Name: production of high-titer infectious influenza pseudotyped particles with envelope glycoproteins from highly pathogenic h5n1 and avian h7n9 viruses
Uploaded: 2020-01-15T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Production of High-Titer Infectious Influenza Pseudotyped Particles with Envelope Glycoproteins from Highly Pathogenic H5N1 and Avian H7N9 Viruses at JoVE.com

وقد حظي هذا العمل بدعم من المنح المقدمة من الطب والعلوم الصحية وخطه التكنولوجيا في مقاطعه تشجيانغ (أرقام المنح ، 2017KY538) ، والطب البلدي في هانغتشو ، وخطه العلوم الصحية والتكنولوجيا (أرقام المنح ، OO20190070) ، والعلوم الطبية في هانغتشو التكنولوجيا الرئيسية المشروع (أرقام المنح ، 2014Z11) والبلدية هانغتشو مشروع التطبيق المستقل للتنمية الاجتماعية والبحث العلمي (أرقام المنح ، 20191203B134).

1. اليوم الأول: ثقافة الخلية والبذر
<ol><li>زراعه الكلي الجنينية البشرية (يشيك) 293T/17 الخلايا في اطباق 60 مم مع المتوسطة الاساسيه المعدلة دولبيكو (DMEM) تستكمل مع 10 ٪ مصل الأبقار الجنينية (الدم) و 100 U/mL البنسلين-ستربتوميسين (DMEMالمتوسطة كامله ، DCM) في 37 درجه مئوية ، و 80 5 ملاحظه: يتم المستحسن 293T/17...

