Name: using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers
Uploaded: 2020-01-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

Yazarlar dr Fuyuhiko Tamanoi ve Binh Vu bu yöntem üzerinde ilk eğitim için teşekkür etmek istiyorum. Dr. Eva Koziolek ile yapılan görüşmeler bu yaklaşımın optimizasyonunda etkili olmuştur ve çok beğenilmiştir. Bu çalışma aşağıdaki kaynaklardan kaynak olmadan mümkün olmazdı: Tütün Ile İlgili Hastalık Araştırma Programı Doktora Sonrası Bursu (27FT-0023, ACS), Savunma Bakanlığı (DoD) Yumurtalık Kanseri Araştırma Programı (W81XWH-17-1-0160), NCI/NIH (1R21CA216770), Tütünle İlgili Hastalık Araştırma Programı Yüksek Etki Pilot Ödülü (27IR-0016) ve UCLA kurumsal desteği, JCCC Tohum Hibesi (NCI/NIH P30CA016042) ve LW Araştırma Başkan Yardımcısı Ofisinden 3R Grant dahil.

Burada sunulan tüm deneyler Kaliforniya Üniversitesi, Los Angeles (UCLA) tarafından gözden geçirildi ve onaylandı. Deidentified, primer insan tümörlerinin kullanımı UCLA Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından onaylanmıştır (Protokol numaraları 17-000037, 17-001169 ve 11-001363). UCLA anda, Hayvan Araştırma Komitesi inceleme tavuk embriyoları kullanarak deneyler için gerekli değildir; protokol onayı sadece yumurtadan çıktığında gereklidir. Ancak, hayvanların ötenazi için AVMA Yönergeleri gibi e...

