Name: production of high-titer infectious influenza pseudotyped particles with envelope glycoproteins from highly pathogenic h5n1 and avian h7n9 viruses
Uploaded: 2020-01-15T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Production of High-Titer Infectious Influenza Pseudotyped Particles with Envelope Glycoproteins from Highly Pathogenic H5N1 and Avian H7N9 Viruses at JoVE.com

이 작품은 절강 성 의학 및 건강 과학 기술 계획 (보조금 번호, 2017KY538), 항저우 시 의학 및 건강 과학 기술 계획 (보조금 번호, OO20190070), 항저우 의학 및 항저우 의학 및 기술 계획에서 보조금에 의해 지원되었다 기술 핵심 프로젝트 (그랜트 번호, 2014Z11) 및 사회 개발 및 과학 연구의 항저우 시 자치 응용 프로그램 프로젝트 (그랜트 번호, 20191203B134).

1일차: 세포 배양 및 시팅
<ol><li>인간 배아 신장(HEK) 293T/17 세포를 60mm 접시에 10% 태아 소 혈청(FBS)과 100U/mL 페니실린-스트렙토마이신(DMEM Complete Medium) 으로 보충하여 변형된 필수 배지(DMEM)를 사용하여 배양합니다. DCM)을 37°C에서, 5%이산화탄소(CO2)에서약 80% 까지 인큐베이터에 있다. 참고 : HEK 293T / 17 낮은 통로 세포를 권장합니다.</li>
	<li>인산완식염(PBS) 1x 5 mL로 조심스럽게 세포를 세척?...

