए करें कि वायु कोशिका को अंडे के अंत से वैक्यूलेचर के ऊपर के क्षेत्र में स्थानांतरित कर दिया गया है।यदि आवश्यक हो, तो मूल वायु कोशिका पर छेद के चारों ओर एक पिपेट नियंत्रक में डाले गए वैक्यूम ट्यूबिंग रखें और वायु कोशिका को स्थानांतरित करने के लिए धीरे-धीरे शॉर्ट फटने में सक्शन लागू करें। एयर कैम सीमा के अंदर लगभग 0.5 सेंटीमीटर वायु कोशिका के नए स्थान की रूपरेखा चिह्नित करें और नई एयर सेल पर छेद को कवर करने के लिए पैकिंग टेप का एक टुकड़ा ठीक करें। अन्य दो अंडे तैयार करने के बाद जैसा कि सिर्फ प्रदर्शन किया गया है, अंडे को इनक्यूबेटर में वापस करें और प्रदर्शन के अनुसार एक से तीन के समूहों में प्रयोग के लिए किसी भी अतिरिक्त अंडे खोलें।जब सभी अंडे खोले गए हैं, तो एक से तीन अंडे को जैव सुरक्षा कैबिनेट में अंडे के रैक में स्थानांतरित हवा कोशिकाओं के साथ स्थानांतरित करें और कैम या वेक्यूलेचर को बाधित किए बिना पूरी तरह से सेल के माध्यम से एयर सेल सीमा पर एक छोटी सी लाइन को काटने के लिए एक परिपत्र काटने वाले पहिए के साथ लगे एक कॉर्डलेस रोटरी टूल का उपयोग करें। घुमावदार कैंची का उपयोग करना, खोल में एक खिड़की बनाने और भ्रूण की व्यवहार्यता को सत्यापित करने के लिए शेष वायु कोशिका के चारों ओर काटें। व्यवहार्य भ्रूण एक व्यापक वाक्यूलेचर, स्पष्ट एल्बुमिन, भ्रूण आंदोलन, और/या एक दृश्यमान दिल की धड़कन प्रदर्शित करेगा ।अविजय भ्रूण में, कैम कुछ के साथ अपारदर्शी दिखाई दे सकता है, यदि कोई हो, तो मौजूद जहाजों और भ्रूण आंदोलन या दिल की धड़कन के बिना छोटे या अनुपस्थित हो सकते हैं। Semkin forceps का उपयोग करना, एक बाँझ कपास की गेंद से कपास के छोटे टुकड़े खींचो और धीरे व्यवहार्य भ्रूण के कैम सतह दाग किसी भी खोल धूल और मलबे को दूर करने के लिए, तो छह से सात सेंटीमीटर पारदर्शी फिल्म ड्रेसिंग के एक चौथाई टुकड़े के साथ खोल खोलने कवर कैम को छूने के बिना और खोला खिड़की का सामना करना पड़ के साथ इनक्यूबेटर के लिए अंडे वापस । अंडे रैक का एक टुकड़ा, अंडे रोटेटर के किनारे, या किसी अन्य उपयुक्त आइटम का उपयोग करें जो किसी भी अंडे को सहारा दें जो रोलिंग रखते हैं।प्रत्यारोपण के लिए कैंसर सेल निलंबन तैयार करने के लिए, ब्याज की कैंसर सेल संस्कृति से कोशिकाओं फसल और अपकेंद्रित्र द्वारा कोशिकाओं तलछट । सुपरनेट को एस्पिरेट करें और यांत्रिक रूप से अवशिष्ट माध्यम में कोशिकाओं को फिर से खर्च करें। कोशिका निलंबन को बर्फ पर रखें और मध्यम में कोशिकाओं की मात्रा को मापने के लिए एक पिपेट का उपयोग करें।फिर कोशिकाओं को मध्यम पूरक के 20 से 100 माइक्रोलीटर में एक से दो मिलियन कोशिकाओं की एकाग्रता पर पुनर्सीमित करें, जिसमें 2.7 से 4 मिलीग्राम प्रति मिलीलीटर बाह्य मैट्रिक्स और किसी भी विकास कारक या ब्याज के अन्य योजक हैं। कैंसर सेल प्रत्यारोपण के लिए, एक गैर छड़ी अंगूठी का उपयोग कर, छह अंडे तक जगह अंडे रैक पर प्रत्यारोपित किया जा करने के लिए और खुली खिड़की की ओर पारदर्शी फिल्म ड्रेसिंग के किनारों रोल करने के लिए गोले से फिल्म को दूर । जांच करें कि अंडे व्यवहार्य और स्वस्थ हैं या नहीं।आदर्श अंडे में खोले गए क्षेत्र के केंद्र के भीतर छोटे शाखाओं वाले जहाजों के साथ एक बड़ा पोत होगा। घुमावदार आईरिस संदंश का उपयोग करके, एक शाखा बिंदु पर आदर्श रूप से पोत पर कैम पर एक बाँझ गैर-छड़ी अंगूठी रखें। कैम को धीरे-धीरे ऊपर उठाने और रिंग के केंद्र में कैंसर सेल निलंबन को पिपेट करने के लिए बाँझ ग्लास हलचल रॉड का उपयोग करें।