Name: identifying inhibitors of the hbx-ddb1 interaction using a split luciferase assay system
Uploaded: 2019-12-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af støtte fra ministeriet for uddannelse, kultur, sport, videnskab og teknologi, Japan (#19H03430 og #17K09405 til M.O., og #19J11829 til K.S.), ved hjælp af støtte til videnskabelig forskning i innovative områder (#18H05024 til M.O.), af forskningsprogrammet om hepatitis fra Japan agentur for medicinsk forskning og udvikling, AMED (til M.O., #JP19fk021005), ved program om innovativ udvikling og anvendelse af nye lægemidler til hepatitis B (#JP19fk0310102 til K.K.) fra AMED, ved tilskud fra Japan Foundation for Applied Enzymology og fra Kobayashi Foundation for Cancer Research (til M.O.), af GSK Japan Research Grant 2018 (til K.S.), og af et stipendium fra Miyakawa Memorial Research Foundation (til K.S.).

Bemærk: en skematisk gengivelse af den opdelte der-analyse er vist i figur 1A, og analyseprocessen er skitseret i figur 1B. Interaktions dynamikken kan måles i realtid uden cellelyse.
1. klargøring af celler
<ol><li>Vedligehold dyrkede HEK293T celler i Dulbecco's modificerede Eagle's medium (DMEM) suppleret med 10% v/v føtal bovin serum (FBS), 1x penicillin/streptomycin ved 37 ?...

<ol>
	<li>Tang, L. S. Y., Covert, E., Wilson, E., Kottilil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+hepatitis+B+infection:+a+review.">Chronic hepatitis B infection: a review.</a> The Journal of the American Medical Association. 319, 1802-1813 (2018).</li><li>Sekiba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+pathogenesis:+Fresh+insights+into+hepatitis+B+virus+RNA.">Hepatitis B virus pathogenesis: Fresh insights into hepatitis B virus RNA.</a> World Journal of Gastroenterology. 24, 2261-2268 (2018).</li><li>Slagle, B. L., Bouchard, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+X+and+regulation+of+viral+gene+expression.">Hepatitis B virus X and regulation of viral gene expression.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 6, a021402 (2016).</li><li>Murphy, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+Virus+X+Protein+Promotes+Degradation+of+SMC5/6+to+Enhance+HBV+Replication.">Hepatitis B Virus X Protein Promotes Degradation of SMC5/6 to Enhance HBV Replication.</a> Cell Reports. 16, 2846-2854 (2016).</li><li>Decorsi&#232;re, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+X+protein+identifies+the+Smc5/6+complex+as+a+host+restriction+factor.">Hepatitis B virus X protein identifies the Smc5/6 complex as a host restriction factor.</a> Nature. 531, 386-389 (2016).</li><li>Niu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Smc5/6+complex+restricts+HBV+when+localized+to+ND10+without+inducing+an+innate+immune+response+and+is+counteracted+by+the+HBV+X+protein+shortly+after+infection.">The Smc5/6 complex restricts HBV when localized to ND10 without inducing an innate immune response and is counteracted by the HBV X protein shortly after infection.</a> PLoS One. 12, e0169648 (2017).</li><li>Sekiba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+HBV+Transcription+From+cccDNA+With+Nitazoxanide+by+Targeting+the+HBx-DDB1+Interaction.">Inhibition of HBV Transcription From cccDNA With Nitazoxanide by Targeting the HBx-DDB1 Interaction.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 7, 297-312 (2019).</li><li>Eggers, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NanoLuc+Complementation+Reporter+Optimized+for+Accurate+Measurement+of+Protein+Interactions+in+Cells.">NanoLuc Complementation Reporter Optimized for Accurate Measurement of Protein Interactions in Cells.</a> ACS Chemical Biology. 11, 400-408 (2015).</li><li>Zhang, J. H., Chung, T. D. Y., Oldenburg, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+statistical+parameter+for+use+in+evaluation+and+validation+of+high+throughput+screening+assays.">A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high throughput screening assays.</a> Journal of Biomolecular Screening. 4, 67-73 (1999).</li><li>Rao, V. S., Srinivas, K., Sujini, G. N., Kumar, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-protein+interaction+detection:+Methods+and+analysis.">Protein-protein interaction detection: Methods and analysis.</a> International Journal of Proteomics. 2014. 2014, 147648 (2014).</li><li>Michael, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Robotic+Platform+for+Quantitative+High-Throughput+Screening.">A Robotic Platform for Quantitative High-Throughput Screening.</a> ASSAY and Drug Development Technologies. 6, 637-657 (2008).</li><li>Skwarczynska, M., Ottmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-protein+interactions+as+drug+targets.">Protein-protein interactions as drug targets.</a> Future Medicinal Chemistry. 7, 2195-2219 (2015).</li><li>de Chassey, B., Meyniel-Schicklin, L., Vonderscher, J., Andr&#233;, P., Lotteau, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-host+interactomics:+New+insights+and+opportunities+for+antiviral+drug+discovery.">Virus-host interactomics: New insights and opportunities for antiviral drug discovery.</a> Genome Medicine. 6, 115 (2014).</li><li>Prasad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-Host+Interactions:+New+Insights+and+Advances+in+Drug+Development+Against+Viral+Pathogens.">Virus-Host Interactions: New Insights and Advances in Drug Development Against Viral Pathogens.</a> Current Drug Metabolism. 18, 942-970 (2017).</li></ol>

