Name: using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers
Uploaded: 2020-01-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

Los autores desean agradecer al Dr. Fuyuhiko Tamanoi y Binh Vu por la formación inicial sobre este método. Las conversaciones con la Dra. Eva Koziolek han sido fundamentales para optimizar este enfoque y han sido muy apreciadas. Este trabajo no habría sido posible sin la financiación de las siguientes fuentes: el Programa de Investigación de Enfermedades Relacionadas con el Tabaco Beca Postdoctoral (27FT-0023, al ACS), el Programa de Investigación del Cáncer de Ovario del Departamento de Defensa (DoD) (W81XWH-17-1-0160), NCI/NIH (1R21CA216770), el Programa de Investigación de Enfermedades Relacionadas con el Tabaco Premio Piloto de Alto Impacto (27IR-0016), y apoyo institucional de la UCLA, incluyendo una Beca de Semillas de JCCC (NCI/NIH P30CA016042) y una Beca 3R de la Oficina del Vicerrectorado de Investigación a LW.

Todos los experimentos presentados aquí fueron revisados y aprobados por los comités éticos apropiados de la Universidad de California, Los Angeles (UCLA). El uso de tumores humanos primarios desidentificados ha sido aprobado por la Junta de Revisión Institucional de UCLA (números de protocolo 17-000037, 17-001169 y 11-001363). En UCLA, no es necesario revisar el Comité de Investigación Animal para experimentos con embriones de pollo; la aprobación del protocolo sólo es necesaria cuando los huevos serán eclosio...

