Name: peptiquick, a one-step incorporation of membrane proteins into biotinylated peptidiscs for streamlined protein binding assays
Uploaded: 2019-11-02T15:00:00
Duration: 15 min 4 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about PeptiQuick, a One-Step Incorporation of Membrane Proteins into Biotinylated Peptidiscs for Streamlined Protein Binding Assays at JoVE.com

हम कनाडा के प्राकृतिक विज्ञान और इंजीनियरिंग अनुसंधान परिषद धन्यवाद. जे एस एक सीजीएस-एम CIHR छात्रवृत्ति रखती है. एलटी जैव प्रौद्योगिकी और जैविक विज्ञान अनुसंधान परिषद द्वारा समर्थित किया गया था वित्त पोषित दक्षिण पश्चिम जैव विज्ञान डॉक्टरेट प्रशिक्षण भागीदारी [प्रशिक्षण अनुदान संदर्भ BB/ एफडी एक टीयर द्वितीय कनाडा अनुसंधान अध्यक्ष है.

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एफडी पेप्टीडिस्क बायोटेक के संस्थापक हैं जो अकादमिक समुदाय को पेप्टिक पेप्टाइड्स वितरित करते हैं। Peptidisc बायोटेक भी औद्योगिक जैव प्रौद्योगिकी और फार्मा कंपनियों के साथ भागीदारी कर रहा है उनके खोज कार्यप्रवाह में peptidisc लागू करने के लिए. इस लेख के खुले प्रवेश प्रकाशन Fort$Bio द्वारा प्रायोजित किया गया था.

