Name: identifying inhibitors of the hbx-ddb1 interaction using a split luciferase assay system
Uploaded: 2019-12-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch Stipendien des Bildungsministeriums, Kultur, Sport, Wissenschaft und Technologie, Japan (#19H03430 und #17K09405 m.O., und #19J11829 an K.S.), durch ein Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (#18H05024 to M.O.), by the Research Program on Hepatitis from Japan Agency for Medical Research and Development, AMED (to M.O., #JP19fk021005), by program on the Innovative Development and the Application of New Drugs for Hepatitis B (#JP19fk0310102 to K.K.) die Japan Foundation for Applied Enzymology und von der Kobayashi Foundation for Cancer Research (to M.O.), von GSK Japan Research Grant 2018 (an K.S.) und durch ein Stipendium der Miyakawa Memorial Research Foundation (an K.S.).

ANMERKUNG: Eine schematische Darstellung des Split-Luziferase-Assays ist in Abbildung 1Adargestellt, und der Assay-Prozess ist in Abbildung 1Bdargestellt. Die Interaktionsdynamik kann in Echtzeit ohne Zelllyse gemessen werden.
1. Zellvorbereitung
<ol><li>Pflegen Sie kultivierte HEK293T-Zellen in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium (DMEM), ergänzt durch 10% v/v fetales Rinderserum ...

<ol>
	<li>Tang, L. S. Y., Covert, E., Wilson, E., Kottilil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+hepatitis+B+infection:+a+review.">Chronic hepatitis B infection: a review.</a> The Journal of the American Medical Association. 319, 1802-1813 (2018).</li><li>Sekiba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+pathogenesis:+Fresh+insights+into+hepatitis+B+virus+RNA.">Hepatitis B virus pathogenesis: Fresh insights into hepatitis B virus RNA.</a> World Journal of Gastroenterology. 24, 2261-2268 (2018).</li><li>Slagle, B. L., Bouchard, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+X+and+regulation+of+viral+gene+expression.">Hepatitis B virus X and regulation of viral gene expression.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 6, a021402 (2016).</li><li>Murphy, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+Virus+X+Protein+Promotes+Degradation+of+SMC5/6+to+Enhance+HBV+Replication.">Hepatitis B Virus X Protein Promotes Degradation of SMC5/6 to Enhance HBV Replication.</a> Cell Reports. 16, 2846-2854 (2016).</li><li>Decorsi&#232;re, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+X+protein+identifies+the+Smc5/6+complex+as+a+host+restriction+factor.">Hepatitis B virus X protein identifies the Smc5/6 complex as a host restriction factor.</a> Nature. 531, 386-389 (2016).</li><li>Niu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Smc5/6+complex+restricts+HBV+when+localized+to+ND10+without+inducing+an+innate+immune+response+and+is+counteracted+by+the+HBV+X+protein+shortly+after+infection.">The Smc5/6 complex restricts HBV when localized to ND10 without inducing an innate immune response and is counteracted by the HBV X protein shortly after infection.</a> PLoS One. 12, e0169648 (2017).</li><li>Sekiba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+HBV+Transcription+From+cccDNA+With+Nitazoxanide+by+Targeting+the+HBx-DDB1+Interaction.">Inhibition of HBV Transcription From cccDNA With Nitazoxanide by Targeting the HBx-DDB1 Interaction.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 7, 297-312 (2019).</li><li>Eggers, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NanoLuc+Complementation+Reporter+Optimized+for+Accurate+Measurement+of+Protein+Interactions+in+Cells.">NanoLuc Complementation Reporter Optimized for Accurate Measurement of Protein Interactions in Cells.</a> ACS Chemical Biology. 11, 400-408 (2015).</li><li>Zhang, J. H., Chung, T. D. Y., Oldenburg, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+statistical+parameter+for+use+in+evaluation+and+validation+of+high+throughput+screening+assays.">A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high throughput screening assays.</a> Journal of Biomolecular Screening. 4, 67-73 (1999).</li><li>Rao, V. S., Srinivas, K., Sujini, G. N., Kumar, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-protein+interaction+detection:+Methods+and+analysis.">Protein-protein interaction detection: Methods and analysis.</a> International Journal of Proteomics. 2014. 2014, 147648 (2014).</li><li>Michael, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Robotic+Platform+for+Quantitative+High-Throughput+Screening.">A Robotic Platform for Quantitative High-Throughput Screening.</a> ASSAY and Drug Development Technologies. 6, 637-657 (2008).</li><li>Skwarczynska, M., Ottmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-protein+interactions+as+drug+targets.">Protein-protein interactions as drug targets.</a> Future Medicinal Chemistry. 7, 2195-2219 (2015).</li><li>de Chassey, B., Meyniel-Schicklin, L., Vonderscher, J., Andr&#233;, P., Lotteau, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-host+interactomics:+New+insights+and+opportunities+for+antiviral+drug+discovery.">Virus-host interactomics: New insights and opportunities for antiviral drug discovery.</a> Genome Medicine. 6, 115 (2014).</li><li>Prasad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-Host+Interactions:+New+Insights+and+Advances+in+Drug+Development+Against+Viral+Pathogens.">Virus-Host Interactions: New Insights and Advances in Drug Development Against Viral Pathogens.</a> Current Drug Metabolism. 18, 942-970 (2017).</li></ol>