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Jackson, S. J., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+tissue+models+in+cancer+research:+looking+beyond+the+mouse.">Human tissue models in cancer research: looking beyond the mouse.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 10 (8), 939-942 (2017).</li><li>Cheon, D. J., Orsulic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Models+of+Cancer.">Mouse Models of Cancer.</a> Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 6 (1), 95-119 (2011).</li><li>. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2016 Available from: <a target="_blank" href="https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/">https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/</a> (2018)</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chicken+chorioallantoic+membrane+angiogenesis+model.">Chicken chorioallantoic membrane angiogenesis model.</a> Methods Molecular Biology. 843, 47-57 (2012).</li><li>Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chicken+chorioallantoic+membrane+model+in+biology,+medicine+and+bioengineering.">The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering.</a> Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).</li><li>Lokman, N. A., Elder, A. S., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+as+an+in+vivo+model+to+study+the+effect+of+newly+identified+molecules+on+ovarian+cancer+invasion+and+metastasis.">Chick chorioallantoic membrane (CAM) assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis.</a> International Journal of Molecular Science. 13 (8), 9959-9970 (2012).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay:+A+3D+Animal+Model+for+Study+of+Human+Nasopharyngeal+Carcinoma.">Chick Chorioallantoic Membrane Assay: A 3D Animal Model for Study of Human Nasopharyngeal Carcinoma.</a> PLoS ONE. 10 (6), e0130935 (2015).</li><li>Deryugina, E. I., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+systems+to+study+and+visualize+human+tumor+cell+metastasis.">Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis.</a> Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1119-1130 (2008).</li><li>Shoin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Embryo+Assay+as+Chemosensitivity+Test+for+Malignant+Glioma.">Chick Embryo Assay as Chemosensitivity Test for Malignant Glioma.</a> Japanese Journal of Cancer Research. 82 (10), 1165-1170 (1991).</li><li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model.">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proceedings of the National Academy of Science U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li><li>Kavaliauskait&#279;, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Sodium+Valproate+on+the+Glioblastoma+U87+Cell+Line+Tumor+Development+on+the+Chicken+Embryo+Chorioallantoic+Membrane+and+on+EZH2+and+p53+Expression.">The Effect of Sodium Valproate on the Glioblastoma U87 Cell Line Tumor Development on the Chicken Embryo Chorioallantoic Membrane and on EZH2 and p53 Expression.</a> BioMed Research International. 2017, 12 (2017).</li><li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Histone+Methyltransferase+EZH2+Mediates+Tumor+Progression+on+the+Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay,+a+Novel+Model+of+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma.">The Histone Methyltransferase EZH2 Mediates Tumor Progression on the Chick Chorioallantoic Membrane Assay, a Novel Model of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma.</a> Translational Oncology. 6 (3), 273-281 (2013).</li><li>Rudy, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Wnt+pathway+inhibition+of+human+squamous+cell+carcinoma+growth+and+metastasis+in+the+chick+chorioallantoic+model.">In vivo Wnt pathway inhibition of human squamous cell carcinoma growth and metastasis in the chick chorioallantoic model.</a> Journal of Otolaryngology - Head &amp; Neck Surgery. 45 (1), 26 (2016).</li><li>Canale, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-27+inhibits+pediatric+B-acute+lymphoblastic+leukemia+cell+spreading+in+a+preclinical+model.">Interleukin-27 inhibits pediatric B-acute lymphoblastic leukemia cell spreading in a preclinical model.</a> Leukemia. 25, 1815 (2011).</li><li>Loos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino-functionalized+nanoparticles+as+inhibitors+of+mTOR+and+inducers+of+cell+cycle+arrest+in+leukemia+cells.">Amino-functionalized nanoparticles as inhibitors of mTOR and inducers of cell cycle arrest in leukemia cells.</a> Biomaterials. 35 (6), 1944-1953 (2014).</li><li>Rovithi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+bioluminescent+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+models+for+primary+pancreatic+cancer+cells:+a+platform+for+drug+testing.">Development of bioluminescent chick chorioallantoic membrane (CAM) models for primary pancreatic cancer cells: a platform for drug testing.</a> Scientific Reports. 7, 44686 (2017).</li><li>Majern&#237;k, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Insights+into+the+Effect+of+Hyperforin+and+Photodynamic+Therapy+with+Hypericin+on+Chosen+Angiogenic+Factors+in+Colorectal+Micro-Tumors+Created+on+Chorioallantoic+Membrane.">Novel Insights into the Effect of Hyperforin and Photodynamic Therapy with Hypericin on Chosen Angiogenic Factors in Colorectal Micro-Tumors Created on Chorioallantoic Membrane.</a> International Journal of Molecular Science. 20 (12), 3004 (2019).</li><li>Swadi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimising+the+chick+chorioallantoic+membrane+xenograft+model+of+neuroblastoma+for+drug+delivery.">Optimising the chick chorioallantoic membrane xenograft model of neuroblastoma for drug delivery.</a> BMC Cancer. 18 (1), 28 (2018).</li><li>Klingenberg, M., Becker, J., Eberth, S., Kube, D., Wilting, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+as+an+in+vivo+xenograft+model+for+Burkitt+lymphoma.">The chick chorioallantoic membrane as an in vivo xenograft model for Burkitt lymphoma.</a> BMC Cancer. 14 (1), 339 (2014).</li><li>Avram, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+A375+human+melanoma+models+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+and+Balb/c+nude+mice.">Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice.</a> Oncology Reports. 38 (1), 89-99 (2017).</li><li>Zabielska-Koczywas, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+as+an+in+vivo+model+to+study+morphological+and+histopathological+features+of+feline+fibrosarcomas.">3D chick embryo chorioallantoic membrane model as an in vivo model to study morphological and histopathological features of feline fibrosarcomas.</a> BMC Veterinary Research. 13 (1), 201 (2017).</li><li>Skowron, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+assay+to+study+treatment+approaches+in+urothelial+carcinoma.">Applying the chicken embryo chorioallantoic membrane assay to study treatment approaches in urothelial carcinoma.</a> Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations. 35 (9), e511-e523 (2017).</li><li>Jefferies, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+imaging+of+engineered+human+tumors+in+the+living+chicken+embryo.">Non-invasive imaging of engineered human tumors in the living chicken embryo.</a> Scientific Reports. 7 (1), 4991 (2017).</li><li>Taizi, M., Deutsch, V. R., Leitner, A., Ohana, A., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+rapid+in+vivo+system+for+testing+therapeutics+on+human+leukemias.">A novel and rapid in vivo system for testing therapeutics on human leukemias.</a> Experimental Hematology. 34 (12), 1698-1708 (2006).</li><li>Strojnik, T., Kavalar, R., Barone, T. A., Plunkett, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+model+and+immunohistochemical+comparison+of+U87+human+glioblastoma+cell+xenografts+on+the+chicken+chorioallantoic+membrane+and+in+rat+brains.">Experimental model and immunohistochemical comparison of U87 human glioblastoma cell xenografts on the chicken chorioallantoic membrane and in rat brains.</a> Anticancer Research. 30 (12), 4851-4860 (2010).</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+model+for+tumor+biology.">The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology.</a> Experimental Cell Research. 328 (2), 314-324 (2014).</li><li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non-integrating+Lentiviral+Approach+Overcomes+Cas9-Induced+Immune+Rejection+to+Establish+an+Immunocompetent+Metastatic+Renal+Cancer+Model.">A Non-integrating Lentiviral Approach Overcomes Cas9-Induced Immune Rejection to Establish an Immunocompetent Metastatic Renal Cancer Model.</a> Molecular Therapy - Methods &amp; Clinical Development. 9, 203-210 (2018).</li></ol>