जबकि डिटर्जेंट झिल्ली प्रोटीन निकालने और शुद्ध करने के लिए सबसे सरल तरीका बना हुआ है, इन सर्फेक्टेंट प्रोटीन स्थिरता, समारोह पर कई अवांछित प्रभाव हो सकते हैं, और डाउनस्ट्रीम विश्लेषण1,2,3, 4,5,6,7,8,9. इन कठिनाइयों ने झिल्ली के विकास को प्रेरित किया है, जो डिटर्जेंट की उपस्थिति को कम करने और देशी झिल्ली पर्यावरण को यथासंभव2,3,4 को दोहराने का प्रयास करते हैं ,5,6. तथापि, अधिकांश पुनर्गठन विधियों के लिए पुनर्गठन की शर्तों के महत्वपूर्ण अनुकूलन की आवश्यकता होती है और प्रायः अतिरिक्त शोधन चरणों की आवश्यकता होती है, जो अंतिम उपज7,8को कम करते हैं । पेप्टीडिस्क स्वतः लक्ष्य झिल्ली प्रोटीन के अनुकूल हो जाता है और तुलनात्मक रूप से , कम अनुकूलन और डाउनस्ट्रीमशुद्धि9,10की आवश्यकता होती है . इस प्रोटोकॉल में, PeptiQuick बहाव प्रोटीन प्रोटीन बातचीत विश्लेषण के लिए पुनर्गठन प्रोटोकॉल को कारगर बनाने के लिए एक सरल साधन के रूप में प्रस्तुत किया है.
हालांकि सीधा, वहाँ कई प्रयोगात्मक चेतावनी है कि असफल पुनर्गठन के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. इनमें से सबसे आम प्रोटीन एकत्रीकरण के कारण है। इसलिए पुनर्गठन प्रक्रिया की निगरानी के लिए आकार बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी करना महत्वपूर्ण है। उदाहरण के लिए, शून्य आयतन पर आकार अपवर्जन शिखर प्रोटीन समुच्चय का सूचक है (चित्र 3ख)17,18. झिल्ली प्रोटीन समुच्चय आम तौर पर पुनर्गठन से पहले उप इष्टतम डिटर्जेंट शर्तों के लिए लंबे समय तक जोखिम पर फार्म. विशेष रूप से, यह पाया गया है कि डिटर्जेंट में झिल्ली प्रोटीन समुच्चय बनाने के लिए जब केन्द्रापसारक उपकरणों पर ultrafiltration द्वारा ध्यान केंद्रित करते हैं. इस मामले में, संवेदनशील झिल्ली प्रोटीन वैक्यूम अल्ट्रा निस्पंदन, एकाग्रता की एक gentler और अधिक सजातीय विधि का उपयोग कर ध्यान केंद्रित किया जा सकता है के बाद से फिल्टर करने के लिए प्रोटीन के अधिशोषण कम है.
सामान्य में, प्रोटीन एकाग्रता से बचने के लिए, eluted IMAC अंशों जमा किया जाना चाहिए, और एक aliquot एक आकार बहिष्करण स्तंभ पर इंजेक्शन इसके पुनर्गठन की गुणवत्ता की जांच करने के लिए. यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि अनिगमित मुक्त पेप्टाइड एल्यूट्स मुख्य पेप्टिक शिखर के ठीक बाद (चित्र 3ख) । मुक्त पाड़ जरूरी downstream प्रयोगों में बाधा नहीं है. हालांकि, यदि आवश्यक हो, तो इस अतिरिक्त को आकार बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी द्वारा हटाया जा सकता है। वैकल्पिक रूप से, पुनर्गठन के दौरान धोने की मात्रा में वृद्धि, और IMAC राल से elution से पहले, प्रभावी ढंग से मुक्त पेप्टीडिस्क पेप्टाइड के अधिकांश को दूर करने के लिए पर्याप्त है. इसलिए, पुनर्गठन की गुणवत्ता की जांच करने के लिए आकार बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी की सिफारिश की जाती है।
BLI प्रयोग दोनों ligand और analyte सांद्रता के सावधान अनुकूलन की आवश्यकता है. Ligand बाइंडिंग एक स्पष्ट संकेत प्राप्त करने के लिए पर्याप्त होना चाहिए, लेकिन ओवरलोडिंग संकेत संतृप्ति का कारण होगा, जो टिप सतह पर भीड़ और steric बाधा से डेटा कलाकृतियों में परिणाम. अतः लिगन्ड की सांद्रता तथा समय की लंबाई दोनों को टिगंड विलयन में युक्ति व्यय करने के लिए प्रत्येक प्रोटीन नमूने(पूरक चित्र 2)के लिए अनुकूलित किया जाना चाहिए। एनालाइट एकाग्रता भी अनुकूलित किया जाना चाहिए। यदि वियोजन स्थिरांक ज्ञात है, तो यह चरण आसान हो जाता है, क्योंकि सांद्रता श्रेणी का अनुमान लगाया जा सकता है. इस विश्लेषण के लिए एक अच्छा प्रारंभिक बिंदु 0.1 और 20 गुना के बीच प्रोटीन सांद्रता का उपयोग कर रहा है उम्मीद Kd19.
BLI डेटा प्राप्ति के बाद, गलत अर्थ से बचने के लिए सावधान डेटा विश्लेषण किया जाना चाहिए। वियोजन स्थिरांक की परिकलन बाइंडिंग वक्र के उपयुक्त पर निर्भर करता है। जब तक बाध्यकारी stoichimetry पहले से ही जाना जाता है, एक शास्त्रीय 1:1 द्वि-अणुक बातचीत मॉडल प्रारंभिक फिटिंग के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए. यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि एक विषम बंधन वक्र अक्सर कलाकृतियों और उच्च एनालिटिक एकाग्रता, जो एक जटिल बाध्यकारी मॉडल के रूप में गलत अर्थ लगाया जा सकता है की वजह से गैर-आदर्श व्यवहार का परिणाम है। इसलिए, analyte एकाग्रता को कम जब तक सेंसरग्राम प्रोफ़ाइल प्रदर्शित करता है 1:1 बाध्यकारी stoichimetry अधिक जटिल बातचीत से विषम बाइंडिंग अंतर में मदद कर सकते हैं. इसके बाद किसी भी अवशिष्ट विषमांगी बाइंडिंग डेटा को उस प्रकार बजादिया जाता है जैसा कि चित्र 420में दर्शाया गया है।
इस रिपोर्ट में, फुआ-कोलम अन्योन्यक्रिया के लिए 2ण्28 - 0ण्74 एनएम का वियोजन स्थिरांक मापा जाता है। यह मान क्रमशः ITC या MST का उपयोग करके नैनोडिस्क या पेप्टीडिस्क के साथ हमारे समूह में निर्धारित वियोजन स्थिरांक के अनुरूप है (चित्र 4E)16. इस स्थिरता बातचीत गतिज निर्धारित करने के लिए एक साधन के रूप में peptidisc पुनर्गठन और BLI विश्लेषण के बारे में विश्वास प्रदान करता है. महत्वपूर्ण बात यह है कि प्रोटीन आमतौर पर या तो बायोटिन रासायनिक पार से जोड़ने या साइट विशेष इसके माध्यम से ई. कोलाई बायोटिन लिगासे BirA21का उपयोग कर streptavidin biosensors पर स्थिर कर रहे हैं ध्यान दिया जाना चाहिए. जाहिर है, peptidisc पाड़ biotinylating, लक्ष्य झिल्ली प्रोटीन के बजाय, कई फायदे हैं. Scaffold biotinylation समय बचाता है और महत्वपूर्ण प्रोटीन बाध्यकारी साइटों को बाधित करने की क्षमता को कम करता है. हमने यह भी पाया है कि PeptiQuick प्रोटीन लक्ष्य वर्गों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए लागू होता है, जी प्रोटीन-युग्मित रिसेप्टर्स (GPCRs), आयन चैनलों सहित, और जेड बैरल झिल्ली प्रोटीन. सामान्य तौर पर, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि एक कुल मुक्त राज्य में झिल्ली प्रोटीन का प्रारंभिक डिटर्जेंट निकालने महत्वपूर्ण है, और पेप्टिक में तत्काल पुनर्गठन डाउनस्ट्रीम एकत्रीकरण समस्याओं को कम करता है। सादगी को देखते हुए, यह कल्पना की है कि PeptiQuick अन्य streptavidin आधारित बाध्यकारी परख के लिए बढ़ाया जाएगा, इस तरह की सतह plasmon अनुनाद (एसपीआर), एलिसा परख के रूप में, और आत्मीयता पुल-डाउन streptavidin मोती का उपयोग कर.

