Name: production of high-titer infectious influenza pseudotyped particles with envelope glycoproteins from highly pathogenic h5n1 and avian h7n9 viruses
Uploaded: 2020-01-15T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Production of High-Titer Infectious Influenza Pseudotyped Particles with Envelope Glycoproteins from Highly Pathogenic H5N1 and Avian H7N9 Viruses at JoVE.com

Bu çalışma Zhejiang İl Tıp ve Sağlık Bilimleri ve Teknoloji Planı (Hibe Numaraları, 2017KY538), Hangzhou Belediye Tıp ve Sağlık Bilimleri ve Teknoloji Planı (Hibe Numaraları, OO20190070), Hangzhou Tıp Bilimi ve Teknoloji nin anahtarı Projesi (Grant Numbers, 2014Z11) ve Hangzhou belediye nin sosyal gelişim ve bilimsel araştırma özerk uygulama projesi (Hibe Numaraları, 20191203B134).

1. Gün 1: Hücre Kültürü ve Tohumlama
<ol><li>%10 fetal sığır serumu (FBS) ve 100 U/mL penisilin-streptomisin (DMEM Complete Medium, DCM) 37 °C,%5 karbondioksit (CO2)inkübatörde yaklaşık %80'e kadar uyumludur. NOT: HEK 293T/17 düşük geçiş li hücreler önerilir.</li>
	<li>Hücreleri 5 mL fosfat tamponlu salin (PBS) 1x ile dikkatlice yıkayın. NOT: HEK 293T/17 hücrelerinin elle kullanımı çok nazik olmalıdır, çünkü kolayca kopabilirler.</li>
	<li>PBS'yi çıkarın ve hücreleri...

<ol>
	<li>Knipe, D. M., Howley, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fields Virology (6th). , (2013).</li><li>White, J. M., Delos, S. E., Brecher, M., Schornberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+and+mechanisms+of+viral+membrane+fusion+proteins:+multiple+variations+on+a+common+theme.">Structures and mechanisms of viral membrane fusion proteins: multiple variations on a common theme.</a> Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology. 43 (3), 189-219 (2008).</li><li>Bright, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-clade+protective+immune+responses+to+influenza+viruses+with+H5N1+HA+and+NA+elicited+by+an+influenza+virus-like+particle.">Cross-clade protective immune responses to influenza viruses with H5N1 HA and NA elicited by an influenza virus-like particle.</a> PLoS One. 3 (1), 1501 (2008).</li><li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+pseudotyped+influenza+viral+particles+in+neutralizing+antibody+detection.">Reliability of pseudotyped influenza viral particles in neutralizing antibody detection.</a> PLoS One. 9 (12), 113629 (2014).</li><li>Wyatt, R., Sodroski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+HIV-1+envelope+glycoproteins:+fusogens,+antigens,+and+immunogens.">The HIV-1 envelope glycoproteins: fusogens, antigens, and immunogens.</a> Science. 280 (5371), 1884-1888 (1998).</li><li>Joe, A. K., Foo, H. H., Kleeman, L., Levine, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transmembrane+domains+of+Sindbis+virus+envelope+glycoproteins+induce+cell+death.">The transmembrane domains of Sindbis virus envelope glycoproteins induce cell death.</a> Journal of Virology. 72 (5), 3935-3943 (1998).</li><li>Albecka, A., Laine, R. F., Janssen, A. F., Kaminski, C. F., Crump, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HSV-1+Glycoproteins+Are+Delivered+to+Virus+Assembly+Sites+Through+Dynamin-Dependent+Endocytosis.">HSV-1 Glycoproteins Are Delivered to Virus Assembly Sites Through Dynamin-Dependent Endocytosis.</a> Traffic. 17 (1), 21-39 (2016).</li><li>Huang, A. S., Palma, E. L., Hewlett, N., Roizman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudotype+formation+between+enveloped+RNA+and+DNA+viruses.">Pseudotype formation between enveloped RNA and DNA viruses.</a> Nature. 252 (5485), 743-745 (1974).</li><li>Rubin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Control+of+Cellular+Susceptibility+to+Pseudotypes+of+Rous+Sarcoma+Virus.">Genetic Control of Cellular Susceptibility to Pseudotypes of Rous Sarcoma Virus.</a> Virology. 26, 270-276 (1965).