Name: using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers
Uploaded: 2020-01-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

Författarna vill tacka Dr Fuyuhiko Tamanoi och Binh Vu för den inledande utbildningen på denna metod. Diskussioner med Dr Eva Koziolek har bidragit till att optimera denna strategi och har varit mycket uppskattat. Detta arbete skulle inte ha varit möjligt utan finansiering från följande källor: tobaksrelaterade sjukdomforskningsprogrammet Postdoctoral Fellowship (27FT-0023, till ACS), Department of Defense (DoD) Äggstockscancer Research Program (W81XWH-17-1-0160), NCI/NIH (1R21CA216770), tobaksrelaterade sjukdomar Research Program High Impact Pilot Award (27IR-0016), och UCLA institutionellt stöd, inklusive ett JCCC Seed Grant (NCI/NIH P30CA016042) och ett 3R-bidrag från office of the Vice Chancellor for Research till LW.

Alla experiment som presenteras häri granskades och godkändes av lämpliga etiska kommittéer vid University of California, Los Angeles (UCLA). Användningen av deidentifierade, primära mänskliga tumörer har godkänts av UCLA Institutional Review Board (protokoll nummer 17-000037, 17-001169 och 11-001363). Vid UCLA krävs inte granskning av animalresearchkommittén för experiment med kycklingembryon. godkännande av protokoll krävs endast när äggen kläcks. Bästa praxis, såsom AVMA:s riktlinjer för djurens d?...

