Name: identifying inhibitors of the hbx-ddb1 interaction using a split luciferase assay system
Uploaded: 2019-12-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av Grants-i-Aid fra departementet for utdanning, kultur, sport, vitenskap og teknologi, Japan (#19H03430 og #17K09405 til Mo., og #19J11829 til K.S.), av en Grant-in-Aid for vitenskapelig forskning på innovative områder (#18H05024 til Mo.), av forskningsprogrammet på hepatitt fra Japan Agency for medisinsk forskning og utvikling, AMED (til Mo., #JP19fk021005), etter program på innovativ utvikling og anvendelse av nye legemidler for hepatitt B (#JP19fk0310102 til K.K.) fra AMED, av tilskudd fra Japan Foundation for Applied Enzymology og fra Kobayashi Foundation for Cancer Research (til Mo.), av GSK Japan Research Grant 2018 (til K.S.), og ved et stipend fra Miyakawa Memorial Research Foundation (til K.S.).

Merk: en skjematisk fremstilling av Split luciferase analysen er vist i figur 1A, og analysen prosessen er skissert i figur 1B. Samspillet dynamikken kan måles i sanntid uten cellelyse.
1. celle forberedelse
<ol><li>Opprettholde kultivert HEK293T celler i Dulbecco ' s modifisert Eagle ' s medium (DMEM) supplert med 10% v/v fosterets storfe serum (FBS), 1x penicillin/Streptomycin ve...

<ol>
	<li>Tang, L. S. Y., Covert, E., Wilson, E., Kottilil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+hepatitis+B+infection:+a+review.">Chronic hepatitis B infection: a review.</a> The Journal of the American Medical Association. 319, 1802-1813 (2018).</li><li>Sekiba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+pathogenesis:+Fresh+insights+into+hepatitis+B+virus+RNA.">Hepatitis B virus pathogenesis: Fresh insights into hepatitis B virus RNA.</a> World Journal of Gastroenterology. 24, 2261-2268 (2018).</li><li>Slagle, B. L., Bouchard, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+X+and+regulation+of+viral+gene+expression.">Hepatitis B virus X and regulation of viral gene expression.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 6, a021402 (2016).</li><li>Murphy, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+Virus+X+Protein+Promotes+Degradation+of+SMC5/6+to+Enhance+HBV+Replication.">Hepatitis B Virus X Protein Promotes Degradation of SMC5/6 to Enhance HBV Replication.</a> Cell Reports. 16, 2846-2854 (2016).</li><li>Decorsi&#232;re, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+X+protein+identifies+the+Smc5/6+complex+as+a+host+restriction+factor.">Hepatitis B virus X protein identifies the Smc5/6 complex as a host restriction factor.</a> Nature. 531, 386-389 (2016).</li><li>Niu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Smc5/6+complex+restricts+HBV+when+localized+to+ND10+without+inducing+an+innate+immune+response+and+is+counteracted+by+the+HBV+X+protein+shortly+after+infection.">The Smc5/6 complex restricts HBV when localized to ND10 without inducing an innate immune response and is counteracted by the HBV X protein shortly after infection.</a> PLoS One. 12, e0169648 (2017).</li><li>Sekiba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+HBV+Transcription+From+cccDNA+With+Nitazoxanide+by+Targeting+the+HBx-DDB1+Interaction.">Inhibition of HBV Transcription From cccDNA With Nitazoxanide by Targeting the HBx-DDB1 Interaction.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 7, 297-312 (2019).</li><li>Eggers, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NanoLuc+Complementation+Reporter+Optimized+for+Accurate+Measurement+of+Protein+Interactions+in+Cells.">NanoLuc Complementation Reporter Optimized for Accurate Measurement of Protein Interactions in Cells.</a> ACS Chemical Biology. 11, 400-408 (2015).</li><li>Zhang, J. H., Chung, T. D. Y., Oldenburg, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+statistical+parameter+for+use+in+evaluation+and+validation+of+high+throughput+screening+assays.">A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high throughput screening assays.</a> Journal of Biomolecular Screening. 4, 67-73 (1999).</li><li>Rao, V. S., Srinivas, K., Sujini, G. N., Kumar, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-protein+interaction+detection:+Methods+and+analysis.">Protein-protein interaction detection: Methods and analysis.</a> International Journal of Proteomics. 2014. 2014, 147648 (2014).</li><li>Michael, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Robotic+Platform+for+Quantitative+High-Throughput+Screening.">A Robotic Platform for Quantitative High-Throughput Screening.</a> ASSAY and Drug Development Technologies. 6, 637-657 (2008).</li><li>Skwarczynska, M., Ottmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-protein+interactions+as+drug+targets.">Protein-protein interactions as drug targets.</a> Future Medicinal Chemistry. 7, 2195-2219 (2015).</li><li>de Chassey, B., Meyniel-Schicklin, L., Vonderscher, J., Andr&#233;, P., Lotteau, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-host+interactomics:+New+insights+and+opportunities+for+antiviral+drug+discovery.">Virus-host interactomics: New insights and opportunities for antiviral drug discovery.</a> Genome Medicine. 6, 115 (2014).</li><li>Prasad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-Host+Interactions:+New+Insights+and+Advances+in+Drug+Development+Against+Viral+Pathogens.">Virus-Host Interactions: New Insights and Advances in Drug Development Against Viral Pathogens.</a> Current Drug Metabolism. 18, 942-970 (2017).</li></ol>

