Name: identifying inhibitors of the hbx-ddb1 interaction using a split luciferase assay system
Uploaded: 2019-12-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door subsidie-in-hulp van het ministerie van onderwijs, cultuur, sport, wetenschap en technologie, Japan (#19H03430 en #17K09405 tot M.O., en #19J11829 aan K.S.), door middel van een subsidie voor wetenschappelijk onderzoek op innovatieve gebieden (#18H05024 to M.O.), door het onderzoeksprogramma over hepatitis van het Agentschap voor medisch onderzoek en ontwikkeling van Japan, AMED (naar M.O., #JP19fk021005), door programma voor de innovatieve ontwikkeling en de toepassing van nieuwe geneesmiddelen voor hepatitis B (#JP19fk0310102 tot K.K.) van AMED, door subsidies van de Japan Foundation for Applied enzymologie en van de Kobayashi Foundation for Cancer Research (to M.O.), door GSK Japan Research Grant 2018 (naar K.S.), en door een subsidie van de Miyakawa Memorial Research Foundation (aan K.S.).

Opmerking: een schematische weergave van de gesplitste plaats test wordt weergegeven in Figuur 1Aen het testproces wordt beschreven in Figuur 1B. De interactie dynamiek kan in real-time worden gemeten zonder cellysis.
1. voorbereiding van de cel
<ol><li>Onderhouden van gekweekte HEK293T cellen in Dulbecco's gemodificeerde Eagle's medium (DMEM) aangevuld met 10% v/v foetaal runderser...

<ol>
	<li>Tang, L. S. Y., Covert, E., Wilson, E., Kottilil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+hepatitis+B+infection:+a+review.">Chronic hepatitis B infection: a review.</a> The Journal of the American Medical Association. 319, 1802-1813 (2018).</li><li>Sekiba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+pathogenesis:+Fresh+insights+into+hepatitis+B+virus+RNA.">Hepatitis B virus pathogenesis: Fresh insights into hepatitis B virus RNA.</a> World Journal of Gastroenterology. 24, 2261-2268 (2018).</li><li>Slagle, B. L., Bouchard, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+X+and+regulation+of+viral+gene+expression.">Hepatitis B virus X and regulation of viral gene expression.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 6, a021402 (2016).</li><li>Murphy, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+Virus+X+Protein+Promotes+Degradation+of+SMC5/6+to+Enhance+HBV+Replication.">Hepatitis B Virus X Protein Promotes Degradation of SMC5/6 to Enhance HBV Replication.</a> Cell Reports. 16, 2846-2854 (2016).</li><li>Decorsi&#232;re, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+X+protein+identifies+the+Smc5/6+complex+as+a+host+restriction+factor.">Hepatitis B virus X protein identifies the Smc5/6 complex as a host restriction factor.</a> Nature. 531, 386-389 (2016).</li><li>Niu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Smc5/6+complex+restricts+HBV+when+localized+to+ND10+without+inducing+an+innate+immune+response+and+is+counteracted+by+the+HBV+X+protein+shortly+after+infection.">The Smc5/6 complex restricts HBV when localized to ND10 without inducing an innate immune response and is counteracted by the HBV X protein shortly after infection.</a> PLoS One. 12, e0169648 (2017).</li><li>Sekiba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+HBV+Transcription+From+cccDNA+With+Nitazoxanide+by+Targeting+the+HBx-DDB1+Interaction.">Inhibition of HBV Transcription From cccDNA With Nitazoxanide by Targeting the HBx-DDB1 Interaction.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 7, 297-312 (2019).</li><li>Eggers, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NanoLuc+Complementation+Reporter+Optimized+for+Accurate+Measurement+of+Protein+Interactions+in+Cells.">NanoLuc Complementation Reporter Optimized for Accurate Measurement of Protein Interactions in Cells.</a> ACS Chemical Biology. 11, 400-408 (2015).</li><li>Zhang, J. H., Chung, T. D. Y., Oldenburg, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+statistical+parameter+for+use+in+evaluation+and+validation+of+high+throughput+screening+assays.">A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high throughput screening assays.</a> Journal of Biomolecular Screening. 4, 67-73 (1999).</li><li>Rao, V. S., Srinivas, K., Sujini, G. N., Kumar, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-protein+interaction+detection:+Methods+and+analysis.">Protein-protein interaction detection: Methods and analysis.</a> International Journal of Proteomics. 2014. 2014, 147648 (2014).</li><li>Michael, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Robotic+Platform+for+Quantitative+High-Throughput+Screening.">A Robotic Platform for Quantitative High-Throughput Screening.</a> ASSAY and Drug Development Technologies. 6, 637-657 (2008).</li><li>Skwarczynska, M., Ottmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-protein+interactions+as+drug+targets.">Protein-protein interactions as drug targets.</a> Future Medicinal Chemistry. 7, 2195-2219 (2015).</li><li>de Chassey, B., Meyniel-Schicklin, L., Vonderscher, J., Andr&#233;, P., Lotteau, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-host+interactomics:+New+insights+and+opportunities+for+antiviral+drug+discovery.">Virus-host interactomics: New insights and opportunities for antiviral drug discovery.</a> Genome Medicine. 6, 115 (2014).</li><li>Prasad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-Host+Interactions:+New+Insights+and+Advances+in+Drug+Development+Against+Viral+Pathogens.">Virus-Host Interactions: New Insights and Advances in Drug Development Against Viral Pathogens.</a> Current Drug Metabolism. 18, 942-970 (2017).</li></ol>