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Jackson, S. J., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+tissue+models+in+cancer+research:+looking+beyond+the+mouse.">Human tissue models in cancer research: looking beyond the mouse.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 10 (8), 939-942 (2017).</li><li>Cheon, D. J., Orsulic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Models+of+Cancer.">Mouse Models of Cancer.</a> Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 6 (1), 95-119 (2011).</li><li>. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2016 Available from: <a target="_blank" href="https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/">https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/</a> (2018)</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chicken+chorioallantoic+membrane+angiogenesis+model.">Chicken chorioallantoic membrane angiogenesis model.</a> Methods Molecular Biology. 843, 47-57 (2012).</li><li>Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chicken+chorioallantoic+membrane+model+in+biology,+medicine+and+bioengineering.">The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering.</a> Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).</li><li>Lokman, N. A., Elder, A. S., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+as+an+in+vivo+model+to+study+the+effect+of+newly+identified+molecules+on+ovarian+cancer+invasion+and+metastasis.">Chick chorioallantoic membrane (CAM) assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis.</a> International Journal of Molecular Science. 13 (8), 9959-9970 (2012).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay:+A+3D+Animal+Model+for+Study+of+Human+Nasopharyngeal+Carcinoma.">Chick Chorioallantoic Membrane Assay: A 3D Animal Model for Study of Human Nasopharyngeal Carcinoma.</a> PLoS ONE. 10 (6), e0130935 (2015).</li><li>Deryugina, E. I., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+systems+to+study+and+visualize+human+tumor+cell+metastasis.">Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis.</a> Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1119-1130 (2008).</li><li>Shoin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Embryo+Assay+as+Chemosensitivity+Test+for+Malignant+Glioma.">Chick Embryo Assay as Chemosensitivity Test for Malignant Glioma.</a> Japanese Journal of Cancer Research. 82 (10), 1165-1170 (1991).</li><li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model.">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proceedings of the National Academy of Science U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li><li>Kavaliauskait&#279;, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Sodium+Valproate+on+the+Glioblastoma+U87+Cell+Line+Tumor+Development+on+the+Chicken+Embryo+Chorioallantoic+Membrane+and+on+EZH2+and+p53+Expression.">The Effect of Sodium Valproate on the Glioblastoma U87 Cell Line Tumor Development on the Chicken Embryo Chorioallantoic Membrane and on EZH2 and p53 Expression.</a> BioMed Research International. 2017, 12 (2017).</li><li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Histone+Methyltransferase+EZH2+Mediates+Tumor+Progression+on+the+Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay,+a+Novel+Model+of+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma.">The Histone Methyltransferase EZH2 Mediates Tumor Progression on the Chick Chorioallantoic Membrane Assay, a Novel Model of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma.</a> Translational Oncology. 6 (3), 273-281 (2013).</li><li>Rudy, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Wnt+pathway+inhibition+of+human+squamous+cell+carcinoma+growth+and+metastasis+in+the+chick+chorioallantoic+model.">In vivo Wnt pathway inhibition of human squamous cell carcinoma growth and metastasis in the chick chorioallantoic model.</a> Journal of Otolaryngology - Head &amp; Neck Surgery. 45 (1), 26 (2016).</li><li>Canale, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-27+inhibits+pediatric+B-acute+lymphoblastic+leukemia+cell+spreading+in+a+preclinical+model.">Interleukin-27 inhibits pediatric B-acute lymphoblastic leukemia cell spreading in a preclinical model.</a> Leukemia. 25, 1815 (2011).