<ol>
	<li>Knipe, D. M., Howley, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fields Virology (6th). , (2013).</li><li>White, J. M., Delos, S. E., Brecher, M., Schornberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+and+mechanisms+of+viral+membrane+fusion+proteins:+multiple+variations+on+a+common+theme.">Structures and mechanisms of viral membrane fusion proteins: multiple variations on a common theme.</a> Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology. 43 (3), 189-219 (2008).</li><li>Bright, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-clade+protective+immune+responses+to+influenza+viruses+with+H5N1+HA+and+NA+elicited+by+an+influenza+virus-like+particle.">Cross-clade protective immune responses to influenza viruses with H5N1 HA and NA elicited by an influenza virus-like particle.</a> PLoS One. 3 (1), 1501 (2008).</li><li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+pseudotyped+influenza+viral+particles+in+neutralizing+antibody+detection.">Reliability of pseudotyped influenza viral particles in neutralizing antibody detection.</a> PLoS One. 9 (12), 113629 (2014).</li><li>Wyatt, R., Sodroski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+HIV-1+envelope+glycoproteins:+fusogens,+antigens,+and+immunogens.">The HIV-1 envelope glycoproteins: fusogens, antigens, and immunogens.</a> Science. 280 (5371), 1884-1888 (1998).</li><li>Joe, A. K., Foo, H. H., Kleeman, L., Levine, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transmembrane+domains+of+Sindbis+virus+envelope+glycoproteins+induce+cell+death.">The transmembrane domains of Sindbis virus envelope glycoproteins induce cell death.</a> Journal of Virology. 72 (5), 3935-3943 (1998).</li><li>Albecka, A., Laine, R. F., Janssen, A. F., Kaminski, C. F., Crump, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HSV-1+Glycoproteins+Are+Delivered+to+Virus+Assembly+Sites+Through+Dynamin-Dependent+Endocytosis.">HSV-1 Glycoproteins Are Delivered to Virus Assembly Sites Through Dynamin-Dependent Endocytosis.</a> Traffic. 17 (1), 21-39 (2016).</li><li>Huang, A. S., Palma, E. L., Hewlett, N., Roizman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudotype+formation+between+enveloped+RNA+and+DNA+viruses.">Pseudotype formation between enveloped RNA and DNA viruses.</a> Nature. 252 (5485), 743-745 (1974).</li><li>Rubin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Control+of+Cellular+Susceptibility+to+Pseudotypes+of+Rous+Sarcoma+Virus.">Genetic Control of Cellular Susceptibility to Pseudotypes of Rous Sarcoma Virus.</a> Virology. 26, 270-276 (1965).</li><li>Steffen, I., Simmons, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudotyping+Viral+Vectors+With+Emerging+Virus+Envelope+Proteins.">Pseudotyping Viral Vectors With Emerging Virus Envelope Proteins.</a> Current Gene Therapy. 16 (1), 47-55 (2016).</li><li>Bartosch, B., Dubuisson, J., Cosset, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infectious+hepatitis+C+virus+pseudo-particles+containing+functional+E1-E2+envelope+protein+complexes.">Infectious hepatitis C virus pseudo-particles containing functional E1-E2 envelope protein complexes.</a> Journal of Experimental Medicine. 197 (5), 633-642 (2003).</li><li>Bian, T., Zhou, Y., Bi, S., Tan, W., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HCV+envelope+protein+function+is+dependent+on+the+peptides+preceding+the+glycoproteins.">HCV envelope protein function is dependent on the peptides preceding the glycoproteins.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 378 (1), 118-122 (2009).</li><li>Gudima, S., Meier, A., Dunbrack, R., Taylor, J., Bruss, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+potentially+important+elements+of+the+hepatitis+B+virus+large+envelope+protein+are+dispensable+for+the+infectivity+of+hepatitis+delta+virus.">Two potentially important elements of the hepatitis B virus large envelope protein are dispensable for the infectivity of hepatitis delta virus.</a> Journal of Virology. 81 (8), 4343-4347 (2007).</li><li>Yoshida, Y., Emi, N., Hamada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VSV-G-pseudotyped+retroviral+packaging+through+adenovirus-mediated+inducible+gene+expression.">VSV-G-pseudotyped retroviral packaging through adenovirus-mediated inducible gene expression.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 232 (2), 379-382 (1997).</li><li>Burns, J. C., Friedmann, T., Driever, W., Burrascano, M., Yee, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicular+stomatitis+virus+G+glycoprotein+pseudotyped+retroviral+vectors:+concentration+to+very+high+titer+and+efficient+gene+transfer+into+mammalian+and+nonmammalian+cells.">Vesicular stomatitis virus G glycoprotein pseudotyped retroviral vectors: concentration to very high titer and efficient gene transfer into mammalian and nonmammalian cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (17), 8033-8037 (1993).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+pseudoparticles+paired+with+hemagglutinin+and+neuraminidase+from+highly+pathogenic+H5N1+influenza+and+avian+influenza+A+(H7N9)+viruses.">Characterization of pseudoparticles paired with hemagglutinin and neuraminidase from highly pathogenic H5N1 influenza and avian influenza A (H7N9) viruses.</a> Virus Research. 253, 20-27 (2018).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infectivity+of+Pseudotyped+Particles+Pairing+Hemagglutinin+of+Highly+Pathogenic+Avian+Influenza+a+H5N1+Virus+with+Neuraminidases+of+The+2009+Pandemic+H1N1+and+a+Seasonal+H3N2.">Infectivity of Pseudotyped Particles Pairing Hemagglutinin of Highly Pathogenic Avian Influenza a H5N1 Virus with Neuraminidases of The 2009 Pandemic H1N1 and a Seasonal H3N2.</a> Journal of Bioterrorism &amp; Biodefense. 2, 104 (2011).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+neuraminidases+from+the+highly+pathogenic+avian+H5N1+and+2009+pandemic+H1N1+influenza+A+viruses.">Characterization of neuraminidases from the highly pathogenic avian H5N1 and 2009 pandemic H1N1 influenza A viruses.</a> PLoS One. 5 (12), 15825 (2010).</li><li>Nefkens, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemagglutinin+pseudotyped+lentiviral+particles:+characterization+of+a+new+method+for+avian+H5N1+influenza+sero-diagnosis.">Hemagglutinin pseudotyped lentiviral particles: characterization of a new method for avian H5N1 influenza sero-diagnosis.</a> Journal of Clinical Virology. 39 (1), 27-33 (2007).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemagglutinin+and+neuraminidase+matching+patterns+of+two+influenza+A+virus+strains+related+to+the+1918+and+2009+global+pandemics.">Hemagglutinin and neuraminidase matching patterns of two influenza A virus strains related to the 1918 and 2009 global pandemics.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 387 (2), 405-408 (2009).</li><li>Lin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oseltamivir+boosts+2009+H1N1+virus+infectivity+in+vitro.">Oseltamivir boosts 2009 H1N1 virus infectivity in vitro.