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Jackson, S. J., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+tissue+models+in+cancer+research:+looking+beyond+the+mouse.">Human tissue models in cancer research: looking beyond the mouse.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 10 (8), 939-942 (2017).</li><li>Cheon, D. J., Orsulic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Models+of+Cancer.">Mouse Models of Cancer.</a> Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 6 (1), 95-119 (2011).</li><li>. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2016 Available from: <a target="_blank" href="https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/">https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/</a> (2018)</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chicken+chorioallantoic+membrane+angiogenesis+model.">Chicken chorioallantoic membrane angiogenesis model.</a> Methods Molecular Biology. 843, 47-57 (2012).</li><li>Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chicken+chorioallantoic+membrane+model+in+biology,+medicine+and+bioengineering.">The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering.</a> Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).</li><li>Lokman, N. A., Elder, A. S., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+assay+as+an+in+vivo+model+to+study+the+effect+of+newly+identified+molecules+on+ovarian+cancer+invasion+and+metastasis.">Chick chorioallantoic membrane (CAM) assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis.</a> International Journal of Molecular Science. 13 (8), 9959-9970 (2012).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay:+A+3D+Animal+Model+for+Study+of+Human+Nasopharyngeal+Carcinoma.">Chick Chorioallantoic Membrane Assay: A 3D Animal Model for Study of Human Nasopharyngeal Carcinoma.</a> PLoS ONE. 10 (6), e0130935 (2015).</li><li>Deryugina, E. I., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+systems+to+study+and+visualize+human+tumor+cell+metastasis.">Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis.</a> Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1119-1130 (2008).</li><li>Shoin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Embryo+Assay+as+Chemosensitivity+Test+for+Malignant+Glioma.">Chick Embryo Assay as Chemosensitivity Test for Malignant Glioma.</a> Japanese Journal of Cancer Research. 82 (10), 1165-1170 (1991).</li><li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model.">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proceedings of the National Academy of Science U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li><li>Kavaliauskait&#279;, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Sodium+Valproate+on+the+Glioblastoma+U87+Cell+Line+Tumor+Development+on+the+Chicken+Embryo+Chorioallantoic+Membrane+and+on+EZH2+and+p53+Expression.">The Effect of Sodium Valproate on the Glioblastoma U87 Cell Line Tumor Development on the Chicken Embryo Chorioallantoic Membrane and on EZH2 and p53 Expression.</a> BioMed Research International. 2017, 12 (2017).</li><li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Histone+Methyltransferase+EZH2+Mediates+Tumor+Progression+on+the+Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay,+a+Novel+Model+of+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma.">The Histone Methyltransferase EZH2 Mediates Tumor Progression on the Chick Chorioallantoic Membrane Assay, a Novel Model of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma.</a> Translational Oncology. 6 (3), 273-281 (2013).</li><li>Rudy, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Wnt+pathway+inhibition+of+human+squamous+cell+carcinoma+growth+and+metastasis+in+the+chick+chorioallantoic+model.">In vivo Wnt pathway inhibition of human squamous cell carcinoma growth and metastasis in the chick chorioallantoic model.</a> Journal of Otolaryngology - Head &amp; Neck Surgery. 45 (1), 26 (2016).</li><li>Canale, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-27+inhibits+pediatric+B-acute+lymphoblastic+leukemia+cell+spreading+in+a+preclinical+model.">Interleukin-27 inhibits pediatric B-acute lymphoblastic leukemia cell spreading in a preclinical model.</a> Leukemia. 25, 1815 (2011).</li><li>Loos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino-functionalized+nanoparticles+as+inhibitors+of+mTOR+and+inducers+of+cell+cycle+arrest+in+leukemia+cells.">Amino-functionalized nanoparticles as inhibitors of mTOR and inducers of cell cycle arrest in leukemia cells.</a> Biomaterials. 35 (6), 1944-1953 (2014).</li><li>Rovithi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+bioluminescent+chick+chorioallantoic+membrane+(CAM)+models+for+primary+pancreatic+cancer+cells:+a+platform+for+drug+testing.">Development of bioluminescent chick chorioallantoic membrane (CAM) models for primary pancreatic cancer cells: a platform for drug testing.</a> Scientific Reports. 7, 44686 (2017).</li><li>Majern&#237;k, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Insights+into+the+Effect+of+Hyperforin+and+Photodynamic+Therapy+with+Hypericin+on+Chosen+Angiogenic+Factors+in+Colorectal+Micro-Tumors+Created+on+Chorioallantoic+Membrane.">Novel Insights into the Effect of Hyperforin and Photodynamic Therapy with Hypericin on Chosen Angiogenic Factors in Colorectal Micro-Tumors Created on Chorioallantoic Membrane.</a> International Journal of Molecular Science. 20 (12), 3004 (2019).</li><li>Swadi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimising+the+chick+chorioallantoic+membrane+xenograft+model+of+neuroblastoma+for+drug+delivery.">Optimising the chick chorioallantoic membrane xenograft model of neuroblastoma for drug delivery.</a> BMC Cancer. 18 (1), 28 (2018).</li><li>Klingenberg, M., Becker, J., Eberth, S., Kube, D., Wilting, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+chorioallantoic+membrane+as+an+in+vivo+xenograft+model+for+Burkitt+lymphoma.">The chick chorioallantoic membrane as an in vivo xenograft model for Burkitt lymphoma.</a> BMC Cancer. 14 (1), 339 (2014).</li><li>Avram, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+A375+human+melanoma+models+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+and+Balb/c+nude+mice.">Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice.</a> Oncology Reports. 38 (1), 89-99 (2017).</li><li>Zabielska-Koczywas, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+as+an+in+vivo+model+to+study+morphological+and+histopathological+features+of+feline+fibrosarcomas.">3D chick embryo chorioallantoic membrane model as an in vivo model to study morphological and histopathological features of feline fibrosarcomas.</a> BMC Veterinary Research. 13 (1), 201 (2017).</li><li>Skowron, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+assay+to+study+treatment+approaches+in+urothelial+carcinoma.">Applying the chicken embryo chorioallantoic membrane assay to study treatment approaches in urothelial carcinoma.</a> Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations. 35 (9), e511-e523 (2017).</li><li>Jefferies, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+imaging+of+engineered+human+tumors+in+the+living+chicken+embryo.">Non-invasive imaging of engineered human tumors in the living chicken embryo.</a> Scientific Reports. 7 (1), 4991 (2017).</li><li>Taizi, M., Deutsch, V. R., Leitner, A., Ohana, A., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+rapid+in+vivo+system+for+testing+therapeutics+on+human+leukemias.">A novel and rapid in vivo system for testing therapeutics on human leukemias.</a> Experimental Hematology. 34 (12), 1698-1708 (2006).</li><li>Strojnik, T., Kavalar, R., Barone, T. A., Plunkett, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+model+and+immunohistochemical+comparison+of+U87+human+glioblastoma+cell+xenografts+on+the+chicken+chorioallantoic+membrane+and+in+rat+brains.">Experimental model and immunohistochemical comparison of U87 human glioblastoma cell xenografts on the chicken chorioallantoic membrane and in rat brains.</a> Anticancer Research. 30 (12), 4851-4860 (2010).</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+model+for+tumor+biology.">The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology.</a> Experimental Cell Research. 328 (2), 314-324 (2014).</li><li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non-integrating+Lentiviral+Approach+Overcomes+Cas9-Induced+Immune+Rejection+to+Establish+an+Immunocompetent+Metastatic+Renal+Cancer+Model.">A Non-integrating Lentiviral Approach Overcomes Cas9-Induced Immune Rejection to Establish an Immunocompetent Metastatic Renal Cancer Model.</a> Molecular Therapy - Methods &amp; Clinical Development. 9, 203-210 (2018).</li></ol>