Vi udviklede en bekvem screeningmetode ved hjælp af en split der assay til at finde HBX-DDB1 binding hæmmere. Interaktions dynamikken kan påvises i realtid i levende celler uden behov for cellelyse. Hæmning af HBx-DDB1-interaktionen fører til genoprettelse af Smc5/6, hvilket resulterer i undertrykkelse af viral transkriptionen, protein ekspression og cccDNA-produktion7. Denne nye mekanisme for antiviral handling kan overvinde utilstrækkeligheden af nuværende HBV-terapier.
<p class="jove...

Hepatitis B-virus (HBV) infektion er et stort folkesundhedsproblem på verdensplan, med årlige estimater af 240.000.000 mennesker kronisk inficeret med HBV og 90.000 dødsfald på grund af komplikationer fra infektionen, herunder cirrose og hepatocellulære karcinom (HCC)1. Selv om de nuværende anti-HBV terapeutiske midler, nucleos (t) ide analoger, tilstrækkeligt hæmmer viral reverse transkription, de sjældent opnå eliminering af virale proteiner, som er det langsigtede kliniske mål. Deres ringe virkning på udskillelsen af virus protein skyldes deres manglende direkte virkning på viral transskription fra episomal viral kovalent lukket cirkulært DNA (cccdna) minichromosomes i hepatocyt Nucleus2.
HBV transskription aktiveres af HBV Regulatory X (HBx) protein3. Nylige undersøgelser afslørede, at HBX nedbryder strukturel vedligeholdelse af kromosomer 5/6 (Smc5/6), en værts begrænsnings faktor, der blokerer HBV-transkriptionen fra cccdna, via kapring af et DDB1-CUL4-ROC1 E3 ubiquitin ubiquitinligase-kompleks4,5,6. Derfor menes et afgørende skridt i at fremme viral transskription fra cccDNA at være HBx-DDB1 interaktion. Forbindelser, der kan hæmme bindingen mellem HBx og DDB1, blokerer viral transkriptionen, og nitazoxid blev faktisk identificeret som en hæmmer af HBx-DDB1-interaktionen via et screeningssystem, der er udviklet i vores laboratorium7.
Her præsenterer vi vores bekvemme screening system, der anvendes til at identificere hæmmere af HBX-DDB1 interaktion, som udnytter en split der komplementær assay7,8. Split der-under enheder er smeltet til HBX og DDB1, og HBX-DDB1-interaktionen bringer underenhederne i umiddelbar nærhed til at danne et funktionelt enzym, der genererer et klart luminescerende signal. Da interaktionen mellem underenhederne er reversibel, kan dette system detektere hurtigt dissocierende HBx-DDB1 proteiner (figur 1). Ved hjælp af dette system, kan en stor sammensatte bibliotek let screenes, hvilket kan resultere i opdagelsen af nye forbindelser, der er i stand til effektivt at hæmme HBx-DDB1 interaktion.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell culture microplate, 96 well, PS, F-BOTTOM</td>
			<td>Greiner-Bio-One GmbH</td>
			<td>655098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D6046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Tocris Bioscience</td>
			<td>3176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Effectene transfection reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>301425</td>
			<td>Includes DNA-condensation buffer, enhancer solution and transfection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Nichirei</td>
			<td>175012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GloMax 96 microplate luminometer</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E6521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBx&#8211;LgBit expressing DNA plasmid</td>
			<td>Our laboratory</td>
