Name: using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers
Uploaded: 2020-01-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

저자는 이 방법에 대한 초기 교육에 대해 다마노이 후유히코 박사와 빈 부 박사에게 감사를 표하고자 합니다. Eva Koziolek 박사와의 논의는 이러한 접근 방식을 최적화하는 데 중요한 역할을 했으며 매우 감사하게 평가되었습니다. 이 작품은 다음과 같은 출처에서 자금조달없이 가능하지 않았을 것이다: 담배 관련 질병 연구 프로그램 박사 후 펠로우십 (27FT-0023, 국방부(DoD) 난소암 연구 프로그램(W81XWH-17-1-0160), NCI/NIH(1R21CA216770), 담배 관련 질병 연구 프로그램 고영향 파일럿 어워드(27IR-0016), UCLA 기관 지원, JCCC 종자 그랜트 (NCI / NIH P30CA016042) 및 LW에 대한 연구를위한 부총장의 사무실에서 3R 그랜트를 포함.

본 명세서에 제시된 모든 실험은 캘리포니아 대학교, 로스앤젤레스(UCLA)의 적절한 윤리위원회에 의해 검토및 승인되었습니다. 비식별, 원발성 인간 종양의 사용은 UCLA 기관 검토 위원회에 의해 승인되었습니다 (의정서 번호 17-000037, 17-001169, 및 11-001363). UCLA에서, 동물 연구위원회 검토닭 배아를 사용 하 여 실험에 대 한 필요 하지 않습니다.; 프로토콜 승인은 계란이 부화 될 때만 필요합니다. 그러?...

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	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Jackson, S. J., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+tissue+models+in+cancer+research:+looking+beyond+the+mouse.">Human tissue models in cancer research: looking beyond the mouse.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 10 (8), 939-942 (2017).</li><li>Cheon, D. J., Orsulic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Models+of+Cancer.">Mouse Models of Cancer.</a> Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 6 (1), 95-119 (2011).</li><li>. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2016 Available from: <a target="_blank" href="https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/">https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/</a> (2018)</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chicken+chorioallantoic+membrane+angiogenesis+model.">Chicken chorioallantoic membrane angiogenesis model.</a> Methods Molecular Biology. 843, 47-57 (2012).</li><li>Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. 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K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+as+an+in+vivo+model+to+study+the+effect+of+newly+identified+molecules+on+ovarian+cancer+invasion+and+metastasis.">Chick chorioallantoic membrane (CAM) assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis.</a> International Journal of Molecular Science. 13 (8), 9959-9970 (2012).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay:+A+3D+Animal+Model+for+Study+of+Human+Nasopharyngeal+Carcinoma.">Chick Chorioallantoic Membrane Assay: A 3D Animal Model for Study of Human Nasopharyngeal Carcinoma.</a> PLoS ONE. 10 (6), e0130935 (2015).</li><li>Deryugina, E. I., Quigley, J. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+assay+to+study+treatment+approaches+in+urothelial+carcinoma.">Applying the chicken embryo chorioallantoic membrane assay to study treatment approaches in urothelial carcinoma.</a> Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations. 35 (9), e511-e523 (2017).</li><li>Jefferies, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+imaging+of+engineered+human+tumors+in+the+living+chicken+embryo.">Non-invasive imaging of engineered human tumors in the living chicken embryo.</a> Scientific Reports. 7 (1), 4991 (2017).</li><li>Taizi, M., Deutsch, V. R., Leitner, A., Ohana, A., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+rapid+in+vivo+system+for+testing+therapeutics+on+human+leukemias.">A novel and rapid in vivo system for testing therapeutics on human leukemias.</a> Experimental Hematology. 34 (12), 1698-1708 (2006).</li><li>Strojnik, T., Kavalar, R., Barone, T. A., Plunkett, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+model+and+immunohistochemical+comparison+of+U87+human+glioblastoma+cell+xenografts+on+the+chicken+chorioallantoic+membrane+and+in+rat+brains.">Experimental model and immunohistochemical comparison of U87 human glioblastoma cell xenografts on the chicken chorioallantoic membrane and in rat brains.</a> Anticancer Research. 30 (12), 4851-4860 (2010).</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+model+for+tumor+biology.">The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology.</a> Experimental Cell Research. 328 (2), 314-324 (2014).</li><li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non-integrating+Lentiviral+Approach+Overcomes+Cas9-Induced+Immune+Rejection+to+Establish+an+Immunocompetent+Metastatic+Renal+Cancer+Model.">A Non-integrating Lentiviral Approach Overcomes Cas9-Induced Immune Rejection to Establish an Immunocompetent Metastatic Renal Cancer Model.</a> Molecular Therapy - Methods &amp; Clinical Development. 9, 203-210 (2018).</li></ol>

