Name: identifying inhibitors of the hbx-ddb1 interaction using a split luciferase assay system
Uploaded: 2019-12-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System at JoVE.com

Detta arbete stöddes av bidrag-in-Aid från ministeriet för utbildning, kultur, sport, vetenskap och teknik, Japan (#19H03430 och #17K09405 till M.O., och #19J11829 till K.S.), genom ett bidrag-in-Aid för vetenskaplig forskning om innovativa områden (#18H05024 till M.O.), av forskningsprogrammet om hepatit från Japan byrån för medicinsk forskning och utveckling, AMED (till M.O., #JP19fk021005), genom program för innovativ utveckling och tillämpning av nya läkemedel för hepatit B (#JP19fk0310102 till KK) från AMED, genom bidrag från Japan Stiftelsen för tillämpad Enzymologi och från Kobayashi Stiftelsen för cancer forskning (till M.O.), av GSK Japan Research Grant 2018 (till K.S.), och genom ett bidrag från Miyakawa Memorial Research Foundation (till K.S.).

Anmärkning: en schematisk representation av Split luciferas-analysen visas i figur 1A, och analysprocessen beskrivs i figur 1B. Interaktionsdynamiken kan mätas i realtid utan cell Lys.
1. cell beredning
<ol><li>Bibehålla odlade HEK293T celler i Dulbecco modifierade Eagle ' s medium (DMEM) kompletteras med 10% v/v fetalt Nötkreaturserum (FBS), 1x penicillin/streptomycin vid 37 °...

<ol>
	<li>Tang, L. S. Y., Covert, E., Wilson, E., Kottilil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+hepatitis+B+infection:+a+review.">Chronic hepatitis B infection: a review.</a> The Journal of the American Medical Association. 319, 1802-1813 (2018).</li><li>Sekiba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+pathogenesis:+Fresh+insights+into+hepatitis+B+virus+RNA.">Hepatitis B virus pathogenesis: Fresh insights into hepatitis B virus RNA.</a> World Journal of Gastroenterology. 24, 2261-2268 (2018).</li><li>Slagle, B. L., Bouchard, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+X+and+regulation+of+viral+gene+expression.">Hepatitis B virus X and regulation of viral gene expression.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 6, a021402 (2016).</li><li>Murphy, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+Virus+X+Protein+Promotes+Degradation+of+SMC5/6+to+Enhance+HBV+Replication.">Hepatitis B Virus X Protein Promotes Degradation of SMC5/6 to Enhance HBV Replication.</a> Cell Reports. 16, 2846-2854 (2016).</li><li>Decorsi&#232;re, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+X+protein+identifies+the+Smc5/6+complex+as+a+host+restriction+factor.">Hepatitis B virus X protein identifies the Smc5/6 complex as a host restriction factor.</a> Nature. 531, 386-389 (2016).</li><li>Niu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Smc5/6+complex+restricts+HBV+when+localized+to+ND10+without+inducing+an+innate+immune+response+and+is+counteracted+by+the+HBV+X+protein+shortly+after+infection.">The Smc5/6 complex restricts HBV when localized to ND10 without inducing an innate immune response and is counteracted by the HBV X protein shortly after infection.</a> PLoS One. 12, e0169648 (2017).</li><li>Sekiba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+HBV+Transcription+From+cccDNA+With+Nitazoxanide+by+Targeting+the+HBx-DDB1+Interaction.">Inhibition of HBV Transcription From cccDNA With Nitazoxanide by Targeting the HBx-DDB1 Interaction.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 7, 297-312 (2019).</li><li>Eggers, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NanoLuc+Complementation+Reporter+Optimized+for+Accurate+Measurement+of+Protein+Interactions+in+Cells.">NanoLuc Complementation Reporter Optimized for Accurate Measurement of Protein Interactions in Cells.</a> ACS Chemical Biology. 11, 400-408 (2015).</li><li>Zhang, J. H., Chung, T. D. Y., Oldenburg, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+statistical+parameter+for+use+in+evaluation+and+validation+of+high+throughput+screening+assays.">A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high throughput screening assays.</a> Journal of Biomolecular Screening. 4, 67-73 (1999).</li><li>Rao, V. S., Srinivas, K., Sujini, G. N., Kumar, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-protein+interaction+detection:+Methods+and+analysis.">Protein-protein interaction detection: Methods and analysis.</a> International Journal of Proteomics. 2014. 2014, 147648 (2014).</li><li>Michael, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Robotic+Platform+for+Quantitative+High-Throughput+Screening.">A Robotic Platform for Quantitative High-Throughput Screening.</a> ASSAY and Drug Development Technologies. 6, 637-657 (2008).</li><li>Skwarczynska, M., Ottmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-protein+interactions+as+drug+targets.">Protein-protein interactions as drug targets.</a> Future Medicinal Chemistry. 7, 2195-2219 (2015).</li><li>de Chassey, B., Meyniel-Schicklin, L., Vonderscher, J., Andr&#233;, P., Lotteau, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-host+interactomics:+New+insights+and+opportunities+for+antiviral+drug+discovery.">Virus-host interactomics: New insights and opportunities for antiviral drug discovery.</a> Genome Medicine. 6, 115 (2014).</li><li>Prasad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-Host+Interactions:+New+Insights+and+Advances+in+Drug+Development+Against+Viral+Pathogens.">Virus-Host Interactions: New Insights and Advances in Drug Development Against Viral Pathogens.</a> Current Drug Metabolism. 18, 942-970 (2017).</li></ol>

