Name: using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers
Uploaded: 2020-01-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

Forfatterne ønsker å takke Dr. Fuyuhiko Tamanoi og Binh Vu for den første treningen på denne metoden. Diskusjoner med Dr. Eva Koziolek har vært medvirkende til å optimalisere denne tilnærmingen og har blitt veldig verdsatt. Dette arbeidet ville ikke vært mulig uten finansiering fra følgende kilder: Tobakksrelatert sykdomsforskningsprogram Postdoktorfellesskap (27FT-0023, til ACS), Department of Defense (DoD) Ovarian Cancer Research Program (W81XWH-17-1-0160), NCI / NIH (1R21CA216770), Tobakksrelatert sykdom Research Program High Impact Pilot Award (27IR-0016), og UCLA institusjonell støtte, inkludert en JCCC Seed Grant (NCI/NIH P30CA016042) og et 3R Grant fra Office of the Vice Chancellor for Research til LW.

Alle eksperimentene som presenteres her ble gjennomgått og godkjent av de riktige etiske komiteene ved University of California, Los Angeles (UCLA). Bruken av avidentifiserte, primære menneskelige svulster er godkjent av UCLA Institutional Review Board (protokollnummer 17-000037, 17-001169 og 11-001363). Ved UCLA er Animal Research Committee gjennomgang ikke nødvendig for eksperimenter ved hjelp av kyllingembryoer; protokollgodkjenning er bare nødvendig når eggene vil bli klekket ut. Imidlertid ble beste praksis, so...