</li><li>Steffen, I., Simmons, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudotyping+Viral+Vectors+With+Emerging+Virus+Envelope+Proteins.">Pseudotyping Viral Vectors With Emerging Virus Envelope Proteins.</a> Current Gene Therapy. 16 (1), 47-55 (2016).</li><li>Bartosch, B., Dubuisson, J., Cosset, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infectious+hepatitis+C+virus+pseudo-particles+containing+functional+E1-E2+envelope+protein+complexes.">Infectious hepatitis C virus pseudo-particles containing functional E1-E2 envelope protein complexes.</a> Journal of Experimental Medicine. 197 (5), 633-642 (2003).</li><li>Bian, T., Zhou, Y., Bi, S., Tan, W., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HCV+envelope+protein+function+is+dependent+on+the+peptides+preceding+the+glycoproteins.">HCV envelope protein function is dependent on the peptides preceding the glycoproteins.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 378 (1), 118-122 (2009).</li><li>Gudima, S., Meier, A., Dunbrack, R., Taylor, J., Bruss, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+potentially+important+elements+of+the+hepatitis+B+virus+large+envelope+protein+are+dispensable+for+the+infectivity+of+hepatitis+delta+virus.">Two potentially important elements of the hepatitis B virus large envelope protein are dispensable for the infectivity of hepatitis delta virus.</a> Journal of Virology. 81 (8), 4343-4347 (2007).</li><li>Yoshida, Y., Emi, N., Hamada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VSV-G-pseudotyped+retroviral+packaging+through+adenovirus-mediated+inducible+gene+expression.">VSV-G-pseudotyped retroviral packaging through adenovirus-mediated inducible gene expression.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 232 (2), 379-382 (1997).</li><li>Burns, J. C., Friedmann, T., Driever, W., Burrascano, M., Yee, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicular+stomatitis+virus+G+glycoprotein+pseudotyped+retroviral+vectors:+concentration+to+very+high+titer+and+efficient+gene+transfer+into+mammalian+and+nonmammalian+cells.">Vesicular stomatitis virus G glycoprotein pseudotyped retroviral vectors: concentration to very high titer and efficient gene transfer into mammalian and nonmammalian cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (17), 8033-8037 (1993).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+pseudoparticles+paired+with+hemagglutinin+and+neuraminidase+from+highly+pathogenic+H5N1+influenza+and+avian+influenza+A+(H7N9)+viruses.">Characterization of pseudoparticles paired with hemagglutinin and neuraminidase from highly pathogenic H5N1 influenza and avian influenza A (H7N9) viruses.</a> Virus Research. 253, 20-27 (2018).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infectivity+of+Pseudotyped+Particles+Pairing+Hemagglutinin+of+Highly+Pathogenic+Avian+Influenza+a+H5N1+Virus+with+Neuraminidases+of+The+2009+Pandemic+H1N1+and+a+Seasonal+H3N2.">Infectivity of Pseudotyped Particles Pairing Hemagglutinin of Highly Pathogenic Avian Influenza a H5N1 Virus with Neuraminidases of The 2009 Pandemic H1N1 and a Seasonal H3N2.</a> Journal of Bioterrorism &amp; Biodefense. 2, 104 (2011).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+neuraminidases+from+the+highly+pathogenic+avian+H5N1+and+2009+pandemic+H1N1+influenza+A+viruses.">Characterization of neuraminidases from the highly pathogenic avian H5N1 and 2009 pandemic H1N1 influenza A viruses.</a> PLoS One. 5 (12), 15825 (2010).</li><li>Nefkens, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemagglutinin+pseudotyped+lentiviral+particles:+characterization+of+a+new+method+for+avian+H5N1+influenza+sero-diagnosis.">Hemagglutinin pseudotyped lentiviral particles: characterization of a new method for avian H5N1 influenza sero-diagnosis.</a> Journal of Clinical Virology. 39 (1), 27-33 (2007).