La expansión e injerto de tumores utilizando el modelo CAM permite un crecimiento tumoral más rápido y directamente observable que los modelos animales in vivo existentes. Además, los costos son significativamente más bajos una vez que se completa la compra inicial de equipos, especialmente en comparación con el costo de los ratones inmunocomprometidos. El estado inicial inmunocomprometido de los embriones de pollo permite fácilmente el injerto de tejido humano y murino. Incluso con estos puntos fuertes, el modelo...

Los ratones han servido como el organismo modelo clásico para el estudio de enfermedades humanas, incluyendo la neoplasia maligna. Como mamíferos, comparten muchas similitudes con los humanos. Su alto grado de similitud genética ha permitido la manipulación transgénica del genoma del ratón para proporcionar una enorme visión del control genético de las enfermedades humanas1. La amplia experiencia en el manejo y la experimentación con ratones ha dado lugar a que sean el modelo de elección para la investigación biomédica. Sin embargo, además de las preocupaciones éticas y científicas con respecto a los modelos murinos, también pueden ser bastante costosos y llevar mucho tiempo2,3. El desarrollo de tumores puede tomar semanas o incluso meses. La vivienda en una institución típica por sí sola puede correr en cientos a miles de dólares mientras se desarrollan los tumores. El cáncer de ovario es un ejemplo de este inconveniente porque su crecimiento en modelos murinos puede tomar fácilmente meses. Los retrasos en los progresos de la investigación pueden afectar a la tasa de supervivencia persistentemente baja de 5 años de los pacientes con cáncer de ovario, de sólo el 47% (es decir, un aumento de la supervivencia de sólo el 10% en 30 años)4. Del mismo modo, los cánceres urológicos (cáncer de riñón, próstata y vejiga) constituyen el 19% de todos los casos de cáncer en los Estados Unidos y el 11% de las muertes relacionadas con el cáncer4. Por lo tanto, un enfoque in vivo novedoso para estudiar los cánceres ginecológicos y urológicos podría ahorrar a un laboratorio tiempo considerable, trabajo y dinero, incluso si este modelo sólo se aplica a los experimentos de cribado iniciales. Además, la aceleración resultante de los resultados de la investigación podría afectar significativamente a las 177.000 personas diagnosticadas con estos tipos de cáncer anualmente.
El modelo CAM de pollo ofrece muchas ventajas que abordan los problemas antes mencionados. Un modelo popular para estudiar la angiogénesis5,6, la invasión de células tumorales7,8, y la metástasis7,9, el modelo CAM embrionario pollito ya se ha utilizado para estudiar muchas formas de cáncer, incluyendo glioma10,11,12, cabeza y cuello carcinoma de células escamosas13,14, leucemia15,16, cáncer de páncreas17,y cáncer colorrectal18. Además, se han generado modelos CAM para neuroblastoma19,linfoma Burkitt20,melanoma21y fibrosarcoma felino22. Estudios previos también han presentado injerto de cáncer de vejiga23 y líneas celulares de cáncer de próstata24,pero con detalles de protocolo limitados. No sólo los huevos son mucho más baratos que los ratones, sino que también producen resultados altamente reproducibles25,26. Muestran un rápido desarrollo de la vasculatura, y el injerto tumoral puede ocurrir en tan solo unos días y visualizarse longitudinalmente a través de la ventana abierta. Con el plazo de 21 días entre la fertilización de óvulos y la eclosión, los experimentos se pueden completar en pocas semanas. Además, el bajo costo, las necesidades limitadas de vivienda y el pequeño tamaño permiten fácilmente experimentos a gran escala que serían prohibitivos para los estudios con ratones.
Por lo tanto, buscamos optimizar el modelo CAM para el injerto de cánceres ginecológicos y urológicos. Debido al estado inmunocomprometido del embrión de pollo temprano27,tanto el ratón como las células humanas se pueden implantar fácilmente. Como tal, hemos injertado con éxito cánceres de ovario, riñón, próstata y vejiga. Para cada uno de estos tipos de tumores, el CAM acepta fácilmente las líneas celulares tumorales establecidas y/o humanas. Es importante destacar que los tejidos tumorales humanos primarios recién cosechados también pueden injertar de células digeridas o trozos de tejido sólido con altas tasas de éxito. Cada uno de estos tipos de cáncer y fuentes celulares requiere optimización, que compartimos aquí.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>-010 Teflon (PTFE) White 55 Duro Shore D O-Rings</td>
			<td>The O-Ring Store</td>
			<td>TEF010</td>
			<td>Nonstick ring for cell seeding. 1/4&#34;ID X 3/8&#34;OD X 1/16&#34;CS Polytetrafluoroethylene (PTFE).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C4-2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3314</td>
			<td>Human prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CWR22Rv1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CWR cells were the kind gift of Dr. David Agus (Keck Medicine of University of Southern California)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 8/18 Antibody (C-51)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-44929-0.02mg</td>
			<td>Used at a dilution of 1:100 for immunohistochemical analysis of human ovarian CAM tumors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin Firefly, potassium salt</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Curved; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4-3/4 in. Overall Length</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS6703</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved scissors would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max Tool Kit</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>8050-N/18</td>
			<td>This kit contains all necessary tools.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertilized chicken eggs (Rhode Island Red - Brown, Lab Grade)</td>
			<td>AA Lab Eggs Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>A local egg supplier would need to be identified, as this supplier only delivers regionally.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HT-1376</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1472</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hovabator Genesis 1588 Deluxe Egg Incubator Combo Kit</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>HB1588D-NONE-1102-1588-1357</td>
			<td>Other egg incubators may be used, but their reliability would need to be verified. After implantation, a cell incubator with the CO2 disabled may also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ID8</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Not commercially available, please see PMID: 10753190.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incu-Bright Cool Light Egg Candler</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>1102</td>
			<td>Other candlers may be used; however, this is preferred among those that we have tested. This candler is included in the aforementioned incubator kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps, 10cm, Curved, Serrated, 0.8mm tips</td>
			<td>World Precision Instrument</td>
			<td>15915</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved forceps would work as well. Multiple brands have been used for this method.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Clipper Distributing</td>
			<td>0010250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina II In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Membrane Matrix HC; LDEV-Free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354248</td>
			<td>Extracellular matrix solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MyC-CaP</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3255</td>
			<td>Murine prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Pipet-Aid XP Pipette Controller</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>4-000-101</td>
			<td>Any similar pipet controller would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Hypodermic Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td>This is provided as an example. Any 18G needle would work similarly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RENCA</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semken Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11008-13</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar forceps or another style that suits researcher preference would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SKOV3</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-77</td>
			<td>Human ovarian cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72914</td>
			<td>This is provided as an example. The forceps used for pulling away the shell for bioluminescence imaging are approximately 12.8 cm long with 3 mm-wide tips.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cotton Balls</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-456-885</td>
			<td>This is provided as an example. Any sterile cotton balls would suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stirring Rods with Rubber Policeman; 5mm diameter, 6 in. length</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>GRPL06</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar glass stir rods would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T24</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-4</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Transparent Dressing Original Frame Style 2 3/8&#34; x 2 3/4&#34;</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>21272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dishes, 10 cm diameter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar, sterile 10-cm dish may be used. Tissue culture treatment is not necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Clear Laboratory Tubing - 1/4 x 3/8 x 1/16 wall (50 feet)</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>AACUN017</td>
			<td>This is provided as an example. Any similarly sized tubing would work as well.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers

Los modelos de ratón son las pruebas de referencia para los estudios de cáncer in vivo. Sin embargo, el costo, el tiempo y las consideraciones éticas han llevado a llamadas a modelos alternativos de cáncer in vivo. El modelo de membrana corioalantoica de pollo (CAM) proporciona una alternativa rápida y económica que permite la visualización directa del desarrollo tumoral y es adecuado para la toma de imágenes in vivo. Como tal, buscamos desarrollar un protocolo optimizado para injertar tumores ginecológicos y urológicos en este modelo, que presentamos aquí. Aproximadamente 7 días después de la fertilización, la célula de aire se mueve al lado vascularizado del óvulo, donde se crea una abertura en la cáscara. Los tumores de las líneas celulares murinas y humanas y los tejidos primarios pueden ser injertados. Estos son típicamente sembrados en una mezcla de matriz extracelular y medio para evitar la dispersión celular y proporcionar apoyo nutritivo hasta que las células reclutan un suministro vascular. Los tumores pueden crecer hasta 14 días más antes de la eclosión de los huevos. Mediante el implante de células transducidas establemente con luciferasa luciérnaga, la imagen de bioluminiscencia se puede utilizar para la detección sensible del crecimiento tumoral en la membrana y la célula cancerosa diseminado por todo el embrión. Este modelo se puede utilizar potencialmente para estudiar la tumorigeniidad, invasión, metástasis, y eficacia terapéutica. El modelo CAM de pollo requiere significativamente menos tiempo y recursos financieros en comparación con los modelos murinos tradicionales. Debido a que los óvulos son inmunocomprometidos e inmunes tolerantes, los tejidos de cualquier organismo pueden implantarse potencialmente sin animales transgénicos costosos (por ejemplo, ratones) necesarios para la implantación de tejidos humanos. Sin embargo, muchas de las ventajas de este modelo podrían ser potencialmente también limitaciones, incluyendo el corto tiempo de generación de tumores y el estado inmunocomprometido/inmune tolerante. Además, aunque todos los tipos de tumores presentados aquí se injertan en el modelo de membrana corioalantoica de pollo, lo hacen con diferentes grados de crecimiento tumoral.

Hasta ahora, hemos encontrado que este método de implantación es exitoso para los cánceres de ovario, riñón, próstata y vejiga. Cada uno fue optimizado para identificar condiciones específicas para la implantación, aunque puede haber flexibilidad. De los tipos de tumores analizados, el crecimiento del cáncer de ovario fue mucho menos pronunciado y normalmente no visible sin la ayuda de imágenes de bioluminiscencia(Figura 1). Sin embargo, un endureci...

Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

Presentamos el modelo de membrana corioalantoica de pollo como un modelo alternativo, trasplantable, in vivo para el injerto de líneas celulares de cáncer ginecológico y urológico y tumores derivados del paciente.

Uso de la membrana chorioalantoica de pollo en vivo modelo para estudiar cánceres ginecológicos y urológicos

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...