झिल्ली प्रोटीन अक्सर दवा या एंटीबॉडी खोज अनुसंधान कार्यक्रमों से बाहर रखा गया है क्योंकि झिल्ली प्रोटीन की प्रवृत्ति के कारण लिपिड bilayer पर्यावरण के बाहर कुल, विशेष रूप से डिटर्जेंट की उपस्थिति में1. इसलिए, हाल के वर्षों में, कई झिल्ली mimetics (कहा हुआ पाड़) अलगाव और एक पूरी तरह से डिटर्जेंट मुक्त वातावरण में झिल्ली प्रोटीन की पूछताछ की सुविधा के लिए विकसित किया गया है (यानी, नैनोडिस्क, SMALPs, उभयपोल, आदि) 2,3,4,5,6. हालांकि, इन mimetics में झिल्ली प्रोटीन के पुनर्गठन अक्सर व्यापक अनुकूलन की आवश्यकता है, जो समय लेने वाली है और आम तौर पर प्रोटीन वसूलीकीहानि के साथ 7,8. इन सीमाओं को दूर करने के लिए, हमारी प्रयोगशाला ने हाल ही में एक "एक आकार फिट-सभी" peptidisc9के रूप में जाना फार्मूला विकसित किया है. Peptidisc का गठन किया है जब एक डिजाइनर 4.5 केडी एम्फीपैथिक द्विहेलपेक्टिव पेप्टाइड की कई प्रतियां एक लक्ष्य झिल्ली प्रोटीन के हाइड्रोफोबिक सतह के लिए बाध्य. पेप्टीडिस्क में स्थिर पुनर्गठन डिटर्जेंट को हटाने पर होता है, दोनों अंतर्जात लिपिड और पानी में घुलनशील कणों में solubilized झिल्ली प्रोटीन entrapping. ये स्थिर कणों अब कई बहाव अनुप्रयोगों के लिए अनुकूल हैं.
Peptidisc विधि कई फायदे प्रदान करता है; उदाहरण के लिए, पुनर्गठन सीधा है, क्योंकि लक्ष्य पर peptidisc पाड़ की बाध्यकारी प्रोटीन टेम्पलेट ही9,10द्वारा निर्देशित है. पेप्टाइड स्टोइकियोमेट्री भी स्वयं निर्धारित है, और exogenous लिपिड के अलावा आवश्यक नहीं है। Peptidisc गठन सरल डिटर्जेंट तनुता द्वारा होता है, polystyrene मोती पर डायलिसिस या अधिशोषण पर एक महत्वपूर्ण लाभ है, जो अक्सर गैर विशिष्ट सतह संघ और एकत्रीकरण11,12 के कारण कम प्रोटीन उपज में परिणाम ,13. अंतिम पेप्टिक एसेम्बली अत्यधिक थर्मोस्टेबल है और हमेशा विभिन्न बफरों में या द्विसंयोजक कोनेशन की उपस्थिति में घुलनशील होती है (उदा., नी2+)। पाड़ की शुद्धता और संरचनात्मक एकरूपता भी उच्च है (उदा., endotoxin मुक्त), और पेप्टाइड कार्यात्मक विभिन्न पदों पर रखा समूहों के साथ अनुकूलित किया जा सकता है.
हम यहाँ एक प्रयोगशाला कार्यप्रवाह प्रस्तुत PeptiQuick कहा जाता है, यह भी पर मोती पुनर्गठन 9 के रूप में जाना जाताहै. इस प्रोटोकॉल एक ही कदम में और एक ही क्रोमैटोग्राफी समर्थन पर झिल्ली प्रोटीन शुद्धि और peptidisc पुनर्गठन को जोड़ती है. जैसा कि नाम इंगित करता है, PeptiQuick अन्य पुनर्गठन विधियों की तुलना में तेजी से है, और यह भी गंभीरता से डिटर्जेंट के लिए जोखिम समय कम कर देता है. नकारात्मक डिटर्जेंट प्रभाव जैसे प्रोटीन खुलासा और एकत्रीकरण अक्सर एक समय पर निर्भर तरीके से होते हैं; इसलिए, डिटर्जेंट जोखिम को कम करने के लिए देशी प्रोटीन अनुरूपता14,15बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण है. यह प्रोटीन बातचीत और ligand बाध्यकारी सजातीयता पर रिपोर्ट है कि तरीकों की सटीकता के लिए महत्वपूर्ण है.
इस प्रोटोकॉल को विकसित करते समय, हम पेप्टीडिस्क पाड़ के उपन्यास बायोटिनीलेट संस्करण पेश करते हैं, जिसे बायो-पेप्टीडिस्क कहा जाता है। बायोटिन कार्यात्मक समूह ों को स्ट्रेप्टाविडिन लेपित सतहों पर लक्ष्य झिल्ली प्रोटीन के लगाव की अनुमति देते हैं। चूंकि बायोटिन लेबलिंग पाड़ तक सीमित है, लक्ष्य झिल्ली प्रोटीन पर बाध्यकारी साइटों unaltered रहते हैं. जैव-पेप्टीडिस्क का उपयोग करना, जीवाणु झिल्ली रिसेप्टर फुआ और एंटीमाइक्रोबियल पेप्टाइड पेटिका एम (कोल) की बाध्यकारी गतिजता16निर्धारित की जाती है। इस आत्मीयता biolayer interfermetry (BLI) के माध्यम से मापा जाता है, जो एक सेंसर टिप से परिलक्षित सफेद प्रकाश हस्तक्षेप पैटर्न के आधार पर वास्तविक समय में बातचीत का विश्लेषण करती है.
इस प्रोटोकॉल का उपयोग करके, BLI विश्लेषण के दौरान डिटर्जेंट की आवश्यकता समाप्त हो जाती है, जो एक महत्वपूर्ण विकास है, क्योंकि डिटर्जेंट बातचीत को बाधित कर सकता है। बंधन सजातीयता इस विधि के साथ तेजी से मापा जा सकता है, और परिणाम पहले नैनोडिस्क और आइसोथर्मल अनुमापन कैलोरीमिति (आईटीसी)16का उपयोग कर रिपोर्ट उन लोगों के लिए तुलनीय हैं। PeptiQuick कार्यप्रवाह में महत्वपूर्ण कदम दिखाए जाते हैं और चर्चा की, जैसे प्रोटीन तैयारी, डिटर्जेंट कमजोर पड़ने, पेप्टाइड इसके अलावा, और पुनर्गठन, के साथ-साथ BLI परख में लिगन्ड और एनालाइट बाइंडिंग का निवारण करने के लिए युक्तियों के साथ। PeptiQuick कार्यप्रवाह का उपयोग करना, यह पाया गया है कि झिल्ली प्रोटीन peptidiscs में कब्जा कर लिया जा सकता है और उनकी बातचीत एक दिन के भीतर मापा.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>30 kDa cut-off centrifugal concentrator</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C7715</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>69-52-3</td>