Vi utvecklade en bekväm screeningmetod med hjälp av en Split luciferas analys för att hitta HBX-DDB1 bindande hämmare. Interaktiondynamiken kan upptäckas i realtid i levande celler utan behov av celllys. Hämning av HBx-DDB1 interaktion leder till återställande av Smc5/6, vilket resulterar i dämpning av viral transkription, proteinuttryck, och cccDNA produktion7. Denna nya mekanism för antiviral åtgärder kan övervinna bristerna i nuvarande HBV-terapier.
Äve...

Hepatit B-virus (HBV) infektion är ett stort folkhälsoproblem över hela världen, med årliga uppskattningar av 240 000 000 personer kroniskt infekterade med HBV och 90 000 dödsfall på grund av komplikationer från infektionen, inklusive cirros och Hepatocellulär cancer (HCC)1. Även om den nuvarande anti-HBV terapeutiska medel, nukleos (t) IDE-analoger, tillräckligt hämma viral omvänd Transkription, de sällan uppnå eliminering av virala proteiner, vilket är det långsiktiga kliniska målet. Deras dåliga effekt på viral proteineliminering beror på deras avsaknad av direkt effekt på viral transkription från episomalt viral kovalent slutna cirkulära DNA (cccdna) minikromosomer i hepatocyte Nucleus2.
HBV-transkription aktiveras av HBV Regulatory X (HBx) protein3. Nyligen genomförda studier visade att HBX försämrar strukturellt underhåll av kromosomer 5/6 (Smc5/6), en värd begränsning faktor som blockerar HBV transkription från cccdna, via kapning en DDB1-CUL4-ROC1 E3 ubiquitin Ligase Complex4,5,6. Därför är ett viktigt steg för att främja viral transkription från cccDNA tros vara HBx-DDB1 interaktion. Föreningar som kan hämma bindningen mellan HBx och DDB1 kan blockera viral transkription, och faktiskt nitazoxanide identifierades som en hämmare av HBx-DDB1 interaktion via ett screening system som utvecklats i vårt laboratorium7.
Här presenterar vi vår bekväma screening system som används för att identifiera hämmare av HBX-DDB1 interaktion, som utnyttjar en Split luciferas kompletterande analys7,8. Split luciferas subenheter är smält till HBX och DDB1, och HBX-DDB1 interaktion ger subenheter i närheten för att bilda ett funktionellt enzym som genererar en ljus självlysande signal. Eftersom interaktionen mellan subenheterna är reversibel kan systemet detektera HBx-DDB1-proteiner snabbt (figur 1). Med hjälp av detta system, en stor sammansatt bibliotek kan lätt screenas, vilket kan resultera i upptäckten av nya föreningar som kan effektivt hämma HBx-DDB1 interaktion.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell culture microplate, 96 well, PS, F-BOTTOM</td>
			<td>Greiner-Bio-One GmbH</td>
			<td>655098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D6046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Tocris Bioscience</td>
			<td>3176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Effectene transfection reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>301425</td>
			<td>Includes DNA-condensation buffer, enhancer solution and transfection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Nichirei</td>
			<td>175012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GloMax 96 microplate luminometer</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E6521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBx&#8211;LgBit expressing DNA plasmid</td>
			<td>Our laboratory</td>
			<td></td>