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Jackson, S. J., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+tissue+models+in+cancer+research:+looking+beyond+the+mouse.">Human tissue models in cancer research: looking beyond the mouse.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 10 (8), 939-942 (2017).</li><li>Cheon, D. J., Orsulic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Models+of+Cancer.">Mouse Models of Cancer.</a> Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 6 (1), 95-119 (2011).</li><li>. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2016 Available from: <a target="_blank" href="https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/">https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/</a> (2018)</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chicken+chorioallantoic+membrane+angiogenesis+model.">Chicken chorioallantoic membrane angiogenesis model.</a> Methods Molecular Biology. 843, 47-57 (2012).</li><li>Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chicken+chorioallantoic+membrane+model+in+biology,+medicine+and+bioengineering.">The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering.</a> Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).</li><li>Lokman, N. A., Elder, A. S., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+as+an+in+vivo+model+to+study+the+effect+of+newly+identified+molecules+on+ovarian+cancer+invasion+and+metastasis.">Chick chorioallantoic membrane (CAM) assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis.</a> International Journal of Molecular Science. 13 (8), 9959-9970 (2012).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay:+A+3D+Animal+Model+for+Study+of+Human+Nasopharyngeal+Carcinoma.">Chick Chorioallantoic Membrane Assay: A 3D Animal Model for Study of Human Nasopharyngeal Carcinoma.</a> PLoS ONE. 10 (6), e0130935 (2015).</li><li>Deryugina, E. I., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+systems+to+study+and+visualize+human+tumor+cell+metastasis.">Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis.</a> Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1119-1130 (2008).</li><li>Shoin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Embryo+Assay+as+Chemosensitivity+Test+for+Malignant+Glioma.">Chick Embryo Assay as Chemosensitivity Test for Malignant Glioma.</a> Japanese Journal of Cancer Research. 82 (10), 1165-1170 (1991).</li><li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model.">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proceedings of the National Academy of Science U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li><li>Kavaliauskait&#279;, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Sodium+Valproate+on+the+Glioblastoma+U87+Cell+Line+Tumor+Development+on+the+Chicken+Embryo+Chorioallantoic+Membrane+and+on+EZH2+and+p53+Expression.">The Effect of Sodium Valproate on the Glioblastoma U87 Cell Line Tumor Development on the Chicken Embryo Chorioallantoic Membrane and on EZH2 and p53 Expression.</a> BioMed Research International. 2017, 12 (2017).</li><li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Histone+Methyltransferase+EZH2+Mediates+Tumor+Progression+on+the+Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay,+a+Novel+Model+of+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma.">The Histone Methyltransferase EZH2 Mediates Tumor Progression on the Chick Chorioallantoic Membrane Assay, a Novel Model of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma.</a> Translational Oncology. 6 (3), 273-281 (2013).</li><li>Rudy, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Wnt+pathway+inhibition+of+human+squamous+cell+carcinoma+growth+and+metastasis+in+the+chick+chorioallantoic+model.">In vivo Wnt pathway inhibition of human squamous cell carcinoma growth and metastasis in the chick chorioallantoic model.</a> Journal of Otolaryngology - Head &amp; Neck Surgery. 45 (1), 26 (2016).</li><li>Canale, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-27+inhibits+pediatric+B-acute+lymphoblastic+leukemia+cell+spreading+in+a+preclinical+model.">Interleukin-27 inhibits pediatric B-acute lymphoblastic leukemia cell spreading in a preclinical model.</a> Leukemia. 25, 1815 (2011).