<ol>
	<li>Knipe, D. M., Howley, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fields Virology (6th). , (2013).</li><li>White, J. M., Delos, S. E., Brecher, M., Schornberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+and+mechanisms+of+viral+membrane+fusion+proteins:+multiple+variations+on+a+common+theme.">Structures and mechanisms of viral membrane fusion proteins: multiple variations on a common theme.</a> Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology. 43 (3), 189-219 (2008).</li><li>Bright, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-clade+protective+immune+responses+to+influenza+viruses+with+H5N1+HA+and+NA+elicited+by+an+influenza+virus-like+particle.">Cross-clade protective immune responses to influenza viruses with H5N1 HA and NA elicited by an influenza virus-like particle.</a> PLoS One. 3 (1), 1501 (2008).</li><li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+pseudotyped+influenza+viral+particles+in+neutralizing+antibody+detection.">Reliability of pseudotyped influenza viral particles in neutralizing antibody detection.</a> PLoS One. 9 (12), 113629 (2014).</li><li>Wyatt, R., Sodroski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+HIV-1+envelope+glycoproteins:+fusogens,+antigens,+and+immunogens.">The HIV-1 envelope glycoproteins: fusogens, antigens, and immunogens.</a> Science. 280 (5371), 1884-1888 (1998).</li><li>Joe, A. K., Foo, H. H., Kleeman, L., Levine, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transmembrane+domains+of+Sindbis+virus+envelope+glycoproteins+induce+cell+death.">The transmembrane domains of Sindbis virus envelope glycoproteins induce cell death.</a> Journal of Virology. 72 (5), 3935-3943 (1998).</li><li>Albecka, A., Laine, R. F., Janssen, A. F., Kaminski, C. F., Crump, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HSV-1+Glycoproteins+Are+Delivered+to+Virus+Assembly+Sites+Through+Dynamin-Dependent+Endocytosis.">HSV-1 Glycoproteins Are Delivered to Virus Assembly Sites Through Dynamin-Dependent Endocytosis.</a> Traffic. 17 (1), 21-39 (2016).</li><li>Huang, A. S., Palma, E. L., Hewlett, N., Roizman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudotype+formation+between+enveloped+RNA+and+DNA+viruses.">Pseudotype formation between enveloped RNA and DNA viruses.</a> Nature. 252 (5485), 743-745 (1974).</li><li>Rubin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Control+of+Cellular+Susceptibility+to+Pseudotypes+of+Rous+Sarcoma+Virus.">Genetic Control of Cellular Susceptibility to Pseudotypes of Rous Sarcoma Virus.</a> Virology. 26, 270-276 (1965).</li><li>Steffen, I., Simmons, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudotyping+Viral+Vectors+With+Emerging+Virus+Envelope+Proteins.">Pseudotyping Viral Vectors With Emerging Virus Envelope Proteins.</a> Current Gene Therapy. 16 (1), 47-55 (2016).</li><li>Bartosch, B., Dubuisson, J., Cosset, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infectious+hepatitis+C+virus+pseudo-particles+containing+functional+E1-E2+envelope+protein+complexes.">Infectious hepatitis C virus pseudo-particles containing functional E1-E2 envelope protein complexes.</a> Journal of Experimental Medicine. 197 (5), 633-642 (2003).</li><li>Bian, T., Zhou, Y., Bi, S., Tan, W., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HCV+envelope+protein+function+is+dependent+on+the+peptides+preceding+the+glycoproteins.">HCV envelope protein function is dependent on the peptides preceding the glycoproteins.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 378 (1), 118-122 (2009).</li><li>Gudima, S., Meier, A., Dunbrack, R., Taylor, J., Bruss, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+potentially+important+elements+of+the+hepatitis+B+virus+large+envelope+protein+are+dispensable+for+the+infectivity+of+hepatitis+delta+virus.">Two potentially important elements of the hepatitis B virus large envelope protein are dispensable for the infectivity of hepatitis delta virus.</a> Journal of Virology. 81 (8), 4343-4347 (2007).</li><li>Yoshida, Y., Emi, N., Hamada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VSV-G-pseudotyped+retroviral+packaging+through+adenovirus-mediated+inducible+gene+expression.">VSV-G-pseudotyped retroviral packaging through adenovirus-mediated inducible gene expression.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 232 (2), 379-382 (1997).</li><li>Burns, J. C., Friedmann, T., Driever, W., Burrascano, M., Yee, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicular+stomatitis+virus+G+glycoprotein+pseudotyped+retroviral+vectors:+concentration+to+very+high+titer+and+efficient+gene+transfer+into+mammalian+and+nonmammalian+cells.">Vesicular stomatitis virus G glycoprotein pseudotyped retroviral vectors: concentration to very high titer and efficient gene transfer into mammalian and nonmammalian cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (17), 8033-8037 (1993).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+pseudoparticles+paired+with+hemagglutinin+and+neuraminidase+from+highly+pathogenic+H5N1+influenza+and+avian+influenza+A+(H7N9)+viruses.">Characterization of pseudoparticles paired with hemagglutinin and neuraminidase from highly pathogenic H5N1 influenza and avian influenza A (H7N9) viruses.</a> Virus Research. 253, 20-27 (2018).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infectivity+of+Pseudotyped+Particles+Pairing+Hemagglutinin+of+Highly+Pathogenic+Avian+Influenza+a+H5N1+Virus+with+Neuraminidases+of+The+2009+Pandemic+H1N1+and+a+Seasonal+H3N2.">Infectivity of Pseudotyped Particles Pairing Hemagglutinin of Highly Pathogenic Avian Influenza a H5N1 Virus with Neuraminidases of The 2009 Pandemic H1N1 and a Seasonal H3N2.</a> Journal of Bioterrorism &amp; Biodefense. 2, 104 (2011).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+neuraminidases+from+the+highly+pathogenic+avian+H5N1+and+2009+pandemic+H1N1+influenza+A+viruses.">Characterization of neuraminidases from the highly pathogenic avian H5N1 and 2009 pandemic H1N1 influenza A viruses.</a> PLoS One. 5 (12), 15825 (2010).</li><li>Nefkens, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemagglutinin+pseudotyped+lentiviral+particles:+characterization+of+a+new+method+for+avian+H5N1+influenza+sero-diagnosis.">Hemagglutinin pseudotyped lentiviral particles: characterization of a new method for avian H5N1 influenza sero-diagnosis.</a> Journal of Clinical Virology. 39 (1), 27-33 (2007).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemagglutinin+and+neuraminidase+matching+patterns+of+two+influenza+A+virus+strains+related+to+the+1918+and+2009+global+pandemics.">Hemagglutinin and neuraminidase matching patterns of two influenza A virus strains related to the 1918 and 2009 global pandemics.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 387 (2), 405-408 (2009).</li><li>Lin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oseltamivir+boosts+2009+H1N1+virus+infectivity+in+vitro.">Oseltamivir boosts 2009 H1N1 virus infectivity in vitro.