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemagglutinin+and+neuraminidase+matching+patterns+of+two+influenza+A+virus+strains+related+to+the+1918+and+2009+global+pandemics.">Hemagglutinin and neuraminidase matching patterns of two influenza A virus strains related to the 1918 and 2009 global pandemics.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 387 (2), 405-408 (2009).</li><li>Lin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oseltamivir+boosts+2009+H1N1+virus+infectivity+in+vitro.">Oseltamivir boosts 2009 H1N1 virus infectivity in vitro.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 390 (4), 1305-1308 (2009).</li><li>McKay, T., Patel, M., Pickles, R. J., Johnson, L. G., Olsen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+M2+envelope+protein+augments+avian+influenza+hemagglutinin+pseudotyping+of+lentiviral+vectors.">Influenza M2 envelope protein augments avian influenza hemagglutinin pseudotyping of lentiviral vectors.</a> Gene Therapy. 13 (8), 715-724 (2006).</li><li>Pan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+mediates+avian+influenza+H5N1+pseudotyped+particle-induced+lung+inflammation+through+NF-kappaB+and+p38+MAPK+signaling+pathways.">Autophagy mediates avian influenza H5N1 pseudotyped particle-induced lung inflammation through NF-kappaB and p38 MAPK signaling pathways.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 306 (2), 183-195 (2014).</li><li>Szecsi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+neutralising+antibodies+by+virus-like+particles+harbouring+surface+proteins+from+highly+pathogenic+H5N1+and+H7N1+influenza+viruses.">Induction of neutralising antibodies by virus-like particles harbouring surface proteins from highly pathogenic H5N1 and H7N1 influenza viruses.</a> Virology Journal. 3, 70 (2006).</li><li>Garcia, J. M., Lagarde, N., Ma, E. S., de Jong, M. D., Peiris, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+and+evaluation+of+an+influenza+A+(H5)+pseudotyped+lentiviral+particle-based+serological+assay.">Optimization and evaluation of an influenza A (H5) pseudotyped lentiviral particle-based serological assay.</a> Journal of Clinical Virology. 47 (1), 29-33 (2010).</li><li>Garcia, J. M., Lai, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+influenza+pseudotyped+lentiviral+particles+and+their+use+in+influenza+research+and+diagnosis:+an+update.">Production of influenza pseudotyped lentiviral particles and their use in influenza research and diagnosis: an update.</a> Expert Review of Anti-infective Therapy. 9 (4), 443-455 (2011).</li><li>Haynes, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza-pseudotyped+Gag+virus-like+particle+vaccines+provide+broad+protection+against+highly+pathogenic+avian+influenza+challenge.">Influenza-pseudotyped Gag virus-like particle vaccines provide broad protection against highly pathogenic avian influenza challenge.</a> Vaccine. 27 (4), 530-541 (2009).</li><li>Schmeisser, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+characterization+of+mammalian+virus-like+particles+from+modified+vaccinia+virus+Ankara+vectors+expressing+influenza+H5N1+hemagglutinin+and+neuraminidase.">Production and characterization of mammalian virus-like particles from modified vaccinia virus Ankara vectors expressing influenza H5N1 hemagglutinin and neuraminidase.</a> Vaccine. 30 (23), 3413-3422 (2012).</li><li>Liu, Y. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus+(SARS-CoV)+S+glycoprotein+and+influenza+matrix+1+efficiently+form+virus-like+particles+(VLPs)+that+protect+mice+against+challenge+with+SARS-CoV.">Chimeric severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) S glycoprotein and influenza matrix 1 efficiently form virus-like particles (VLPs) that protect mice against challenge with SARS-CoV.</a> Vaccine. 29 (38), 6606-6613 (2011).