CAM 모델을 사용하여 종양 확장 및 생착은 생체 내 동물 모델에서 기존 모델보다 더 빠르고 직접적으로 관찰 가능한 종양 성장을 허용합니다. 또한, 특히 면역 손상 마우스의 비용과 비교할 때 장비의 초기 구매가 완료되면 비용이 현저히 낮습니다. 닭 배아의 초기, 면역 손상 상태는 쉽게 인간과 뮤린 조직의 생착을 허용합니다. 이러한 강점에도 불구하고 CAM 모델에는 한계가 있습니다. 장기적인 ?...

마우스는 악성종양을 포함한 인간 질병의 연구를 위한 고전적인 모델 유기체로서 사용되어 왔습니다. 포유류로서, 그들은 인간과 많은 유사점을 공유합니다. 그들의 높은 수준의 유전 적 유사성은 인간 질병의 유전 적 통제에 대한 엄청난 통찰력을 제공하기 위해 마우스 게놈의 형질 전환 조작을허용했습니다 1. 마우스를 취급하고 실험에 있는 광대한 경험은 생물 의학 연구를 위한 선택의 모형 귀착되었습니다. 그러나, 뮤린 모델에 관한 윤리적, 과학적 우려 뿐만 아니라, 그들은 또한 매우 비용이 많이 들고 시간이 많이 소요 될 수 있습니다2,3. 종양의 발달은 몇 주 또는 몇 달이 걸릴 수 있습니다. 종양이 발전하는 동안 일반적인 기관의 주택만으로도 수백에서 수천 달러의 주택이 운영될 수 있습니다. 난소암은 뮤린 모델에서의 성장이 수개월이 걸릴 수 있기 때문에 이러한 단점의 예입니다. 연구 진행에 있는 지연은 잠재적으로 난소암 환자에 영향을 미칠 수 있습니다' 지속적으로 낮은 5 년 생존율만 47%(즉,30 년 동안 단지 10%의 생존율증가)4. 유사하게, 비뇨기과 암 (신장, 전립선 및 방광암)는 미국에 있는 모든 암 케이스의 19%를 구성하고 암 관련죽음의11%를 4. 따라서, 부인과 및 비뇨기과 암을 연구하는 생체 내 새로운 접근법은 이 모형이 초기 선별 실험에만 적용되더라도 실험실상당한 시간, 노동 및 돈을 절약할 수 있었습니다. 추가적으로, 연구 사실 인정의 결과적인 가속은 이 암으로 매년 진단된 177,000명의 개별에 현저하게 영향을 미칠 수 있었습니다.
치킨 CAM 모델은 앞서 언급 한 문제를 해결하는 많은 장점을 제공합니다. 혈관 신생을 연구하는 인기있는 모델5,6,종양 세포 침공7,8,및 전이7,9,병아리 배아 CAM 모델은 이미 신경교종10,11,12,두경부 편평 세포 암13,14,백혈병15,16,췌장 암17,췌장 암 등 다양한 형태의 암을 연구하는 데 사용되었습니다. 대장암18. 또한, CAM 모델은 신경아세포종19,버킷림프종20,흑색종21,및 펠린 섬유육종22에대해 생성되었다. 선행 연구는 또한 방광암(23)과 전립선암 세포주24의생착을 제시했습니다, 그러나 한정된 프로토콜 세부사항. 뿐만 아니라 계란은 쥐 보다 훨씬 저렴, 하지만 그들은 또한 매우 재현 가능한 결과 생산25,26. 그(것)들은 빠른 혈관 발달을 보여주고, 종양 생착은 며칠로 빨리 생기고 열린 창을 통해서 세로로 구상될 수 있습니다. 난자 수정과 부화 사이의 21 일 기간으로 몇 주 이내에 실험을 완료 할 수 있습니다. 또한, 저렴한 비용, 제한된 주택 요구, 작은 크기는 마우스 연구에 대한 금지 될 대규모 실험을 쉽게 허용.
따라서, 우리는 부인과 및 비뇨기과 암의 생착에 대한 CAM 모델을 최적화하기 위해 노력했다. 초기 닭배아(27)의면역 손상 상태로 인해, 마우스 및 인간 세포 모두 쉽게 이식될 수 있다. 이와 같이, 우리는 성공적으로 난소, 신장, 전립선 및 방광암을 이식했습니다. 이러한 종양 유형의 각각에 대 한, CAM 쉽게 설립 된 뮤린 및 인간 종양 세포 주를 받아들입니다. 중요 한 것은, 갓 수확 기본 인간의 종양 조직 또한 성공의 높은 속도 소화 된 세포 또는 고체 조직의 조각에서 생착 수 있습니다. 이 암 모형 및 세포 근원의 각각은 우리가 여기에서 공유하는 최적화를 요구합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>-010 Teflon (PTFE) White 55 Duro Shore D O-Rings</td>
			<td>The O-Ring Store</td>
			<td>TEF010</td>
			<td>Nonstick ring for cell seeding. 1/4&#34;ID X 3/8&#34;OD X 1/16&#34;CS Polytetrafluoroethylene (PTFE).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C4-2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3314</td>
			<td>Human prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CWR22Rv1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CWR cells were the kind gift of Dr. David Agus (Keck Medicine of University of Southern California)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 8/18 Antibody (C-51)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-44929-0.02mg</td>
			<td>Used at a dilution of 1:100 for immunohistochemical analysis of human ovarian CAM tumors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin Firefly, potassium salt</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Curved; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4-3/4 in. Overall Length</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS6703</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved scissors would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max Tool Kit</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>8050-N/18</td>
			<td>This kit contains all necessary tools.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertilized chicken eggs (Rhode Island Red - Brown, Lab Grade)</td>
			<td>AA Lab Eggs Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>A local egg supplier would need to be identified, as this supplier only delivers regionally.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HT-1376</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1472</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hovabator Genesis 1588 Deluxe Egg Incubator Combo Kit</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>HB1588D-NONE-1102-1588-1357</td>