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 390 (4), 1305-1308 (2009).</li><li>McKay, T., Patel, M., Pickles, R. J., Johnson, L. G., Olsen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+M2+envelope+protein+augments+avian+influenza+hemagglutinin+pseudotyping+of+lentiviral+vectors.">Influenza M2 envelope protein augments avian influenza hemagglutinin pseudotyping of lentiviral vectors.</a> Gene Therapy. 13 (8), 715-724 (2006).</li><li>Pan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+mediates+avian+influenza+H5N1+pseudotyped+particle-induced+lung+inflammation+through+NF-kappaB+and+p38+MAPK+signaling+pathways.">Autophagy mediates avian influenza H5N1 pseudotyped particle-induced lung inflammation through NF-kappaB and p38 MAPK signaling pathways.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 306 (2), 183-195 (2014).</li><li>Szecsi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+neutralising+antibodies+by+virus-like+particles+harbouring+surface+proteins+from+highly+pathogenic+H5N1+and+H7N1+influenza+viruses.">Induction of neutralising antibodies by virus-like particles harbouring surface proteins from highly pathogenic H5N1 and H7N1 influenza viruses.</a> Virology Journal. 3, 70 (2006).</li><li>Garcia, J. M., Lagarde, N., Ma, E. S., de Jong, M. D., Peiris, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+and+evaluation+of+an+influenza+A+(H5)+pseudotyped+lentiviral+particle-based+serological+assay.">Optimization and evaluation of an influenza A (H5) pseudotyped lentiviral particle-based serological assay.</a> Journal of Clinical Virology. 47 (1), 29-33 (2010).</li><li>Garcia, J. M., Lai, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+influenza+pseudotyped+lentiviral+particles+and+their+use+in+influenza+research+and+diagnosis:+an+update.">Production of influenza pseudotyped lentiviral particles and their use in influenza research and diagnosis: an update.</a> Expert Review of Anti-infective Therapy. 9 (4), 443-455 (2011).</li><li>Haynes, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza-pseudotyped+Gag+virus-like+particle+vaccines+provide+broad+protection+against+highly+pathogenic+avian+influenza+challenge.">Influenza-pseudotyped Gag virus-like particle vaccines provide broad protection against highly pathogenic avian influenza challenge.</a> Vaccine. 27 (4), 530-541 (2009).</li><li>Schmeisser, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+characterization+of+mammalian+virus-like+particles+from+modified+vaccinia+virus+Ankara+vectors+expressing+influenza+H5N1+hemagglutinin+and+neuraminidase.">Production and characterization of mammalian virus-like particles from modified vaccinia virus Ankara vectors expressing influenza H5N1 hemagglutinin and neuraminidase.</a> Vaccine. 30 (23), 3413-3422 (2012).</li><li>Liu, Y. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus+(SARS-CoV)+S+glycoprotein+and+influenza+matrix+1+efficiently+form+virus-like+particles+(VLPs)+that+protect+mice+against+challenge+with+SARS-CoV.">Chimeric severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) S glycoprotein and influenza matrix 1 efficiently form virus-like particles (VLPs) that protect mice against challenge with SARS-CoV.</a> Vaccine. 29 (38), 6606-6613 (2011).</li><li>Moeschler, S., Locher, S., Conzelmann, K. K., Kramer, B., Zimmer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Lyssavirus-Neutralizing+Antibodies+Using+Vesicular+Stomatitis+Virus+Pseudotype+Particles.">Quantification of Lyssavirus-Neutralizing Antibodies Using Vesicular Stomatitis Virus Pseudotype Particles.</a> Viruses. 8 (9), 254 (2016).</li><li>Lai, A. L., Millet, J. K., Daniel, S., Freed, J. H., Whittaker, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SARS-CoV+Fusion+Peptide+Forms+an+Extended+Bipartite+Fusion+Platform+that+Perturbs+Membrane+Order+in+a+Calcium-Dependent+Manner.">The SARS-CoV Fusion Peptide Forms an Extended Bipartite Fusion Platform that Perturbs Membrane Order in a Calcium-Dependent Manner.</a> Journal of Molecular Biology. 429 (24), 3875-3892 (2017).</li><li>Millet, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Middle+East+respiratory+syndrome+coronavirus+infection+is+inhibited+by+griffithsin.">Middle East respiratory syndrome coronavirus infection is inhibited by griffithsin.</a> Antiviral Research. 133, 1-8 (2016).</li><li>Millet, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+Pseudotyped+Particles+to+Study+Highly+Pathogenic+Coronaviruses+in+a+Biosafety+Level+2+Setting.">Production of Pseudotyped Particles to Study Highly Pathogenic Coronaviruses in a Biosafety Level 2 Setting.</a> Journal of Visualized Experiments. (145), e59010 (2019).</li><li>Ma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+leukemia+virus+pseudotypes+of+La+Crosse+and+Hantaan+Bunyaviruses:+a+system+for+analysis+of+cell+tropism.">Murine leukemia virus pseudotypes of La Crosse and Hantaan Bunyaviruses: a system for analysis of cell tropism.</a> Virus Research. 64 (1), 23-32 (1999).</li><li>Wool-Lewis, R. J., Bates, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Ebola+virus+entry+by+using+pseudotyped+viruses:+identification+of+receptor-deficient+cell+lines.">Characterization of Ebola virus entry by using pseudotyped viruses: identification of receptor-deficient cell lines.</a> Journal of Virology. 72 (4), 3155-3160 (1998).</li><li>Chen, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+design+of+more+effective+avian+replication-incompetent+retroviral+vectors.">Production and design of more effective avian replication-incompetent retroviral vectors.</a> Developmental Biology. 214 (2), 370-384 (1999).</li><li>Kaku, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Second+generation+of+pseudotype-based+serum+neutralization+assay+for+Nipah+virus+antibodies:+sensitive+and+high-throughput+analysis+utilizing+secreted+alkaline+phosphatase.">Second generation of pseudotype-based serum neutralization assay for Nipah virus antibodies: sensitive and high-throughput analysis utilizing secreted alkaline phosphatase.</a> Journal of Virological Methods. 179 (1), 226-232 (2012).</li><li>Rudiger, D., Kupke, S. Y., Laske, T., Zmora, P., Reichl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiscale+modeling+of+influenza+A+virus+replication+in+cell+cultures+predicts+infection+dynamics+for+highly+different+infection+conditions.">Multiscale modeling of influenza A virus replication in cell cultures predicts infection dynamics for highly different infection conditions.</a> PLOS Computational Biology. 15 (2), 1006819 (2019).</li><li>Petiot, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+viruses+production:+Evaluation+of+a+novel+avian+cell+line+DuckCelt(R)-T17.">Influenza viruses production: Evaluation of a novel avian cell line DuckCelt(R)-T17.</a> Vaccine. 36 (22), 3101-3111 (2018).</li></ol>