Wir entwickelten ein praktisches Screening-Verfahren mit einem Split-Luziferase-Assay, um HBx-DDB1-Bindungshemmer zu finden. Die Interaktionsdynamik kann in Echtzeit in lebenden Zellen ohne Zelllyse nachgewiesen werden. Die Hemmung der HBx-DDB1-Wechselwirkung führt zur Wiederherstellung von Smc5/6, was zur Unterdrückung der viralen Transkription, Proteinexpression und cccDNA-Produktion7führt. Dieser neuartige Mechanismus der antiviralen Wirkung kann die Unzulänglichkeiten der aktuellen HBV-The...

Die Hepatitis-B-Infektion (HBV) ist weltweit ein großes Problem für die öffentliche Gesundheit: Jährliche Schätzungen von 240 Millionen chronisch mit HBV infizierten Menschen und 90.000 Todesfällen aufgrund von Komplikationen durch die Infektion, einschließlich Zirrhose und Hepatozellulärem Karzinom (HCC)1. Obwohl die derzeitigen Anti-HBV-Therapeutika, Nukleos(t)ide-Analoga, die virale Reverse-Transkription ausreichend hemmen, erreichen sie selten die Eliminierung viraler Proteine, was das langfristige klinische Ziel ist. Ihre schlechte Wirkung auf die virale Proteinelimination ist auf ihre fehlende direkte Wirkung auf die virale Transkription von episomalen viralen kovalent geschlossenen kreisförmigen DNA-Minichromosomen (cccDNA) im Hepatozytenkern2zurückzuführen.
Die HBV-Transkription wird durch das HBV-regulatorische X (HBx)-Protein3aktiviert. Jüngste Studien zeigten, dass HBx die strukturelle Erhaltung der Chromosomen 5/6 (Smc5/6), ein Host-Restriktionsfaktor, der die HBV-Transkription von cccDNA blockiert, durch Entführung eines DDB1-CUL4-ROC1 E3 Ubiquitin Ligase-Komplexes4,5,6abbaut. Daher wird angenommen, dass ein entscheidender Schritt bei der Förderung der viralen Transkription von cccDNA die HBx-DDB1-Interaktion ist. Verbindungen, die die Bindung zwischen HBx und DDB1 hemmen können, können die virale Transkription blockieren, und in der Tat wurde Nitazoxanid als Inhibitor der HBx-DDB1-Wechselwirkung über ein in unseremLaborentwickeltes Screening-System 7 identifiziert.
Hier stellen wir Ihnen unser praktisches Screening-System vor, mit dem Inhibitoren der HBx-DDB1-Wechselwirkung identifiziert werden, die einen split luciferase komplementären Assay7,8verwendet. Split-Luziferase-Untereinheiten werden mit HBx und DDB1 verschmolzen, und die HBx-DDB1-Interaktion bringt die Untereinheiten in die Nähe, um ein funktionelles Enzym zu bilden, das ein helles Leuchtsignal erzeugt. Da die Wechselwirkung zwischen den Untereinheiten reversibel ist, kann dieses System schnell dissoziierende HBx-DDB1-Proteine erkennen (Abbildung 1). Mit diesem System kann eine große zusammengesetzte Bibliothek leicht überprüft werden, was zur Entdeckung neuartiger Verbindungen führen kann, die die HBx-DDB1-Interaktion effizient hemmen können.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell culture microplate, 96 well, PS, F-BOTTOM</td>
			<td>Greiner-Bio-One GmbH</td>
			<td>655098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D6046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Tocris Bioscience</td>
			<td>3176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Effectene transfection reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>301425</td>
			<td>Includes DNA-condensation buffer, enhancer solution and transfection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Nichirei</td>
			<td>175012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GloMax 96 microplate luminometer</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E6521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBx&#8211;LgBit expressing DNA plasmid</td>
			<td>Our laboratory</td>
			<td></td>
			<td>Available upon request</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T cells</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-11268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoBiT PPI starter systems</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2015</td>
			<td>Includes Nano-Glo Live Cell Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11058021</td>
			<td>Described as &#34;buffered cell culture medium&#34; in the manuscript</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Takara</td>
			<td>T900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screen-Well FDA-approved drug library V2 version 1.0</td>
			<td>Enzo Life Sciences</td>
			<td>BML-2841</td>
			<td>Compounds used here were as follows: mequinol, mercaptopurine hydrate, mesna, mestranol, metaproterenol hemisulfate, metaraminol bitartrate, metaxalone, methacholine chloride, methazolamide, methenamine hippurate, methocarbamol, methotrexate, methoxsalen, methscopolamine bromide, methsuximide, methyclothiazide, methyl aminolevulinate&#183;HCl, methylergonovine maleate, metolazone, metyrapone, mexiletine&#183;HCl, micafungin, miconazole, midodrine&#183;HCl, miglitol, milnacipran&#183;HCl, mirtazapine, mitotane, moexipril&#183;HCl, mometasone furoate, mupirocin, nadolol, nafcillin&#183;Na, naftifine&#183;HCl, naratriptan&#183;HCl, natamycin, nebivolol&#183;HCl, nelarabine, nepafenac, nevirapine, niacin, nicotine, nilotinib, nilutamide, nitazoxanide, nitisinone, nitrofurantoin, nizatidine, nortriptyline&#183;HCl, olsalazine&#183;Na, orlistat, oxaprozin, oxtriphylline, oxybutynin Chloride, oxytetracycline&#183;HCl, paliperidone, palonosetron&#183;HCl, paromomycin sulfate, pazopanib&#183;HCl, pemetrexed disodium, pemirolast potassium, penicillamine, penicillin G potassium, pentamidine isethionate, pentostatin, perindopril erbumine, permethrin, perphenazine, phenelzine sulfate, phenylephrine, phytonadione, pimecrolimus, pitavastatin calcium, and podofilox</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SmBit&#8211;DDB1 expressing DNA plasmid</td>
			<td>Our laboratory</td>
			<td></td>
			<td>Available upon request</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identifying inhibitors of the hbx-ddb1 interaction using a split luciferase assay system