CAM modeli kullanılarak tümör genişlemesi ve engraftment in vivo hayvan modelleri mevcut daha hızlı ve doğrudan gözlemlenebilir tümör büyümesi sağlar. Buna ek olarak, özellikle bağışıklık sistemi zayıf farelerin maliyeti ile karşılaştırıldığında, ekipman ilk satın alma tamamlandıktan sonra maliyetleri önemli ölçüde daha düşüktür. Tavuk embriyolarının ilk, bağışıklık sistemi kolayca insan ve murin dokusunun engraftment izin verir. Bu güçlü olsa bile, CAM modeli sınırlamala...

Fareler malignite de dahil olmak üzere insan hastalıklarının incelenmesi için klasik model organizma olarak hizmet vermiştir. Memeliler olarak, insanlarla birçok benzerlikleri vardır. Genetik benzerlik onların yüksek derecede insan hastalıklarının genetik kontrolü içine büyük bir fikir sağlamak için fare genomunun transgenik manipülasyon izin verdi1. Farelerin kullanımı ve deneyleri konusunda geniş deneyim, biyomedikal araştırmalar için tercih edilen model olmalarına yol açmıştır. Ancak, murine modelleri ile ilgili etik ve bilimsel endişelere ek olarak, onlar da oldukça pahalı ve zaman alıcı olabilir2,3. Tümörlerin gelişimi haftalar hatta aylar sürebilir. Sadece tipik bir kurumda konut tümörler gelişmekte iken binlerce dolar yüzlerce çalıştırabilirsiniz. Yumurtalık kanseri bu dezavantajı bir örnektir çünkü murine modellerinde büyüme kolayca ay sürebilir. Araştırma ilerleme gecikmeler potansiyel yumurtalık kanseri hastalarının ısrarla düşük 5 yıllık sağkalım oranı sadece% 47 (yani, 30 yıl içinde sadece% 10 sağkalım artışı)4etkiler. Benzer şekilde, ürolojik kanserler (böbrek, prostat ve mesane kanserleri) Amerika Birleşik Devletleri'nde tüm kanser vakalarının% 19 ve kansere bağlı ölümlerin% 11oluşturmaktadır 4. Böylece, jinekolojik ve ürolojik kanserleri incelemek için vivo yaklaşımında yeni bir yaklaşım, bu model sadece ilk tarama deneylerine uygulansa bile, bir laboratuvarda önemli ölçüde zaman, emek ve para tasarrufu sağlayabilir. Ayrıca, araştırma bulgularının ortaya çıkan ivme önemli ölçüde bu kanserler yıllık tanısı 177.000 bireyleretkileyebilir.
Tavuk CAM modeli yukarıda belirtilen sorunları ele birçok avantaj sunuyor. Anjiyogenez çalışmak için popüler bir model5,6, tümör hücre li invazyonu7,8, ve metastaz7,9, civciv embriyo CAM modeli zaten kanserlerin birçok formları çalışmak için kullanılmıştır, glioma dahil10,11,12, baş ve boyun skuamöz hücreli karsinom13,14, lösemi15,16, pankreas kanseri17, ve kolorektal kanser18. Ayrıca, CAM modelleri nöroblastom için üretilmiştir19, Burkitt lenfoma20, melanom21, ve kedi fibrosarkom22. Önceki çalışmalar da mesane kanseri engraftment sundu23 ve prostat kanseri hücre hatları24, ancak sınırlı protokol detayları ile. Sadece yumurta farelerden çok daha ucuz, ama onlar da son derece tekrarlanabilir sonuçlarüretmek 25,26. Hızlı vaskülatür gelişimi gösterirler ve tümör engraftment birkaç gün gibi hızlı bir şekilde oluşabilir ve açık pencereden uzunlamasına görselleştirilebilir. Yumurta döllenme ve kuluçka arasında 21 günlük zaman dilimi ile, deneyler birkaç hafta içinde tamamlanabilir. Ayrıca, düşük maliyet, sınırlı konut ihtiyaçları ve küçük boyut kolayca fare çalışmaları için engelleyici olacaktır büyük ölçekli deneyler izin verir.
Bu nedenle, jinekolojik ve ürolojik kanserlerin engraftment için CAM modeli optimize etmek için çalıştı. Erken tavuk embriyosu27immünazdurumu nedeniyle, hem fare hem de insan hücreleri kolayca implante edilebilir. Bu nedenle, biz başarıyla yumurtalık, böbrek, prostat ve mesane kanserleri engrafted var. Bu tümör tiplerinin her biri için, CAM kolayca kurulan murine ve / veya insan tümör hücre hatları kabul eder. Daha da önemlisi, taze hasat birincil insan tümör dokuları da ya sindirilmiş hücrelerden veya başarı oranı yüksek katı doku parçaları engraft olabilir. Bu kanser türlerinin ve hücre kaynaklarının her biri optimizasyon gerektirir, burada paylaştığımız.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>-010 Teflon (PTFE) White 55 Duro Shore D O-Rings</td>
			<td>The O-Ring Store</td>
			<td>TEF010</td>
			<td>Nonstick ring for cell seeding. 1/4&#34;ID X 3/8&#34;OD X 1/16&#34;CS Polytetrafluoroethylene (PTFE).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C4-2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3314</td>
			<td>Human prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CWR22Rv1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CWR cells were the kind gift of Dr. David Agus (Keck Medicine of University of Southern California)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 8/18 Antibody (C-51)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-44929-0.02mg</td>
