Name: identifying inhibitors of the hbx-ddb1 interaction using a split luciferase assay system
Uploaded: 2019-12-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System at JoVE.com

Bu çalışma, Milli Eğitim Bakanlığı'nın hibe-in-Aid tarafından desteklenmiştir, Kültür, Spor, Bilim ve Teknoloji, Japonya (#19H03430 ve #17K09405 M.O.'ya, #19J11829,#JP19fk0310102 #JP19fk021005 #18H05024,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, Japonya Uygulamalı Enzymoloji Vakfı ve Kobayashi Kanser Araştırmaları Vakfı'ndan (M.O.'ya), GSK Japan Research Grant 2018 (K.S.'ye) ve Miyakawa Memorial Research Foundation'ın (K.S.)'den aldığı bir bağışla.

NOT: Bölünmüş luciferase tamsasının şematik gösterimi Şekil 1A'dagösterilmiştir ve isme işlemi Şekil 1B'deözetlenmiştir. Etkileşim dinamiği hücre lisisi olmadan gerçek zamanlı olarak ölçülebilir.
1. Hücre Hazırlama
<ol><li>Dulbecco'nun modifiye Eagle'S orta (DMEM) % 10 v / v fetal sığır serum (FBS), 1x penisilin / streptomisin ile desteklenmiş kültürl?...

<ol>
	<li>Tang, L. S. Y., Covert, E., Wilson, E., Kottilil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+hepatitis+B+infection:+a+review.">Chronic hepatitis B infection: a review.</a> The Journal of the American Medical Association. 319, 1802-1813 (2018).</li><li>Sekiba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+pathogenesis:+Fresh+insights+into+hepatitis+B+virus+RNA.">Hepatitis B virus pathogenesis: Fresh insights into hepatitis B virus RNA.</a> World Journal of Gastroenterology. 24, 2261-2268 (2018).</li><li>Slagle, B. L., Bouchard, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+X+and+regulation+of+viral+gene+expression.">Hepatitis B virus X and regulation of viral gene expression.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 6, a021402 (2016).</li><li>Murphy, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+Virus+X+Protein+Promotes+Degradation+of+SMC5/6+to+Enhance+HBV+Replication.">Hepatitis B Virus X Protein Promotes Degradation of SMC5/6 to Enhance HBV Replication.</a> Cell Reports. 16, 2846-2854 (2016).</li><li>Decorsi&#232;re, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+X+protein+identifies+the+Smc5/6+complex+as+a+host+restriction+factor.">Hepatitis B virus X protein identifies the Smc5/6 complex as a host restriction factor.</a> Nature. 531, 386-389 (2016).</li><li>Niu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Smc5/6+complex+restricts+HBV+when+localized+to+ND10+without+inducing+an+innate+immune+response+and+is+counteracted+by+the+HBV+X+protein+shortly+after+infection.">The Smc5/6 complex restricts HBV when localized to ND10 without inducing an innate immune response and is counteracted by the HBV X protein shortly after infection.</a> PLoS One. 12, e0169648 (2017).</li><li>Sekiba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+HBV+Transcription+From+cccDNA+With+Nitazoxanide+by+Targeting+the+HBx-DDB1+Interaction.">Inhibition of HBV Transcription From cccDNA With Nitazoxanide by Targeting the HBx-DDB1 Interaction.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 7, 297-312 (2019).</li><li>Eggers, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NanoLuc+Complementation+Reporter+Optimized+for+Accurate+Measurement+of+Protein+Interactions+in+Cells.">NanoLuc Complementation Reporter Optimized for Accurate Measurement of Protein Interactions in Cells.</a> ACS Chemical Biology. 11, 400-408 (2015).</li><li>Zhang, J. H., Chung, T. D. Y., Oldenburg, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+statistical+parameter+for+use+in+evaluation+and+validation+of+high+throughput+screening+assays.">A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high throughput screening assays.</a> Journal of Biomolecular Screening. 4, 67-73 (1999).</li><li>Rao, V. S., Srinivas, K., Sujini, G. N., Kumar, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-protein+interaction+detection:+Methods+and+analysis.">Protein-protein interaction detection: Methods and analysis.</a> International Journal of Proteomics. 2014. 2014, 147648 (2014).</li><li>Michael, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Robotic+Platform+for+Quantitative+High-Throughput+Screening.">A Robotic Platform for Quantitative High-Throughput Screening.</a> ASSAY and Drug Development Technologies. 6, 637-657 (2008).</li><li>Skwarczynska, M., Ottmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-protein+interactions+as+drug+targets.">Protein-protein interactions as drug targets.</a> Future Medicinal Chemistry. 7, 2195-2219 (2015).</li><li>de Chassey, B., Meyniel-Schicklin, L., Vonderscher, J., Andr&#233;, P., Lotteau, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-host+interactomics:+New+insights+and+opportunities+for+antiviral+drug+discovery.">Virus-host interactomics: New insights and opportunities for antiviral drug discovery.</a> Genome Medicine. 6, 115 (2014).</li><li>Prasad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-Host+Interactions:+New+Insights+and+Advances+in+Drug+Development+Against+Viral+Pathogens.">Virus-Host Interactions: New Insights and Advances in Drug Development Against Viral Pathogens.</a> Current Drug Metabolism. 18, 942-970 (2017).</li></ol>