Es besteht ein dringender Bedarf an neuartigen therapeutischen Wirkstoffen für die Infektion mit dem Hepatitis-B-Virus (HBV). Obwohl derzeit verfügbare Nukleos(t)ide Analoge die Virusreplikation stark hemmen, haben sie keine direkte Wirkung auf die Expression viraler Proteine, die aus einer viralen kovalent geschlossenen kreisförmigen DNA (cccDNA) transkribiert wurden. Da eine hohe virusfreie Antigenbelastung bei dieser chronischen und HBV-bedingten Karzinogenese eine Rolle spielen kann, ist das Ziel der HBV-Behandlung die Ausrottung viraler Proteine. Das HBV-Regulierungsprotein X (HBx) bindet an das an den Wirt dna schädigende Protein 1 (DDB1) Protein, um die strukturelle Erhaltung der Chromosomen 5/6 (Smc5/6) zu abbauen, was zu einer Aktivierung der viralen Transkription aus cccDNA führt. Hier präsentieren wir mit Einem Split Luciferase Complementation Assay System ein umfassendes zusammengesetztes Screening-System zur Identifizierung von Inhibitoren der HBx-DDB1-Wechselwirkung. Unser Protokoll ermöglicht eine einfache Erkennung der Interaktionsdynamik in Echtzeit in lebenden Zellen. Diese Technik kann ein wichtiger Test werden, um neue therapeutische Wirkstoffe für die Behandlung von HBV-Infektion zu entdecken.

Repräsentative Ergebnisse nach der Verwendung dieses Protokolls sind in Abbildung 2A,B dargestellt. Das Signal-Hintergrund-Verhältnis war größer als 80 und der Z-Faktor9 (der Goldstandard-Qualitätsindex für Dasperthemmierungs-Hochdurchsatz) war größer als 0,5, was darauf hindeutet, dass dieses Assay-System für das Screening mit hohem Durchsatz akzeptabel war. Mit der Schwelle auf >40% Hemmung im Vergleich zur ...