</li><li>Loos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino-functionalized+nanoparticles+as+inhibitors+of+mTOR+and+inducers+of+cell+cycle+arrest+in+leukemia+cells.">Amino-functionalized nanoparticles as inhibitors of mTOR and inducers of cell cycle arrest in leukemia cells.</a> Biomaterials. 35 (6), 1944-1953 (2014).</li><li>Rovithi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+bioluminescent+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+models+for+primary+pancreatic+cancer+cells:+a+platform+for+drug+testing.">Development of bioluminescent chick chorioallantoic membrane (CAM) models for primary pancreatic cancer cells: a platform for drug testing.</a> Scientific Reports. 7, 44686 (2017).</li><li>Majern&#237;k, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Insights+into+the+Effect+of+Hyperforin+and+Photodynamic+Therapy+with+Hypericin+on+Chosen+Angiogenic+Factors+in+Colorectal+Micro-Tumors+Created+on+Chorioallantoic+Membrane.">Novel Insights into the Effect of Hyperforin and Photodynamic Therapy with Hypericin on Chosen Angiogenic Factors in Colorectal Micro-Tumors Created on Chorioallantoic Membrane.</a> International Journal of Molecular Science. 20 (12), 3004 (2019).</li><li>Swadi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimising+the+chick+chorioallantoic+membrane+xenograft+model+of+neuroblastoma+for+drug+delivery.">Optimising the chick chorioallantoic membrane xenograft model of neuroblastoma for drug delivery.</a> BMC Cancer. 18 (1), 28 (2018).</li><li>Klingenberg, M., Becker, J., Eberth, S., Kube, D., Wilting, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+as+an+in+vivo+xenograft+model+for+Burkitt+lymphoma.">The chick chorioallantoic membrane as an in vivo xenograft model for Burkitt lymphoma.</a> BMC Cancer. 14 (1), 339 (2014).</li><li>Avram, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+A375+human+melanoma+models+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+and+Balb/c+nude+mice.">Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice.</a> Oncology Reports. 38 (1), 89-99 (2017).</li><li>Zabielska-Koczywas, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+as+an+in+vivo+model+to+study+morphological+and+histopathological+features+of+feline+fibrosarcomas.">3D chick embryo chorioallantoic membrane model as an in vivo model to study morphological and histopathological features of feline fibrosarcomas.</a> BMC Veterinary Research. 13 (1), 201 (2017).</li><li>Skowron, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+assay+to+study+treatment+approaches+in+urothelial+carcinoma.">Applying the chicken embryo chorioallantoic membrane assay to study treatment approaches in urothelial carcinoma.</a> Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations. 35 (9), e511-e523 (2017).</li><li>Jefferies, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+imaging+of+engineered+human+tumors+in+the+living+chicken+embryo.">Non-invasive imaging of engineered human tumors in the living chicken embryo.</a> Scientific Reports. 7 (1), 4991 (2017).</li><li>Taizi, M., Deutsch, V. R., Leitner, A., Ohana, A., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+rapid+in+vivo+system+for+testing+therapeutics+on+human+leukemias.">A novel and rapid in vivo system for testing therapeutics on human leukemias.</a> Experimental Hematology. 34 (12), 1698-1708 (2006).</li><li>Strojnik, T., Kavalar, R., Barone, T. A., Plunkett, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+model+and+immunohistochemical+comparison+of+U87+human+glioblastoma+cell+xenografts+on+the+chicken+chorioallantoic+membrane+and+in+rat+brains.">Experimental model and immunohistochemical comparison of U87 human glioblastoma cell xenografts on the chicken chorioallantoic membrane and in rat brains.</a> Anticancer Research. 30 (12), 4851-4860 (2010).</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+model+for+tumor+biology.">The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology.</a> Experimental Cell Research. 328 (2), 314-324 (2014).</li><li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non-integrating+Lentiviral+Approach+Overcomes+Cas9-Induced+Immune+Rejection+to+Establish+an+Immunocompetent+Metastatic+Renal+Cancer+Model.">A Non-integrating Lentiviral Approach Overcomes Cas9-Induced Immune Rejection to Establish an Immunocompetent Metastatic Renal Cancer Model.</a> Molecular Therapy - Methods &amp; Clinical Development. 9, 203-210 (2018).</li></ol>