HBx-DDB1 bağlayıcı inhibitörlerini bulmak için split luciferase tsay kullanarak uygun bir tarama yöntemi geliştirdik. Hücre lisisine gerek kalmadan canlı hücrelerde etkileşim dinamiği gerçek zamanlı olarak saptanabilir. HBx-DDB1 etkileşiminin inhibisyonu Smc5/6'nın restorasyonuna yol açar, bu da viral transkripsiyon, protein ekspresyonu ve cccDNA üretiminin bastırılmasıyla sonuçlanır7. Antiviral eylem bu yeni mekanizma mevcut HBV tedavilerin yetersizlikleri üstesinden geleb...

Hepatit B virüsü (HBV) enfeksiyonu dünya çapında önemli bir halk sağlığı sorunudur, yıllık tahminlere göre 240 milyon kişi kronik HBV ile enfekte ve 90.000 ölüm enfeksiyon komplikasyonları nedeniyle, siroz ve hepatosellüler karsinom da dahil olmak üzere (HCC)1. Mevcut anti-HBV terapötik ajanlar, nükleos(t)ide analogları, yeterince viral ters transkripsiyon inhibe rağmen, nadiren viral proteinlerin ortadan kaldırılması elde, hangi uzun vadeli klinik hedeftir. Viral protein eliminasyonu üzerindeki kötü etkileri, hepatosit çekirdeğindeki epizomal viral kovalent kapalı dairesel DNA (cccDNA) minikromozomlarından viral transkripsiyon üzerinde doğrudan etki olmamasından kaynaklanmaktadır2.
HBV transkripsiyonu HBV düzenleyici X (HBx) protein3ile aktive edilir. Son çalışmalar HBx kromozomlar yapısal bakım bozunr ortaya 5/6 (Smc5/6), cccDNA HBV transkripsiyon blokları bir konak kısıtlama faktörü, bir DDB1-CUL4-ROC1 E3 ubiquitin ligaz kompleksi kaçırma yoluyla4,5,6. Bu nedenle, cccDNA viral transkripsiyon teşvik önemli bir adım HBx-DDB1 etkileşimi olduğu düşünülmektedir. HBx ve DDB1 arasındaki bağlanmayı inhibe edebilen bileşikler viral transkripsiyonengelleyebilir, ve gerçekten nitazoxanide bizim laboratuvar da geliştirilen bir tarama sistemi ile HBx-DDB1 etkileşiminin bir inhibitörü olarak tespit edilmiştir7.
Burada, hbx-DDB1 etkileşiminin inhibitörlerini tanımlamak için kullanılan uygun tarama sistemimizi sıyoruz, bu da 7,8'likbölünmüş luciferase tamamlayıcıbirteşp. Split luciferase alt birimleri HBx ve DDB1'e kaynaştırılır ve HBx-DDB1 etkileşimi alt birimleri yakınbir yere getirerek parlak parlak bir sinyal üreten işlevsel bir enzim oluşturur. Alt birimler arasındaki etkileşim tersine çevrilebildiği için, bu sistem hbx-DDB1 proteinlerinin hızla ayrıştırıcı olduğunu algılayabilir(Şekil 1). Bu sistemi kullanarak, büyük bir bileşik kitaplığı kolayca taranabilir, hangi verimli HBx-DDB1 etkileşimini inhibe yeteneğine sahip yeni bileşiklerin keşfi neden olabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell culture microplate, 96 well, PS, F-BOTTOM</td>
			<td>Greiner-Bio-One GmbH</td>
			<td>655098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D6046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Tocris Bioscience</td>
			<td>3176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Effectene transfection reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>301425</td>
			<td>Includes DNA-condensation buffer, enhancer solution and transfection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Nichirei</td>
			<td>175012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GloMax 96 microplate luminometer</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E6521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBx&#8211;LgBit expressing DNA plasmid</td>
			<td>Our laboratory</td>
			<td></td>
			<td>Available upon request</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T cells</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-11268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoBiT PPI starter systems</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2015</td>
			<td>Includes Nano-Glo Live Cell Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11058021</td>
			<td>Described as &#34;buffered cell culture medium&#34; in the manuscript</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Takara</td>
			<td>T900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screen-Well FDA-approved drug library V2 version 1.0</td>
			<td>Enzo Life Sciences</td>
			<td>BML-2841</td>
			<td>Compounds used here were as follows: mequinol, mercaptopurine hydrate, mesna, mestranol, metaproterenol hemisulfate, metaraminol bitartrate, metaxalone, methacholine chloride, methazolamide, methenamine hippurate, methocarbamol, methotrexate, methoxsalen, methscopolamine bromide, methsuximide, methyclothiazide, methyl aminolevulinate&#183;HCl, methylergonovine maleate, metolazone, metyrapone, mexiletine&#183;HCl, micafungin, miconazole, midodrine&#183;HCl, miglitol, milnacipran&#183;HCl, mirtazapine, mitotane, moexipril&#183;HCl, mometasone furoate, mupirocin, nadolol, nafcillin&#183;Na, naftifine&#183;HCl, naratriptan&#183;HCl, natamycin, nebivolol&#183;HCl, nelarabine, nepafenac, nevirapine, niacin, nicotine, nilotinib, nilutamide, nitazoxanide, nitisinone, nitrofurantoin, nizatidine, nortriptyline&#183;HCl, olsalazine&#183;Na, orlistat, oxaprozin, oxtriphylline, oxybutynin Chloride, oxytetracycline&#183;HCl, paliperidone, palonosetron&#183;HCl, paromomycin sulfate, pazopanib&#183;HCl, pemetrexed disodium, pemirolast potassium, penicillamine, penicillin G potassium, pentamidine isethionate, pentostatin, perindopril erbumine, permethrin, perphenazine, phenelzine sulfate, phenylephrine, phytonadione, pimecrolimus, pitavastatin calcium, and podofilox</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SmBit&#8211;DDB1 expressing DNA plasmid</td>
			<td>Our laboratory</td>
			<td></td>
			<td>Available upon request</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identifying inhibitors of the hbx-ddb1 interaction using a split luciferase assay system