Watch this Scientific Journal Video about Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System at JoVE.com

Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System

Hier stellen wir eine Methode zum Screening von Anti-Hepatitis-B-Virusmitteln vor, die die HBx-DDB1-Wechselwirkung mit einem Split-Luziferase-Assay-System hemmen. Dieses System ermöglicht den einfachen Nachweis von Protein-Protein-Wechselwirkungen und eignet sich zur Identifizierung von Inhibitoren solcher Wechselwirkungen.

Identifizieren von Inhibitoren der HBx-DDB1-Wechselwirkung mit einem Split Luciferase Assay System

There is an urgent need for novel therapeutic agents for hepatitis B virus (HBV) infection. Although currently available nucleos(t)ide analogs potently ...

Die HBX-DDB1-Interaktion ist ein entscheidender Schritt zur Förderung der HPV-Transkription von cccDNA, so dass dieses Protokoll zu einem wichtigen Vorteil werden kann, um neue therapeutische Wirkstoffe für die HPV-Funktionshärtung zu entdecken. Unser Verfahren ist einfach und erfordert nur eine kurze Zeit zum Screenen. Die Interaktion, die ich mischen kann in Echtzeit erkannt werden, ohne dass eine Zelllyse erforderlich ist.Darüber hinaus ist die Screening-Qualität mit einer hohen Z-Primzahl zufriedenstellend. Die Hemmung der HBX-DDB1-Wechselwirkung führt zur Wiederherstellung von Smc5/6, was zur Unterdrückung der HPV-Transkription, der Proteinexpression und der cccDNA-Produktion führt. Dieser neuartige Mechanismus der antiviralen Wirkung kann die Unzulänglichkeiten der aktuellen HPV-Therapien überwinden.Protein-Protein-Wechselwirkungen sind eine wichtige Klasse von Wirkstoffzielen. Die hier beschriebene Split-Luciferase-basierte Säure, die auf die Wechselwirkungen zwischen viralen und HasS-Proteinen abzielt, kann eine neue Strategie zur Entwicklung von Heilmitteln für andere Infektionskrankheiten bieten. Obwohl unser Protokoll einfach und leicht verständlich ist, können einige Schritte ohne die visuelle Demonstration schwer reproduziert werden.Daher wird die visuelle Demonstration eine große Hilfe sein, um unser Protokoll zu verstehen. Beginnen Sie damit, fünfmal 10 bis 5. HEK293T-Zellen in eine 100-Millimeter-Schale mit 10 Milliliter DMEM zu säen und sie über Nacht bei 37 Grad Celsius zu inkubieren. Verdünnen Sie am nächsten Tag jeweils ein Mikrogramm von HBx-LgBit und SmBit-DDB1, das DNA-Plasmide und DNA-Kondensationspuffer für ein Gesamtvolumen von 300 Mikrolitern ausdrückt.Fügen Sie 16 Mikroliter Enhancer-Lösung hinzu und mischen Sie die Rohre durch Wirbeln für eine Sekunde. Inkubieren Sie die Probe bei Raumtemperatur für drei Minuten, dann fügen Sie 60 Mikroliter Transfektionreagenz. Wirbeln Sie die Röhre für 10 Sekunden, und inkubieren Sie die Probe für weitere acht Minuten.In der Zwischenzeit das Medium aus der Schale mit den Zellen aspirieren und mit fünf MilliliterPVS waschen. Aspirieren Sie die PVS und fügen Sie sieben Milliliter DMEM hinzu. Fügen Sie drei Milliliter DMEM in das Rohr mit den Transfektionskomplexen, Pipette nach oben und unten, um zu mischen, und fügen Sie die Mischung zu den Zellen.Dann inkubieren Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius und fünf Prozent Kohlendioxid für 10 Stunden. Nach der Inkubation entfernen Sie das verbrauchte Kulturmedium und waschen Sie die Zellen mit fünf MilliliterpvS. Entfernen Sie die PVS bei einem Milliliter 0,25%Trypsin EDTA, und inkubieren Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius, um sie zu lösen.Fügen Sie als Nächstes vier Milliliter DMEM hinzu, und dispergieren Sie das Medium, indem Sie es mehrmals über die Oberfläche der Zellschicht pipetieren, und übertragen Sie die Suspension in ein Rohr. Zentrifugieren Sie die Zellen bei 500 mal G für fünf Minuten, entsorgen Sie dann den Überstand und setzen Sie das Zellpellet in einem Milliliter PVS wieder auf. Wiederholen Sie die Cetrifugation und entsorgen Sie den Überstand.Dann, wieder aussetzen das Zellpellet mit gepufferten Zellkultur Medium ergänzt mit 10%FBS zu einer Saatdichte von einer Million Zellen pro Milliliter. 50 Mikroliter der Zellsuspension in jeden Brunnen einer 96-Well-Platte geben und die Zellen für 10 Stunden in den 37-Grad-Celsius-Inkubator zurückbringen. Während die Zellen inkubieren, verdünnen Sie die Siebverbindungen und Lösungsmittel auf 13,5 X Konzentration.Fügen Sie 12,5 Mikroliter Leuchtstoff substrat zu jedem Brunnen hinzu und brüten Sie die Platte für fünf Minuten bei Raumtemperatur. Messen Sie die Grundbeleuchtung mit einem Luminometer, und fügen Sie fünf Mikroliter der Verbindungen und kontrollierte DMSO zu jedem Brunnen unmittelbar danach. Messen Sie die Lumineszenz alle 30 Minuten für zwei Stunden, und berechnen Sie dann die hemmende Wirkung der Verbindungen im Vergleich zur DMSO-Behandlung.Die Signalliniensignale wurden gemessen, und das Signal-Hintergrund-Verhältnis wurde mit mehr als 80 berechnet. Die Z-Primzahl war größer als 0,5, was darauf hindeutet, dass dieses Assay-System für das Screening mit hohem Durchsatz akzeptabel ist. Durch die Festlegung der Schwelle auf mehr als 40% Hemmung im Vergleich zur DMSO-only-Kontrolle, Nitazoxanid wurde als Kandidatenmedikament identifiziert.Zuvor haben wir Nitazoxanid als Inhibitor der HBX-DDB1-Wechselwirkung identifiziert, indem wir eine Reaktivitäts-Klein-Verbundbibliothek mit dieser Methode screening. Mit Nitazoxanid bestätigen wir, dass die Hemmung der HBX-DDB1-Wechselwirkung, die Reduktion der viralen Transkription und die nachfolgenden viralen Produktspiegel. Der optimale Teil der gespaltenen Luziferase, der zu einem Zielprotein verschmolzen wird, muss vorher bestimmt werden.In diesem Fall lieferte HPX, das an der C-Endstation von HPX und DDB1 mit Small Bit am Endterminus von DDB1 verschmolz, die besten Ergebnisse.