Tumorutvidelse og engraftment ved hjelp av CAM-modellen tillater raskere og direkte observerbar tumorvekst enn eksisterende in vivo dyremodeller. I tillegg er kostnadene betydelig lavere når det første kjøpet av utstyr er fullført, spesielt sammenlignet med kostnadene for immunkompromitterte mus. Den første, immunkompromitterte tilstanden av kyllingembryoer tillater lett engraftment av humant og mininvev. Selv med disse styrkene har CAM-modellen begrensninger. Den korte tiden som kan være en fordel kan også være ...

Mus har fungert som den klassiske modellorganismen for studiet av menneskelige sykdommer, inkludert malignitet. Som pattedyr deler de mange likheter med mennesker. Deres høye grad av genetisk likhet har tillatt transgen manipulering av musegenomet for å gi enorm innsikt i den genetiske kontrollen av menneskelige sykdommer1. Lang erfaring i håndteringen av og eksperimentering med mus har resultert i at de er modellen for valg for biomedisinsk forskning. Men i tillegg til de etiske og vitenskapelige bekymringene om murine modeller, kan de også være ganske kostbart og tidkrevende2,3. Utviklingen av svulster kan ta uker eller måneder. Boligen på en typisk institusjon alene kan kjøre i hundrevis til tusenvis av dollar mens svulster utvikler seg. Eggstokkreft er et eksempel på denne ulempen fordi veksten i murine modeller lett kan ta måneder. Forsinkelser i forskningsfremgang påvirker potensielt eggstokkreftpasienters vedvarende lave 5-årige overlevelsesrate på bare 47 % (dvs. en økning i overlevelse på bare 10 % over 30 år)4. Tilsvarende utgjør urologiske kreftformer (nyre-, prostata- og blærekreft) 19% av alle krefttilfeller i USA og 11% av kreftrelaterte dødsfall4. Dermed kan en ny in vivo tilnærming til å studere gynekologiske og urologiske kreftformer spare et laboratorium betydelig tid, arbeidskraft og penger, selv om denne modellen bare brukes til innledende screeningeksperimenter. I tillegg kan den resulterende akselerasjonen av forskningsfunn påvirke de 177.000 personene diagnostisert med disse kreftene årlig.
Kylling CAM modellen tilbyr mange fordeler som løser de nevnte problemene. En populær modell for å studere angiogenese5,6, tumorcelleinvasjon7,8, og metastase7,9, chick embryo CAM modellen har allerede blitt brukt til å studere mange former for kreft, inkludert glioma10,11,12, hode og nakke plateepitelkarsinom13,14, leukemi15,16, bukspyttkjertelkreft17, og kolorektal kreft18. I tillegg har CAM-modeller blitt generert for neuroblastom19, Burkitt lymfom20, melanom21og feline fibrosarcoma22. Tidligere studier har også presentert engraftment av blærekreft23 og prostatakreft cellelinjer24, men med begrensede protokolldetaljer. Ikke bare er egg mye billigere enn mus, men de produserer også svært reproduserbare resultater25,26. De viser rask vaskulaturutvikling, og tumorengraftment kan oppstå så raskt som noen få dager og visualiseres langsgående gjennom det åpne vinduet. Med 21 dagers tidsramme mellom eggbefruktning og klekking, kan eksperimenter fullføres i løpet av få uker. Videre tillater de lave kostnadene, begrensede boligbehov og små størrelse lett store eksperimenter som ville være uoverkommelige for musestudier.
Derfor forsøkte vi å optimalisere CAM-modellen for engraftment av gynekologiske og urologiske kreftformer. På grunn av den immunkompromitterte statusen til det tidlige kyllingembryoet27, kan både mus og menneskelige celler lett implanteres. Som sådan har vi med hell engrafted ovarie-, nyre-, prostata- og blærekreft. For hver av disse tumortypene aksepterer CAM lett etablerte murine- og/eller humane tumorcellelinjer. Viktigere, nyhøstet primære menneskelige tumorvev kan også engraft fra enten fordøyd celler eller biter av solid vev med høye priser på suksess. Hver av disse krefttyper og cellekilder krever optimalisering, som vi deler her.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>-010 Teflon (PTFE) White 55 Duro Shore D O-Rings</td>
			<td>The O-Ring Store</td>
			<td>TEF010</td>
			<td>Nonstick ring for cell seeding. 1/4&#34;ID X 3/8&#34;OD X 1/16&#34;CS Polytetrafluoroethylene (PTFE).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C4-2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3314</td>
			<td>Human prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CWR22Rv1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CWR cells were the kind gift of Dr. David Agus (Keck Medicine of University of Southern California)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 8/18 Antibody (C-51)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-44929-0.02mg</td>
			<td>Used at a dilution of 1:100 for immunohistochemical analysis of human ovarian CAM tumors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin Firefly, potassium salt</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Curved; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4-3/4 in. Overall Length</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS6703</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved scissors would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max Tool Kit</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>8050-N/18</td>
			<td>This kit contains all necessary tools.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertilized chicken eggs (Rhode Island Red - Brown, Lab Grade)</td>
			<td>AA Lab Eggs Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>A local egg supplier would need to be identified, as this supplier only delivers regionally.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HT-1376</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1472</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hovabator Genesis 1588 Deluxe Egg Incubator Combo Kit</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>HB1588D-NONE-1102-1588-1357</td>
			<td>Other egg incubators may be used, but their reliability would need to be verified. After implantation, a cell incubator with the CO2 disabled may also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ID8</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Not commercially available, please see PMID: 10753190.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incu-Bright Cool Light Egg Candler</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>1102</td>
			<td>Other candlers may be used; however, this is preferred among those that we have tested. This candler is included in the aforementioned incubator kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps, 10cm, Curved, Serrated, 0.8mm tips</td>
			<td>World Precision Instrument</td>
			<td>15915</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved forceps would work as well. Multiple brands have been used for this method.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Clipper Distributing</td>
			<td>0010250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina II In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Membrane Matrix HC; LDEV-Free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354248</td>
			<td>Extracellular matrix solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MyC-CaP</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3255</td>
			<td>Murine prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Pipet-Aid XP Pipette Controller</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>4-000-101</td>
			<td>Any similar pipet controller would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Hypodermic Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td>This is provided as an example. Any 18G needle would work similarly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RENCA</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semken Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11008-13</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar forceps or another style that suits researcher preference would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SKOV3</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-77</td>
			<td>Human ovarian cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72914</td>
			<td>This is provided as an example. The forceps used for pulling away the shell for bioluminescence imaging are approximately 12.8 cm long with 3 mm-wide tips.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cotton Balls</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-456-885</td>
			<td>This is provided as an example. Any sterile cotton balls would suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stirring Rods with Rubber Policeman; 5mm diameter, 6 in. length</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>GRPL06</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar glass stir rods would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T24</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-4</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Transparent Dressing Original Frame Style 2 3/8&#34; x 2 3/4&#34;</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>21272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dishes, 10 cm diameter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar, sterile 10-cm dish may be used. Tissue culture treatment is not necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Clear Laboratory Tubing - 1/4 x 3/8 x 1/16 wall (50 feet)</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>AACUN017</td>
			<td>This is provided as an example. Any similarly sized tubing would work as well.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers

Musemodeller er referansetestene for in vivo kreftstudier. Kostnader, tid og etiske hensyn har imidlertid ført til krav om alternative kreftmodeller. Kylling korioallantoisk membran (CAM) modellen gir et billig, raskt alternativ som tillater direkte visualisering av tumorutvikling og er egnet for in vivo imaging. Som sådan forsøkte vi å utvikle en optimalisert protokoll for å fengsle gynekologiske og urologiske svulster i denne modellen, som vi presenterer her. Omtrent 7 dager etterbefruktning flyttes luftcellen til den vaskualiserte siden av egget, hvor en åpning opprettes i skallet. Svulster fra murine og menneskelige cellelinjer og primærvev kan deretter bli transplantert. Disse er vanligvis seeded i en blanding av ekstracellulær matrise og medium for å unngå cellulær spredning og gi næringsstøtte til cellene rekrutterer en vaskulær forsyning. Svulster kan da vokse i opptil 14 dager før eggene klekkes. Ved å implantere celler som er stabilt transducert med firefly luciferase, kan bioluminescensavbildning brukes til sensitiv påvisning av tumorvekst på membranen og kreftcellen spredt over hele embryoet. Denne modellen kan potensielt brukes til å studere tumorigeniitet, invasjon, metastase og terapeutisk effektivitet. Kylling CAM-modellen krever betydelig mindre tid og økonomiske ressurser sammenlignet med tradisjonelle murine modeller. Fordi eggene er immunkompromitterte og immuntolerante, kan vev fra enhver organisme potensielt implanteres uten kostbare transgene dyr (f.eks. mus) som kreves for implantering av humant vev. Imidlertid kan mange av fordelene med denne modellen potensielt også være begrensninger, inkludert kort tumorgenerasjontid og immunkompromittert / immuntolerant status. I tillegg, selv om alle tumortyper presentert her engraft i kylling chorioallantoic membran modell, gjør de det med varierende grad av tumorvekst.

Så langt har vi funnet denne metoden for implantasjon for å lykkes for ovarie-, nyre-, prostata- og blærekreft. Hver ble optimalisert for å identifisere spesifikke forhold for implantasjon, selv om det kan være fleksibilitet. Av de testede tumortypene var ovariekreftveksten mye mindre uttalt og vanligvis ikke synlig uten hjelp av bioluminescensavbildning (figur 1). Imidlertid kan en stivning av CAM merkes med tang innen implantasjon. Dette kan bidra til ...

Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

Vi presenterer kylling korioallantoisk membran modell som et alternativ, transplanterbar, in vivo modell for engraftment av gynekologiske og urologiske kreft cellelinjer og pasient-avledede svulster.

Bruke kylling chorioallantoic membran i Vivo modell for å studere gynekologiske og urologiske kreftformer

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...