			<td>Sodium Salt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Peptidisc Peptide</td>
			<td>Peptidisc Biotech</td>
			<td>https://peptidisc.com</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9048-46-8</td>
			<td>Lyophilized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>10035-04-8</td>
			<td>Certified ACS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>6381-92-6</td>
			<td>Biotechnology Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ettan LC (AKTA)</td>
			<td>Amersham Pharmacia Biotech</td>
			<td>18-1145-58</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>50-99-7</td>
			<td>Anhydrous, Reagent Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>56-81-5</td>
			<td>Certified ACS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>288-32-4</td>
			<td>Biotechnology Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lauryldimethylamine oxide (LDAO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>101822204</td>
			<td>~30% in H2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>10034-99-8</td>
			<td>Certified ACS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfluidizer</td>
			<td>Microfluidics</td>
			<td>M-110L</td>
			<td>Fit with F20Y 75&#181; diruption chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ni-NTA Resin</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>H-320-50</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-binding 96well BLI Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>655076</td>
			<td>Microplate, PS, 96 well, F-Bottom (chimney well), Black, Fluotrac, Med. Binding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octet Red96</td>
			<td>Fort&#233;Bio</td>
			<td>OCTET RED96E-GxP</td>
			<td>Octet RED96e instrument, Octet CFR software, desktop computer, LC monitor, accessory kit, IQ/OQ kit, PQ Kits and one-year warranty</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylmethanesulfonylfluoride (PMSF)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P-7626</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein Assay Dye - Reagent Concentrate</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>5000006</td>
			<td>Used in the bradford assay to determine protein concentration - 5x concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td>Biotechnology Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin (SA) Biosensors</td>
			<td>ForteBio</td>
			<td>18-5019</td>
			<td>One tray of 96 biosensors coated with streptavidin for quantitation, screening, or kinetic applications.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superdex S200 (300/10)</td>
			<td>Amersham Pharmacia Biotech</td>
			<td>175175-01</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiamine</td>
			<td>Merck</td>
			<td>69271</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>77-86-1</td>
			<td>Reagent Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>900998-1</td>
			<td>Biotechnology Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>56-40-6</td>
			<td>Reagent Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>365668</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
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peptiquick, a one-step incorporation of membrane proteins into biotinylated peptidiscs for streamlined protein binding assays