في هذا البروتوكول ، ونحن وصف طريقه لإنتاج الجسيمات الكاذبة فيروس الإنفلونزا (pp) في اعداد BSL-2. وأدرجت المخبر البلازميد pcdna-gfp في pps ويمكن استخدامها لقياس pps من قبل facs في عدوي مقايسة. اخترنا نوعين من خطوط الخلايا الحساسة لأنها تستخدم علي نطاق واسع في أبحاث الإنفلونزا. ومن شان خلايا MDCK ان توفر سي?...

وتتمثل مهمة الجسيمات الفيروسية في نقل المجين البشري من خليه مضيفه مصابه إلى خليه مضيفه غير مصابه وتسليمه إلى الخلايا الخلوية أو النواة في شكل النسخ المتماثل المختص1. يتم تشغيل هذه العملية في البداية عن طريق ربط مستقبلات الخلايا المضيفة ، تليها الانصهار من الاغشيه الخلوية والخلايا. للفيروسات المغلفة ، مثل فيروسات الإنفلونزا ، البروتينات السكرية الحاده هي المسؤولة عن مستقبلات ملزمه والانصهار1،2. الفيروسية المغلف البروتينات السكرية (علي سبيل المثال ، الحمم البركانية ، المستضدات) ، وتشارك في العديد من الخصائص والاحداث الهامه ، مثل بدء دوره حياه الفيروسات (ملزمه والانصهار) ، والمرض الفيروسي ، والاستمناع ،والخلية المضيفة المبرمج والتروسيه الخلوية ، ومسار البحوث علي البروتينات السكرية المغلف الفيروسية سوف تساعدنا علي فهم العديد من جوانب عمليه العدوى الفيروسية. الجسيمات الفيروسية الكاذبة (pp) ، وتسمي أيضا سودوفيريونز أو الكاذبة ، يمكن ان تتولد من خلال تقنيه التنميط الكاذب8،9،10. وقد استخدمت هذه التكنولوجيا لتطوير الجزيئات الكاذبة من العديد من الفيروسات, بما في ذلك التهاب الكبد C11,12, التهاب الكبد ب13, فيروس التهاب الفم الحويصلي (vsv)14,15, وفيروس الإنفلونزا16,17,18,19. وتستند هذه التكنولوجيا علي البروتين هفوة بول من لينتيفيروسيس أو غيرها من الفيروسات الرجعية.
يمكن الحصول علي الجزيئات الفيروسية الكاذبة باستخدام نظام البلازما الثلاثة عن طريق التحويل الفيروسي لغلاف البروتين السكري البلازميد ، والعبوات المضادة للفيروسات الارتجاعية في عداد المفقودين الجينات المغلف البيئية ، ومراسل منفصل البلازميد في الخلايا المنتجة pp. يتم تجميع الفيروس الرجعي من قبل بروتين الكمامة ، وانها براعم من غشاء الخلية المصابة التي تعبر عن بروتين مغلف الفيروس1. ولذلك ، فمن الممكن الحصول علي الإنفلونزا العالية عيار pps باستخدام الفيروس الرجعي الكمامة البروتين لإنتاج براعم علي الغشاء الخلوي التعبير عن الإنفلونزا HA و NA. في دراساتنا السابقة ، وقد/NAs في جميع تركيبات وظيفية وقادره علي أداء وظائفها المقابلة في دوره الحياة الفيروسية16،17،18،20،21. وتستخدم هذه الورقة للتحقيق في الخصائص البيولوجية الإنفلونزا, بما في ذلك التراص, النشاط نيوامينيداز, [ها-مستقبلات ملزمه التروسم, و عدوي. لان HA و NA علي حد سواء البروتينات الوظيفية السطحية الهامه في دوره الحياة الفيروسية ، وقد غير متطابقة و NAs المستمدة من سلالات مختلفه من الإنفلونزا يمكن ان تظهر جزئيا أعاده تشكيل بينهما. هنا ، ونحن توليد ثمانيه أنواع من الإنفلونزا pps من خلال الجمع بين اثنين واثنين من الناس (المستمدة من سلاله اتش بي جي 5 ووصمه العار H7N9) ، وذلك باستخدام نظام التنميط الكاذب ثلاثه plasmid. وتشمل هذه الأنواع الثمانية من pps اثنين الأصلي pps, H5N1pp, H7N9pp; اثنين غير متطابقة pps ، (H5 + N9) pp ، (H7 + N1) pp ؛ وأربعه pps فقط إيواء بروتين سكري واحد (HA أو NA) ، H5pp ، N1pp ، H7pp ، N9pp. والدراسات المتعلقة بفيروس الإنفلونزا ، مثل H5N1 و H7N9 ، محدوده بمتطلبات السلامة الاحيائيه. وينبغي اجراء جميع الدراسات المتعلقة بسلالات فيروس الإنفلونزا البرية في مختبر من مستوي السلامة البيولوجية 3 (BSL-3). ويمكن استخدام تكنولوجيا الجسيمات الفيروسية الزائفة لحزم الفيريون الاصطناعية في الاعداد 2 (BSL-2) مستوي السلامة الاحيائيه. ولذلك ، يمثل pps أداه أكثر أمانا وفائدة لدراسة عمليات فيروس الإنفلونزا اعتمادا علي اثنين من البروتينات السكرية الرئيسية: هيماغلوتينين (HA) و نيوامينيداز (NA).
يصف هذا البروتوكول الجيل من هذه pps مع استراتيجية ثلاثه plasmid المختلط (عرضت في الشكل 1) ، وكيفيه قياس pps ، والكشف عن عدوي. وينطوي إنتاج البولي بروبيلين علي ثلاثه أنواع من البلازميدات (الشكل 1). وقد استنسخت الجينات هفوة-pol ، والتي ترميز الفيروس الرجعية هفوة-بول البروتين ، من مجموعه التعبئة والتغليف الرجعية وادراجها في pcdna 3.1 بلازميد واسمه Pcdna-هفوة-pol. تم استنساخ الجين المعزز للبروتين الفلوري الأخضر (eGFP) ، الذي يشفر البروتين الفلوري الأخضر ، من ناقلات pTRE-EGFP ، والذي تم ادراجه في pcDNA 3.1 plasmid ، ودعا pcDNA-GFP. اثناء الاستنساخ ، تم أضافه تسلسل اشاره التعبئة والتغليف (ψ) عن طريق التمهيدي. تم استنساخ الجينات HA و NA في plasmid pVRC ، المسمي pVRC-HA و pVRC-NA ، علي التوالي. البلازما الاخيره بترميز البروتين الانصهار ويمكن استبدالها مع اي بروتين الانصهار الأخرى من الفائدة. لدينا منصة التنميط الكاذب ويشمل اثنين من التعبير البلازميدات بروتين سكري: pVRC-HA و pVRC-NA. وهذا يمكن تبسيط البحث علي أعاده تشكيل بين سلالات الفيروسات المختلفة في اعداد BSL-2.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Benzonase Nuclease</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>70664</td>