Engraftmentet av svulster på kylling chorioallantoic membran, eller CAM, kan brukes til studier av tumorigenicity, behandling effekt eller cellulær crosstalk. Denne metoden tillater kostnadseffektiv rask tumorvekst i en immunotolerant in vivo-innstilling. Ved hjelp av CAM-modellen kan nye terapeutiske tilnærminger raskt testes ved hjelp av cellelinjer eller til og med pasientsvulstprøver.De mest avgjørende aspektene ved denne protokollen er å sikre riktig CAM-dannelse og ikke forstyrre CAM eller vaskulatur mens du åpner eggene. På utviklingsdag syv eller åtte når CAM er fullt utviklet, slå av eggrotatoren og legg omtrent ett til tre egg i eggstativet i biosikkerhetsskapet. Når lysene er slått av, plasser et egg candler mot eggeskallet for å identifisere og markere plasseringen av luftcellen til ett egg, og flytt deretter egglyset over skallet for å finne et stort blodkarnettverk, rotere egget etter behov.En ideell vaskulatur vil forgrene seg nær midten av egget. Bruk en markør til å spore vaskulaturen som skal brukes til implantasjon. Etter å ha slått på lyset i panseret, bruk et batteridrevet roterende verktøy utstyrt med en silisiumkarbidslipingsstein for å bore et lite hull i skallet rett over midten av luftcellen.Når det meste av skallet er fjernet, men med hvit indre membran intakt, bor et annet lite hull hvor det vaskulære vinduet vil bli åpnet som nettopp demonstrert. Når det andre hullet er klart, bruk en 18 gauge nål for å forsiktig pierce den hvite indre membranen over luftcellen og vaskulaturen, og vær forsiktig med at den hvite indre membranen, men ikke CAM, forstyrres gjennom hele det borede området. Når hetten lyser av igjen, bruk egglyset til å kontrollere at luftcellen er overført fra enden av egget til området over vaskulaturen.Plasser eventuelt vakuumrør satt inn i en pipettekontroller rundt hullet over den opprinnelige luftcellen og påfør forsiktig suging i korte utbrudd for å flytte luftcellen. Merk omrisset av den nye plasseringen av luftcellen ca. 0,5 centimeter inne i luft-CAM-grensen og fest et stykke pakketape akkurat stor nok til å dekke hullet over den nye luftcellen. Etter å ha forberedt de to andre eggene som nettopp demonstrert, returner eggene til inkubatoren og åpne eventuelle ekstra egg for eksperimentet i grupper på en til tre som demonstrert.Når alle eggene er åpnet, overfører du ett til tre egg med flyttede luftceller til eggstativet i et biosikkerhetsskap og bruker et batteridrevet roterende verktøy utstyrt med et sirkulært skjærehjul for å kutte en liten linje over luftcellegrensen helt gjennom cellen uten å forstyrre CAM eller vaskulaturen. Bruk buet saks, kutt rundt den gjenværende luftcellen for å lage et vindu i skallet og verifisere levedyktigheten til embryoet. Levedyktige embryoer vil vise en omfattende vaskulatur, klar albumin, embryobevegelse og/eller et synlig hjerteslag.I ikke-levedyktige embryoer kan CAM virke ugjennomsiktig med få, om noen, fartøy tilstede og embryoene kan være små eller fraværende uten bevegelse eller hjerteslag. Bruk Semkin tang, trekk små biter av bomull fra en steril bomullsdott og tørk forsiktig CAM-overflaten til de levedyktige embryoene for å fjerne eventlstøv og rusk, og dekk deretter skallåpningen med et en kvart stykke seks og syv centimeter gjennomsiktig filmdressing uten å berøre CAM og returnere eggene til inkubatoren med det åpnede vinduet vendt opp. Bruk et stykke eggstativ, kanten av eggrotatoren eller et annet egnet element for å støtte egg som fortsetter å rulle.For å forberede kreftcellesuspensjon for transplantasjon, høst cellene fra kreftcellekulturen av interesse og sediment cellene ved sentrifugering. Aspirer de overnaturante og mekanisk gjenbruke cellene i restmediet. Plasser cellefjæringen på isen og bruk en pipette til å måle volumet av celler i medium.Deretter resuspend cellene i en konsentrasjon av en til to millioner celler i 20 til 100 mikroliter av middels supplert med 2,7 til 4 milligram per milliliter ekstracellulær matrise og eventuelle vekstfaktorer eller andre tilsetningsstoffer av interesse. For kreftcelleimplantasjon, ved hjelp av en non-stick ring, plasser opptil seks egg som skal implanteres på eggstativet og rulle kantene på den gjennomsiktige filmdressingen mot det åpne vinduet for å fjerne filmen fra skjellene. Sjekk om eggene er levedyktige og sunne.Ideelle egg vil ha et stort fartøy med mindre forgreningsfartøy i midten av det åpne området. Bruk buede iris-tang til å plassere en steril non-stick ring på CAM over fartøyet ideelt over et grenpunkt. Bruk en steril rørestang i glass til å forsiktig slipe CAM og pipette kreftcellefjæringen inn i midten av ringen.Når alle cellene er levert, forsegler du åpningen med et en kvart stykke seks og syv centimeter gjennomsiktig filmdressing og merker egget med en passende implantatbetegnelse. Legg deretter eggene sikkert i inkubatoren med åpningen av skallet vendt oppreist. For å implantere kreftceller uten bruk av en non-stick ring, aspirer cellesuspensjonen i en rørspiss i riktig størrelse og hold den øverste delen av spissen forsiktig løs pipettespissen og plasser spissen horisontalt i en steril 10 centimeter vevskulturrett.Etter at tipsene er lastet, legg parabolen i en 37 graders Celsius inkubator i 15 til 30 minutter, se etter polymerisering etter 15 minutter. En liten mengde væske vil vanligvis lekke ut som hver spiss er plassert i parabolen. Bruk denne væsken til å estimere omfanget av polymeriseringen i spissen.Når matrisen er klar, plasserer du en spiss på en pipette i riktig størrelse og senker stempelet ned for å tvinge den delvis polymeriserte cellefjæringen på CAM ideelt over det forgrenede punktet til et stort velutviklet fartøy. Ved hjelp av disse metodene resulterte både menneskelige og murin eggstokkreftcellelinjer og primære tumorstykker i vellykket engraftment av svulster med morfologiske er i samsvar med de som er observert i andre in vivo-modeller. Av de testede tumortypene var veksten i eggstokkreft mye mindre uttalt og vanligvis ikke synlig uten hjelp av bioluminescensavbildning.Effekten av å legge til vekstfaktorer eller hormoner på tidspunktet for implantasjon kan også testes ved hjelp av disse metodene. For nyrekreft produserer implantasjon av klare celle nyrecellekarsinomceller fra etablerte cellelinjer eller stykker fra primære menneskelige nyresvulster rask, robust tumordannelse. Videre hadde flere menneskelige og murin prostatakreftcellelinjer og human blærekreftcellelinjer og primære tumorstykker blitt brukt til å etablere svulster ved hjelp av denne modellen.Det er avgjørende å unngå å forstyrre CAM og vaskulaturen og å sørge for at CAM ikke holder seg til skallet mens du åpner vinduet. Etter vellykket engraftment kan CAM-modellen brukes til å vurdere den terapeutiske effekten av behandlinger av interesse eller interaksjoner mellom ulike celletyper i en svulst.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