झिल्ली प्रोटीन, ट्रांसपोर्टरों सहित, चैनल, और रिसेप्टर्स, सेलुलर proteome के लगभग एक चौथाई और वर्तमान दवा लक्ष्यों के आधे से अधिक का गठन. फिर भी, उनकी विशेषता और शैक्षिक या औद्योगिक सेटिंग्स में शोषण के लिए एक प्रमुख बाधा यह है कि सबसे जैव रासायनिक, जैव भौतिक, और दवा स्क्रीनिंग रणनीतियों इन प्रोटीन की आवश्यकता के लिए एक पानी में घुलनशील राज्य में हो. हमारी प्रयोगशाला ने हाल ही में पेप्टीडिस्क विकसित किया है, एक झिल्ली मिमेटिक की पेशकश एक "एक आकार फिट सभी" झिल्ली प्रोटीन घुलनशीलता की समस्या के लिए दृष्टिकोण. हम यहाँ एक सुव्यवस्थित प्रोटोकॉल है कि एक एकल क्रोमैटोग्राफी कदम में प्रोटीन शुद्धि और peptidisc पुनर्गठन को जोड़ती है मौजूद है. इस कार्यप्रवाह, PeptiQuick कहा जाता है, polystyrene मोती के साथ डायलिसिस और ऊष्मायन को दरकिनार करने के लिए अनुमति देता है, जिससे बहुत डिटर्जेंट के लिए जोखिम को कम करने, प्रोटीन विकृतीकरण, और नमूना हानि. जब PeptiQuick biotinylated पाड़ के साथ किया जाता है, तैयारी सीधे streptavidin लेपित सतहों से जुड़ा जा सकता है. झिल्ली प्रोटीन लक्ष्य biotinylate या संशोधित करने के लिए कोई ज़रूरत नहीं है. PeptiQuick झिल्ली रिसेप्टर FhuA और एंटीमाइक्रोबियल लिगंड पेटलिन एम के साथ यहाँ प्रदर्शित किया जाता है, biolayer interfermetry का उपयोग करने के लिए उनकी बातचीत की सटीक गतिज निर्धारित. यह निष्कर्ष निकाला है कि PeptiQuick तैयार करने और एक डिटर्जेंट मुक्त वातावरण में एक दिन के भीतर झिल्ली प्रोटीन-लिगंड बातचीत का विश्लेषण करने के लिए एक सुविधाजनक तरीका है.