We ontwikkelden een handige screeningsmethode met behulp van een split plaats assay om HBX-DDB1 BIND remmers te vinden. De interactie dynamiek kan worden gedetecteerd in real-time in levende cellen zonder de noodzaak voor cel lysis. Remming van de HBx-DDB1 interactie leidt tot herstel van Smc5/6, wat resulteert in onderdrukking van virale transcriptie, eiwit expressie, en cccDNA productie7. Dit nieuwe mechanisme van antivirale actie kan de tekortkomingen van de huidige HBV-therapieën overwinnen.<...

Infectie met het hepatitis B-virus (HBV) is wereldwijd een belangrijk volksgezondheidsprobleem, met jaarlijkse schattingen van 240.000.000 mensen die chronisch zijn geïnfecteerd met HBV en 90.000 sterfgevallen als gevolg van complicaties van de infectie, waaronder cirrose en hepatocellulair carcinoom (HCC)1. Hoewel de huidige anti-HBV therapeutische middelen, nucleos (t) IDE analogen, voldoende remmen virale omgekeerde transcriptie, ze zelden bereiken eliminatie van virale eiwitten, dat is de lange termijn klinische doelstelling. Hun slechte effect op de eliminatie van virale eiwitten is te wijten aan hun gebrek aan direct effect op virale transcriptie van episomale virale covalent gesloten circulair DNA (cccdna) minichromosomen in de hepatocyte Nucleus2.
HBV transcriptie wordt geactiveerd door HBV Regulatory X (HBx) Protein3. Recente studies toonden aan dat HBX structureel onderhoud van chromosomen degradeert 5/6 (Smc5/6), een hostbeperkings factor die HBV-transcriptie van cccdna blokkeert, via het hijacken van een DDB1-CUL4-ROC1 E3 ubiquitine ligase complex4,5,6. Daarom, een cruciale stap in het bevorderen van virale transcriptie van cccDNA wordt beschouwd als de HBx-DDB1 interactie. Verbindingen die kunnen remmen de binding tussen HBx en DDB1 kan virale transcriptie blokkeren, en inderdaad nitazoxanide werd geïdentificeerd als een remmer van de HBx-DDB1 interactie via een screeningsysteem ontwikkeld in ons laboratorium7.
Hier presenteren we ons handige screeningsysteem dat wordt gebruikt om remmers van de HBX-DDB1-interactie te identificeren, die gebruik maakt van een gesplitste plaats-Complementaire assay7,8. Split plaats subeenheden zijn samengesmolten naar HBX en DDB1, en de HBX-DDB1 interactie brengt de subeenheden in de nabijheid van een functioneel enzym dat een heldere lichtgevende signaal genereert vormen. Aangezien de interactie tussen de subeenheden omkeerbaar is, kan dit systeem snel dissocierende HBx-DDB1 eiwitten detecteren (Figuur 1). Met behulp van dit systeem, een grote samengestelde bibliotheek kan gemakkelijk worden gescreend, wat kan resulteren in de ontdekking van nieuwe verbindingen geschikt voor het efficiënt remmen van de HBx-DDB1 interactie.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell culture microplate, 96 well, PS, F-BOTTOM</td>
			<td>Greiner-Bio-One GmbH</td>
			<td>655098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D6046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Tocris Bioscience</td>
			<td>3176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Effectene transfection reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>301425</td>
			<td>Includes DNA-condensation buffer, enhancer solution and transfection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Nichirei</td>
			<td>175012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GloMax 96 microplate luminometer</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E6521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBx&#8211;LgBit expressing DNA plasmid</td>