जब कोशिकाओं के सभी दिया गया है, सात सेंटीमीटर पारदर्शी फिल्म ड्रेसिंग द्वारा छह के एक चौथाई टुकड़े के साथ खोलने सील और एक उपयुक्त प्रत्यारोपण पदनाम के साथ अंडे लेबल । फिर अंडे को सीधे सामना करने वाले खोल के उद्घाटन के साथ इनक्यूबेटर में सुरक्षित रूप से रखें। एक गैर छड़ी अंगूठी के उपयोग के बिना कैंसर कोशिकाओं को प्रत्यारोपित करने के लिए, एक उचित आकार पिपेट टिप में सेल निलंबन aspirate और टिप के शीर्ष भाग पकड़ ध्यान से पिपेट टिप बाहर निकाल और टिप क्षैतिज एक बाँझ 10 सेंटीमीटर ऊतक संस्कृति पकवान में जगह है ।टिप्स लोड होने के बाद डिश को 15 से 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में रखें, 15 मिनट बाद पॉलीमराइजेशन की जांच करें। तरल की एक छोटी राशि आम तौर पर बाहर रिसाव के रूप में प्रत्येक टिप पकवान में रखा जाता है । टिप के भीतर बहुलीकरण की सीमा का अनुमान लगाने के लिए इस तरल का उपयोग करें।जब मैट्रिक्स तैयार हो जाता है, तो एक टिप को उचित आकार के पिपेट पर रखें और एक बड़े अच्छी तरह से विकसित पोत के शाखाओं वाले बिंदु पर आदर्श रूप से कैम पर आंशिक रूप से पॉलीमराइज्ड सेल निलंबन को मजबूर करने के लिए प्लंजर को दबाना। इन तरीकों का उपयोग करना, दोनों मानव और murine अंडाशय कैंसर सेल लाइनों और प्राथमिक ट्यूमर टुकड़े वीवो मॉडल में अंय में मनाया उन लोगों के अनुरूप morphologies के साथ ट्यूमर के सफल engraftment में हुई । परीक्षण ट्यूमर प्रकारों में से, अंडाशय के कैंसर की वृद्धि बहुत कम स्पष्ट थी और आमतौर पर बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग की सहायता के बिना दिखाई नहीं देती थी।प्रत्यारोपण के समय विकास कारकों या हार्मोन को जोड़ने के प्रभाव का भी इन तरीकों का उपयोग करके परीक्षण किया जा सकता है। गुर्दे के कैंसर के लिए, प्राथमिक मानव गुर्दे के ट्यूमर से स्थापित सेल लाइनों या टुकड़ों से स्पष्ट सेल गुर्दे की कोशिका कार्सिनोमा कोशिकाओं का प्रत्यारोपण तेजी से, मजबूत ट्यूमर गठन का उत्पादन करता है। इसके अलावा, कई मानव और murine प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइनों और मानव मूत्राशय कैंसर सेल लाइनों और प्राथमिक ट्यूमर टुकड़े इस मॉडल का उपयोग कर ट्यूमर स्थापित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था ।कैम और वैक्यूलेचर को बाधित करने से बचने और यह सुनिश्चित करना महत्वपूर्ण है कि कैम खिड़की खोलते समय खोल का पालन न करे। सफल एनग्रेफ्टमेंट के बाद, सीएएम मॉडल का उपयोग ट्यूमर के भीतर विभिन्न सेल प्रकारों के बीच ब्याज या बातचीत के उपचार की चिकित्सीय प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Cancer Research

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Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

माउस किडनी में स्थापित मेटास्टैटिक क्लियर सेल रेनल सेल कार्सिनोमा मॉडल की तुलना और चिकन कोरियोलंटोइक झिल्ली पर

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Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

4T1 स्तन कैंसर मॉडल में फेफड़ों के मेटास्टेसिस के क्वांटिफिकेशन में सुधार करने के लिए कंप्यूटर आधारित छवि विश्लेषण का उपयोग करना

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Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

रैपिड और मात्रात्मक इंट्राविटल चिक कोरियोलाएंटोइक झिल्ली मॉडल का उपयोग करके मेटास्टैटिक नियामकों की खोज

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