			<td>Available upon request</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T cells</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-11268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoBiT PPI starter systems</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2015</td>
			<td>Includes Nano-Glo Live Cell Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11058021</td>
			<td>Described as &#34;buffered cell culture medium&#34; in the manuscript</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Takara</td>
			<td>T900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screen-Well FDA-approved drug library V2 version 1.0</td>
			<td>Enzo Life Sciences</td>
			<td>BML-2841</td>
			<td>Compounds used here were as follows: mequinol, mercaptopurine hydrate, mesna, mestranol, metaproterenol hemisulfate, metaraminol bitartrate, metaxalone, methacholine chloride, methazolamide, methenamine hippurate, methocarbamol, methotrexate, methoxsalen, methscopolamine bromide, methsuximide, methyclothiazide, methyl aminolevulinate&#183;HCl, methylergonovine maleate, metolazone, metyrapone, mexiletine&#183;HCl, micafungin, miconazole, midodrine&#183;HCl, miglitol, milnacipran&#183;HCl, mirtazapine, mitotane, moexipril&#183;HCl, mometasone furoate, mupirocin, nadolol, nafcillin&#183;Na, naftifine&#183;HCl, naratriptan&#183;HCl, natamycin, nebivolol&#183;HCl, nelarabine, nepafenac, nevirapine, niacin, nicotine, nilotinib, nilutamide, nitazoxanide, nitisinone, nitrofurantoin, nizatidine, nortriptyline&#183;HCl, olsalazine&#183;Na, orlistat, oxaprozin, oxtriphylline, oxybutynin Chloride, oxytetracycline&#183;HCl, paliperidone, palonosetron&#183;HCl, paromomycin sulfate, pazopanib&#183;HCl, pemetrexed disodium, pemirolast potassium, penicillamine, penicillin G potassium, pentamidine isethionate, pentostatin, perindopril erbumine, permethrin, perphenazine, phenelzine sulfate, phenylephrine, phytonadione, pimecrolimus, pitavastatin calcium, and podofilox</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SmBit&#8211;DDB1 expressing DNA plasmid</td>
			<td>Our laboratory</td>
			<td></td>
			<td>Available upon request</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identifying inhibitors of the hbx-ddb1 interaction using a split luciferase assay system

Det finns ett akut behov av nya terapeutiska medel för infektion med hepatit B-virus (HBV). Även om för närvarande tillgängliga nukleos (t) IDE analoger kraftigt hämmar viral replikering, de har ingen direkt effekt på uttrycket av virala proteiner transkriberas från en viral kovalent slutna cirkulära DNA (cccdna). Eftersom hög viral antigen belastning kan spela en roll i denna kroniska och HBV-relaterade carcinogenes, är målet med HBV-behandling att utrota virala proteiner. HBV reglerande protein X (HBx) binder till värden DNA-skadebindande protein 1 (DDB1) protein för att försämra strukturellt underhåll av kromosomer 5/6 (Smc5/6), vilket resulterar i aktivering av viral transkription från cccDNA. Här, med hjälp av en Split luciferas kompletterings analyssystem, presenterar vi ett omfattande sammansatt screening system för att identifiera hämmare av HBX-DDB1 interaktion. Vårt protokoll möjliggör enkel detektering av interaktionsdynamik i realtid inom levande celler. Denna teknik kan bli en viktig analys för att upptäcka nya terapeutiska medel för behandling av HBV-infektion.