			<td>Effective viscosity reduction and removal of nucleic acids from protein solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Flat Bottom Polystyrene TC-treated Microplates (96-well)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td>Treated for optimal cell attachment 
			Sterilized by gamma radiation and certified nonpyrogenic 
			Individual alphanumeric codes for well identification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear TC-treated Multiple Well Plates (6-wells)</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3516</td>
			<td>Individual alphanumerical codes for well identification 
			Treated for optimal cell attachment 
			Sterilized by gamma irradiation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified essential medium (DMEM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965092</td>
			<td>A widely used basal medium for supporting the growth of many different mammalian cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Excell</td>
			<td>FND500</td>
			<td>fetal bovine sera that can offer excellent value for basic cell culture, specialty research, and specific assays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)</td>
			<td>Beckman coulter</td>
			<td>cytoflex</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human alveolar adenocarcinoma A549 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRM-CCL-185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human embryonic kidney (HEK) HEK-293T/17 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-11268</td>
			<td>A versatile transfection reagent that has been shown to effectively transfect the widest variety of adherent and suspension cell lines</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted fluorescent biological microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51-32P01-FLB3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted light microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CKX31-12PHP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000 Transfection Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668019</td>
			<td>Rapid, sensitive and precise probe-based qPCR detection and quantitation of target RNA targets.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit</td>
			<td>NEB</td>
			<td>E3006L</td>
			<td>Will withstand up to 14,000 RCF 
			RNase-/DNase-free Nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MaxyClear Snaplock Microcentrifuge Tube (1.5 mL)</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>33 mm, gamma sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-HV Syringe Filter Unit, 0.45 &#181;m, PVDF</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLHV033RS</td>
			<td>an improved Minimal Essential Medium (MEM) that allows for a reduction of Fetal Bovine Serum supplementation by at least 50% with no change in cell growth rate or morphology. Opti-MEM I medium is also recommended for use with cationic lipid transfection reagents, such as Lipofectamine reagent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11058021</td>
			<td>The antibiotics penicillin and streptomycin are used to prevent bacterial contamination of cell cultures due to their effective combined action against gram-positive and gram-negative bacteria.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin-streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Maximum RCF is 12,500 xg 
			Temperature range from -80 &#176;C to 120 &#176;C 
			RNase-/DNase-free 
			Sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PP Centrifuge Tubes (15 mL)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>a stable and highly reactive serine protease</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>ST532</td>
			<td>Treated for optimal cell attachment 
			Sterilized by gamma radiation and certified nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC-treated Culture Dish (60mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430166</td>
			<td>Trypsin from bovine pancreas 
			TPCK Treated, essentially salt-free, lyophilized powder, &#8805;10,000 BAEE units/mg protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TPCK-trypsin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1426</td>
			<td>This liquid formulation of trypsin contains EDTA and phenol red. Gibco Trypsin-EDTA is made from trypsin powder, an irradiated mixture of proteases derived from porcine pancreas. Due to its digestive strength, trypsin is widely used for cell dissociation, routine cell culture passaging, and primary tissue dissociation. The trypsin concentration required for dissociation varies with cell type and experimental requirements.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