</li><li>Moeschler, S., Locher, S., Conzelmann, K. K., Kramer, B., Zimmer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Lyssavirus-Neutralizing+Antibodies+Using+Vesicular+Stomatitis+Virus+Pseudotype+Particles.">Quantification of Lyssavirus-Neutralizing Antibodies Using Vesicular Stomatitis Virus Pseudotype Particles.</a> Viruses. 8 (9), 254 (2016).</li><li>Lai, A. L., Millet, J. K., Daniel, S., Freed, J. H., Whittaker, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SARS-CoV+Fusion+Peptide+Forms+an+Extended+Bipartite+Fusion+Platform+that+Perturbs+Membrane+Order+in+a+Calcium-Dependent+Manner.">The SARS-CoV Fusion Peptide Forms an Extended Bipartite Fusion Platform that Perturbs Membrane Order in a Calcium-Dependent Manner.</a> Journal of Molecular Biology. 429 (24), 3875-3892 (2017).</li><li>Millet, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Middle+East+respiratory+syndrome+coronavirus+infection+is+inhibited+by+griffithsin.">Middle East respiratory syndrome coronavirus infection is inhibited by griffithsin.</a> Antiviral Research. 133, 1-8 (2016).</li><li>Millet, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+Pseudotyped+Particles+to+Study+Highly+Pathogenic+Coronaviruses+in+a+Biosafety+Level+2+Setting.">Production of Pseudotyped Particles to Study Highly Pathogenic Coronaviruses in a Biosafety Level 2 Setting.</a> Journal of Visualized Experiments. (145), e59010 (2019).</li><li>Ma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+leukemia+virus+pseudotypes+of+La+Crosse+and+Hantaan+Bunyaviruses:+a+system+for+analysis+of+cell+tropism.">Murine leukemia virus pseudotypes of La Crosse and Hantaan Bunyaviruses: a system for analysis of cell tropism.</a> Virus Research. 64 (1), 23-32 (1999).</li><li>Wool-Lewis, R. J., Bates, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Ebola+virus+entry+by+using+pseudotyped+viruses:+identification+of+receptor-deficient+cell+lines.">Characterization of Ebola virus entry by using pseudotyped viruses: identification of receptor-deficient cell lines.</a> Journal of Virology. 72 (4), 3155-3160 (1998).</li><li>Chen, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+design+of+more+effective+avian+replication-incompetent+retroviral+vectors.">Production and design of more effective avian replication-incompetent retroviral vectors.</a> Developmental Biology. 214 (2), 370-384 (1999).</li><li>Kaku, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Second+generation+of+pseudotype-based+serum+neutralization+assay+for+Nipah+virus+antibodies:+sensitive+and+high-throughput+analysis+utilizing+secreted+alkaline+phosphatase.">Second generation of pseudotype-based serum neutralization assay for Nipah virus antibodies: sensitive and high-throughput analysis utilizing secreted alkaline phosphatase.</a> Journal of Virological Methods. 179 (1), 226-232 (2012).</li><li>Rudiger, D., Kupke, S. Y., Laske, T., Zmora, P., Reichl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiscale+modeling+of+influenza+A+virus+replication+in+cell+cultures+predicts+infection+dynamics+for+highly+different+infection+conditions.">Multiscale modeling of influenza A virus replication in cell cultures predicts infection dynamics for highly different infection conditions.</a> PLOS Computational Biology. 15 (2), 1006819 (2019).</li><li>Petiot, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+viruses+production:+Evaluation+of+a+novel+avian+cell+line+DuckCelt(R)-T17.">Influenza viruses production: Evaluation of a novel avian cell line DuckCelt(R)-T17.</a> Vaccine. 36 (22), 3101-3111 (2018).</li></ol>

Bu protokolde, bir BSL-2 ayarında influenza virüs psödotipli parçacıklar (pp) üretmek için bir yöntem açıklar. Muhabir plazmid pcDNA-GFP pps dahil ve bir enfektelik testi FACS tarafından pps ölçmek için kullanılabilir. Grip araştırmalarında yaygın olarak kullanıldığı için iki tür duyarlı hücre hattı seçtik. MDCK hücreleri bu çalışmalarda kullanılan değişken ölümsüzleştirilmiş insan hücrelerine iyi bir kontrol sağlayacaktır.
Bu protokol retrovirüs ML...