			<td>Used at a dilution of 1:100 for immunohistochemical analysis of human ovarian CAM tumors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin Firefly, potassium salt</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Curved; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4-3/4 in. Overall Length</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS6703</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved scissors would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max Tool Kit</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>8050-N/18</td>
			<td>This kit contains all necessary tools.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertilized chicken eggs (Rhode Island Red - Brown, Lab Grade)</td>
			<td>AA Lab Eggs Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>A local egg supplier would need to be identified, as this supplier only delivers regionally.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HT-1376</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1472</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hovabator Genesis 1588 Deluxe Egg Incubator Combo Kit</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>HB1588D-NONE-1102-1588-1357</td>
			<td>Other egg incubators may be used, but their reliability would need to be verified. After implantation, a cell incubator with the CO2 disabled may also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ID8</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Not commercially available, please see PMID: 10753190.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incu-Bright Cool Light Egg Candler</td>
			<td>Incubator Warehouse</td>
			<td>1102</td>
			<td>Other candlers may be used; however, this is preferred among those that we have tested. This candler is included in the aforementioned incubator kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps, 10cm, Curved, Serrated, 0.8mm tips</td>
			<td>World Precision Instrument</td>
			<td>15915</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar curved forceps would work as well. Multiple brands have been used for this method.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Clipper Distributing</td>
			<td>0010250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina II In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Membrane Matrix HC; LDEV-Free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354248</td>
			<td>Extracellular matrix solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MyC-CaP</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3255</td>
			<td>Murine prostate cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Pipet-Aid XP Pipette Controller</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>4-000-101</td>
			<td>Any similar pipet controller would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Hypodermic Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td>This is provided as an example. Any 18G needle would work similarly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RENCA</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semken Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11008-13</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar forceps or another style that suits researcher preference would be appropriate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SKOV3</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-77</td>
			<td>Human ovarian cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72914</td>
			<td>This is provided as an example. The forceps used for pulling away the shell for bioluminescence imaging are approximately 12.8 cm long with 3 mm-wide tips.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cotton Balls</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-456-885</td>
			<td>This is provided as an example. Any sterile cotton balls would suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stirring Rods with Rubber Policeman; 5mm diameter, 6 in. length</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>GRPL06</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar glass stir rods would work as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T24</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-4</td>
			<td>Human bladder cancer cell line.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Transparent Dressing Original Frame Style 2 3/8&#34; x 2 3/4&#34;</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>21272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dishes, 10 cm diameter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>This is provided as an example. Any similar, sterile 10-cm dish may be used. Tissue culture treatment is not necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Clear Laboratory Tubing - 1/4 x 3/8 x 1/16 wall (50 feet)</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>AACUN017</td>
			<td>This is provided as an example. Any similarly sized tubing would work as well.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers

Fare modelleri in vivo kanser çalışmaları için kriter testleri dir. Ancak, maliyet, zaman, ve etik hususlar alternatif in vivo kanser modelleri için çağrılara yol açmıştır. Tavuk koryoallantoik membran (CAM) modeli tümör gelişiminin doğrudan görselleştirilmesine izin veren ve in vivo görüntüleme için uygun olan ucuz, hızlı bir alternatif sağlar. Bu nedenle, jinekolojik ve ürolojik tümörlerin bu modele engrafting için optimize edilmiş bir protokol geliştirmeye çalıştık, burada sunduğumuz. Yaklaşık 7 gün sonra döllenme sonrası, hava hücresi yumurtanın vaskülarize tarafına taşınır ve kabukta bir açıklık oluşur. Daha sonra murine ve insan hücre hatları ve primer dokulardan tümörler engrafted olabilir. Bu genellikle hücre dışı matris ve orta hücresel dağılım önlemek ve hücreler bir vasküler kaynağı işe kadar besin desteği sağlamak için bir karışımı tohumlu vardır. Tümörler yumurtadan çıkmadan 14 gün öncesine kadar büyüyebilir. Ateş böceği luciferase ile transeksif hücreleri yerleştirerek, biyolüminesans görüntüleme membran ve kanser hücresi embriyo yayılmış tümör büyüme hassas tespiti için kullanılabilir. Bu model potansiyel tümörijenite, invazyon, metastaz ve terapötik etkinliğini incelemek için kullanılabilir. Tavuk CAM modeli geleneksel murine modelleri ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde daha az zaman ve mali kaynaklar gerektirir. Yumurtalar bağışıklık sistemi zayıf ve bağışıklık toleranslı olduğundan, herhangi bir organizmanın dokuları potansiyel olarak insan dokularının implantasyonu için gerekli pahalı transgenik hayvanlar (örneğin, fareler) olmadan implante edilebilir. Ancak, Bu modelin avantajları nın çoğu potansiyel olarak da sınırlamalar olabilir, kısa tümör üretimi süresi ve immün/immün toleranslı durum da dahil olmak üzere. Ayrıca, tavuk koryoallantoik membran modelinde burada engraft sunulan tüm tümör tipleri rağmen, tümör büyüme değişen derecelerde bunu.