production of high-titer infectious influenza pseudotyped particles with envelope glycoproteins from highly pathogenic h5n1 and avian h7n9 viruses

ومن المسائل الخطيرة المتعلقة بالصحة العامة الانتقال المباشر العرضي لإنفلونزا الطيور A المسببة للامراض الشديدة من فيروس H5N1 (HPAI H5N1) و H7N9 إلى البشر والفتك بها ، وتشير إلى احتمال حدوث وباء. ومع ذلك ، فان فهمنا الجزيئي للفيروس بدائي ، ومن الضروري دراسة الخواص البيولوجية للبروتينات المغلفة كاهداف علاجيه ووضع استراتيجيات للسيطرة علي العدوى. طورنا منصة الجسيمات الفيروسية الصلبة (pp) لدراسة فيروس إنفلونزا الطيور ، بما في ذلك التحليل الوظيفي للبروتينات السكرية المغلفة هيماغلوتينين (HA) والعصبية (NA) ، وخصائص أعاده التشكيل لل والناس ، مستقبلات, الانقسامات, تحييد الأجسام المضادة, التشخيص, عدوي, لأغراض تطوير المخدرات وتصميم اللقاح. هنا ، ونحن وصف اجراء تجريبي لإنشاء pps مع البروتينات السكرية المغلف (HA ، NA) من اثنين من سلالات الإنفلونزا A (HAPI H5N1 و 2013 الطيور H7N9). ويستند جيلهم علي قدره بعض الفيروسات ، مثل فيروس سرطان الدم murine (MLV) ، لدمج البروتينات السكرية المغلف في pp. الاضافه إلى ذلك ، ونحن أيضا بالتفصيل كيف يتم قياس هذه pps مع RT-qPCR ، والكشف عن عدوي الفيروس الأصلي وغير متطابقة pps اعتمادا علي أصل وقد و NAs. هذا النظام هو مرنه للغاية وقابله للتكيف ويمكن استخدامها لإنشاء pps الفيروسية مع البروتينات السكرية المغلف التي يمكن ادراجها في اي نوع آخر من الفيروسات يلفها. وهكذا ، يمكن استخدام هذه المنصة الجسيمات الفيروسية لدراسة الفيروسات البرية في العديد من التحقيقات البحثية.

اعتمادا علي الاجراء العام الموصوف أعلاه ، لقد ولدت 10 أنواع من pps الجمع بين اثنين من مجموعه لديها/NAs أو VSV-G بروتين سكري أو البروتينات السكرية لا المغلف (كما هو موضح في الجدول 1). سبعه منهم معدون. و pps ان الميناء لا المغلف بروتين سكري أو الميناء فقط NA لم تظهر اي عدوي هنا. يتم الإفراط في ال?...

Watch this Scientific Journal Video about Production of High-Titer Infectious Influenza Pseudotyped Particles with Envelope Glycoproteins from Highly Pathogenic H5N1 and Avian H7N9 Viruses at JoVE.com

Production of High-Titer Infectious Influenza Pseudotyped Particles with Envelope Glycoproteins from Highly Pathogenic H5N1 and Avian H7N9 Viruses

يصف هذا البروتوكول عمليه تجريبية لإنتاج الجسيمات الفيروسية المعدية عاليه التهاب (pp) مع البروتينات السكرية المغلفة من اثنين من سلالات الإنفلونزا A وكيفيه تحديد عدويها. هذا البروتوكول هو قابل للتكيف للغاية لتطوير pps من اي نوع آخر من الفيروسات يلفها مع البروتينات السكرية مغلف مختلفه.

إنتاج جسيمات الإنفلونزا المعدية العالية التهابات بالمغلفات بالبروتينات السكرية المسببة للامراض الشديدة H5N1 وفيروسات الطيور H7N9

The occasional direct transmission of the highly pathogenic avian influenza A virus H5N1 (HPAI H5N1) and H7N9 to humans and their lethality are serious ...