Viral bir parçacığın görevi, genomunu enfekte olmuş bir konak hücreden enfekte olmayan bir konak hücreye taşımak ve onu bir çoğaltma-yetkin form1'desitoplazmaya veya çekirdeğe ulaştırmaktır. Bu süreç başlangıçta konak hücre reseptörlerine bağlanması ile tetiklenir, virion ve hücre zarlarının füzyon u izledi. Grip virüsleri gibi zarflı virüsler için, başak glikoproteinler reseptör bağlama ve füzyonsorumludur 1,2. Viral zarf glikoproteinler (örneğin, pirojenler, antijenler), virüs yaşam döngüsü başlatma (bağlama ve füzyon), viral patogenez, immünojenite, konak hücre apoptozisi ve hücresel tropizm, hücresel endositik yol, yanı sıra interspecies iletim ve reassortment1,3,4,5,6,7gibi birçok önemli özellikleri ve olayları, yer almaktadır. Viral zarf glikoproteinler üzerinde araştırma bize viral enfeksiyon sürecinin birçok yönünü anlamamıza yardımcı olacaktır. Pseudotyped viral parçacıklar (pp), ayrıca pseudovirions veya psödo partikülleri olarak adlandırılan, bir psödotiplemetekniği8,9,10ile oluşturulabilir. Bu teknoloji hepatit C11,12,hepatit B13, vesiküler stomatit virüsü (VSV)14,15, ve grip virüsü16,17,18,19dahil olmak üzere birçok virüs, psödotipli parçacıklar geliştirmek için kullanılmıştır. Bu teknoloji lentiviruses veya diğer retrovirüslerin Gag-Pol protein dayanmaktadır.
Psödotipli viral parçacıklar, viral zarf glikoprotein ekspresyonu plazmidi, zarf env geni eksik retroviral ambalaj plazmidi ve pp üretici hücrelerine ayrı bir muhabir plazmid kotransfecting tarafından üç plazmid sistemi kullanılarak elde edilebilir. Retrovirüs gag proteini tarafından monte edilir ve virüs zarfprotein1ifade enfekte bir hücre zarından tomurcukları . Bu nedenle, influenza HA ve NA ifade eden bir hücresel membran üzerinde tomurcukları üretmek için retrovirus Gag proteinkullanarak yüksek titer influenza pps elde etmek mümkündür. Önceki çalışmalarımızda, tüm kombinasyonlarda HAs / NAs fonksiyonel ve viral yaşam döngüsü16,17,18,20,21karşılık gelen işlevlerini gerçekleştirmek mümkün idi. Bu pps grip biyolojik özelliklerini araştırmak için kullanılır, hemagglutination dahil, neuraminidaz aktivitesi, HA-reseptör bağlama tropizm, ve enfektivite. HA ve NA viral yaşam döngüsünde hem önemli yüzey fonksiyonel proteinler olduğundan, uyumsuz HAs ve NA'lar influenza farklı suşları türetilen kısmen aralarında reassortment gösterebilir. Burada, üç plazmid psödotipleme sistemi kullanarak, iki HAs ve iki NA 'yi (HPAI H5N1 suş ve H7N9 lekesinden türetilmiş) birleştirerek sekiz tür influenza pps üretiyoruz. Bu sekiz pps türü iki yerli pps içerir, H5N1pp, H7N9pp; iki eşleşmemiş pps, (H5+N9)pp, (H7+N1)pp; ve sadece tek bir glikoprotein (HA veya NA), H5pp, N1pp, H7pp, N9pp. Grip virüsü üzerine yapılan çalışmalar, H5N1 ve H7N9 gibi biyogüvenlik gereksinimleri ile sınırlıdır. Yaban influenza virüs suşları ile ilgili tüm çalışmalar biyogüvenlik düzeyi 3 (BSL-3) laboratuarında yapılmalıdır. Psödotipli viral parçacık teknolojisi, yapay virion'u biyogüvenlik seviyesi 2 (BSL-2) ayarında paketlemek için kullanılabilir. Bu nedenle pps, iki büyük glikoproteinine bağlı olarak grip virüsü süreçlerini incelemek için daha güvenli ve yararlı bir araçtır: hemagglutinin (HA) ve nöraminidaz (NA).