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 390 (4), 1305-1308 (2009).</li><li>McKay, T., Patel, M., Pickles, R. J., Johnson, L. G., Olsen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+M2+envelope+protein+augments+avian+influenza+hemagglutinin+pseudotyping+of+lentiviral+vectors.">Influenza M2 envelope protein augments avian influenza hemagglutinin pseudotyping of lentiviral vectors.</a> Gene Therapy. 13 (8), 715-724 (2006).</li><li>Pan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+mediates+avian+influenza+H5N1+pseudotyped+particle-induced+lung+inflammation+through+NF-kappaB+and+p38+MAPK+signaling+pathways.">Autophagy mediates avian influenza H5N1 pseudotyped particle-induced lung inflammation through NF-kappaB and p38 MAPK signaling pathways.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 306 (2), 183-195 (2014).</li><li>Szecsi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+neutralising+antibodies+by+virus-like+particles+harbouring+surface+proteins+from+highly+pathogenic+H5N1+and+H7N1+influenza+viruses.">Induction of neutralising antibodies by virus-like particles harbouring surface proteins from highly pathogenic H5N1 and H7N1 influenza viruses.</a> Virology Journal. 3, 70 (2006).</li><li>Garcia, J. M., Lagarde, N., Ma, E. S., de Jong, M. D., Peiris, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+and+evaluation+of+an+influenza+A+(H5)+pseudotyped+lentiviral+particle-based+serological+assay.">Optimization and evaluation of an influenza A (H5) pseudotyped lentiviral particle-based serological assay.</a> Journal of Clinical Virology. 47 (1), 29-33 (2010).</li><li>Garcia, J. M., Lai, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+influenza+pseudotyped+lentiviral+particles+and+their+use+in+influenza+research+and+diagnosis:+an+update.">Production of influenza pseudotyped lentiviral particles and their use in influenza research and diagnosis: an update.</a> Expert Review of Anti-infective Therapy. 9 (4), 443-455 (2011).</li><li>Haynes, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza-pseudotyped+Gag+virus-like+particle+vaccines+provide+broad+protection+against+highly+pathogenic+avian+influenza+challenge.">Influenza-pseudotyped Gag virus-like particle vaccines provide broad protection against highly pathogenic avian influenza challenge.</a> Vaccine. 27 (4), 530-541 (2009).</li><li>Schmeisser, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+characterization+of+mammalian+virus-like+particles+from+modified+vaccinia+virus+Ankara+vectors+expressing+influenza+H5N1+hemagglutinin+and+neuraminidase.">Production and characterization of mammalian virus-like particles from modified vaccinia virus Ankara vectors expressing influenza H5N1 hemagglutinin and neuraminidase.</a> Vaccine. 30 (23), 3413-3422 (2012).</li><li>Liu, Y. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus+(SARS-CoV)+S+glycoprotein+and+influenza+matrix+1+efficiently+form+virus-like+particles+(VLPs)+that+protect+mice+against+challenge+with+SARS-CoV.">Chimeric severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) S glycoprotein and influenza matrix 1 efficiently form virus-like particles (VLPs) that protect mice against challenge with SARS-CoV.</a> Vaccine. 29 (38), 6606-6613 (2011).</li><li>Moeschler, S., Locher, S., Conzelmann, K. K., Kramer, B., Zimmer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Lyssavirus-Neutralizing+Antibodies+Using+Vesicular+Stomatitis+Virus+Pseudotype+Particles.">Quantification of Lyssavirus-Neutralizing Antibodies Using Vesicular Stomatitis Virus Pseudotype Particles.</a> Viruses. 8 (9), 254 (2016).</li><li>Lai, A. L., Millet, J. K., Daniel, S., Freed, J. H., Whittaker, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SARS-CoV+Fusion+Peptide+Forms+an+Extended+Bipartite+Fusion+Platform+that+Perturbs+Membrane+Order+in+a+Calcium-Dependent+Manner.">The SARS-CoV Fusion Peptide Forms an Extended Bipartite Fusion Platform that Perturbs Membrane Order in a Calcium-Dependent Manner.</a> Journal of Molecular Biology. 429 (24), 3875-3892 (2017).</li><li>Millet, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Middle+East+respiratory+syndrome+coronavirus+infection+is+inhibited+by+griffithsin.">Middle East respiratory syndrome coronavirus infection is inhibited by griffithsin.</a> Antiviral Research. 133, 1-8 (2016).</li><li>Millet, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+Pseudotyped+Particles+to+Study+Highly+Pathogenic+Coronaviruses+in+a+Biosafety+Level+2+Setting.">Production of Pseudotyped Particles to Study Highly Pathogenic Coronaviruses in a Biosafety Level 2 Setting.</a> Journal of Visualized Experiments. (145), e59010 (2019).</li><li>Ma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+leukemia+virus+pseudotypes+of+La+Crosse+and+Hantaan+Bunyaviruses:+a+system+for+analysis+of+cell+tropism.">Murine leukemia virus pseudotypes of La Crosse and Hantaan Bunyaviruses: a system for analysis of cell tropism.</a> Virus Research. 64 (1), 23-32 (1999).</li><li>Wool-Lewis, R. J., Bates, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Ebola+virus+entry+by+using+pseudotyped+viruses:+identification+of+receptor-deficient+cell+lines.">Characterization of Ebola virus entry by using pseudotyped viruses: identification of receptor-deficient cell lines.</a> Journal of Virology. 72 (4), 3155-3160 (1998).</li><li>Chen, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+design+of+more+effective+avian+replication-incompetent+retroviral+vectors.">Production and design of more effective avian replication-incompetent retroviral vectors.</a> Developmental Biology. 214 (2), 370-384 (1999).</li><li>Kaku, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Second+generation+of+pseudotype-based+serum+neutralization+assay+for+Nipah+virus+antibodies:+sensitive+and+high-throughput+analysis+utilizing+secreted+alkaline+phosphatase.">Second generation of pseudotype-based serum neutralization assay for Nipah virus antibodies: sensitive and high-throughput analysis utilizing secreted alkaline phosphatase.</a> Journal of Virological Methods. 179 (1), 226-232 (2012).</li><li>Rudiger, D., Kupke, S. Y., Laske, T., Zmora, P., Reichl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiscale+modeling+of+influenza+A+virus+replication+in+cell+cultures+predicts+infection+dynamics+for+highly+different+infection+conditions.">Multiscale modeling of influenza A virus replication in cell cultures predicts infection dynamics for highly different infection conditions.</a> PLOS Computational Biology. 15 (2), 1006819 (2019).</li><li>Petiot, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+viruses+production:+Evaluation+of+a+novel+avian+cell+line+DuckCelt(R)-T17.">Influenza viruses production: Evaluation of a novel avian cell line DuckCelt(R)-T17.</a> Vaccine. 36 (22), 3101-3111 (2018).</li></ol>