Şimdiye kadar, biz yumurtalık, böbrek, prostat ve mesane kanserleri için başarılı olması implantasyon bu yöntemi bulduk. Her biri implantasyon için belirli koşulları belirlemek için optimize edilse de, esneklik olabilir. Test edilen tümör tiplerinden yumurtalık kanseri büyümesi çok daha az belirgindi ve genellikle biyolüminesans görüntüleme yardımı olmadan görülemese de(Şekil 1). Ancak, CAM sertleşme implantasyon alanında forceps...

Watch this Scientific Journal Video about Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers at JoVE.com

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

Tavuk koryoallantoik membran modelini jinekolojik ve ürolojik kanser hücre hatlarının ve hasta kaynaklı tümörlerin engraftment için alternatif, nakledilebilir, in vivo modeli olarak sıyoruz.

Jinekolojik ve Ürolojik Kanserleri Incelemek Için Vivo Modelinde Tavuk Chorioallantoic Membran Kullanma

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...

Tavuk korrioallantoik membran üzerine tümörlerin engraftment, veya CAM, tümörijenite çalışmaları için kullanılabilir, tedavi etkinliği veya hücresel crosstalk. Bu yöntem, in vivo ayarında immüntoleransa dayanıklı bir tümör büyümesine izin verir. CAM modeli kullanılarak, yeni terapötik yaklaşımlar hızla hücre hatları ve hatta hasta tümör örnekleri kullanılarak test edilebilir.Bu protokolün en önemli yönleri uygun CAM oluşumunu sağlamak ve yumurtaları açarken CAM veya vaskülatür bozmamaktır. Cam tam olarak geliştirildiğinde yedinci veya sekizinci gelişim gününde, yumurta rotatörükapatın ve biyogüvenlik kabininde yumurta rafına yaklaşık bir ila üç yumurta yerleştirin. Işıklar kapalı, tanımlamak ve bir yumurta hava hücresinin yerini işaretlemek için yumurta kabuğuna bir yumurta mum yerleştirin, sonra büyük bir kan damarı ağı bulmak için kabuk üzerinde yumurta mum hareket, gerektiği gibi yumurta dönen.İdeal bir damar yumurtanın ortasına yakın dallanacak. İmplantasyon için kullanılacak vaskülatür izlemek için bir marker kullanın. Kaputun ışığını geri döndükten sonra, doğrudan hava hücresinin merkezi üzerinde kabuk küçük bir delik açmak için silikon karbür taş ile donatılmış bir akülü döner alet kullanın.Kabuğun çoğu çıkarıldığında ancak beyaz iç zarı sağlam ken, vasküler pencerenin az önce gösterildiği gibi açılacağı küçük bir delik daha açın. İkinci delik hazır olduğunda, beyaz iç zarı hafifçe hava hücresi ve vaskülature üzerinde beyaz iç zarı delmek için 18 gauge iğne kullanın, ama CAM değil, delinmiş alanın tamamı boyunca bozulur dikkat. Kaput Unması ile, hava hücresinin yumurtanın ucundan damar üzerinde alana aktarıldığını doğrulamak için yumurta mumunu kullanın.Gerekirse, orijinal hava hücresi üzerinde deliğin etrafına bir pipet denetleyicisine yerleştirilen vakum borularını yerleştirin ve hava hücresini hareket ettirebilmek için hafifçe kısa patlamalar halinde emme uygulayın. Hava hücresinin yeni yerinin ana hatlarını hava CAM sınırı içinde yaklaşık 0,5 santimetre olarak işaretleyin ve yeni hava hücresi üzerindeki deliği kapatacak kadar büyük bir ambalaj bandı parçasını düzeltin. Diğer iki yumurtayı az önce gösterildiği gibi hazırladıktan sonra yumurtaları kuvöze geri döndürün ve deney için 1-3 kişilik gruplar halinde ek yumurtaaçın.Tüm yumurtalar açıldığında, bir biyogüvenlik kabininde yumurta rafına taşınan hava hücreleri ile bir ila üç yumurta aktarın ve CAM veya vaskülatür bozmadan hücre üzerinden tamamen hava hücresi sınırı üzerinde küçük bir çizgi kesmek için dairesel kesme tekerleği ile donatılmış bir akülü döner araç kullanın. Kavisli makas kullanarak, kabuk bir pencere oluşturmak ve embriyo canlılığını doğrulamak için kalan hava hücresi etrafında kesti. Canlı embriyolar geniş bir vaskülatür, berrak albumin, embriyo hareketi ve / veya görünür bir kalp atışı gösterecektir.Cansız embriyolarda, CAM birkaç opak görünebilir, varsa, damarlar mevcut ve embriyolar küçük veya hareket veya kalp atışı olmadan yok