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Experimentelle Erzeugung von Karzinom-assoziierte Fibroblasten (CAF) von menschlichen Brustkrebszellen Fibroblasten

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Forschung

Medizin

Utilizing Transcranial Magnetic Stimulation to Study the Human Neuromuscular System

Mit Hilfe Transkranielle Magnetstimulation auf die menschliche neuromuskuläre System zu studieren

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been in use for more than 20 years 1, and has grown exponentially in popularity over the past decade.  While ...

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Die Verwendung Tiermodell für Sepsis zu neuartigen Therapien zu beurteilen Herbal

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Intraoperative Detection of Subtle Endometriosis: A Novel Paradigm for Detection and Treatment of Pelvic Pain Associated with the Loss of Peritoneal Integrity

Intraoperative Detektion von Subtle Endometriosis: A Novel Paradigm for Detection und Behandlung von Pelvic Pain mit dem Loss of Peritoneal Integrity-Zustellbare

Endometriosis is a  common disease affecting 40 to 70% of reproductive-aged women with chronic  pelvic pain (CPP) and/or infertility. The purpose of this ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Dreidimensionale Co-Kultur-Modell für Tumor-Stroma-Interaktion

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Dreidimensionale (3D) Tumor Spheroid Invasionsassay

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Utilization of the Soft Agar Colony Formation Assay to Identify Inhibitors of Tumorigenicity in Breast Cancer Cells

Nutzung der Koloniebildung in Weichagar-Assay auf Inhibitoren der Tumorigenität in Brustkrebs-Zellen zu identifizieren

Given the inherent difficulties in investigating the mechanisms of tumor progression in vivo, cell-based assays such as the soft agar colony formation ...

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the "RE:fine Drugs" System

Drug Repurposing Hypothesengenerierung Mit der &quot;RE: Fein Drugs&quot; System

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The ...

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Das Pilocarpin Modell der Temporallappen-Epilepsie und EEG Monitoring mittels Radiotelemetrie System bei Mäusen

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...