</li><li>Loos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino-functionalized+nanoparticles+as+inhibitors+of+mTOR+and+inducers+of+cell+cycle+arrest+in+leukemia+cells.">Amino-functionalized nanoparticles as inhibitors of mTOR and inducers of cell cycle arrest in leukemia cells.</a> Biomaterials. 35 (6), 1944-1953 (2014).</li><li>Rovithi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+bioluminescent+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+models+for+primary+pancreatic+cancer+cells:+a+platform+for+drug+testing.">Development of bioluminescent chick chorioallantoic membrane (CAM) models for primary pancreatic cancer cells: a platform for drug testing.</a> Scientific Reports. 7, 44686 (2017).</li><li>Majern&#237;k, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Insights+into+the+Effect+of+Hyperforin+and+Photodynamic+Therapy+with+Hypericin+on+Chosen+Angiogenic+Factors+in+Colorectal+Micro-Tumors+Created+on+Chorioallantoic+Membrane.">Novel Insights into the Effect of Hyperforin and Photodynamic Therapy with Hypericin on Chosen Angiogenic Factors in Colorectal Micro-Tumors Created on Chorioallantoic Membrane.</a> International Journal of Molecular Science. 20 (12), 3004 (2019).</li><li>Swadi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimising+the+chick+chorioallantoic+membrane+xenograft+model+of+neuroblastoma+for+drug+delivery.">Optimising the chick chorioallantoic membrane xenograft model of neuroblastoma for drug delivery.</a> BMC Cancer. 18 (1), 28 (2018).</li><li>Klingenberg, M., Becker, J., Eberth, S., Kube, D., Wilting, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+as+an+in+vivo+xenograft+model+for+Burkitt+lymphoma.">The chick chorioallantoic membrane as an in vivo xenograft model for Burkitt lymphoma.</a> BMC Cancer. 14 (1), 339 (2014).</li><li>Avram, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+A375+human+melanoma+models+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+and+Balb/c+nude+mice.">Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice.</a> Oncology Reports. 38 (1), 89-99 (2017).</li><li>Zabielska-Koczywas, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+as+an+in+vivo+model+to+study+morphological+and+histopathological+features+of+feline+fibrosarcomas.">3D chick embryo chorioallantoic membrane model as an in vivo model to study morphological and histopathological features of feline fibrosarcomas.</a> BMC Veterinary Research. 13 (1), 201 (2017).</li><li>Skowron, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+assay+to+study+treatment+approaches+in+urothelial+carcinoma.">Applying the chicken embryo chorioallantoic membrane assay to study treatment approaches in urothelial carcinoma.</a> Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations. 35 (9), e511-e523 (2017).</li><li>Jefferies, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+imaging+of+engineered+human+tumors+in+the+living+chicken+embryo.">Non-invasive imaging of engineered human tumors in the living chicken embryo.</a> Scientific Reports. 7 (1), 4991 (2017).</li><li>Taizi, M., Deutsch, V. R., Leitner, A., Ohana, A., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+rapid+in+vivo+system+for+testing+therapeutics+on+human+leukemias.">A novel and rapid in vivo system for testing therapeutics on human leukemias.</a> Experimental Hematology. 34 (12), 1698-1708 (2006).</li><li>Strojnik, T., Kavalar, R., Barone, T. A., Plunkett, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+model+and+immunohistochemical+comparison+of+U87+human+glioblastoma+cell+xenografts+on+the+chicken+chorioallantoic+membrane+and+in+rat+brains.">Experimental model and immunohistochemical comparison of U87 human glioblastoma cell xenografts on the chicken chorioallantoic membrane and in rat brains.</a> Anticancer Research. 30 (12), 4851-4860 (2010).</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+model+for+tumor+biology.">The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology.</a> Experimental Cell Research. 328 (2), 314-324 (2014).</li><li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non-integrating+Lentiviral+Approach+Overcomes+Cas9-Induced+Immune+Rejection+to+Establish+an+Immunocompetent+Metastatic+Renal+Cancer+Model.">A Non-integrating Lentiviral Approach Overcomes Cas9-Induced Immune Rejection to Establish an Immunocompetent Metastatic Renal Cancer Model.</a> Molecular Therapy - Methods &amp; Clinical Development. 9, 203-210 (2018).</li></ol>