Coculture Analyser å studere macrophage og Microglia Stimulering av Glioblastoma Invasion

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disc Tumor Model: Visualisering og Kvantifisering av genekspresjon og Tumor Invasivitet Bruke Genetic Mosaikk

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

Levende Imaging å studere microtubule Dynamic Ustabilitet i taxan-resistent brystkreft

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Påvisning av mitokondrier membran potensial til å studere CLIC4 Knockdown-indusert HN4 celle apoptose In Vitro

Depletion of the mitochondrial membrane potential (MMP, &#916;&#936;m) is considered the earliest event in the apoptotic cascade. It even occurs ahead of ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

I Vivo EPR vurdering av pH, pO2, Redox Status, og konsentrasjoner av fosfat og glutation i svulst Microenvironment

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Acellular og cellulær lunge modell å studere svulst metastasering

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Få kreft stamcellesfærer fra gynekologiske og brystkreft svulster

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

Sammenligne metastatisk klar celle nyrecelle karsinom modell etablert i mus nyre og på kylling chorioallantoic membran

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

Bruke databasert bildeanalyse for å forbedre kvantifiseringen av lungemetastase i 4T1 brystkreftmodell

Breast cancer is a devastating malignancy, accounting for 40,000 female deaths and 30% of new female cancer diagnoses in the United States in 2019 alone. ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

Oppdagelse av metastatiske regulatorer ved hjelp av en rask og kvantitativ intravital chick chorioallantoic membranmodell

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...