Bu protokol, bu pps'lerin üretimini üç plazmid li kotransfeksiyon stratejisi (Şekil 1'degenel olarak), pps'nin nasıl ölçülecek ve enfektelik tespiti ile açıklar. PP üretimi üç çeşit plazmid içerir (Şekil 1). Retrovirüs Gag-Pol proteinini kodlayan gag-pol geni retrovirüs ambalaj kitinden klonlandı ve pcDNA 3.1 plazmidine yerleştirildi ve pcDNA-Gag-Pol olarak adlandırıldı. Yeşil Floresan Proteini kodlayan geliştirilmiş yeşil floresan protein (eGFP) geni pTRE-EGFP vektöründen klonlandı, pcDNA 3.1 plazmidine yerleştirildi ve pcDNA-GFP olarak adlandırıldı. Klonlama sırasında bir astar ile bir ambalaj sinyali () dizisi eklendi. HA ve NA genleri sırasıyla pVRC-HA ve pVRC-NA adı verilen bir pVRC plazmidine klonlandı. Son plazmid füzyon proteinini kodlar ve ilgi çekici başka bir füzyon proteini ile değiştirilebilir. Psödotipleme platformumuz iki glikoprotein ekspresyonu içerir: pVRC-HA ve pVRC-NA. Bu bir BSL-2 ayarında farklı virüs suşları arasında reassortment araştırma basitleştirebilirsiniz.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Benzonase Nuclease</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>70664</td>
			<td>Effective viscosity reduction and removal of nucleic acids from protein solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Flat Bottom Polystyrene TC-treated Microplates (96-well)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td>Treated for optimal cell attachment 
			Sterilized by gamma radiation and certified nonpyrogenic 
			Individual alphanumeric codes for well identification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear TC-treated Multiple Well Plates (6-wells)</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3516</td>
			<td>Individual alphanumerical codes for well identification 
			Treated for optimal cell attachment 
			Sterilized by gamma irradiation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified essential medium (DMEM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965092</td>
			<td>A widely used basal medium for supporting the growth of many different mammalian cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Excell</td>
			<td>FND500</td>
			<td>fetal bovine sera that can offer excellent value for basic cell culture, specialty research, and specific assays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)</td>
			<td>Beckman coulter</td>
			<td>cytoflex</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human alveolar adenocarcinoma A549 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRM-CCL-185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human embryonic kidney (HEK) HEK-293T/17 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-11268</td>
			<td>A versatile transfection reagent that has been shown to effectively transfect the widest variety of adherent and suspension cell lines</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted fluorescent biological microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51-32P01-FLB3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted light microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CKX31-12PHP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000 Transfection Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668019</td>
			<td>Rapid, sensitive and precise probe-based qPCR detection and quantitation of target RNA targets.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit</td>
			<td>NEB</td>
			<td>E3006L</td>
			<td>Will withstand up to 14,000 RCF 
			RNase-/DNase-free Nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MaxyClear Snaplock Microcentrifuge Tube (1.5 mL)</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>33 mm, gamma sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-HV Syringe Filter Unit, 0.45 &#181;m, PVDF</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLHV033RS</td>
			<td>an improved Minimal Essential Medium (MEM) that allows for a reduction of Fetal Bovine Serum supplementation by at least 50% with no change in cell growth rate or morphology. Opti-MEM I medium is also recommended for use with cationic lipid transfection reagents, such as Lipofectamine reagent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11058021</td>
			<td>The antibiotics penicillin and streptomycin are used to prevent bacterial contamination of cell cultures due to their effective combined action against gram-positive and gram-negative bacteria.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin-streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Maximum RCF is 12,500 xg 