Tumör expansion och engraftment med hjälp av CAM-modellen möjliggör snabbare och direkt observerbar tumörtillväxt än befintliga in vivo djurmodeller. Dessutom är kostnaderna betydligt lägre när det första köpet av utrustningen är klart, särskilt jämfört med kostnaden för immunkomprometterade möss. Det ursprungliga, immunkomprometterade tillståndet för kycklingembryon tillåter lätt engraftment av mänsklig och murinvävnad. Även med dessa styrkor har CAM-modellen begränsningar. Den korta tid som ka...

Möss har fungerat som den klassiska modellorganismen för studier av mänskliga sjukdomar, inklusive malignitet. Som däggdjur delar de många likheter med människor. Deras höga grad av genetisk likhet har tillåtit transgen manipulation av musgenomet för att ge enorm insikt i den genetiska kontrollen av mänskliga sjukdomar1. Lång erfarenhet av hantering av och experiment med möss har resulterat i att de är den modell som väljs för biomedicinsk forskning. Men förutom de etiska och vetenskapliga oro när det gäller murin modeller, kan de också vara ganska kostsamt och tidskrävande2,3. Utvecklingen av tumörer kan ta veckor eller månader. Bostäder på en typisk institution ensam kan köras i hundratals till tusentals dollar medan tumörer utvecklas. Äggstockscancer är ett exempel på denna nackdel eftersom dess tillväxt i murin modeller lätt kan ta månader. Förseningar i forskningsutvecklingen kan påverka äggstockscancer patienternas ihållande låga 5-års överlevnad på endast 47% (dvs. en ökning av överlevnaden på endast 10% under 30 år)4. På samma sätt utgör urologiska cancerformer (njur-, prostata- och blåscancer) 19% av alla cancerfall i USA och 11% av cancerrelaterade dödsfall4. Således kan en ny in vivo strategi för att studera gynekologiska och urologiska cancerer spara ett laboratorium betydande tid, arbete och pengar, även om denna modell endast tillämpas på inledande screening experiment. Dessutom kan den resulterande accelerationen av forskningsresultat avsevärt påverka de 177.000 individer som diagnostiserats med dessa cancerformer årligen.
KycklingEN CAM modellen erbjuder många fördelar som tar itu med ovannämnda frågor. En populär modell för att studera angiogenes5,6, tumörcell invasion7,8och metastasering7,9, chick embryo CAM modell har redan använts för att studera många former av cancer, inklusive glioma10,11,12, huvud och hals skivepitelcancer carcinom13,14, leukemi15,16, pankreascancer17, och kolorektal cancer18. Dessutom har CAM modeller genererats för neuroblastom19, Burkitt lymfom20, melanom21och katt fibrosarkom22. Tidigare studier har också presenterat engraftment av blåscancer23 och prostatacancer cellinjer24, men med begränsade protokoll detaljer. Inte bara är ägg mycket billigare än möss, men de ger också mycket reproducerbara resultat25,26. De visar snabb vaskulatur utveckling, och tumör engraftment kan uppstå i så snabbt som ett par dagar och visualiseras längsgående genom det öppna fönstret. Med 21 dagars tidsram mellan äggbefruktning och kläckning kan experiment slutföras inom några veckor. Dessutom tillåter de låga kostnaderna, begränsade bostadsbehov och små storlekar lätt storskaliga experiment som skulle vara oöverkomliga för musstudier.
Därför försökte vi optimera CAM-modellen för engraftment av gynekologiska och urologiska cancerformer. På grund av den immunkomprometterade status en tidig kyckling embryo27, både mus och mänskliga celler kan lätt implanteras. Som sådan har vi framgångsrikt engrafted äggstockscancer, njure, prostata och cancer i urinblåsan. För var och en av dessa tumörtyper accepterar CAM lätt etablerade murina och/eller mänskliga tumörcellinjer. Viktigt, nyskördade primära mänskliga tumörvävnader kan också engraft från antingen smälta celler eller bitar av fast vävnad med hög framgång. Var och en av dessa cancertyper och cellkällor kräver optimering, som vi delar här.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>-010 Teflon (PTFE) White 55 Duro Shore D O-Rings</td>
			<td>The O-Ring Store</td>
			<td>TEF010</td>
			<td>Nonstick ring for cell seeding. 1/4&#34;ID X 3/8&#34;OD X 1/16&#34;CS Polytetrafluoroethylene (PTFE).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C4-2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3314</td>
			<td>Human prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CWR22Rv1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CWR cells were the kind gift of Dr. David Agus (Keck Medicine of University of Southern California)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 8/18 Antibody (C-51)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-44929-0.02mg</td>
			<td>Used at a dilution of 1:100 for immunohistochemical analysis of human ovarian CAM tumors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin Firefly, potassium salt</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Curved; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4-3/4 in. Overall Length</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS6703</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved scissors would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max Tool Kit</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>8050-N/18</td>
			<td>This kit contains all necessary tools.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertilized chicken eggs (Rhode Island Red - Brown, Lab Grade)</td>
			<td>AA Lab Eggs Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>A local egg supplier would need to be identified, as this supplier only delivers regionally.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HT-1376</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1472</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hovabator Genesis 1588 Deluxe Egg Incubator Combo Kit</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>HB1588D-NONE-1102-1588-1357</td>
			<td>Other egg incubators may be used, but their reliability would need to be verified. After implantation, a cell incubator with the CO2 disabled may also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ID8</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Not commercially available, please see PMID: 10753190.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incu-Bright Cool Light Egg Candler</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>1102</td>
			<td>Other candlers may be used; however, this is preferred among those that we have tested. This candler is included in the aforementioned incubator kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps, 10cm, Curved, Serrated, 0.8mm tips</td>
			<td>World Precision Instrument</td>
			<td>15915</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved forceps would work as well. Multiple brands have been used for this method.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Clipper Distributing</td>
			<td>0010250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina II In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Membrane Matrix HC; LDEV-Free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354248</td>
			<td>Extracellular matrix solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MyC-CaP</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3255</td>
			<td>Murine prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Pipet-Aid XP Pipette Controller</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>4-000-101</td>
			<td>Any similar pipet controller would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Hypodermic Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td>This is provided as an example. Any 18G needle would work similarly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RENCA</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semken Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11008-13</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar forceps or another style that suits researcher preference would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SKOV3</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-77</td>
			<td>Human ovarian cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72914</td>
			<td>This is provided as an example. The forceps used for pulling away the shell for bioluminescence imaging are approximately 12.8 cm long with 3 mm-wide tips.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cotton Balls</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-456-885</td>
			<td>This is provided as an example. Any sterile cotton balls would suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stirring Rods with Rubber Policeman; 5mm diameter, 6 in. length</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>GRPL06</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar glass stir rods would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T24</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-4</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Transparent Dressing Original Frame Style 2 3/8&#34; x 2 3/4&#34;</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>21272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dishes, 10 cm diameter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar, sterile 10-cm dish may be used. Tissue culture treatment is not necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Clear Laboratory Tubing - 1/4 x 3/8 x 1/16 wall (50 feet)</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>AACUN017</td>
			<td>This is provided as an example. Any similarly sized tubing would work as well.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers

Musmodeller är riktmärkestesterna för in vivo cancerstudier. Men kostnader, tid och etiska överväganden har lett till krav på alternativa in vivo cancermodeller. Kycklingchorioallantoic membranet (CAM) modellen ger ett billigt, snabbt alternativ som möjliggör direkt visualisering av tumör utveckling och är lämplig för in vivo imaging. Som sådan försökte vi utveckla ett optimerat protokoll för engrafting gynekologiska och urologiska tumörer i denna modell, som vi presenterar här. Cirka 7 dagar postfertilization, luftcellen flyttas till vascularized sidan av ägget, där en öppning skapas i skalet. Tumörer från murin och mänskliga cellinjer och primära vävnader kan sedan engrafted. Dessa är vanligtvis sådd i en blandning av extracellulär matris och medium för att undvika cellulär spridning och ge näringsstöd tills cellerna rekrytera ren kärlförsörjning. Tumörer kan sedan växa i upp till ytterligare 14 dagar före äggen kläckning. Genom att implantera celler som genomsärgas särbehandling med firefly luciferase kan bioluminescensavbildning användas för känslig detektion av tumörtillväxt på membranet och cancercellen sprids över hela embryot. Denna modell kan potentiellt användas för att studera tumorigenicity, invasion, metastasering och terapeutisk effektivitet. KycklingEN CAM-modellen kräver betydligt mindre tid och ekonomiska resurser jämfört med traditionella murinmodeller. Eftersom äggen är immunkomprometterade och immuntoleranta kan vävnader från alla organismer potentiellt implanteras utan kostsamma transgena djur (t.ex. möss) som krävs för implantation av mänskliga vävnader. Men många av fördelarna med denna modell kan potentiellt också vara begränsningar, inklusive den korta tumör generationentid och immunkomprometterade / immun tolerant status. Dessutom, även om alla tumörtyper presenteras här engraft i kyckling chorioallantoic membran modell, de gör det med varierande grad av tumörtillväxt.

Hittills har vi funnit denna metod för implantation vara framgångsrik för äggstockscancer, njure, prostata och cancer i urinblåsan. Var och en optimerades för att identifiera specifika villkor för implantation, även om det kan finnas flexibilitet. Av de testade tumörtyperna var äggstockscancertillväxten mycket mindre uttalad och syns vanligtvis inte utan hjälp av bioluminescensavbildning (figur 1). En förstyvning av CAM kunde dock kännas med pin...

Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

Vi presenterar kyckling chorioallantoic membran modell som en alternativ, transplanterbar, in vivo modell för engraftment av gynekologiska och urologiska cancer cellinjer och patient-härledda tumörer.

Använda Kyckling chorioallantoic Membrane In Vivo modell för att studera gynekologiska och urologiska cancerformer

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...