			<td>Other egg incubators may be used, but their reliability would need to be verified. After implantation, a cell incubator with the CO2 disabled may also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ID8</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Not commercially available, please see PMID: 10753190.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incu-Bright Cool Light Egg Candler</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>1102</td>
			<td>Other candlers may be used; however, this is preferred among those that we have tested. This candler is included in the aforementioned incubator kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps, 10cm, Curved, Serrated, 0.8mm tips</td>
			<td>World Precision Instrument</td>
			<td>15915</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved forceps would work as well. Multiple brands have been used for this method.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Clipper Distributing</td>
			<td>0010250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina II In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Membrane Matrix HC; LDEV-Free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354248</td>
			<td>Extracellular matrix solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MyC-CaP</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3255</td>
			<td>Murine prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Pipet-Aid XP Pipette Controller</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>4-000-101</td>
			<td>Any similar pipet controller would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Hypodermic Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td>This is provided as an example. Any 18G needle would work similarly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RENCA</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semken Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11008-13</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar forceps or another style that suits researcher preference would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SKOV3</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-77</td>
			<td>Human ovarian cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72914</td>
			<td>This is provided as an example. The forceps used for pulling away the shell for bioluminescence imaging are approximately 12.8 cm long with 3 mm-wide tips.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cotton Balls</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-456-885</td>
			<td>This is provided as an example. Any sterile cotton balls would suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stirring Rods with Rubber Policeman; 5mm diameter, 6 in. length</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>GRPL06</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar glass stir rods would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T24</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-4</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Transparent Dressing Original Frame Style 2 3/8&#34; x 2 3/4&#34;</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>21272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dishes, 10 cm diameter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar, sterile 10-cm dish may be used. Tissue culture treatment is not necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Clear Laboratory Tubing - 1/4 x 3/8 x 1/16 wall (50 feet)</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>AACUN017</td>
			<td>This is provided as an example. Any similarly sized tubing would work as well.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers

마우스 모델은 생체 내 암 연구에 대한 벤치 마크 테스트입니다. 그러나, 비용, 시간 및 윤리적고려는 생체내 암 모형에 있는 대안을 요구하기 위하여 지도했습니다. 닭 융모난토암 막 (CAM) 모형은 종양 발달의 직접적인 가시화를 허용하고 생체 내 화상 진찰을 위해 적당한 저렴하고, 급속한 대안을 제공합니다. 이와 같이, 우리는 부인과 및 비뇨기과 종양을 이 모형으로 접착하기 위한 최적화된 프로토콜을 개발하기 위하여 노력했습니다, 우리는 여기에서 제출합니다. 약 7 일 후, 공기 세포는 껍질에 개구부가 생성되는 계란의 혈관 측으로 이동됩니다. 뮤린과 인간 세포주 및 1 차적인 조직에서 종양은 그 때 이식될 수 있습니다. 이들은 일반적으로 세포 분산을 피하고 세포가 혈관 공급을 모집 할 때까지 영양 지원을 제공하기 위해 세포 외 매트릭스와 매체의 혼합물에서 시드됩니다. 종양은 그 때 계란 부화하기 전에 추가 14 일까지 증가할 수 있습니다. 반딧불이 루시퍼라제로 안정적으로 변형된 세포를 이식함으로써, 생물 발광 이미징은 배아 전체에 퍼진 막 및 암세포에서 종양 성장의 민감한 검출에 사용될 수 있다. 이 모델은 잠재적으로 종양성, 침략, 전이 및 치료 효과를 연구하는 데 사용될 수 있습니다. 치킨 CAM 모델은 기존 뮤린 모델에 비해 훨씬 적은 시간과 재정적 자원을 필요로합니다. 계란은 면역 손상 및 면역 내성 때문에, 어떤 유기체에서 조직은 잠재적으로 인간 조직의 이식에 필요한 비용이 많이 드는 형질 전환 동물없이 이식 될 수있다 (예를 들어, 마우스). 그러나, 이 모형의 많은 이점은 잠재적으로 또한 짧은 종양 생성 시간 및 면역 타협/면역 관용 상태를 포함하여 제한일 수 있었습니다. 추가적으로, 닭 chorioallantoic 막 모형에 여기에서 제출된 모든 종양 모형이 있더라도, 종양 성장의 다양한 각도로 이렇게 합니다.

지금까지, 우리는 난소, 신장, 전립선 및 방광암을 위해 성공하기 위하여 이식의 이 방법을 찾아냈습니다. 각각은 융통성이 있을 지도 모르지만, 이식을 위한 특정 조건을 확인하기 위하여 최적화되었습니다. 시험된 종양 모형의, 난소암 성장은 생물 발광 화상 진찰의 도움 없이 훨씬 적게 발음되고 전형적으로 보이지 않았습니다(그림 1). 그러나, CAM?...

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Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

우리는 부인과 및 비뇨기과 암 세포주 및 환자 유래 종양의 이식에 대한 대안, 이식 가능한 생체 내 모델로 닭 융모알구암 막 모델을 제시합니다.

비보 모델에서 닭 융모난토암 막을 사용하여 부인과 및 비뇨기과 암을 연구

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...