Vi utviklet en praktisk screening metoden ved hjelp av en splitt luciferase analysen for å finne HBx-DDB1 bindende hemmere. Samspillet dynamikk kan påvises i sanntid i levende celler uten behov for cellelyse. Hemming av HBx-DDB1 interaksjon fører til restaurering av Smc5/6, som resulterer i undertrykkelse av viral transkripsjon, protein uttrykk, og cccDNA produksjon7. Denne romanen mekanisme av antiviral handling kan overvinne utilstrekkelighet av dagens HBV terapier.
<p class="jove_content...

Hepatitt B virus (HBV) infeksjon er en stor folkehelse bekymring over hele verden, med årlige anslag på 240 000 000 personer kronisk smittet med HBV og 90 000 dødsfall på grunn av komplikasjoner fra infeksjonen, inkludert skrumplever og leverkreft (HCC)1. Selv om dagens anti-HBV terapeutiske midler, nukleos (t) IDE analoger, tilstrekkelig hemme viral omvendt transkripsjon, de sjelden oppnå eliminering av virale proteiner, som er det langsiktige kliniske målet. Deres dårlig effekt på viral protein eliminering skyldes deres mangel på direkte effekt på viral transkripsjon fra episomal viral covalently lukket sirkulær DNA (cccDNA) minichromosomes i hepatocytter nucleus2.
HBV transkripsjon er aktivert av HBV regulatoriske X (HBx) protein3. Nyere studier avslørte at HBx forringer strukturelle vedlikehold av kromosomer 5/6 (Smc5/6), en vert restriksjon faktor som blokkerer HBV transkripsjon fra cccDNA, via kapre en DDB1-CUL4-ROC1 E3 ubiquitin ligase Complex4,5,6. Derfor er et avgjørende skritt i å fremme viral transkripsjon fra cccDNA antas å være HBx-DDB1 interaksjon. Forbindelser i stand til å hemme bindingen mellom HBx og DDB1 kan blokkere viral transkripsjon, og faktisk Nitazoxanide ble identifisert som en hemmer av HBx-DDB1 interaksjon via en screening system utviklet i vårt laboratorium7.
Her presenterer vi vår praktiske screening system brukes til å identifisere hemmere av HBx-DDB1 interaksjon, som utnytter en splitt luciferase komplementær analysen7,8. Split luciferase under enheter er smeltet til HBx og DDB1, og HBx-DDB1 interaksjon bringer under enheter i umiddelbar nærhet for å danne en funksjonell enzym som genererer en lys selvlysende signal. Som samspillet mellom under enheter er reversibel, kan dette systemet oppdage raskt dissociating HBx-DDB1 proteiner (figur 1). Ved hjelp av dette systemet, en stor sammensatt bibliotek kan lett vist, noe som kan resultere i oppdagelsen av romanen forbindelser i stand til effektivt å hemme HBx-DDB1 interaksjon.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell culture microplate, 96 well, PS, F-BOTTOM</td>
			<td>Greiner-Bio-One GmbH</td>
			<td>655098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D6046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Tocris Bioscience</td>
			<td>3176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Effectene transfection reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>301425</td>
			<td>Includes DNA-condensation buffer, enhancer solution and transfection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Nichirei</td>
			<td>175012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GloMax 96 microplate luminometer</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E6521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBx&#8211;LgBit expressing DNA plasmid</td>
			<td>Our laboratory</td>
			<td></td>