Hepatit B virüsü (HBV) enfeksiyonu için yeni terapötik ajanlara acil ihtiyaç vardır. Şu anda mevcut nükleos(t)ide analogları viral replikasyonu güçlü bir şekilde inhibe etseler de, viral kovalent olarak kapalı dairesel DNA'dan (cccDNA) transkripsiyonu yapılan viral proteinlerin ekspresyonu üzerinde doğrudan bir etkiye sahip değildirler. Yüksek viral antijen yükü bu kronik ve HBV ile ilişkili karsinogenezde rol oynayabileceğinden, HBV tedavisinin amacı viral proteinleri ortadan kaldırmaktır. HBV düzenleyici protein X (HBx) kromozomların yapısal bakımını bozacak şekilde konak DNA hasar bağlayıcı protein 1 (DDB1) proteinine bağlanır (Smc5/6), cccDNA'dan viral transkripsiyon aktivasyonu ile sonuçlanır. Burada, bölünmüş luciferase kompleman teşeleme sistemi kullanarak, HBx-DDB1 etkileşiminin inhibitörlerini belirlemek için kapsamlı bir bileşik tarama sistemi salıyoruz. Protokolümüz, etkileşim dinamiklerinin canlı hücreler içinde gerçek zamanlı olarak kolayca algılanmasını sağlar. Bu teknik HBV enfeksiyonutedavisi için yeni terapötik ajanlar keşfetmek için önemli bir tetki olabilir.

Bu protokolün kullanımını izleyen temsili sonuçlar Şekil 2A,B'degösterilmiştir. Sinyal-arka plan oranı 80'den büyüktü ve Z' faktörü9 (yüksek işlem taraması için altın standart kalite endeksi) 0,5'ten büyüktü ve bu da bu test sisteminin yüksek işlem taraması için kabul edilebilir olduğunu gösteriyordu. Eşik olarak belirlenen >40% inhibisyon kontrol ile karşılaştırıldığında (Sadece DM...