			<td></td>
			<td>Available upon request</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T cells</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-11268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoBiT PPI starter systems</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2015</td>
			<td>Includes Nano-Glo Live Cell Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11058021</td>
			<td>Described as &#34;buffered cell culture medium&#34; in the manuscript</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Takara</td>
			<td>T900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screen-Well FDA-approved drug library V2 version 1.0</td>
			<td>Enzo Life Sciences</td>
			<td>BML-2841</td>
			<td>Compounds used here were as follows: mequinol, mercaptopurine hydrate, mesna, mestranol, metaproterenol hemisulfate, metaraminol bitartrate, metaxalone, methacholine chloride, methazolamide, methenamine hippurate, methocarbamol, methotrexate, methoxsalen, methscopolamine bromide, methsuximide, methyclothiazide, methyl aminolevulinate&#183;HCl, methylergonovine maleate, metolazone, metyrapone, mexiletine&#183;HCl, micafungin, miconazole, midodrine&#183;HCl, miglitol, milnacipran&#183;HCl, mirtazapine, mitotane, moexipril&#183;HCl, mometasone furoate, mupirocin, nadolol, nafcillin&#183;Na, naftifine&#183;HCl, naratriptan&#183;HCl, natamycin, nebivolol&#183;HCl, nelarabine, nepafenac, nevirapine, niacin, nicotine, nilotinib, nilutamide, nitazoxanide, nitisinone, nitrofurantoin, nizatidine, nortriptyline&#183;HCl, olsalazine&#183;Na, orlistat, oxaprozin, oxtriphylline, oxybutynin Chloride, oxytetracycline&#183;HCl, paliperidone, palonosetron&#183;HCl, paromomycin sulfate, pazopanib&#183;HCl, pemetrexed disodium, pemirolast potassium, penicillamine, penicillin G potassium, pentamidine isethionate, pentostatin, perindopril erbumine, permethrin, perphenazine, phenelzine sulfate, phenylephrine, phytonadione, pimecrolimus, pitavastatin calcium, and podofilox</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SmBit&#8211;DDB1 expressing DNA plasmid</td>
			<td>Our laboratory</td>
			<td></td>
			<td>Available upon request</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identifying inhibitors of the hbx-ddb1 interaction using a split luciferase assay system

Der er et presserende behov for nye terapeutiske midler til hepatitis B virus (HBV) infektion. Selv om de aktuelt tilgængelige nucleos (t) ide-analogere hæmmer viral replikation, har de ingen direkte virkning på ekspression af virale proteiner, der er transkriberet fra et viral, kovalent lukket cirkulært DNA (cccDNA). Da høj viral antigen belastning kan spille en rolle i denne kroniske og HBV-relaterede carcinogenese, er målet med HBV behandling at udrydde virale proteiner. HBV Regulatory protein X (HBx) binder til Host DNA Damage-bindende protein 1 (DDB1) protein til at forringe strukturel vedligeholdelse af kromosomer 5/6 (Smc5/6), hvilket resulterer i aktivering af viral transkription fra cccDNA. Her, ved hjælp af en split der komplementering assay system, præsenterer vi en omfattende sammensatte screening system til at identificere hæmmere af HBX-DDB1 interaktion. Vores protokol gør det nemt at opdage interaktions dynamik i realtid i levende celler. Denne teknik kan blive en vigtig analyse for at opdage nye terapeutiske midler til behandling af HBV-infektion.