			<td>Our laboratory</td>
			<td></td>
			<td>Available upon request</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T cells</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-11268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoBiT PPI starter systems</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2015</td>
			<td>Includes Nano-Glo Live Cell Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11058021</td>
			<td>Described as &#34;buffered cell culture medium&#34; in the manuscript</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Takara</td>
			<td>T900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screen-Well FDA-approved drug library V2 version 1.0</td>
			<td>Enzo Life Sciences</td>
			<td>BML-2841</td>
			<td>Compounds used here were as follows: mequinol, mercaptopurine hydrate, mesna, mestranol, metaproterenol hemisulfate, metaraminol bitartrate, metaxalone, methacholine chloride, methazolamide, methenamine hippurate, methocarbamol, methotrexate, methoxsalen, methscopolamine bromide, methsuximide, methyclothiazide, methyl aminolevulinate&#183;HCl, methylergonovine maleate, metolazone, metyrapone, mexiletine&#183;HCl, micafungin, miconazole, midodrine&#183;HCl, miglitol, milnacipran&#183;HCl, mirtazapine, mitotane, moexipril&#183;HCl, mometasone furoate, mupirocin, nadolol, nafcillin&#183;Na, naftifine&#183;HCl, naratriptan&#183;HCl, natamycin, nebivolol&#183;HCl, nelarabine, nepafenac, nevirapine, niacin, nicotine, nilotinib, nilutamide, nitazoxanide, nitisinone, nitrofurantoin, nizatidine, nortriptyline&#183;HCl, olsalazine&#183;Na, orlistat, oxaprozin, oxtriphylline, oxybutynin Chloride, oxytetracycline&#183;HCl, paliperidone, palonosetron&#183;HCl, paromomycin sulfate, pazopanib&#183;HCl, pemetrexed disodium, pemirolast potassium, penicillamine, penicillin G potassium, pentamidine isethionate, pentostatin, perindopril erbumine, permethrin, perphenazine, phenelzine sulfate, phenylephrine, phytonadione, pimecrolimus, pitavastatin calcium, and podofilox</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SmBit&#8211;DDB1 expressing DNA plasmid</td>
			<td>Our laboratory</td>
			<td></td>
			<td>Available upon request</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identifying inhibitors of the hbx-ddb1 interaction using a split luciferase assay system

Er is dringend behoefte aan nieuwe therapeutische middelen voor infectie met het hepatitis B-virus (HBV). Hoewel momenteel beschikbare nucleos (t) IDE-analogen krachtig de virale replicatie remmen, hebben ze geen direct effect op de expressie van virale eiwitten die zijn getranscribeerd uit een virale covalent gesloten circulair DNA (cccDNA). Aangezien hoge virale antigeen belasting een rol kan spelen bij deze chronische en HBV-gerelateerde carcinogenese, is het doel van de behandeling met HBV om virale eiwitten uit te roeien. HBV regulerend proteïne X (HBx) bindt aan het host DNA damage-binding Protein 1 (DDB1) eiwit om structureel onderhoud van chromosomen 5/6 (Smc5/6) te degraderen, wat resulteert in activatie van virale transcriptie van cccDNA. Hier, met behulp van een split plaats complementatie assay systeem, presenteren we een uitgebreide samengestelde screeningsysteem om remmers van de HBX-DDB1 interactie identificeren. Ons protocol zorgt voor een eenvoudige detectie van interactie dynamiek in real-time binnen levende cellen. Deze techniek kan een belangrijke test worden om nieuwe therapeutische middelen te ontdekken voor de behandeling van HBV-infectie.