Engraftment av tumörer på kyckling chorioallantoic membranet, eller CAM, kan användas för studier av tumorigenicity, behandling effekt eller cellulära överhörning. Denna metod tillstånd kostnadseffektiva snabb tumör tillväxt i en immunotolerant in vivo inställning. Med hjälp av CAM-modellen kan nya terapeutiska metoder snabbt testas med hjälp av cellinjer eller till och med patienttumörexemplar.De mest avgörande aspekterna av detta protokoll är att säkerställa korrekt CAM-formation och inte störa CAM eller vasculature samtidigt öppna äggen. På utvecklingsdag sju eller åtta när CAM har fullt utvecklad, stäng av äggrotatorn och placera ungefär ett till tre ägg i äggstället i biosäkerhetsskåpet. Med lamporna avstängda, placera ett ägg candler mot äggskalet för att identifiera och markera placeringen av luftcellen av ett ägg, flytta sedan ägget candler över skalet för att hitta ett stort blodkärl nätverk, rotera ägget som behövs.En idealisk vasculature kommer gren nära mitten av ägget. Använd en markör för att spåra den vasculatur som ska användas för implantation. Efter att ha vänt på ljuset i huven igen, använd ett sladdlöst rotationsverktyg som är försett med en kiselkarbidslipsten för att borra ett litet hål i skalet direkt över luftcellens centrum.När större delen av skalet har tagits bort men med vitt innermembran intakt, borra ett annat litet hål där kärlfönstret kommer att öppnas som just visats. När det andra hålet är klart, använd en 18 gauge nål för att försiktigt genomborra den vita inre membran över luftcellen och vasculature ta hand om att den vita inre membranet, men inte CAM, störs i hela det borrade området. Med huvljuset släckt igen, använd ägg-candler för att verifiera att luftcellen har överförts från äggänden till området över vasculaturen.Placera vid behov vakuumslangar som förs in i en pipettstyrenhet runt hålet över den ursprungliga luftcellen och försiktigt applicera sug i korta skurar för att flytta luftcellen. Markera konturerna av den nya platsen för luftcellen cirka 0,5 centimeter innanför luft-CAM-gränsen och fixa en bit förpackningstejp precis tillräckligt stor för att täcka hålet över den nya luftcellen. Efter att ha förberett de två andra äggen som just visats, återlämna äggen till ruvmaskinen och öppna ytterligare ägg för experimentet i grupper om ett till tre som visats.När alla ägg har öppnats, överför ett till tre ägg med flyttade luftceller till äggstället i ett biosäkerhetsskåp och använd ett sladdlöst rotationsverktyg försett med ett cirkulärt skärhjul för att skära en liten linje över luftcellsgränsen helt genom cellen utan att störa CAM eller vaskulaturen. Med hjälp av böjd sax, skär runt den återstående luftcellen för att skapa ett fönster i skalet och kontrollera livskraften hos embryot. Livskraftiga embryon kommer att visa en omfattande vasculature, tydlig albumin, embryo rörelse, och / eller en synlig hjärtslag.Hos icke avundsvärda embryon kan CAM verka ogenomskinlig med få, om några, kärl som finns och embryona kan vara små eller frånvarande utan rörelse eller hjärtslag. Använd Semkin-ttymmor, dra små bitar av bomull från en steril bomullstuss och försiktigt blot CAM ytan av de livskraftiga embryon för att ta bort alla skal damm och skräp, sedan täcka skal öppning med en fjärdedel av sex med sju centimeter transparent film dressing utan att röra CAM och tillbaka äggen till inkubatorn med det öppnade fönstret uppåt. Använd en bit ägg rack, kanten av ägget rotator, eller en annan lämplig post för att stötta alla ägg som håller rullande.För att förbereda cancercell suspension för transplantation, skörda cellerna från cancer cell kultur av intresse och sediment cellerna genom centrifugeringen. Aspirera supernatanten och resuspend mekaniskt cellerna i restmediet. Placera cellfjädringen på is och använd en pipett för att mäta volymen av celler i medium.Sedan resuspend cellerna vid en koncentration av en till två miljoner celler i 20 till 100 mikroliter medium kompletteras med 2,7 till 4 milligram per milliliter extracellulär matris och eventuella tillväxtfaktorer eller andra tillsatser av intresse. För cancer cell implantation, med hjälp av en non-stick ring, placera upp till sex ägg som ska implanteras på äggracket och rulla kanterna på den genomskinliga filmen dressing mot det öppna fönstret för att ta bort filmen från skalen. Kontrollera om äggen är livskraftiga och friska.Ideala ägg kommer att ha ett stort fartyg med mindre förgreningsfartyg inom mitten av det öppnade området. Med hjälp av böjda iris-forceps placerar du en steril non-stick-ring på CAM över kärlet helst över en grenpunkt. Använd en steril glas stir rod för att försiktigt abrade CAM och pipettera cancercell suspensionen i mitten av ringen.När alla celler har levererats, försegla öppningen med en fjärdedel av sex med sju centimeter transparent film dressing och märka ägget med en lämplig implantatbeteckning. Placera sedan äggen säkert i inkubatorn med skalets öppning vänd upprätt. För att implantera cancerceller utan användning av en non-stick ring, aspirera cellen suspensionen i en lämpligt stor pipetten spets och hålla den övre delen av spetsen försiktigt mata ut pipetten spets och placera spetsen horisontellt i en steril 10 centimeter vävnad kultur skålen.Efter att spetsarna har laddats, placera skålen i en 37 grader Celsius inkubator i 15 till 30 minuter, kontroll av polymerisering efter 15 minuter. En liten mängd vätska kommer vanligtvis läcka ut som varje spets placeras i skålen. Använd denna vätska för att uppskatta omfattningen av polymerisationen inom spetsen.När matrisen är klar, placera en spets på en lämpligt stor pipetter och tryck ned kolven för att tvinga den delvis polymeriserade cellupphängningen på CAM idealiskt över den förgrenade punkten på ett stort välutvecklat kärl. Med hjälp av dessa metoder, både mänskliga och murine äggstockscancer cellinjer och primära tumör bitar resulterade i framgångsrika engraftment av tumörer med morfologier överensstämmer med dem som observerats i andra in vivo modeller. Av de testade tumörtyperna var äggstockscancer tillväxt mycket mindre uttalad och vanligtvis inte synliga utan hjälp av bioluminescens imaging.Effekterna av att lägga till tillväxtfaktorer eller hormoner vid tidpunkten för implantation kan också testas med hjälp av dessa metoder. För njurcancer, implantation av klar cell njurcellscancer celler från etablerade cellinjer eller bitar från primära mänskliga njurtumörer producerar snabb, robust tumörbildning. Vidare, flera mänskliga och murine prostatacancer cellinjer och mänskliga urinblåsan cancer cellinjer och primära tumör bitar hade använts för att fastställa tumörer med hjälp av denna modell.Det är avgörande att undvika att störa CAM och vasculature och att se till att CAM inte klibbar på skalet medan du öppnar fönstret. Efter en framgångsrik engraftment kan CAM-modellen användas för att bedöma den terapeutiska effekten av behandlingar av intresse eller interaktioner mellan olika celltyper inom en tumör.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