			<td>Available upon request</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T cells</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-11268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoBiT PPI starter systems</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2015</td>
			<td>Includes Nano-Glo Live Cell Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11058021</td>
			<td>Described as &#34;buffered cell culture medium&#34; in the manuscript</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Takara</td>
			<td>T900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screen-Well FDA-approved drug library V2 version 1.0</td>
			<td>Enzo Life Sciences</td>
			<td>BML-2841</td>
			<td>Compounds used here were as follows: mequinol, mercaptopurine hydrate, mesna, mestranol, metaproterenol hemisulfate, metaraminol bitartrate, metaxalone, methacholine chloride, methazolamide, methenamine hippurate, methocarbamol, methotrexate, methoxsalen, methscopolamine bromide, methsuximide, methyclothiazide, methyl aminolevulinate&#183;HCl, methylergonovine maleate, metolazone, metyrapone, mexiletine&#183;HCl, micafungin, miconazole, midodrine&#183;HCl, miglitol, milnacipran&#183;HCl, mirtazapine, mitotane, moexipril&#183;HCl, mometasone furoate, mupirocin, nadolol, nafcillin&#183;Na, naftifine&#183;HCl, naratriptan&#183;HCl, natamycin, nebivolol&#183;HCl, nelarabine, nepafenac, nevirapine, niacin, nicotine, nilotinib, nilutamide, nitazoxanide, nitisinone, nitrofurantoin, nizatidine, nortriptyline&#183;HCl, olsalazine&#183;Na, orlistat, oxaprozin, oxtriphylline, oxybutynin Chloride, oxytetracycline&#183;HCl, paliperidone, palonosetron&#183;HCl, paromomycin sulfate, pazopanib&#183;HCl, pemetrexed disodium, pemirolast potassium, penicillamine, penicillin G potassium, pentamidine isethionate, pentostatin, perindopril erbumine, permethrin, perphenazine, phenelzine sulfate, phenylephrine, phytonadione, pimecrolimus, pitavastatin calcium, and podofilox</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SmBit&#8211;DDB1 expressing DNA plasmid</td>
			<td>Our laboratory</td>
			<td></td>
			<td>Available upon request</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identifying inhibitors of the hbx-ddb1 interaction using a split luciferase assay system

Det er et presserende behov for romanen terapeutiske midler for hepatitt B virus (HBV) infeksjon. Selv om tiden tilgjengelig nukleos (t) IDE analogs potently hemme viral replikering, har de ingen direkte effekt på uttrykk for viral proteiner skrives fra en viral covalently lukket sirkulær DNA (cccDNA). Ettersom høy viral antigen-belastning kan spille en rolle i denne kroniske og HBV-relaterte kreft, er målet med HBV-behandling å utrydde virus proteiner. HBV regulatoriske protein X (HBx) binder seg til verten DNA skade-bindende protein 1 (DDB1) protein for å svekke strukturelle vedlikehold av kromosomer 5/6 (Smc5/6), noe som resulterer i aktivering av viral transkripsjon fra cccDNA. Her, ved hjelp av en splitt luciferase komplementering analysen system, presenterer vi en omfattende sammensatte screening system for å identifisere hemmere av HBx-DDB1 interaksjon. Vår protokoll muliggjør enkel påvisning av samspill dynamikk i sanntid i levende celler. Denne teknikken kan bli en viktig analysen for å oppdage romanen terapeutiske midler for behandling av HBV infeksjon.