Representativa resultat efter användning av detta protokoll visas i figur 2A, B. Signal-till-bakgrund förhållandet var större än 80 och Z ' faktor9 (guldmynt standard kvalitetsindex för hög genomflöde screening) var större än 0,5, vilket tyder på att detta analyssystem var acceptabelt för hög genomströmning screening. Med tröskeln inställd på > 40% hämning jämfört med kontrollen (DMSO endast), ident...

Watch this Scientific Journal Video about Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System at JoVE.com

Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System

Här presenterar vi en metod för screening anti-hepatit B-virala medel som hämmar HBX-DDB1 interaktion med hjälp av en Split luciferas assay system. Detta system möjliggör enkel detektering av protein-proteininteraktioner och är lämplig för att identifiera hämmare av sådana interaktioner.

Identifiera hämmare av HBx-DDB1 interaktion med hjälp av en Split Luciferase assay system

There is an urgent need for novel therapeutic agents for hepatitis B virus (HBV) infection. Although currently available nucleos(t)ide analogs potently ...

HBX-DDB1 interaktion är ett avgörande steg för att främja HPV transkription från cccDNA, så detta protokoll kan bli en viktig tillgång för att upptäcka nya terapeutiska medel för HPV funktionell botemedel. Vår procedur är enkel och kräver bara en kort tid till skärmen. Den interaktion som jag blandar kan upptäckas i realtid utan att kräva celllys.Dessutom är screeningkvaliteten tillfredsställande med en hög Z prime score. Hämning av HBX-DDB1 interaktionen leder till återställande av Smc5/6, vilket resulterar i undertryckande av HPV-transkription, proteinuttryck och cccDNA produktion. Denna nya mekanism för antiviral verkan kan övervinna bristerna i nuvarande HPV-terapier.Protein-protein interaktioner är viktig klass av läkemedel mål. Den split-luciferas-baserade syra som beskrivs här, som riktar sig till samspelet mellan virus- och hasS-proteiner, kan ge en ny strategi för att utveckla botemedel mot andra infektionssjukdomar. Även om vårt protokoll är enkelt och lätt att förstå, kan vissa steg vara svåra att reproducera utan den visuella demonstrationen.Således kommer den visuella demonstrationen vara en stor hjälp att förstå vårt protokoll. Börja med att så fem gånger 10 till 5: e HEK293T celler i en 100 millimeter skål med 10 milliliter DMEM, och ruva dem över natten vid 37 grader celsius. Nästa dag späder du ut ett mikrogram vardera av HBx-LgBit och SmBit-DDB1 som uttrycker DNA-plasmider och DNA-kondensationsbuffert för en total volym på 300 mikroliter.Tillsätt 16 mikroliter av förstärkare lösning, och blanda rören genom att vortexa i en sekund. Inkubera provet i rumstemperatur i tre minuter, tillsätt sedan 60 mikroliter transfection-reagens. Vortexa röret i 10 sekunder, och inkubera provet i ytterligare åtta minuter.Under tiden aspirera mediet från skålen med cellerna och tvätta dem med fem milliliter PVS. Aspirera PVS och tillsätt sju milliliter DMEM. Tillsätt tre milliliter DMEM till röret med transfektionskomplexen, pipetten upp och ner för att blanda och tillsätt blandningen i cellerna.Sedan, inkubera cellerna vid 37 grader celsius och fem procent koldioxid i 10 timmar. Efter inkubationen, ta bort det förbrukade odlingsmediet, och tvätta cellerna med fem milliliter PVS. Ta bort PVS på en milliliter av 0,25%trypsin EDTA, och inkubera cellerna i 37 grader celsius för att lossa dem.Därefter lägger du till fyra milliliter DMEM, och dispergerar mediet genom pipettering det över ytan av cellskiktet flera gånger, och överför suspensionen till ett rör. Centrifugera cellerna vid 500 gånger G i fem minuter, sedan kasta supernatanten, och åter upphäva cellpelletsen i en milliliter PVS. Upprepa cetrifugationen och kassera supernatanten.Sedan, åter upphäva cell pelleten med buffrade cellkultur medium kompletteras med 10%FBS till en sådd densitet av en miljon celler per milliliter. Pipett 50 mikroliter av cellupphängningen i varje brunn av en 96-brunnsplatta, och återför cellerna till 37-graders-celsius inkubator i 10 timmar. Medan cellerna inkuberar, späd screening föreningar och lösningsmedel till 13,5 X koncentration.Tillsätt 12,5 mikroliter av självlysande substrat till varje brunn, och inkubera plattan i fem minuter vid rumstemperatur. Mät baslinjen luminescens med en luminometer, och tillsätt fem mikroliter av föreningarna och kontrollerade DMSO till varje brunn omedelbart efter. Mät luministans var 30:e minut i två timmar, beräkna sedan de hämmande effekterna av föreningarna i jämförelse med DMSO-behandling.Originalkontroller av luminiscenssignaler mättes, och signal-bakgrundsförhållandet beräknades vara större än 80. Z prime var större än 0,5, vilket tyder på att detta analyssystem är acceptabelt för screening med hög genomströmning. Genom att sätta tröskeln till större än 40%hämning jämfört med den DMSO-bara kontroll identifierades nitazoxanid som en kandidat läkemedel.Vi identifierade tidigare nitazoxanide som en hämmare av HBX-DDB1 interaktionen genom screening en reaktivitet småskaliga sammansatta bibliotek med denna metod. Med hjälp av nitazoxanide bekräftar vi att hämning av HBX-DDB1 interaktionen, att minskning av viral transkription och efterföljande viral produktnivåer. Den optimala delen av den uppdelade luciferasen smält till ett målprotein måste bestämmas i förväg.I detta fall, HPX smält till Large Bit vid C terminus av HPX och DDB1 smält till Small Bit i slutet ändstation av DDB1 gav de bästa resultaten.