Repræsentative resultater efter anvendelsen af denne protokol er vist i figur 2A, B. Forholdet mellem signal og baggrund var større end 80, og Z ' faktor9 (det gyldne standard kvalitetsindeks for screening med høj gennemløb) var større end 0,5, hvilket indikerer, at dette analyse system var acceptabelt for screening med høj gennemløb. Med tærsklen sat til > 40% hæmning sammenlignet med kontrol (DMSO kun), iden...

Watch this Scientific Journal Video about Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System at JoVE.com

Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System

Her præsenterer vi en metode til screening anti-hepatitis B viral agenter, der hæmmer HBX-DDB1 interaktion ved hjælp af en split der assay system. Dette system giver mulighed for nem påvisning af protein-protein interaktioner og er egnet til at identificere hæmmere af sådanne interaktioner.

Identificering af hæmmere af HBx-DDB1-interaktionen ved hjælp af et split luciferase-analyse system

There is an urgent need for novel therapeutic agents for hepatitis B virus (HBV) infection. Although currently available nucleos(t)ide analogs potently ...

HBX-DDB1-interaktionen er et afgørende skridt til at fremme HPV-transskription fra cccDNA, så denne protokol kan blive et vigtigt aktiv for at opdage nye terapeutiske midler til HPV-funktionær. Vores procedure er enkel og kræver kun kort tid til at screene. Den interaktion, som jeg blander, kan detekteres i realtid uden at kræve cellelysis.Desuden er screeningkvaliteten tilfredsstillende med en høj Z-prime score. Hæmning af HBX-DDB1 interaktion fører til restaurering af Smc5/6, hvilket resulterer i undertrykkelse af HPV transskription, protein udtryk, og cccDNA produktion. Denne nye mekanisme for antiviral handling kan overvinde manglerne ved de nuværende HPV-behandlinger.Protein-protein interaktioner er vigtige klasse af narkotika mål. Den split-luciferase-baserede syre beskrevet her, som er rettet mod samspillet mellem viral og hasS proteiner, kan give en ny strategi for at udvikle helbredelsesmetoder for andre smitsomme sygdomme. Selvom vores protokol er enkel og let at forstå, kan nogle trin være svære at reproducere uden den visuelle demonstration.Således vil den visuelle demonstration være en stor hjælp til at forstå vores protokol. Begynd med at så fem gange 10 til 5th HEK293T celler i en 100 millimeter skål med 10 milliliter DMEM, og inkubere dem natten over ved 37 grader celsius. Den næste dag fortyndes et mikrogram hver af HBx-LgBit og SmBit-DDB1, der udtrykker DNA-plasmider og DNA-kondensbuffer for et samlet volumen på 300 mikroliter.Tilføj 16 mikroliter af forstærker opløsning, og bland rørene ved vortexing i et sekund. Prøven inkuberes ved stuetemperatur i tre minutter, og der tilsættes derefter 60 mikroliter refektionsreage. Vortex røret i 10 sekunder, og inkuber prøven i yderligere otte minutter.I mellemtiden aspirere mediet fra skålen med cellerne og vask dem med fem milliliter PVS. Aspirere PVS og tilsæt syv milliliter DMEM. Tilføj tre milliliter DMEM til røret med transfektionskomplekser, pipette op og ned for at blande, og tilsæt blandingen til cellerne.Derefter inkuberes cellerne ved 37 grader celsius og fem procent kuldioxid i 10 timer. Efter inkubationen fjernes brugt kulturmedium og cellerne vaskes med fem milliliter PVS. Fjern PVS på en milliliter på 0,25% trypsin EDTA, og inkuber cellerne ved 37 grader celsius for at frigøre dem.Dernæst tilsættes fire milliliter DMEM, og sprede mediet ved pipettering det over overfladen af cellelaget flere gange, og overføre suspensionen til et rør. Centrifuge cellerne ved 500 gange G i fem minutter, derefter kassere supernatant, og re-suspendere cellen pellet i en milliliter PVS. Gentag cetrifugeationen, og kassér supernatanten.Derefter re-suspendere celle pellet med buffercellekultur medium suppleret med 10% FBS til en såning tæthed på en million celler pr milliliter. Pipette 50 mikroliter af cellesuspensionen i hver brønd af en 96-brøndplade, og returnere cellerne til 37-graders-celsius-inkubatoren i 10 timer. Mens cellerne inkuberes, fortyndes screeningforbindelserne og opløsningsmidlet til 13,5 X koncentration.Tilsæt 12,5 mikroliter af selvlysende substrat til hver brønd, og inkuber pladen i fem minutter ved stuetemperatur. Mål baseline luminescens med et luminometer, og tilsæt fem mikroliter af forbindelserne og kontrolleret DMSO til hver godt umiddelbart efter. Mål luminescens hver 30 minutter i to timer, derefter beregne hæmmende virkninger af forbindelserne i forhold til DMSO behandling.Baseline luminescenssignaler blev målt, og signal-til-baggrund-forholdet blev beregnet til at være større end 80. Z prime var større end 0,5, hvilket indikerer, at dette analysesystem er acceptabelt for screening med høj kapacitet. Ved at fastsætte tærsklen til større end 40% hæmning i forhold til DMSO-only kontrol, nitazoxanid blev identificeret som en kandidat stof.Vi har tidligere identificeret nitazoxanide som en hæmmer af HBX-DDB1 interaktion ved at screene en reaktivitet lille sammensatte bibliotek med denne metode. Ved hjælp af nitazoxanid bekræfter vi, at hæmning af HBX-DDB1-interaktionen, denne reduktion af viral transskription og efterfølgende virale produktniveauer. Den optimale del af den opdelte luciferase, der er smeltet til et målprotein, skal bestemmes på forhånd.I dette tilfælde smeltede HPX til Large Bit ved C-endestationen HPX og DDB1, der smeltede til Small Bit ved slutperioden for DDB1, gav de bedste resultater.