olabilir. Semkin forceps kullanarak, steril bir pamuk topu küçük parçalar çekin ve yavaşça herhangi bir kabuk toz ve enkaz kaldırmak için canlı embriyoların CAM yüzeyi leke, sonra CAM dokunmadan altı yedi santimetre şeffaf film pansuman dörtte biri ile kabuk açılış kapağı ve açılan pencere yukarı bakacak şekilde kuvöz yumurta dönmek. Yumurta raf bir parça kullanın, yumurta rotator kenarı, ya da haddeleme tutmak herhangi bir yumurta prop için başka bir uygun öğe.Transplantasyon için kanser hücresi süspansiyon hazırlamak için, ilgi kanser hücresi kültüründen hücreleri hasat ve santrifüj ile hücreleri tortu. Süpernatant aspire ve mekanik artık ortamda hücreleri resuspend. Hücre süspansiyonu buz üzerine yerleştirin ve orta hücre hacmini ölçmek için bir pipet kullanın.Sonra orta 20 ila 100 mikrolitre mililitre ekstrasellüler matris başına 2,7 ila 4 miligram ve herhangi bir büyüme faktörleri veya ilgi diğer katkı maddeleri ile takviye bir ila iki milyon hücre konsantrasyonu hücreleri yeniden askıya. Kanser hücresi implantasyonu için, yapışmaz bir halka kullanarak, yumurta rafına yerleştirilecek altı yumurta yerleştirin ve şeffaf film pansumanının kenarlarını açık pencereye doğru yuvarlayın ve filmi kabuklardan çıkarın. Yumurtalar uygun ve sağlıklı olup olmadığını kontrol edin.İdeal yumurta açılan alanın merkezinde küçük dallanma gemileri ile büyük bir gemi olacak. Kavisli iris forceps kullanarak, bir dal noktası üzerinde ideal gemi üzerinde CAM üzerine steril bir yapışmaz halka yerleştirin. Cam ve pipeti yavaşça halkanın ortasına kanser hücresi süspansiyon aşındırmak için steril bir cam karıştırma çubuğu kullanın.Tüm hücreler teslim edildiğinde, açılışı altının dörtte biri ile yedi santimetre şeffaf film pansumanı ile kapatın ve yumurtayı uygun bir implant adı ile etiketleyin. Daha sonra yumurtaları kuvöze, kabuğun dik olarak açılmasıyla güvenli bir şekilde yerleştirin. Yapışmaz bir halka kullanmadan kanser hücrelerini yerleştirmek için, hücre süspansiyonuna uygun büyüklükte bir pipet ucuna aspire edin ve ucun üst kısmını dikkatlice pipet ucunu dışarı tutarak ve ucu yatay olarak steril 10 santimetrelik doku kültür yemeğine yerleştirin.İpuçları yüklendikten sonra, 15 dakika sonra polimerizasyon için kontrol, 15 ila 30 dakika boyunca 37 derece santigrat santigrat kuvöz içine çanak yerleştirin. Her ucu çanak yerleştirilir gibi sıvı küçük bir miktar genellikle dışarı sızıntı olacaktır. Uç içindeki polimerizasyonun kapsamını tahmin etmek için bu sıvıyı kullanın.Matris hazır olduğunda, uygun büyüklükteki bir pipete bir ucu yerleştirin ve kısmen polimerize hücre süspansiyonu cam üzerine ideal büyük bir iyi gelişmiş geminin dallı noktası üzerinde zorlamak için piston depress. Bu yöntemler kullanılarak, hem insan hem de ürinen yumurtalık kanseri hücre hatları ve primer tümör parçaları, diğer in vivo modellerde gözlenen morfolojilerle uyumlu tümörlerin başarılı bir şekilde engreftleştirilen sonuçlanmıştır. Test edilen tümör tipleri, yumurtalık kanseri büyüme çok daha az belirgin ve genellikle biyolüminesans görüntüleme yardımı olmadan görünür değildi.İmplantasyon sırasında büyüme faktörleri veya hormonekleme etkileri de bu yöntemler kullanılarak test edilebilir. Böbrek kanseri için, kurulan hücre hatları veya primer insan böbrek tümörlerinden parçalardan berrak hücreli renal hücreli karsinom hücrelerinin implantasyonu hızlı, sağlam tümör oluşumu üretir. Ayrıca, birden fazla insan ve murin prostat kanseri hücre hatları ve insan mesane kanseri hücre hatları ve primer tümör parçaları bu modeli kullanarak tümörler kurmak için kullanılmıştır.CAM'i ve vaskülatürü bozmamak ve camın pencereyi açarken kabukla yapışmadığından emin olmak çok önemlidir. Başarılı engraftment sonra, CAM modeli bir tümör içinde farklı hücre tipleri arasında ilgi veya etkileşim tedavilerin terapötik etkinliğini değerlendirmek için kullanılabilir.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