هذه التقنية لإنتاج وباء الأنفلونزا الفيروسية وتحديد العدوى يمكن تبسيط البحوث من فيروس الانفلونزا في مدينة BSL-2. قمنا بالتطبيع PPS للعدوى على أساس qRT-PCR البيانات من PPS. يتم ترميز اثنين من تعبير الجليكوبروتين plasmid، والتي يمكن تبسيط البحوث على reassortment الفيروس.بعد يوم واحد من بذر الخلية، تحقق من مورفولوجيا الخلية وكثافتها تحت مجهر ضوء مقلوب. من الناحية المثالية يجب أن تكون الخلية 85٪ تقريبًا التقاء عند نقل الدم. استبدال المتوسطة مع ملليلتر واحد من DMEM خالية من المصل في بئر، ووضع لوحة مرة أخرى في الحاضنة.لكل بئر من الخلايا التي سيتم نقلها، تمييع ثمانية ميكرولترات من كاشف transfection إلى حجم 150 ميكرولترات مع انخفاض متوسط المصل. اخلطي الحل بلطف واتركه يجلس في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق. وفي الوقت نفسه، تمييع 2.5 ميكروغرام من الحمض النووي البلازميد إلى 158 ميكرولترات من متوسط المصل المخفض.بعد فترة الحضانة لمدة خمس دقائق، اجمع الحمض النووي المخفف مع كاشف الانبعاثات المخفف، واخلط المحلّل بلطف واتركه في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. إضافة مجمع الدهون الحمض النووي إلى الآبار المقابلة مع الخلايا في المتوسطة خالية من المصل. ثم اخلطي الطبق بلطف عن طريق الهزاز ذهابا وإيابا.احتضان لوحة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة أربع إلى ست ساعات. بعد الحضانة، وإزالة المتوسطة واستبدالها مع ملليلتر اثنين من DMEM في بئر. ثم احتضانه لمدة 36 إلى 48 ساعة أخرى.بذور كل نوع من الخلايا المعرضة في 10،000 الخلايا في بئر و 96 لوحة جيدا. ثم اترك اللوحة ليلاً في حاضنة لثاني أكسيد الكربون بنسبة 37 درجة مئوية وخمسة في المئة. في اليوم الثالث بعد عملية نقل، تحقق من لون الوسط الذي يجب أن يضيء الوردي أو البرتقالي قليلاً وفحص الخلايا مع المجهر البيولوجي المقلوب تحت الطول الموجي نانومتر 440 إلى 460 نانومتر.في 38 إلى 48 ساعة بعد ما بعد transfection، حصاد الجسيمات pseuotyped أو PPS عن طريق تمرير لهم من خلال مرشح غشاء فلوريد بولي فينيلينيد ميكرومتر 0.45 للقضاء على حطام الخلايا، ثم تقسيمها إلى aliquots حجم صغير وتخزينها في ناقص 80 درجة مئوية. لتحديد كمية PPS، نقل 30 ميكرولترات من الجسيمات الفيروسية النقية إلى أنبوب 1.5 ميكرولتر RNase خالية وإضافة ميكرولتر واحد من نوكلياز بنزوناز. احتضان الأنبوب في 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة للقضاء على أي الحمض النووي والحمض النووي الريبي التلوث.بعد الحضانة، وتجميد العينة إلى ناقص 70 درجة مئوية إلى النوى النشطة وإضافة اثنين microliters من البروتينات K.احتضان الخليط لمدة 30 دقيقة لهضم البروتينات المغلف والافراج عن الحمض النووي CMV-GFP RNA. ثم غير نشط البروتينات K في 100 درجة مئوية لمدة ثلاث دقائق. كمّيّة ال [بيس] مع كمّيّة عكس نسخة [رPCR] يستعمل المجسّم عالميّة [ون-ستت] [رت-هكّر] [رتّر] [ا] [رسّل] في التمهيديّة والتحقيقات يعيّن في النصّ مخطوطة.تطبيع PPS إلى أربع مرات 10 إلى الخامس نسخ الجيش الملكي النيبالي لكل ملليلتر. ثم إضافة TPCK-التربسين إلى تركيز النهائي من 10 ميكروغرام لكل ملليلتر في PPS التي تؤوي H7N9 hemagglutinin. احتضان PPS في 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة لتشكيل وحدات فرعية وظيفية HA1 و HA2.اخلطي الـ PPS المُطَيَّر مع وسيط DMEM بنسبة واحدة إلى واحدة، ثم أحضري اللوحة التي تحتوي على خلايا عرضة لخزانة السلامة البيولوجية. استلهمي المابير ويغسل الخلايا مرة واحدة مع 100 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني مُدفأ مسبقاً. إضافة 100 ميكرولتردات من PPS-DMEM خليط في كل بئر، ثلاثية اختبارات العدوى من كل نوع من PPS إلى خط خلية واحد عرضة.احتضان لوحة لمدة أربع إلى ست ساعات في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. ثم pirate المابير واستبداله مع 100 ميكرولترات من DCM احتضان لوحة لآخر 24 إلى 36 ساعة قبل الكشف عن العدوى. نتائجنا هي PPS تعتبر الآن المعدية للناس.لذلك ينصح بإجراءات الحراسة الآمنة الضرورية لاتخاذ مثل ارتداء قناع وأداء المقايسات العدوى في مجلس الوزراء السلامة البيولوجية. وكان هذا البروتوكول توليد لتوليد 10 أنواع من الجزيئات الزائفة أو PPS مع اثنين من hemaglutininin تجميع ونيولامينيداز فيروس التهاب الفم في الوريد G ج جليكوبروتين أو لا يوجد مظروف glycoproteins. تم تصوير PPS مع المجهر الإلكترون انتقال وتم تقييم العدوى في خطين من الخلايا، A549 و MDCK.في مجموعة PPS إيواء H5، كانت العدوى من H5N1، H5 زائد N9 و H5 حوالي 90٪ 18٪ و 10٪ لخط الخلية A549 و 40٪ 5٪ و 5٪ لMCK، على التوالي. في مجموعة PPS إيواء H7، كانت العدوى من H7N9، H7 زائد N1 و H7 ما يقرب من 10٪ 7٪ و 1٪ لخط الخلية A549 و 8٪ 4٪ و 1٪ لMMCK، على التوالي. وكان العدوى من التهاب الفم في الوريد فيروس G الجليكوبروتين PP حوالي 21٪ ل A549 و 16٪ لخلايا MDCK.في حين أن دلتا المغلف الجليكوبروتين PP أظهرت عدم العدوى. من المهم أن نتذكر أن PP منتج HEK-293T/17 الخلايا تشكل الأساس لهذا الإجراء. لذلك النمو الأمثل يعلمنا خلايا HEK-293T/17 هو الأكثر أهمية.بعد هذا الإجراء أو بعض الاختبارات الأخرى مثل L2 يمكن إجراء فحص المحيط. هذا المقايسة يمكن أن تعطي تقريبا التخلص من الخصائص البيولوجية للتفضيل مستقبلات ونمط سوف تكشف عن tropism من PPS. منذ أن أخذوا البروتينات من فيروس الانفلونزا يتم استنساخها في اثنين زائد ماكس.يمكن دراسة ها والبروتينات NA بشكل منفصل لذلك نحن reassortment بينهما. ويمكن استكشاف المسوخ والآثار الناضجة.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Determination of Molecular Structures of HIV Envelope Glycoproteins using Cryo-Electron Tomography and Automated Sub-tomogram Averaging