이 프로토콜에서, 우리는 BSL-2 설정에서 인플루엔자 바이러스 가성 입자(pp)를 생성하는 방법을 설명한다. 리포터 플라스미드 pcDNA-GFP는 pps에 통합되고 감염성 분석에서 FACS에 의해 pps를 정량화하는데 사용될 수 있다. 우리는 인플루엔자 연구에 널리 사용되기 때문에 두 가지 유형의 영향을 받기 쉬운 세포주를 선택했습니다. MDCK 세포는 이러한 연구에서 사용되는 가변 불멸의 인간 세포에 좋은 대?...

바이러스 입자의 임무는 감염된 숙주 세포로부터 비감염숙주 세포로 게놈을 수송하고 이를 복제 유능한 형태1에서세포질 또는 핵으로 전달하는 것이다. 이 프로세스는 처음에 호스트 세포 수용 체에 바인딩에 의해 트리거됩니다., virion와 세포 막의 융합 다음. 인플루엔자 바이러스와 같은 포위 된 바이러스의 경우, 스파이크 당단백질은 수용체 결합 및 융합1,2를담당합니다. Viral envelope glycoproteins (e.g., pyrogens, antigens), are involved in many important properties and events, such as virus lifecycle initiation (binding and fusion), viral pathogenesis, immunogenicity, host cell apoptosis and cellular tropism, the cellular endocytic pathway, as well as interspecies transmission and reassortment1,3,4,5,6,7. 바이러스 성 봉투 당단백질에 대한 연구는 바이러스 감염 과정의 많은 측면을 이해하는 데 도움이됩니다. 의사형 바이러스 입자(pp)는 또한 의사 입자 또는 의사 입자라고도 하며, 가성 화 기법을 통해 생성될 수 있다8,9,10. 이 기술은 C형 간염11,12형,B형 간염13형,수포성 구내염 바이러스(VSV)14, 15,및 인플루엔자 바이러스16,17,18,19를포함한 많은 바이러스의 가성 입자를 개발하는 데 사용되어 왔다. 이 기술은 렌티바이러스 또는 다른 레트로바이러스의 개그폴 단백질을 기반으로 합니다.
가성형 바이러스 입자는 바이러스 봉투 당단백질 발현 플라스미드, 봉투 env 유전자를 누락한 레트로바이러스 패키징 플라스미드, 및 pp 생산자 세포내로의 별도의 리포터 플라스미드를 교전시킴으로써 3-플라스미드 시스템을 사용하여 수득될 수 있다. 레트로바이러스는 개그 단백질에 의해 조립되고, 바이러스 봉투 단백질1을발현하는 감염된 세포막에서 싹이 나고 있다. 따라서, 레트로바이러스 개그 단백질을 이용하여 고역인플루엔자 pps를 획득하여 인플루엔자 HA 및 NA를 발현하는 세포막상에서 싹을 생성할 수 있다. 우리의 이전 연구에서, 모든 조합의 HA /NA는 기능적이었고 바이러스 성 수명 주기16,17,18,20,21에서해당 기능을 수행 할 수 있었습니다. 이러한 pps는 hemagglutination, neuraminidase 활동, HA 수용체 결합 트로피즘, 및 감염을 포함하는 인플루엔자 생물학적 특성을 조사하기 위해 사용된다. HA와 NA는 바이러스 성 수명 주기에서 중요한 표면 기능성 단백질이기 때문에, 인플루엔자의 다른 변종에서 파생된 불일치하는 HA 및 NA는 부분적으로 그들 사이의 재분류를 입증할 수 있습니다. 여기서, 우리는 2개의 하스와 2개의 NA (HPAI H5N1 긴장 및 H7N9 얼룩에서 파생된)를 결합하여 8가지 유형의 인플루엔자 pps를 생성합니다. pps의 이 8가지 모형은 2개의 네이티브 pps, H5N1pp, H7N9pp를 포함합니다; 두 개의 일치하지 않는 PPS, (H5 + N9)pp, (H7 + N1)pp; 단일 당단백질(HA 또는 NA), H5pp, N1pp, H7pp, N9pp. H5N1 및 H7N9와 같은 인플루엔자 바이러스에 대한 연구는 생체 안전성 요건에 의해 제한됩니다. 야생 인플루엔자 바이러스 균주에 대한 모든 연구는 생물 안전 수준 3 (BSL-3) 실험실에서 수행되어야합니다. 가성형 바이러스 입자 기술은 생체 안전 도 2(BSL-2) 설정에서 인공 비리온을 패키징하는 데 사용할 수 있습니다. 따라서 pps는 두 가지 주요 당단백질인 헤마글루티닌(HA)과 뉴라미니다아제(NA)에 따라 인플루엔자 바이러스 과정을 연구하는 보다 안전하고 유용한 도구를 나타냅니다.
이 프로토콜은 3-plasmid cotransfection 전략(그림 1에서검토됨), pps를 정량화하는 방법 및 감염성 검출을 통해 이러한 pps의 생성을 설명합니다. pp 생산에는 플라스미드의 3가지 종류가 포함됩니다(그림1). 레트로바이러스 개그폴 단백질을 인코딩하는 개그폴 유전자는 레트로바이러스 패키징 키트에서 복제하여 pcDNA 3.1 플라스미드에 삽입하고 PCDNA-Gag-Pol로 명명하였다. 녹색 형광 단백질을 인코딩하는 향상된 녹색 형광 단백질 (eGFP) 유전자는 pTRE-EGFP 벡터에서 복제되고 pcDNA 3.1 플라스미드에 삽입되고 pcDNA-GFP라고 합니다. 복제 동안, 패키징 신호(θ) 시퀀스가 프라이머를 통해 첨가되었다. HA 및 NA 유전자는 각각 pVRC-HA 및 pVRC-NA라는 pVRC 플라스미드로 복제되었다. 마지막 플라스미드는 융합 단백질을 인코딩하고 관심 있는 임의의 다른 융합 단백질로 대체할 수 있다. 우리의 의사 티핑 플랫폼은 두 개의 당단백질 발현 플라스미드를 포함합니다: pVRC-HA 및 pVRC-NA. 이 BSL-2 설정에서 다른 바이러스 긴장 사이 재분류에 대 한 연구를 단순화할 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Benzonase Nuclease</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>70664</td>
			<td>Effective viscosity reduction and removal of nucleic acids from protein solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Flat Bottom Polystyrene TC-treated Microplates (96-well)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td>Treated for optimal cell attachment 
			Sterilized by gamma radiation and certified nonpyrogenic 
			Individual alphanumeric codes for well identification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear TC-treated Multiple Well Plates (6-wells)</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3516</td>
			<td>Individual alphanumerical codes for well identification 
			Treated for optimal cell attachment 
			Sterilized by gamma irradiation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified essential medium (DMEM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965092</td>