Watch this Scientific Journal Video about Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System at JoVE.com

Identifying Inhibitors of the HBx-DDB1 Interaction Using a Split Luciferase Assay System

Burada, bölünmüş luciferase tsay sistemi kullanarak HBx-DDB1 etkileşimini inhibe eden anti-hepatit B viral ajanların taranması için bir yöntem salıyoruz. Bu sistem protein-protein etkileşimlerinin kolay algılanmasını sağlar ve bu etkileşimlerin inhibitörlerini belirlemek için uygundur.

Bölünmüş Luciferase Assay Sistemi Kullanarak HBx-DDB1 Etkileşiminin Inhibitörlerinin Belirlenmesi

There is an urgent need for novel therapeutic agents for hepatitis B virus (HBV) infection. Although currently available nucleos(t)ide analogs potently ...

HBX-DDB1 etkileşimi cccDNA'dan HPV transkripsiyonuna teşvik etmek için çok önemli bir adımdır, bu nedenle bu protokol HPV fonksiyonel tedavisi için yeni terapötik ajanlar keşfetmek için önemli bir varlık haline gelebilir. Prosedürümüz basittir ve ekrana sadece kısa bir süre gerektirir. Karıştırdığım etkileşim hücre lisisi gerektirmeden gerçek zamanlı olarak tespit edilebilir.Ayrıca, tarama kalitesi yüksek Z asal puanı ile tatmin edicidir. HBX-DDB1 etkileşiminin inhibisyonu Smc5/6'nın restorasyonuna yol açar ve bu da HPV transkripsiyonunun, protein ekspresyonunun ve cccDNA üretiminin bastırılmasına neden olur. Antiviral eylemin bu yeni mekanizması mevcut HPV tedavilerinin yetersizliklerinin üstesinden gelebilir.Protein-protein etkileşimleri ilaç hedeflerinin önemli sınıfıdır. Burada açıklanan, viral ve hasS proteinleri arasındaki etkileşimleri hedefleyen split-luciferase bazlı asit, diğer bulaşıcı hastalıklar için tedavilergeliştirmek için yeni bir strateji sağlayabilir. Protokolümüz basit ve anlaşılması kolay olsa da, bazı adımları görsel gösteri olmadan çoğaltmak zor olabilir.Böylece, görsel gösteri bizim protokol anlamak için büyük bir yardımcı olacaktır. 5. HEK293T hücrelerini 10 mililitre DMEM ile 100 milimetrelik bir tabağa beş kez 10 tohumlayarak ve bir gecede 37 santigrat derecede kuluçkaya yatırarak başlayın. Ertesi gün, toplam 300 mikrolitre hacim için DNA plazmidleri ve DNA yoğuşma tamponunu ifade eden HBx-LgBit ve SmBit-DDB1'in her birini bir mikrogram seyreltin.Artırıcı çözelti 16 mikrolitre ekleyin ve bir saniye girdap tarafından tüpleri karıştırın. Numuneyi oda sıcaklığında üç dakika kuluçkaya yatırın, ardından 60 mikrolitre transfeksiyon reaktifi ekleyin. Tüpü 10 saniye boyunca girdaplayın ve numuneyi sekiz dakika daha kuluçkaya yatırın.Bu arada, hücreleri ile çanak orta aspire ve PVS beş mililitre ile yıkayın. PVS aspire ve DMEM yedi mililitre ekleyin. Transfeksiyon kompleksleri ile tüpe üç mililitre DMEM ekleyin, pipet yukarı ve aşağı karıştırmak için, ve hücrelere karışımı ekleyin.Sonra, hücreleri 37 derecede kuluçkaya yatırın ve 10 saat boyunca %5 karbondioksit. Kuluçkadan sonra harcanan kültür ortamını çıkarın ve hücreleri beş mililitre PVS ile yıkayın. %0,25 tripsin EDTA'nın bir mililitresinde PVS'yi çıkarın ve hücreleri ayırmak için 37 derecede kuluçkaya yatırın.Daha sonra, dört mililitre DMEM ekleyin ve ortayı hücre tabakasının yüzeyine birkaç kez borulandırarak dağıtın ve süspansiyonu bir tüpe aktarın. Hücreleri 500 kez G'de beş dakika santrifüj edin, sonra süpernatant'ı atın ve hücre peletini bir mililitre PVS'de yeniden askıya alın. Cetrifugation tekrarlayın ve supernatant atın.Daha sonra, mililitre başına bir milyon hücre bir tohumlama yoğunluğu% 10 FBS ile desteklenen tamponlu hücre kültürü orta ile hücre pelet yeniden askıya. Pipet, 96 kuyulu bir plakanın her kuyuya hücre süspansiyonunun 50 mikrolitresi ve hücreleri 10 saat boyunca 37 derecelik kantine geri döndürün. Hücreler kuluçkaya yatarken, tarama bileşiklerini ve çözücüleri 13,5 X konsantrasyonuna seyreltin.Her kuyuya 12,5 mikrolitre parlak substrat ekleyin ve tabağı oda sıcaklığında beş dakika kuluçkaya yatırın. Bir luminometre ile temel parlaklığı ölçün ve bileşiklerin beş mikrolitre ekleyin ve hemen sonra her bir iyi DMSO kontrollü. İki saat boyunca her 30 dakikada bir parlaklık ölçün, ardından DMSO tedavisiile karşılaştırıldığında bileşiklerin inhibitör etkilerini hesaplayın.Temel parlaklık sinyalleri ölçüldü ve sinyal-arka plan oranı 80'den büyük olarak hesaplandı. Z asal 0,5'ten büyüktü ve bu da bu deneme sisteminin yüksek işlem li tarama için kabul edilebilir olduğunu gösteriyordu. DMSO sadece kontrolü ile karşılaştırıldığında% 40'tan fazla inhibisyonu için eşik ayarlayarak, nitazoxanide bir aday ilaç olarak tespit edildi.Daha önce bu yöntemle bir reaktivite küçük ölçekli bileşik kütüphane taranarak HBX-DDB1 etkileşiminin bir inhibitörü olarak nitazoxanide tespit. Nitazoxanide kullanarak HBX-DDB1 etkileşiminin inhibisyonu, viral transkripsiyonun azaltılması ve sonraki viral ürün düzeylerinin azaldığını doğruluzduk. Bir hedef proteine kaynaşmış bölünmüş luciferase optimal kısmı önceden belirlenmelidir.Bu durumda HPX, HPX'in C terminusu olan Large Bit'e ve DDB1'in son terminusunda Small Bit'e kaynaşmış olarak erimiş ve en iyi sonuçları vermiştir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