Representative utfall etter bruk av denne protokollen er vist i figur 2A, B. Signalet-til-bakgrunn ratio var større enn 80 og Z ' faktor9 (gull standard kvalitet indeks for høy gjennomstrømming screening) var større enn 0,5, noe som indikerer at denne analysen systemet var akseptabelt for høy gjennomstrømming screening. Med terskelen satt til > 40% hemming sammenlignet med kontroll (DMSO bare), identifiserte vi N...

Watch this Scientific Journal Video about Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System at JoVE.com

Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System

Her presenterer vi en metode for screening anti-hepatitt B viral agenter som hemmer HBx-DDB1 interaksjon ved hjelp av en splitt luciferase analysen system. Dette systemet gir enkel påvisning av protein-protein interaksjoner og er egnet for å identifisere hemmere av slike interaksjoner.

Identifisere hemmere av HBx-DDB1 interaksjon ved hjelp av en Split luciferase analysen system

There is an urgent need for novel therapeutic agents for hepatitis B virus (HBV) infection. Although currently available nucleos(t)ide analogs potently ...

HBX-DDB1-interaksjonen er et avgjørende skritt for å fremme HPV-transkripsjon fra cccDNA, så denne protokollen kan bli en viktig ressurs for å oppdage nye terapeutiske midler for HPV funksjonell kur. Vår prosedyre er enkel og krever bare kort tid å screene. Samspillet som jeg blander kan oppdages i sanntid uten å kreve cellelys.Videre er screeningkvaliteten tilfredsstillende med en høy Z prime score. Hemming av HBX-DDB1-interaksjonen fører til restaurering av Smc5/6, noe som resulterer i undertrykkelse av HPV-transkripsjon, proteinuttrykk og cccDNA-produksjon. Denne nye mekanismen for antiviral virkning kan overvinne utilstrekkelighetene til dagens HPV-behandlinger.Protein-protein interaksjoner er viktig klasse av narkotika mål. Den split-luciferase-baserte syren som er beskrevet her, som retter seg mot samspillet mellom virale og hasS-proteiner, kan gi en ny strategi for å utvikle kurer for andre smittsomme sykdommer. Selv om vår protokoll er enkel og lett å forstå, kan noen trinn være vanskelige å reprodusere uten den visuelle demonstrasjonen.Dermed vil den visuelle demonstrasjonen være en stor hjelp til å forstå vår protokoll. Begynn med å så fem ganger 10 til femte HEK293T-celler i en 100 millimeter tallerken med 10 milliliter DMEM, og inkubere dem over natten ved 37 grader celsius. På neste dag fortynner du ett mikrogram hver av HBx-LgBit og SmBit-DDB1 som uttrykker DNA-plasmider og DNA-kondensbuffer for et totalt volum på 300 mikroliter.Tilsett 16 mikroliter med forsterkerløsning, og bland rørene ved å virvle i ett sekund. Inkuber prøven ved romtemperatur i tre minutter, og tilsett deretter 60 mikroliter transinfeksjonsreagens. Vortex røret i 10 sekunder, og inkuber prøven i ytterligere åtte minutter.I mellomtiden aspirerer mediet fra parabolen med cellene og vasker dem med fem milliliter PVS. Aspirer PVS og legg til syv milliliter DMEM. Tilsett tre milliliter DMEM til røret med transfeksjonskompleksene, pipetten opp og ned for å blande, og tilsett blandingen til cellene.Deretter inkubere cellene ved 37 grader celsius og fem prosent karbondioksid i 10 timer. Etter inkubasjonen fjerner du det brukte kulturmediet, og vask cellene med fem milliliter PVS. Fjern PVS på en milliliter på 0,25% trypsin EDTA, og inkuber cellene ved 37 grader celsius for å løsne dem.Deretter legger du til fire milliliter DMEM, og sprer mediet ved å pipettere det over overflaten av cellelaget flere ganger, og overføre suspensjonen til et rør. Sentrifuger cellene ved 500 ganger G i fem minutter, kast deretter supernatanten, og suspender cellepelleten på en milliliter PVS. Gjenta cetrifugation og kast supernatant.Deretter, re-suspendere celle pellet med bufret celle kultur medium supplert med 10% FBS til en såing tetthet på en million celler per milliliter. Pipette 50 mikroliter av cellefjæringen i hver brønn av en 96-brønnsplate, og returner cellene til 37-graders celsius inkubator i 10 timer. Mens cellene inkuberer, fortynne screeningforbindelser og løsemiddel til 13,5 X konsentrasjon.Tilsett 12,5 mikroliter med selvlysende substrat til hver brønn, og inkuber platen i fem minutter ved romtemperatur. Mål baseline luminescens med et luminometer, og tilsett fem mikroliter av forbindelsene og kontrollert DMSO til hver brønn umiddelbart etter. Mål luminescence hvert 30.Baseline luminescenssignaler ble målt, og signal-til-bakgrunn-forholdet ble beregnet til å være større enn 80. Z prime var større enn 0,5, noe som indikerer at dette analysesystemet er akseptabelt for høy gjennomstrømningsscreening. Ved å sette terskelen til større enn 40% hemming sammenlignet med DMSO-bare kontroll, nitazoxanide ble identifisert som en kandidat narkotika.Vi har tidligere identifisert nitazoxanide som en hemmer av HBX-DDB1-interaksjonen ved å screene et reaktivitetsbibliotek med småskala med denne metoden. Ved hjelp av nitazoxanid bekrefter vi at hemming av HBX-DDB1-interaksjonen, den reduksjonen av viral transkripsjon og påfølgende virusproduktnivåer. Den optimale delen av den splittede luciferase smeltet til et målprotein må bestemmes på forhånd.I dette tilfellet smeltet HPX til Large Bit ved C-endestasjonen til HPX og DDB1 smeltet til Small Bit på slutten av DDB1 ga de beste resultatene.