			<td>A widely used basal medium for supporting the growth of many different mammalian cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Excell</td>
			<td>FND500</td>
			<td>fetal bovine sera that can offer excellent value for basic cell culture, specialty research, and specific assays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)</td>
			<td>Beckman coulter</td>
			<td>cytoflex</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human alveolar adenocarcinoma A549 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRM-CCL-185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human embryonic kidney (HEK) HEK-293T/17 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-11268</td>
			<td>A versatile transfection reagent that has been shown to effectively transfect the widest variety of adherent and suspension cell lines</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted fluorescent biological microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51-32P01-FLB3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted light microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CKX31-12PHP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000 Transfection Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668019</td>
			<td>Rapid, sensitive and precise probe-based qPCR detection and quantitation of target RNA targets.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit</td>
			<td>NEB</td>
			<td>E3006L</td>
			<td>Will withstand up to 14,000 RCF 
			RNase-/DNase-free Nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MaxyClear Snaplock Microcentrifuge Tube (1.5 mL)</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>33 mm, gamma sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-HV Syringe Filter Unit, 0.45 &#181;m, PVDF</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLHV033RS</td>
			<td>an improved Minimal Essential Medium (MEM) that allows for a reduction of Fetal Bovine Serum supplementation by at least 50% with no change in cell growth rate or morphology. Opti-MEM I medium is also recommended for use with cationic lipid transfection reagents, such as Lipofectamine reagent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11058021</td>
			<td>The antibiotics penicillin and streptomycin are used to prevent bacterial contamination of cell cultures due to their effective combined action against gram-positive and gram-negative bacteria.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin-streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Maximum RCF is 12,500 xg 
			Temperature range from -80 &#176;C to 120 &#176;C 
			RNase-/DNase-free 
			Sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PP Centrifuge Tubes (15 mL)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>a stable and highly reactive serine protease</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>ST532</td>
			<td>Treated for optimal cell attachment 
			Sterilized by gamma radiation and certified nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC-treated Culture Dish (60mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430166</td>
			<td>Trypsin from bovine pancreas 
			TPCK Treated, essentially salt-free, lyophilized powder, &#8805;10,000 BAEE units/mg protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TPCK-trypsin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1426</td>
			<td>This liquid formulation of trypsin contains EDTA and phenol red. Gibco Trypsin-EDTA is made from trypsin powder, an irradiated mixture of proteases derived from porcine pancreas. Due to its digestive strength, trypsin is widely used for cell dissociation, routine cell culture passaging, and primary tissue dissociation. The trypsin concentration required for dissociation varies with cell type and experimental requirements.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