Coculture Tahliller Glioblastoma Invasion Makrofaj ve Mikroglia Stimülasyon Eğitim için

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

<em&gt; Drosophila</em&gt; Hayali Disk Tümör Modeli: Genetik Mozaikler kullanma Gen İfade ve Tümör invazivliğinin Görselleştirme ve

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

Canlı Görüntüleme taksan dirençli Meme Kanserlerinde Mikrotubul dinamik dengesizlik Eğitim için

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Mitokondri zar potansiyeli CLIC4 nakavt kaynaklı HN4 hücre Apoptosis Vitro çalışma tespiti

Depletion of the mitochondrial membrane potential (MMP, &#916;&#936;m) is considered the earliest event in the apoptotic cascade. It even occurs ahead of ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

Vivo EPR pH, pO2, Redox durumu ve fosfat konsantrasyonları ve glutatyon tümör Microenvironment olarak değerlendirilmesi

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Tümör metastazı çalışmaya acellular ve hücresel akciğer modeli

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Jinekolojik ve Meme Kanseri Tümörlerinden Kanser Kök Hücre Kürelerinin Alınması

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

Fare Böbreği ve Tavuk Koryoallantoik Membranda Kurulan Metastatik Berrak Hücreli Renal Hücreli Karsinom Modelinin Karşılaştırılması

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

4T1 Meme Kanseri Modelinde Akciğer Metastazının Nicelleştirilmesini Geliştirmek Için Bilgisayar Tabanlı Görüntü Analizinin Kullanılması

Breast cancer is a devastating malignancy, accounting for 40,000 female deaths and 30% of new female cancer diagnoses in the United States in 2019 alone. ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

Hızlı ve Nicel Intravital Chick Chorioallantoic Membran Modeli Kullanılarak Metastatik Regülatörlerin Keşfi

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...