닭 초막, 또는 CAM에 종양의 이식은 종양성, 치료 효능 또는 세포 간 담론의 연구에 사용할 수 있습니다. 이 방법은 생체 내성 환경에서 면역 내성에서 비용 효율적인 빠른 종양 성장을 허용합니다. CAM 모델을 사용하여, 새로운 치료 접근법은 세포주 또는 환자 종양 견본을 사용하여 급속하게 시험될 수 있습니다.이 프로토콜의 가장 중요한 측면은 적절한 CAM 형성을 보장하고 계란을 여는 동안 CAM 이나 혈관을 방해하지 않는 것입니다. CAM이 완전히 발달한 7~8일째에 계란 회전기를 끄고 약 1~3개의 계란을 생물안전 캐비닛의 달걀 랙에 넣습니다. 조명이 꺼지면 달걀 껍질에 달걀 촛불을 놓고 한 달걀의 공기 세포의 위치를 식별하고 표시한 다음 달걀 촛불을 껍질 위로 이동하여 큰 혈관 네트워크를 찾아 필요에 따라 달걀을 회전시합니다.이상적인 혈관은 계란의 중간 근처에 분기됩니다. 마커를 사용하여 이식에 사용되는 혈관을 추적합니다. 후드의 빛을 다시 켠 후 실리콘 초경 연삭 석이 장착된 무선 회전 도구를 사용하여 쉘의 작은 구멍을 공기 셀 의 중앙을 직접 뚫습니다.대부분의 쉘이 제거되었지만 흰색 내부 멤브레인이 그대로 발생하면 혈관 창이 방금 입증된 대로 열리는 또 다른 작은 구멍을 뚫습니다. 두 번째 구멍이 준비되면 18 게이지 바늘을 사용하여 공기 세포와 혈관 에 흰색 내부 멤브레인을 부드럽게 관통하여 CAM이 아닌 백색 내부 멤브레인을 돌봐 주며 드릴 영역 전체에 걸쳐 중단됩니다. 후드가 다시 켜지면 계란 촛불을 사용하여 공기 세포가 계란 끝에서 혈관 위로 영역으로 옮겨졌는지 확인합니다.필요한 경우 원래 공기 셀 위에 구멍 주위에 피펫 컨트롤러에 삽입 된 진공 튜브를 배치하고 공기 셀을 이동짧은 버스트에 흡입을 부드럽게 적용합니다. 에어 캠 경계 내부 약 0.5센티미터의 공기 셀의 새로운 위치의 윤곽을 표시하고 새로운 공기 셀 위에 구멍을 커버 할 만큼 큰 포장 테이프조각을 수정합니다. 방금 입증 된 대로 다른 두 개의 계란을 준비 한 후, 인큐베이터에 계란을 반환하고 입증 된 바와 같이 1 ~ 3 의 그룹으로 실험을위한 추가 계란을 엽니 다.모든 계란이 열리면, 생물 안전 캐비닛에 계란 랙에 재배치 된 공기 세포를 가진 1 ~3 개의 계란을 옮기고 CAM 또는 혈관을 방해하지 않고 세포를 통해 공기 셀 경계에 작은 선을 완전히 절단하는 원형 절단 휠이 장착 된 무선 회전 도구를 사용합니다. 곡선 가위를 사용하여 나머지 공기 셀 주위를 잘라 껍질에 창을 만들고 배아의 생존 가능성을 확인합니다. 실행 가능한 태아는 광범위한 혈관통, 명확한 알부민, 배아 운동 및 /또는 눈에 보이는 심장 박동을 표시합니다.비생존 배아에서, CAM은 몇몇, 있는 경우에, 혈관이 존재하는 경우에, 불투명하거나 배아가 운동 또는 심장 박동 없이 작거나 결석할 수 있습니다 불투명한 나타날 수 있습니다. 셈킨 포셉을 사용하여 멸균 면공에서 작은 면 조각을 당기고 가능한 배아의 CAM 표면을 부드럽게 얼룩져 쉘 먼지와 이물질을 제거한 다음, CAM을 건드리지 않고 6~7센티미터투명 필름 드레싱으로 쉘 개구부를 덮고 열린 창문을 향한 인큐베이터로 계란을 되돌려 보냅니다. 계란 랙 조각, 계란 회전자의 가장자리 또는 압연 유지 계란을 소품에 다른 적합한 항목을 사용.