production of high-titer infectious influenza pseudotyped particles with envelope glycoproteins from highly pathogenic h5n1 and avian h7n9 viruses

고병원성 조류 인플루엔자 A 바이러스 H5N1(HPAI H5N1) 및 H7N9를 인간에게 직접 적으로 전달하는 것은 심각한 공중 보건 문제이며 전염병의 가능성을 시사한다. 그러나, 바이러스의 우리의 분자 이해는 기초적이고, 그것의 봉투 단백질의 생물학 속성을 치료 표적으로 공부하고 감염을 통제하는 전략을 개발하는 것이 필요합니다. 우리는 그것의 헤마글루티닌 (HA) 및 뉴라미니다아제 (NA) 봉투 당단백질, HA 및 NA의 재분류 특성의 기능 분석을 포함하여 조류 인플루엔자 바이러스를 연구하는 고체 바이러스 성 가성 입자 (pp) 플랫폼을 개발했습니다. 수용체, 트로피즘, 중화 항체, 진단, 감염, 약물 개발 및 백신 설계의 목적을 위해. 여기서, 우리는 2개의 인플루엔자 A 균주(HAPI H5N1 및 2013 조류 H7N9)로부터 엔벨로프 당단백질(HA, NA)을 가진 pps를 확립하는 실험 적 절차를 기술한다. 그들의 생성은 pp에 봉투 당단백질을 통합하기 위하여 뮤린 백혈병 바이러스 (MLV)와 같은 몇몇 바이러스의 수용량에 근거를 두었습니다. 또한 이러한 pps가 RT-qPCR로 정량화되는 방법, 그리고 H및 NA의 기원에 따라 네이티브 및 불일치 바이러스 pps의 감염 성 검출방법을 자세히 설명합니다. 이 시스템은 매우 유연하고 적응력이 있으며 봉투 당단백질로 바이러스 pps를 확립하는 데 사용할 수 있으며 다른 유형의 봉투 바이러스에 통합 될 수 있습니다. 따라서, 이러한 바이러스 성 입자 플랫폼은 많은 연구 조사에서 야생 바이러스를 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

위에서 설명한 일반적인 절차에 따라, 우리는 2개의 그룹 HA/NA 또는 VSV-G 당단백질 또는 무엔벨로프 당단백질을 결합한 10가지 종류의 pps를 생성하였다(표 1에나타낸). 그 중 7명은 전염성이 있습니다. 무엔벨로프 당단백질 또는 NA만 항구하는 pps는 여기에서 어떤 감염도 보여주지 않았습니다. 인플루엔자 pp 생산 절차는 그림 1에서검토됩니다. pps의 전송 전자 현미?...

Watch this Scientific Journal Video about Production of High-Titer Infectious Influenza Pseudotyped Particles with Envelope Glycoproteins from Highly Pathogenic H5N1 and Avian H7N9 Viruses at JoVE.com

Production of High-Titer Infectious Influenza Pseudotyped Particles with Envelope Glycoproteins from Highly Pathogenic H5N1 and Avian H7N9 Viruses

이 프로토콜은 2개의 인플루엔자 A 긴장에서 봉투 당단백질을 가진 높은 역가 감염성 바이러스성 의사 입자 (pp)를 생성하는 실험 적인 프로세스및 그들의 감염성을 결정하는 방법을 기술합니다. 이 프로토콜은 다른 봉투 당단백질을 가진 봉투바이러스의 그밖 모형의 pps를 개발하기 위하여 높게 적응합니다.

고병원성 H5N1 및 조류 H7N9 바이러스의 엔벨로프 당단백질을 가진 고적퇴력 감염성 인플루엔자 슈도타입 입자 의 생산

The occasional direct transmission of the highly pathogenic avian influenza A virus H5N1 (HPAI H5N1) and H7N9 to humans and their lethality are serious ...