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Eksperimentell Generation of Karsinom-Associated Fibroblaster (kafeer) fra Human mammary Fibroblaster

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Utilizing Transcranial Magnetic Stimulation to Study the Human Neuromuscular System

Utnytte Transkraniell magnetisk stimulering for å studere menneskelige nevromuskulære systemet

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been in use for more than 20 years 1, and has grown exponentially in popularity over the past decade.  While ...

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Bruk av Animal Model of Sepsis å evaluere Novel urteterapi

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Intraoperative Detection of Subtle Endometriosis: A Novel Paradigm for Detection and Treatment of Pelvic Pain Associated with the Loss of Peritoneal Integrity

Intraoperativ Påvisning av Subtle Endometriose: A Novel Paradigm for deteksjon og behandling av bekkensmerter knyttet til tap av Peritoneal Integrity

Endometriosis is a  common disease affecting 40 to 70% of reproductive-aged women with chronic  pelvic pain (CPP) and/or infertility. The purpose of this ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Tredimensjonal Co-kultur Modell for Tumor-stromal Interaksjon

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Tredimensjonale (3D) Tumor Spheroid invasjonen analysen

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Utilization of the Soft Agar Colony Formation Assay to Identify Inhibitors of Tumorigenicity in Breast Cancer Cells

Utnyttelse i Soft Agar Colony Forming analyse for å identifisere hemmere av tumorgenisitet i brystkreftceller

Given the inherent difficulties in investigating the mechanisms of tumor progression in vivo, cell-based assays such as the soft agar colony formation ...

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the "RE:fine Drugs" System

Drug gjenbruk Hypotese Generation Bruke &quot;RE: Fine Drugs&quot; System

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The ...

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Pilocarpine modell av tinninglappen epilepsi og EEG overvåking ved hjelp av Radiotelemetry systemet i mus

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...