Representatieve uitkomsten na het gebruik van dit protocol worden weergegeven in Figuur 2A, B. De signaal-naar-achtergrond ratio was groter dan 80 en de Z ' factor9 (de Gold Standard Quality index voor high-throughput screening) was groter dan 0,5, wat erop duidt dat dit testsysteem acceptabel was voor screening met hoge doorvoer. Met de drempelwaarde ingesteld op > 40% remming in vergelijking met de controle (DMSO all...

Watch this Scientific Journal Video about Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System at JoVE.com

Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System

Hier presenteren we een methode voor het screenen van anti-hepatitis B-virale middelen die de HBX-DDB1-interactie remmen met behulp van een split plaats-testsysteem. Dit systeem maakt een eenvoudige detectie van eiwit-eiwit interacties mogelijk en is geschikt voor het identificeren van remmers van dergelijke interacties.

Identificeren van remmers van de HBx-DDB1 interactie met behulp van een split Luciferase assay systeem

There is an urgent need for novel therapeutic agents for hepatitis B virus (HBV) infection. Although currently available nucleos(t)ide analogs potently ...

De HBX-DDB1-interactie is een cruciale stap voor het bevorderen van HPV-transcriptie van cccDNA, dus dit protocol kan een belangrijke troef worden om nieuwe therapeutische middelen voor HPV-functionele genezing te ontdekken. Onze procedure is eenvoudig en vereist slechts een korte tijd om te screenen. De interactie die ik meng kan in real-time worden gedetecteerd zonder dat er een cellyse nodig is.Bovendien is de screening kwaliteit bevredigend met een hoge Z prime score. Remming van de HBX-DDB1-interactie leidt tot herstel van Smc5/6, wat resulteert in onderdrukking van HPV-transcriptie, eiwitexpressie en cccDNA-productie. Dit nieuwe mechanisme van antivirale werking kan de tekortkomingen van de huidige HPV-therapieën overwinnen.Eiwit-eiwit interacties zijn belangrijke klasse van geneesmiddelen doelen. Het hier beschreven split-luciferase-gebaseerde zuur, dat zich richt op de interacties tussen virale en hasS-eiwitten, kan een nieuwe strategie bieden om behandelingen voor andere infectieziekten te ontwikkelen. Hoewel ons protocol eenvoudig en gemakkelijk te begrijpen is, kunnen sommige stappen moeilijk te reproduceren zijn zonder de visuele demonstratie.Zo zal de visuele demonstratie een grote hulp zijn om ons protocol te begrijpen. Begin met het zaaien van vijf keer 10 tot de 5e HEK293T cellen in een 100 millimeter schotel met 10 milliliter DMEM, en uitbroeden ze 's nachts op 37 graden Celsius. Verdun de volgende dag elk van HBx-LgBit en SmBit-DDB1 een microgram en geeft DNA-plasmiden en DNA-condensatiebuffer af voor een totaal volume van 300 microliters.Voeg 16 microliter versterker oplossing, en meng de buizen door vortexing voor een seconde. Incubeer het monster drie minuten op kamertemperatuur en voeg vervolgens 60 microliter transfectiereagens. Vortex de buis voor 10 seconden, en incubeer het monster voor nog eens acht minuten.Ondertussen, aspirate het medium uit de schotel met de cellen en was ze met vijf milliliter PVS. Aspirate de PVS en voeg zeven milliliter DMEM. Voeg drie milliliter DMEM aan de buis met de transfectie complexen, pipet op en neer te mengen, en voeg het mengsel aan de cellen.Dan, incubeer de cellen op 37 graden Celsius en vijf procent kooldioxide voor 10 uur. Na de incubatie, verwijder de gebruikte cultuurmedium, en was de cellen met vijf milliliter PVS. Verwijder de PVS op een milliliter van 0,25% trypsin EDTA, en broeden de cellen op 37 graden Celsius om ze los te maken.Voeg vervolgens vier milliliter DMEM toe en verdeel het medium door het meerdere keren over het oppervlak van de cellaag te pipetten en breng de suspensie over naar een buis. Centrifugeer de cellen op 500 keer G gedurende vijf minuten, gooi dan de supernatant, en opnieuw opschorten van de cel pellet in een milliliter PVS. Herhaal de cetrifugatie en gooi de supernatant weg.Dan, opnieuw opschorten de cel pellet met gebufferde cel cultuur medium aangevuld met 10%FBS tot een zaaien dichtheid van een miljoen cellen per milliliter. Pipette 50 microliters van de cel suspensie in elke put van een 96-put plaat, en de cellen terug te keren naar de 37-graden-celsius incubator voor 10 uur. Terwijl de cellen uitbroeden, verdun de screening verbindingen en oplosmiddel tot 13,5 X concentratie.Voeg 12,5 microliter lichtgevende substraat toe aan elke put en broed de plaat gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur uit. Meet de uitgangslumnie met een luminometer en voeg onmiddellijk daarna vijf microliter van de verbindingen en gecontroleerde DMSO toe aan elke put. Meet de luminescentie om de 30 minuten gedurende twee uur en bereken vervolgens de remmende effecten van de verbindingen in vergelijking met de DMSO-behandeling.De luminescentiesignalen van de basislijn werden gemeten en de signaal-achtergrondverhouding werd berekend om groter te zijn dan 80. De Z-priemgetal was groter dan 0,5, wat aangeeft dat dit testsysteem aanvaardbaar is voor screening met hoge doorvoer. Door de drempel te stellen op meer dan 40%-remming ten opzichte van de DMSO-only-controle, werd nitazoxanide geïdentificeerd als een kandidaat-medicijn.We identificeerden eerder nitazoxanide als een remmer van de HBX-DDB1 interactie door een reactiviteits kleinschalige samengestelde bibliotheek met deze methode te screenen. Met behulp van nitazoxanide bevestigen we dat remming van de HBX-DDB1-interactie, die vermindering van virale transcriptie en de daaropvolgende virale productniveaus. Het optimale gedeelte van de gespleten luciferase dat tot een doeleiwit wordt gesmolten, moet vooraf worden bepaald.In dit geval, HPX versmolten tot Large Bit op de C eindpunt van HPX en DDB1 gesmolten tot Small Bit aan het eindeinde eindeinde van DDB1 mits de beste resultaten.