El injerto de tumores en la membrana corioalantoica de pollo, o CAM, se puede utilizar para estudios de tumorigenicidad, eficacia del tratamiento ocrucimiento celular. Este método permite un crecimiento tumoral rápido y rentable en un entorno in vivo inmunotolerante. Utilizando el modelo CAM, nuevos enfoques terapéuticos se pueden probar rápidamente utilizando líneas celulares o incluso muestras de tumores de pacientes.Los aspectos más cruciales de este protocolo son asegurar la formación adecuada de CAM y no interrumpir el CAM o la vasculatura al abrir los huevos. En el día siete u ocho del desarrollo, cuando el CAM se haya desarrollado por completo, apague el rotador de huevos y coloque aproximadamente de uno a tres huevos en el estante de huevos en el gabinete de bioseguridad. Con las luces apagadas, coloque una veladora de huevo contra la cáscara de huevo para identificar y marcar la ubicación de la célula de aire de un huevo, luego mueva el velador de huevo sobre la cáscara para encontrar una red grande de vasos sanguíneos, girando el huevo según sea necesario.Una vasculatura ideal se ramificará cerca de la mitad del huevo. Utilice un marcador para trazar la vasculatura que se utilizará para la implantación. Después de volver a encender la luz en el capó, utilice una herramienta rotativa inalámbrica equipada con una piedra de molienda de carburo de silicio para perforar un pequeño agujero en la cáscara directamente sobre el centro de la celda de aire.Cuando la mayor parte de la cáscara se ha eliminado pero con la membrana interna blanca intacta, perforar otro pequeño agujero donde la ventana vascular se abrirá como se acaba de demostrar. Cuando el segundo agujero esté listo, utilice una aguja de calibre 18 para perforar suavemente la membrana interna blanca sobre la célula de aire y la vasculatura teniendo cuidado de que la membrana interna blanca, pero no la CAM, se interrumpa en toda la totalidad del área perforada. Con la luz de la campana apagada de nuevo, utilice la vela de huevo para verificar que la célula de aire se ha transferido desde el extremo del huevo a la zona sobre la vasculatura.Si es necesario, coloque el tubo de vacío insertado en un controlador de pipeta alrededor del orificio sobre la celda de aire original y aplique suavemente la succión en ráfagas cortas para mover la celda de aire. Marque el contorno de la nueva ubicación de la celda de aire aproximadamente 0,5 centímetros dentro del límite CAM de aire y fije un pedazo de cinta de embalaje lo suficientemente grande como para cubrir el agujero sobre la nueva celda de aire. Después de preparar los otros dos huevos como se acaba de demostrar, devuelva los huevos a la incubadora y abra cualquier huevo adicional para el experimento en grupos de uno a tres como se ha demostrado.Una vez abiertos todos los huevos, transfiera de uno a tres huevos con células de aire reubicadas al estante de huevos en un gabinete de bioseguridad y utilice una herramienta rotativa inalámbrica equipada con una rueda de corte circular para cortar una pequeña línea sobre el límite de la célula de aire completamente a través de la célula sin interrumpir el CAM o la vasculatura. Usando tijeras curvas, corte alrededor de la célula de aire restante para crear una ventana en la cáscara y verificar la viabilidad del embrión. Los embriones viables mostrarán una extensa vasculatura, albúmina clara, movimiento embrionario y/o un latido visible del corazón.En embriones no viables, la CAM puede parecer opaca con pocos vasos presentes, si los hay, y los embriones pueden ser pequeños o ausentes sin movimiento ni latidos del corazón. Usando fórceps Semkin, tire de pequeños trozos de algodón de una bola de algodón estéril y borre suavemente la superficie CAM de los embriones viables para eliminar cualquier polvo de cáscara y escombros, luego cubra la abertura de la cáscara con un apósito de película transparente de un cuarto de seis por siete centímetros sin tocar el CAM y devuelva los huevos a la incubadora con la ventana abierta hacia arriba. Utilice un trozo de estante de huevo, el borde del rotador de