			Temperature range from -80 &#176;C to 120 &#176;C 
			RNase-/DNase-free 
			Sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PP Centrifuge Tubes (15 mL)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>a stable and highly reactive serine protease</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>ST532</td>
			<td>Treated for optimal cell attachment 
			Sterilized by gamma radiation and certified nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC-treated Culture Dish (60mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430166</td>
			<td>Trypsin from bovine pancreas 
			TPCK Treated, essentially salt-free, lyophilized powder, &#8805;10,000 BAEE units/mg protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TPCK-trypsin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1426</td>
			<td>This liquid formulation of trypsin contains EDTA and phenol red. Gibco Trypsin-EDTA is made from trypsin powder, an irradiated mixture of proteases derived from porcine pancreas. Due to its digestive strength, trypsin is widely used for cell dissociation, routine cell culture passaging, and primary tissue dissociation. The trypsin concentration required for dissociation varies with cell type and experimental requirements.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

production of high-titer infectious influenza pseudotyped particles with envelope glycoproteins from highly pathogenic h5n1 and avian h7n9 viruses

Son derece patojen kuş gribi A virüsü H5N1 (HPAI H5N1) ve H7N9 insanlar ve bunların öldürücü ara sıra doğrudan iletim ciddi halk sağlığı sorunları ve bir salgın olasılığını düşündürmektedir. Ancak, virüsün moleküler anlayışı ilkeldir ve zarf proteinlerinin biyolojik özelliklerini tedavi edici hedefler olarak incelemek ve enfeksiyonu kontrol etmek için stratejiler geliştirmek gereklidir. Kuş gribi virüsünü incelemek için katı bir viral psödotipli parçacık (pp) platformu geliştirdik, hemagglutinin (HA) ve nöraminidaz (NA) zarf glikoproteinlerin fonksiyonel analizi, HAs ve NA'ların reassortment özellikleri, reseptörler, tropizmler, nötralize antikorlar, tanı, enfektivite, ilaç geliştirme ve aşı tasarımı amacıyla. Burada, iki influenza A türünden (HAPI H5N1 ve 2013 kuş H7N9) zarf glikoproteinleri (HA, NA) ile pps oluşturmak için deneysel bir prosedür açıklıyoruz. Onların nesil murine lösemi virüsü (MLV) gibi bazı virüslerin kapasitesine dayanmaktadır, bir pp içine zarf glikoproteinler dahil etmek. Buna ek olarak, bu pps RT-qPCR ile nasıl ölçülür ve yerli ve uyumsuz virüs pps enfekte algılama HAs ve NA'ların kökenine bağlı olarak ayrıntılı. Bu sistem son derece esnek ve uyarlanabilir ve zarflı virüs başka bir tür dahil edilebilir zarf glikoproteinler ile viral pps kurmak için kullanılabilir. Böylece, bu viral parçacık platformu birçok araştırma araştırmalarında vahşi virüsleri incelemek için kullanılabilir.

Yukarıda açıklanan genel prosedüre bağlı olarak, iki grup HAs/NA'yı veya VSV-G glikoproteinini veya zarfsız glikoproteini birleştiren 10 tip pps ürettik (Tablo 1'degösterilmiştir). Yedisi bulaşıcı. Hiçbir zarf glikoprotein veya sadece liman NA barındıran pps burada herhangi bir enfektelik göstermedi. Grip pp üretim prosedürü Şekil 1'degenel olarak vebaktır. Pps iletim elektron mikrografları (örneğin, H5N1pp) Şekil 3'te</strong...

Watch this Scientific Journal Video about Production of High-Titer Infectious Influenza Pseudotyped Particles with Envelope Glycoproteins from Highly Pathogenic H5N1 and Avian H7N9 Viruses at JoVE.com

Production of High-Titer Infectious Influenza Pseudotyped Particles with Envelope Glycoproteins from Highly Pathogenic H5N1 and Avian H7N9 Viruses

Bu protokol, iki influenza A suşlarından zarf glikoproteinleri ile yüksek titreyen enfeksiyöz viral psödotipli parçacıklar (pp) üretmek için deneysel bir süreci ve bunların enfekteliğini nasıl belirleyeceklerini açıklamaktadır. Bu protokol, farklı zarf glikoproteinleri ile zarflı virüslerin herhangi bir tür pps geliştirmek için son derece uyarlanabilir.

Yüksek Patojenik H5N1 ve Kuş H7N9 Virüslerinden Zarf Glikoproteinleri Ile Yüksek Titer Enfeksiyöz İnfluenza Pseudotyped Partiküllerin Üretimi

The occasional direct transmission of the highly pathogenic avian influenza A virus H5N1 (HPAI H5N1) and H7N9 to humans and their lethality are serious ...