이식용 암세포 현탁액을 준비하기 위해, 원심분리에 의한 세포에 대한 관심과 퇴적물의 암세포 배양으로부터 세포를 수확한다. 잔류 배지에서 수퍼내탄을 흡인하고 기계적으로 재보전한다. 세포 현탁액을 얼음 위에 놓고 파이펫을 사용하여 세포의 양을 중간 크기로 측정합니다.그런 다음 밀리리터 세포 외 매트릭스 당 2.7 ~ 4 밀리그램으로 보충된 중간 크기의 20~100마이크로리터에서 1~200만 개의 세포 농도로 세포를 재제한하고 성장 인자 또는 기타 관심 첨가제를 첨가합니다. 암세포 이식의 경우, 논스틱 링을 사용하여, 계란 랙에 이식될 최대 6개의 알을 놓고 투명 필름 드레싱의 가장자리를 열린 창쪽으로 굴려 조개껍질에서 필름을 제거합니다. 계란이 실행 가능하고 건강한지 확인하십시오.이상적인 계란은 개방 된 지역의 중앙 내에 작은 분기 선박과 큰 선박을해야합니다. 곡선홍채 집게를 사용하여 멸균 되지 않는 링을 혈관 위에 이상적으로 배치합니다. 멸균 유리 교반 봉을 사용하여 CAM을 부드럽게 래브라드하고 암세포 현탁액을 링 중앙으로 피펫합니다.모든 세포가 전달되면, 7센티미터 투명 필름 드레싱에 의해 6의 1 분기 조각으로 개구부를 밀봉하고 적절한 임플란트 지정으로 계란을 라벨. 그런 다음 껍질을 똑바로 향하여 인큐베이터에 계란을 단단히 놓습니다. 비스틱 링을 사용하지 않고 암세포를 이식하려면, 셀 서스펜션을 적절한 크기의 파이펫 팁으로 흡인시키고 팁의 상단 부분을 조심스럽게 피펫 팁을 꺼내서 팁을 멸균 10센티미터 조직 배양 접시에 수평으로 놓는다.팁이 적재된 후, 접시를 섭씨 37도 인큐베이터에 15-30분 간 넣고 15분 후에 중합을 확인합니다. 각 팁이 접시에 배치될 때 소량의 액체가 일반적으로 누출됩니다. 이 액체를 사용하여 팁 내의 중합 정도를 추정하십시오.매트릭스가 준비되면, 적절한 크기의 파이펫에 한 끝을 놓고 플런저를 우울하여 부분적으로 중합화된 셀 서스펜션을 CAM에 이상적으로 밀어 큰 잘 발달된 용기의 분기 지점에 이상적으로 두게 한다. 이러한 방법을 사용하여, 인간과 뮤린 난소암 세포주 와 1 차적인 종양 조각 둘 다 다른 생체 내 모형에서 관찰된 것과 일치하는 형태학을 가진 종양의 성공적인 이식 귀착되었습니다. 시험된 종양 모형의, 난소암 성장은 생물 발광 화상 진찰의 도움 없이 훨씬 덜 발음하고 전형적으로 보이지 않았습니다.이식 시 성장 인자 또는 호르몬을 첨가하는 효과 또한 이러한 방법을 사용 하 여 테스트할 수 있습니다. 신장암을 위해, 1 차적인 인간 신장 종양에서 확립된 세포주 또는 조각에서 명확한 세포 신장 세포 암 세포의 이식은 급속하고 강력한 종양 형성을 일으킵니다. 또한, 다수의 인간 및 뮤린 전립선암 세포주 및 인간 방광암 세포주 및 1차 종양 조각이 이 모델을 사용하여 종양을 확립하는 데 사용되었다.CAM과 혈관을 방해하지 않고 창을 열때 CAM이 셸을 준수하지 않도록 하는 것이 중요합니다. 성공적인 이식 후, CAM 모델은 종양 내의 상이한 세포 유형 간의 관심 또는 상호 작용의 치료 효능을 평가하는 데 사용될 수 있다.

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