인플루엔자 바이러스 PP를 생산하고 감염성을 결정하는이 기술은 BSL-2 도시에서 인플루엔자 바이러스의 연구를 단순화 할 수 있습니다. 우리는 PPS의 qRT-PCR 데이터를 기반으로 감염에 대한 조달청을 정상화했습니다. 2개의 당단백질 발현 플라스미드는 인코딩되어 바이러스 재구에 대한 연구를 단순화할 수 있습니다.세포 씨를 뿌린 지 하루 후, 반전된 광 현미경으로 세포 형태와 밀도를 확인하십시오. 이상적으로 세포는 경질에서 대략 85% 응수되어야 합니다. 매체를 음편당 세럼이 없는 DMEM 1밀리리터로 교체하고 접시를 인큐베이터에 다시 넣습니다.각 웰의 세포에 대해, 경질 시약의 8마이크로리터를 혈청 배지를 감소시 150 마이크로리터의 부피에 희석시. 용액을 부드럽게 섞고 실온에 5분간 앉게 하십시오. 한편, 2.5 마이크로그램의 플라스미드 DNA를 158마이크로리터의 혈청 배지로 희석한다.5 분 인큐베이션 후 희석 된 DNA를 희석 된 형질 검사 시약과 결합하고 용액을 부드럽게 혼합하고 실온에서 15 분 동안 둡니다. 혈청이 없는 배지의 세포와 함께 해당 우물에 DNA 지질 복합체를 추가합니다. 그런 다음 앞뒤로 흔들어 서 접시를 부드럽게 섞습니다.플레이트를 섭씨 37도, 이산화탄소 5%에서 4~6시간 동안 배양합니다. 인큐베이션 후, 매체를 제거하고 잘 당 DMEM의 두 밀리리터로 대체합니다. 그런 다음 36 ~48 시간 동안 다시 배양하십시오.잘 당 10, 000 세포와 96 웰 플레이트에 취약 셀의 각 유형을 시드. 그런 다음 밤에 접시를 섭씨 37도, 이산화탄소 인큐베이터 5%로 둡니다. 형질 전환 후 셋째 날에는 분홍색 또는 약간 주황색으로 밝은 매체의 색상을 확인하고 440 ~ 460 나노미터 파장 아래 반전 된 플로레스센트 생물학적 현미경으로 세포를 검사하십시오.트랜스펙트 후 38내지 48시간 후에, 0.45 마이크로미터 폴리비닐리덴 불소 막 필터를 통과하여 슈오타이핑 입자 또는 PPS를 수확하여 세포 이물질을 제거한 다음 소량의 알리코크로 나누어 섭씨 80도를 뺀 값으로 보관하십시오. 조달청을 정량화하기 위해 정제된 바이러스 입자30마이크로리터를 1.5 마이크로리터 RNase 프리 튜브로 옮기고 벤조나제 뉴클레아제 1마이크로리터를 첨가한다. DNA및 RNA 오염을 제거하기 위해 1시간 동안 37°C의 튜브를 배양합니다.인큐베이션 후, 시료를 영하 70도까지 동결하여 핵을 활성화하고 단백질을 30분 동안 2마이크로리터의 단백질을 첨가하여 봉투 단백질을 소화하고 CMV-GFP RNA를 방출한다. 그런 다음 3 분 동안 섭씨 100도에서 단백질 Ae K를 비활성. 텍스트 원고에 지정된 프라이머 및 프로브에서 유니버설 프로브 원스텝 RT-qPCR 키트를 사용하여 정량적 역전사 RTPCR로 PPS를 정량화합니다.MMLiter 당 4 회 10 ~ 5 번째 RNA 복사본으로 PPS를 정상화합니다. 그런 다음 H7N9 헤마글루티닌을 수용하는 PPS에 밀리리터당 10 마이크로그램의 최종 농도에 TPCK-트립신을 추가합니다. 기능하위유닛 HA1 및 HA2를 형성하기 위해 1시간 동안 PPS를 섭씨 37도에서 배양한다.정규화된 PPS를 DMEM 배지와 1 대 1 비율로 혼합한 다음 취약한 세포를 포함하는 플레이트를 생물 안전 캐비닛에 가져옵니다. 수퍼네티드를 흡인하고 100 마이크로리터의 미리 데운 PBS로 세포를 한 번 씻으세요. 각 우물에 PPS-DMEM 혼합물 100 마이크로리터를 추가하여 각 PPS 유형의 감염성 테스트를 하나의 취약한 세포주로 세팅합니다.플레이트를 섭씨 37도에서 4~6시간, 이산화탄소 5%로 배양합니다. 그런 다음 슈퍼나탄을 흡인하고 감염성 검출 전에 24~36시간 동안 플레이트를 배양하는 DCM 의 마이크로리터 100마이크로리터로 교체한다. 우리의 결과는 PPS는 지금 사람들에게 전염성이 있는 것으로 간주됩니다.그래서 필요한 안전 가드 절차는 마스크를 착용하고 생물 안전 캐비닛에 감염성 검사를 수행하는 등의 작업을 수행하는 것이 좋습니다. 이 프로토콜은 2개의 그룹화된 헤마글루티닌 및 뉴라미니다아제 성혈구 스토마티스 바이러스 G 당단백질 또는 봉투 당단백질없음을 가진 10가지 유형의 의사형 입자 또는 PPS를 생성하기 위해 생성되었다. 조달청은 전염 전자 현미경으로 심화되었고 그들의 감염성은 두 개의 세포주, A549 및 MDCK에서 평가되었다.H5를 수용하는 조달국 군에서는 H5N1, H5 플러스 N9 및 H5의 감염성은 세포주 A549 및 40%5%와 5%의 약 90%와 10%였다. H7을 수용하는 조달군에서는 H7N9, H7 플러스 N1 및 H7의 감염성은 셀주 A549 및 8%4%와 1%로 각각 약 10%7% 및 1%였다. 성구 구내염 바이러스 G 당단백질 PP의 감염성은 A549의 경우 약 21%, MDCK 세포의 경우 16%였다.델타 봉투 당단백질 PP는 감염성을 나타내지 않았다. PP 생산업체 HEK-293T/17 세포가 이 절차의 기초에 해당한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 따라서 최적의 성장이 HEK-293T/17 세포를 가르치는 것이 가장 중요합니다.이 절차 또는 L2와 같은 다른 테스트에 따라 경계 분석이 수행 될 수 있습니다. 이 분석체는 수용체 선호도의 생물학적 특수성을 거의 제거할 수 있으며 패턴은 PPS의 트로피주의를 드러낼 것이다. 그들은 인플루엔자 바이러스에서 당단백질을 했다 이후 두 플러스 최대로 복제.HA와 NA 단백질은 별도로 연구할 수 있으므로 그(것)들 사이 를 재분류합니다. 돌연변이와 성숙한 효과를 탐구 할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Determination of Molecular Structures of HIV Envelope Glycoproteins using Cryo-Electron Tomography and Automated Sub-tomogram Averaging