تحديد الهياكل الجزيئية لفيروس نقص المناعة البشرية جليكوبروتينات مغلف باستخدام البرد الكترون والتصوير المقطعي الآلي متوسط ​​الفرعية صورة مقطعية

Since its discovery nearly 30 years ago, more than 60 million people have been infected with the human immunodeficiency virus (HIV) (www.usaid.gov). The ...

Avian Influenza Surveillance with FTA  Cards: Field Methods, Biosafety, and Transportation Issues Solved

الطيور ترصد الأنفلونزا اتفاقية التجارة الحرة مع بطاقات : أساليب الميدانية ، الأحيائية ، وقضايا النقل محلولة

Avian Influenza Viruses (AIVs) infect many mammals, including humans1. These AIVs are diverse in their natural hosts, harboring almost all possible viral ...

Packaging HIV- or FIV-based Lentivector Expression Constructs &amp; Transduction of VSV-G Pseudotyped Viral Particles

Packaging HIV- or FIV-based Lentivector Expression Constructs & Transduction of VSV-G Pseudotyped Viral Particles

التعبئة والتغليف بفيروس نقص المناعة البشرية أو FIV المستندة إلى محددات التعبير Lentivector وتنبيغ من الجزيئات VSV-G الفيروسية Pseudotyped

As with standard plasmid vectors, it is possible to transfect lentivectors in plasmid form into cells with low-to-medium efficiency to obtain transient ...

Expression of Functional Recombinant Hemagglutinin and Neuraminidase Proteins from the Novel H7N9 Influenza Virus Using the Baculovirus Expression System

التعبير عن المؤتلف وظيفية راصة دموية والبروتينات النورامينيداز من الفيروسات الأنفلونزا H7N9 رواية باستخدام نظام التعبير الفيروسة العصوية

The baculovirus expression system is a powerful tool for expression of  recombinant proteins. Here we use it to produce correctly folded and  glycosylated ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

تقييم بتكوين لHIV-1 مغلف مثلوثي بروتينات سكرية باستخدام خلية القاعدة ELISA الفحص

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

Modeling The Lifecycle Of Ebola Virus Under Biosafety Level 2 Conditions With Virus-like Particles Containing Tetracistronic Minigenomes

نماذج دورة حياة فيروس الايبولا تحت شروط السلامة الأحيائية المستوى 2 مع جزيئات تشبه الفيروسات يحتوي على Tetracistronic Minigenomes

Ebola viruses cause severe hemorrhagic fevers in humans and non-human primates, with case fatality rates as high as 90%. There are no approved vaccines or ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

إدارة الأنف المؤتلف لقاحات الأنفلونزا في همي ماوس نماذج لدراسة الأغشية المخاطية الحصانة

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...

Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

علاج منتجات صفائح الدم مع فيتامين بي وضوء الأشعة فوق البنفسجية: فعالية ضد ارتفاع العيار الحجمي البكتيرية تلوث

Contamination of platelet units by bacteria has long been acknowledged as a significant transfusion risk due to their post-donation storage conditions. ...

Rapid Molecular Detection and Differentiation of Influenza Viruses A and B

سرعة الكشف الجزيئي والتمايز من فيروسات الأنفلونزا A و B

Influenza is a contagious respiratory illness caused by influenza viruses A and B in humans and causes a significant amount of morbidity and mortality ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

مضان القائم على النورامينيداز تثبيط الفحص لتقييم مدى حساسية فيروسات الأنفلونزا إلى والنورامينيداز المانع فئة من الأدوية المضادة للفيروسات

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...