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PeptiQuick, a One-Step Incorporation of Membrane Proteins into Biotinylated Peptidiscs for Streamlined Protein Binding Assays

हम एक विधि है कि एक ही क्रोमैटोग्राफी कदम में peptidiscs में झिल्ली प्रोटीन शुद्धि और पुनर्गठन को जोड़ती है प्रस्तुत करते हैं. Biotinylated पाड़ प्रत्यक्ष सतह लगाव और biolayer interfermetry के माध्यम से प्रोटीन-लिगंड बातचीत की माप के लिए उपयोग किया जाता है.

PeptiQuick, एक एक कदम झिल्ली प्रोटीन का शामिल Biotinylated Peptidiscs के लिए सुव्यवस्थित प्रोटीन बंधन परख के लिए

Membrane proteins, including transporters, channels, and receptors, constitute nearly one-fourth of the cellular proteome and over half of current drug ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

पाड़ Liposomes का उपयोग लिपिड-समीपस्थ प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत पुनर्गठित करने<em&gt; इन विट्रो</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Purification of Biotinylated Cell Surface Proteins from Rhipicephalus microplus Epithelial Gut Cells

Purification of Biotinylated Cell Surface Proteins from Rhipicephalus microplus Epithelial Gut Cells

बायोटिनिलाटेड सेल सतह प्रोटीन की शुद्धि<em&gt; राइप्सीफलस माइक्रोप्रलस</em&gt; एपिथेलियल पेट कोशिकाओं

Rhipicephalus microplus &#8211; the cattle tick &#8211; is the most significant ectoparasite in terms of economic impact on livestock as a vector of ...

Biotinylated Cell-penetrating Peptides to Study Intracellular Protein-protein Interactions

Biotinylated सेल-मर्मज्ञ पेप्टाइड्स Intracellular प्रोटीन-प्रोटीन बातचीत का अध्ययन करने के लिए

Here we present a protocol to study intracellular protein-protein interactions that is based on the widely used biotin-avidin pull-down system. The ...

Detergent-free Ultrafast Reconstitution of Membrane Proteins into Lipid Bilayers Using Fusogenic Complementary-charged Proteoliposomes.

डिटर्जेंट-मुक्त Ultrafast Bilayers में झिल्ली प्रोटीन का पुनर्गठन Fusogenic पूरक का उपयोग कर Proteoliposomes आरोप लगाया ।

Detergents are indispensable for delivery of membrane proteins into 30-100 nm small unilamellar vesicles, while more complex, larger model lipid bilayers ...

2 in 1: One-step Affinity Purification for the Parallel Analysis of Protein-Protein and Protein-Metabolite Complexes

2 में 1: प्रोटीन और प्रोटीन-Metabolite परिसरों के समानांतर विश्लेषण के लिए एक कदम संबध शुद्धि

Cellular processes are regulated by interactions between biological molecules such as proteins, metabolites, and nucleic acids. While the investigation of ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

सेल-सेल संपर्कों में प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन की एक प्रतिदीप्ति अस्थिरता स्पेक्ट्रोस्कोपी परख

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

प्रतिलेखन फैक्टर के उच्च संवेदनशीलता माप-प्रतिस्पर्धी अनुमापन द्वारा डीएनए बाध्यकारी समानताएं प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग

Accurate quantification of transcription factor (TF)-DNA interactions is essential for understanding the regulation of gene expression. Since existing ...

Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids

जीवाणु रोगजनक फैटी एसिड समावेश के अध्ययन के लिए चिकन अंडे Yolk से लाइपोप्रोटीन कणों का अलगाव झिल्ली Phospholipids में शामिल

Staphylococcus aureus and other Gram-positive pathogens incorporate fatty acids from the environment into membrane phospholipids. During infection, the ...

Detergent-assisted Reconstitution of Recombinant Drosophila Atlastin into Liposomes for Lipid-mixing Assays

Detergent-assisted Reconstitution of Recombinant Drosophila Atlastin into Liposomes for Lipid-mixing Assays

लिपिड-मिश्रण परख के लिए Liposomes में रिकॉमबिनेंट Drosophila Atlastin के डिटर्जेंट की मदद से पुनर्गठन

Membrane fusion is a crucial process in the eukaryotic cell. Specialized proteins are necessary to catalyze fusion. Atlastins are endoplasmic reticulum ...

Measuring Nucleotide Binding to Intact, Functional Membrane Proteins in Real Time

वास्तविक समय में बरकरार, कार्यात्मक झिल्ली प्रोटीन के लिए न्यूक्लियोटाइड बाइंडिंग को मापना

We have developed a method to measure binding of adenine nucleotides to intact, functional transmembrane receptors in a cellular or membrane environment. ...