huevos u otro elemento adecuado para apoyar cualquier huevo que siga rodando.Para preparar la suspensión de células cancerosas para el trasplante, cosecha las células del cultivo celular del cáncer de interés y sedimenta las células por centrifugación. Aspirar el sobrenadante y resuspender mecánicamente las células en el medio residual. Coloque la suspensión celular sobre hielo y utilice una pipeta para medir el volumen de las células en el medio.Luego resuspender las células a una concentración de uno a dos millones de células en 20 a 100 microlitros de medio complementados con 2.7 a 4 miligramos por matriz extracelular mililitro y cualquier factor de crecimiento u otros aditivos de interés. Para la implantación de células cancerosas, utilizando un anillo antiadherente, coloque hasta seis huevos para ser implantados en el estante de huevo y enrolle los bordes del apósito de película transparente hacia la ventana abierta para eliminar la película de las conchas. Compruebe si los huevos son viables y saludables.Los huevos ideales tendrán un recipiente grande con recipientes ramificados más pequeños dentro del centro de la zona abierta. Usando fórceps de iris curvos, coloque un anillo antiadherente estéril en el CAM sobre el recipiente idealmente sobre un punto de rama. Utilice una barra de agitación de vidrio estéril para abrasar suavemente el CAM y pipetear la suspensión de la célula cancerosa en el centro del anillo.Cuando se hayan entregado todas las células, selle la abertura con un vendaje de película transparente de un cuarto de seis por siete centímetros y etiquete el huevo con una designación de implante adecuada. A continuación, coloque los huevos firmemente en la incubadora con la abertura de la cáscara mirando hacia arriba. Para implantar células cancerosas sin el uso de un anillo antiadherente, aspirar la suspensión celular en una punta de pipeta de tamaño adecuado y sosteniendo la parte superior de la punta expulsar cuidadosamente la punta de la pipeta y colocar la punta horizontalmente en un plato estéril de cultivo de tejido de 10 centímetros.Después de que las puntas hayan sido cargadas, coloque el plato en una incubadora de 37 grados Celsius durante 15 a 30 minutos, comprobando la polimerización después de 15 minutos. Una pequeña cantidad de líquido normalmente se filtra a medida que cada punta se coloca en el plato. Utilice este líquido para estimar la extensión de la polimerización dentro de la punta.Cuando la matriz esté lista, coloque una punta en una pipeta de tamaño adecuado y presione el émbolo para forzar la suspensión de celda parcialmente polimerizada en el CAM idealmente sobre el punto ramificado de un recipiente grande y bien desarrollado. Utilizando estos métodos, las líneas celulares de cáncer de ovario humano y murino y las piezas de tumores primarios resultaron en el injerto exitoso de tumores con morfologías consistentes con las observadas en otros modelos in vivo. De los tipos de tumores analizados, el crecimiento del cáncer de ovario fue mucho menos pronunciado y, por lo general, no era visible sin la ayuda de imágenes de bioluminiscencia.Los efectos de la adición de factores de crecimiento u hormonas en el momento de la implantación también se pueden probar utilizando estos métodos. Para el cáncer de riñón, la implantación de células de carcinoma de células renales transparentes a partir de líneas celulares establecidas o piezas de tumores renales humanos primarios produce una formación de tumores rápida y robusta. Además, se habían utilizado múltiples líneas celulares de cáncer de próstata humano y murino y líneas celulares de cáncer de vejiga humana y piezas de tumores primarios para establecer tumores utilizando este modelo.Es crucial evitar interrumpir el CAM y la vasculatura y asegurarse de que el CAM no se adhiere al shell mientras se abre la ventana. Después de un injerto exitoso, el modelo CAM se puede utilizar para evaluar la eficacia terapéutica de los tratamientos de interés o interacciones entre diferentes tipos celulares dentro de un tumor.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