Coculture Analyser för att studera makrofager och mikroglia Stimulering av Glioblastoma Invasion

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal skiva Tumör Modell: Visualisering och kvantifiering av genuttryck och tumör invasiv använda genetiska mosaiker

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

Live Imaging att studera mikrotubuli Dynamisk Instabilitet i taxan resistent bröstcancer

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Påvisande av mitokondrier membranet Potential att studera CLIC4 Knockdown-inducerad HN4 Cell apoptos In Vitro

Depletion of the mitochondrial membrane potential (MMP, &#916;&#936;m) is considered the earliest event in the apoptotic cascade. It even occurs ahead of ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR bedömning av pH, pO2, Redox Status, och koncentrationer av fosfat och glutation i den tumör mikromiljö

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Acellulärt och cellulära Lung modell att studera tumör metastasering

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Erhålla Cancer Stem Cell Spheres från gynekologiska och bröstcancertumörer

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

Jämföra metastaserande clear cell njurcellscancer modell etablerad i mus njure och på kyckling chorioallantoic membranet

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

Använda datorbaserad bildanalys för att förbättra kvantifiering av lung metastasering i 4T1 Bröstcancermodellen

Breast cancer is a devastating malignancy, accounting for 40,000 female deaths and 30% of new female cancer diagnoses in the United States in 2019 alone. ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

Upptäckt av metastaserade regulatorer med hjälp av en snabb och kvantitativ intravital chick chorioallantoic membranmodell

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...