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Eksperimentel Generering af Carcinoma-associerede fibroblaster (cafeer) fra Human brystkirtler fibroblaster

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Utilizing Transcranial Magnetic Stimulation to Study the Human Neuromuscular System

Utilizing Transcranial magnetisk stimulation til at studere menneskelige neuromuskulære system

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been in use for more than 20 years 1, and has grown exponentially in popularity over the past decade.  While ...

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Anvendelse af dyremodel af Sepsis at evaluere Nye Naturlægemidler Terapier

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Intraoperative Detection of Subtle Endometriosis: A Novel Paradigm for Detection and Treatment of Pelvic Pain Associated with the Loss of Peritoneal Integrity

Intraoperativ Påvisning af Subtle Endometriose: et nyt paradigme for påvisning og behandling af bækkensmerter forbundet med tab af Peritoneal Integrity

Endometriosis is a  common disease affecting 40 to 70% of reproductive-aged women with chronic  pelvic pain (CPP) and/or infertility. The purpose of this ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Tre-dimensionel Co-kultur Model for Tumor-stromale Interaktion

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Tre-Dimensional (3D) Tumor Sfæroide Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Utilization of the Soft Agar Colony Formation Assay to Identify Inhibitors of Tumorigenicity in Breast Cancer Cells

Udnyttelse af blød agar Colony Formation Assay til at identificere inhibitorer for tumorgenicitet for Breast Cancer Cells

Given the inherent difficulties in investigating the mechanisms of tumor progression in vivo, cell-based assays such as the soft agar colony formation ...

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the "RE:fine Drugs" System

Drug nyorientering Hypotese Generation Brug af &quot;RE: fine Drugs&quot; System

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The ...

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Pilocarpin Model af frontal-lap epilepsi og EEG overvågning ved hjælp af Radiotelemetry System i mus

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...