Cryo - 전자 Tomography 및 자동 하위 tomogram 평균을 사용하여 HIV의 봉투 Glycoproteins의 분자 구조 결정

Since its discovery nearly 30 years ago, more than 60 million people have been infected with the human immunodeficiency virus (HIV) (www.usaid.gov). The ...

연구

면역학 및 감염병학

Avian Influenza Surveillance with FTA  Cards: Field Methods, Biosafety, and Transportation Issues Solved

조류 FTA 카드 인플루엔자 감시 : 필드 방법, Biosafety, 그리고 교통 문제 해결

Avian Influenza Viruses (AIVs) infect many mammals, including humans1. These AIVs are diverse in their natural hosts, harboring almost all possible viral ...

Packaging HIV- or FIV-based Lentivector Expression Constructs &amp; Transduction of VSV-G Pseudotyped Viral Particles

Packaging HIV- or FIV-based Lentivector Expression Constructs & Transduction of VSV-G Pseudotyped Viral Particles

포장 HIV 또는 FIV 기반 Lentivector 식 구조 및 VSV-G Pseudotyped 바이러스성 입자의 형질 도입

As with standard plasmid vectors, it is possible to transfect lentivectors in plasmid form into cells with low-to-medium efficiency to obtain transient ...

Expression of Functional Recombinant Hemagglutinin and Neuraminidase Proteins from the Novel H7N9 Influenza Virus Using the Baculovirus Expression System

배큘로 바이러스 발현 시스템을 사용하여 소설 H7N9 인플루엔자 바이러스의 기능 재조합 적혈구 응집소와 뉴 라미니다 아제 단백질의 발현

The baculovirus expression system is a powerful tool for expression of  recombinant proteins. Here we use it to produce correctly folded and  glycosylated ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

셀 기반의 ELISA 분석을 사용하여 HIV-1 삼량 봉투 당 단백질의 구조적 평가

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

Modeling The Lifecycle Of Ebola Virus Under Biosafety Level 2 Conditions With Virus-like Particles Containing Tetracistronic Minigenomes

Tetracistronic Minigenomes를 포함하는 바이러스 입자와 바이오 안전성 수준이 조건에서 에볼라 바이러스의 수명주기를 모델링

Ebola viruses cause severe hemorrhagic fevers in humans and non-human primates, with case fatality rates as high as 90%. There are no approved vaccines or ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

키메라 마우스 모델에서 재조합 인플루엔자 백신의 비강 관리는 점막 면역을 연구하기 위해

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...

Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

리보플라빈과 혈소판 제품 및 자외선 치료 : 높은 역가 세균 오염에 대해 효과

Contamination of platelet units by bacteria has long been acknowledged as a significant transfusion risk due to their post-donation storage conditions. ...

Rapid Molecular Detection and Differentiation of Influenza Viruses A and B

빠른 분자 탐지 및 인플루엔자 바이러스 A와 B의 차별화

Influenza is a contagious respiratory illness caused by influenza viruses A and B in humans and causes a significant amount of morbidity and mortality ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

형광 기반의 뉴 라미니다 아제 억제 분석은 항 바이러스제의 뉴 라미니다 아제 억제제 클래스에 인플루엔자 바이러스의 감수성을 평가하기 위해

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...