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Experimentell generationens Cancer Associated-fibroblasts (CAFS) från Human bröst fibroblasts

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Utilizing Transcranial Magnetic Stimulation to Study the Human Neuromuscular System

Använda transkraniell magnetisk stimulering för att studera mänskliga neuromuskulära systemet

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been in use for more than 20 years 1, and has grown exponentially in popularity over the past decade.  While ...

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Användning av djurmodell för sepsis till utvärdera nya växtbaserade behandlingar

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Intraoperative Detection of Subtle Endometriosis: A Novel Paradigm for Detection and Treatment of Pelvic Pain Associated with the Loss of Peritoneal Integrity

Intraoperativ detektion av subtil Endometrios: A Novel Paradigm för upptäckt och behandling av bäckenben smärta i samband med förlusten av Peritoneal Integrity

Endometriosis is a  common disease affecting 40 to 70% of reproductive-aged women with chronic  pelvic pain (CPP) and/or infertility. The purpose of this ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Tredimensionell Samodling modell för Tumör-stromal Interaktion

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Tredimensionell (3D) Tumör Spheroid invasionsanalys

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Utilization of the Soft Agar Colony Formation Assay to Identify Inhibitors of Tumorigenicity in Breast Cancer Cells

Utnyttjande av Soft Agar kolonibildningsanalys för att identifiera inhibitorer för tumorgenes i bröstcancerceller

Given the inherent difficulties in investigating the mechanisms of tumor progression in vivo, cell-based assays such as the soft agar colony formation ...

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the "RE:fine Drugs" System

Drug återanvända Hypotesen Generation Använda &quot;RE: fina Drugs&quot; System

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The ...

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Pilokarpin modellen av tinningloben epilepsi och EEG övervakning med hjälp av Radiotelemetry System i möss

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...