İnsan Meme Fibroblastlar Karsinom İlişkili Fibroblastlar Deneysel Nesil (CAFs)

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Utilizing Transcranial Magnetic Stimulation to Study the Human Neuromuscular System

İnsan Nöromusküler Sistem Eğitim Transkraniyal Manyetik Uyarım kullanımı

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been in use for more than 20 years 1, and has grown exponentially in popularity over the past decade.  While ...

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Roman Bitkisel Tedaviler Değerlendirmek için Sepsis Hayvan Modeli kullanımı

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Intraoperative Detection of Subtle Endometriosis: A Novel Paradigm for Detection and Treatment of Pelvic Pain Associated with the Loss of Peritoneal Integrity

Hafif Endometriozis İntraoperatif Algılama: Periton Bütünlüğü Kaybı ile İlişkili Pelvik Ağrı Tespiti ve Tedavisi İçin Yeni Bir Paradigma

Endometriosis is a  common disease affecting 40 to 70% of reproductive-aged women with chronic  pelvic pain (CPP) and/or infertility. The purpose of this ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Tümör-stromal Etkileşim için üç boyutlu Co-kültür Modeli

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Üç boyutlu (3D) Tümör Sfero Yayılması deneyindeki

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Utilization of the Soft Agar Colony Formation Assay to Identify Inhibitors of Tumorigenicity in Breast Cancer Cells

Yumuşak Agar koloni oluşturma deneyi kullanılması Meme Kanseri Hücrelerinde tümör oluşum nedenlerinin nin inhibitörlerini teşhis etmek üzere

Given the inherent difficulties in investigating the mechanisms of tumor progression in vivo, cell-based assays such as the soft agar colony formation ...

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the "RE:fine Drugs" System

&quot;RE: İnce ilaçlar kullanılması&quot; İlaç repurposing Hipotez Üretim Sistemi

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The ...

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Temporal LOB epilepsi ve EEG farelerde Radiotelemetry sistemini kullanarak izleme Pilokarpin modeli

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...