Cocultivo Los ensayos para Estudiar macrófagos y microglia Estimulación de Glioblastoma Invasion

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

Investigación

Investigación sobre el cáncer

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

los<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal modelo de tumor de disco: visualización y cuantificación de la expresión génica y la invasividad tumoral Uso Genético Mosaicos

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

Imágenes en vivo para el Estudio de la inestabilidad dinámica de microtúbulos en los cánceres de mama resistentes a taxano

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Detección del potencial de membrana de las mitocondrias CLIC4 HN4 inducida por la caída de la célula Apoptosis In Vitro

Depletion of the mitochondrial membrane potential (MMP, &#916;&#936;m) is considered the earliest event in the apoptotic cascade. It even occurs ahead of ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

En Vivo EPR evaluación de pH, pO2, estado Redox y concentraciones de fosfato y glutatión en el microambiente tumoral

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Modelo de pulmón acelular y celular para el estudio de metástasis de Tumor

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Obtención de esferas de células madre de cáncer de cáncer de tumores ginecológicos y de cáncer de mama

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

Comparación de metastática célula sin fin renal Modelo establecido en el riñón del ratón y en la membrana chorioalantoica del pollo

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

Uso de análisis de imágenes por ordenador para mejorar la cuantificación de la metástasis pulmonar en el modelo de cáncer de mama 4T1

Breast cancer is a devastating malignancy, accounting for 40,000 female deaths and 30% of new female cancer diagnoses in the United States in 2019 alone. ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

Descubrimiento de reguladores metastásicos utilizando un modelo de membrana corioalantoica intravital de pollitos rápido y cuantitativo

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...