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Experimentele Generatie van Carcinoom-geassocieerde fibroblasten (cafe&#39;s) van Human Borst fibroblasten

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Utilizing Transcranial Magnetic Stimulation to Study the Human Neuromuscular System

Gebruik te maken van Transcranial Magnetic Stimulation aan de Human neuromusculaire systeem Study

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been in use for more than 20 years 1, and has grown exponentially in popularity over the past decade.  While ...

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Het gebruik van dierlijk model van Sepsis op nieuwe kruidentherapieën Evalueer

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Intraoperative Detection of Subtle Endometriosis: A Novel Paradigm for Detection and Treatment of Pelvic Pain Associated with the Loss of Peritoneal Integrity

Intraoperatieve Detectie van Subtle endometriose: A Novel Paradigma voor opsporing en behandeling van bekkenpijn geassocieerd met het verlies van peritoneale Integriteit

Endometriosis is a  common disease affecting 40 to 70% of reproductive-aged women with chronic  pelvic pain (CPP) and/or infertility. The purpose of this ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Driedimensionale Co-cultuur Model voor Tumor-stromale Interactie

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Driedimensionale (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Utilization of the Soft Agar Colony Formation Assay to Identify Inhibitors of Tumorigenicity in Breast Cancer Cells

Gebruik van de zachte agar Colony Formation Assay aan Remmers van tumorigeniciteit in borstkankercellen Identificeer

Given the inherent difficulties in investigating the mechanisms of tumor progression in vivo, cell-based assays such as the soft agar colony formation ...

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the "RE:fine Drugs" System

Drug herbestemming Hypothese Generation Met behulp van de &quot;RE: fine Drugs&quot; System

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The ...

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Pilocarpine Model van temporale kwab epilepsie en EEG toezicht Radiotelemetry systeem met muizen

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...