Grip viral PP üreten ve enfekte olduğunu belirleyen bu teknik bir BSL-2 şehirde grip virüsü araştırma basitleştirmek olabilir. PpS'nin qRT-PCR verilerine dayalı enfeksiyonlar için PPS'yi normalleştirdik. İki glikoprotein ekspresyonu plazmid kodlanır, bu da virüs reassortment araştırmabasitleştirebilirsiniz.Hücre tohumlamadan bir gün sonra, ters ışık mikroskobu altında hücre morfolojisini ve yoğunluğunu kontrol edin. İdeal olarak hücre transfeksiyonda yaklaşık %85 konfeksiyon olmalıdır. Orta yı her kuyuda bir mililitre serumsuz DMEM ile değiştirin ve tabağı kuvöze geri koyun.Hücrelerin her bir kuyunun transfeksiyon alabilen her bir kuyusu için, transfeksiyon reaktifinin sekiz mikrolitresini azaltılmış serum ortamına sahip 150 mikrolitrelik bir hacme seyreltin. Çözeltiyi hafifçe karıştırın ve oda sıcaklığında beş dakika bekletin. Bu arada, azaltılmış serum orta 158 mikrolitre içine plazmid DNA 2.5 mikrogram seyreltin.Beş dakika kuluçka sonra, seyreltilmiş DNA seyreltilmiş transfeksiyon reaktifi ile birleştirmek, yavaşça çözeltikarıştırın ve 15 dakika oda sıcaklığında bırakın. Serumiçermeyen ortamdaki hücrelerle ilgili kuyulara DNA lipid kompleksini ekleyin. Sonra yavaşça ileri geri sallayarak plaka karıştırın.Plakayı 37 santigrat derecede ve %5 karbondioksitle 4-6 saat kuluçkaya yatırın. Kuluçkadan sonra ortayı çıkarın ve her kuyuda iki mililitre DMEM ile değiştirin. Sonra 36-48 saat daha kuluçkaya yat.Her bir duyarlı hücre türünü kuyu başına 10, 000 hücre ve 96 kuyu plakası ile tohumlayın. Sonra tabağı bir gecede 37 derece santigrat ve %5 karbondioksit kuvözde bırakın. Transfeksiyondan sonraki üçüncü gün, pembe veya hafif turuncu renkte olması gereken ortamın rengini kontrol edin ve 440 ila 460 nanometre dalga boyu altında ters floresan biyolojik mikroskopla hücreleri inceleyin.Transfeksiyon sonrası 38 ila 48 saat sonra, hücre enkazını ortadan kaldırmak için 0,45 mikrometrelik poliviniliden florür membran filtresinden geçirerek pseuotyped partikülleri veya PPS'yi hasat edin, sonra bunları küçük hacimli aliquotlara bölün ve eksi 80 santigrat derecede saklayın. PPS'yi ölçmek için saflaştırılmış viral parçacıkların 30 mikrolitresini 1,5 mikrolitrelik bir RNase içermeyen tüpe aktarın ve bir mikrolitre Benzonaz Çekirdeği ekleyin. Herhangi bir DNA ve RNA kontaminasyonunu ortadan kaldırmak için tüpü 37 derecede bir saat kuluçkaya yatırın.Kuluçkadan sonra, çekirdeği aktif leştirmek için numuneyi eksi 70 dereceye kadar dondurun ve karışımı iki mikrolitre Proteinaz K.Incubate ekleyip zarf proteinlerini sindirmek ve CMV-GFP RNA'yı serbest bırakmak için 30 dakika boyunca ekleyin. Sonra Proteinaz K'yi 100 derecede üç dakika boyunca etkisiz k. Metin el yazmasında belirtilen astar ve problarda Evrensel Sonda Tek AdımLı RT-qPCR Kiti'ni kullanarak PPS'yi nicel ters transkripsiyon RTPCR ile ölçün.PPS'yi mililitre başına dört kez 10 ila beşinci RNA kopyalarına normalleştirin. Daha sonra TPCK-trypsin'i mililitre başına 10 mikrogramlık son konsantrasyona h7N9 hemagglutinin barındıran PPS'ye ekleyin. PPS'yi 37 santigrat derecede bir saat boyunca kuluçkaya yatırın ve fonksiyonel ALT Birimler HA1 ve HA2'yi oluşturun.Normalleştirilmiş PPS'yi DMEM ortamı ile bire bir oranında karıştırın ve duyarlı hücreleri içeren plakayı biyogüvenlik kabinesine getirin. Supernatant aspire ve önceden ısıtılmış PBS 100 mikrolitre ile hücreleri bir kez yıkayın. Her kuyuya 100 mikrolitre PPS-DMEM karışımı ekleyerek, her bir PPS tipinin enfekte liktestlerini hassas bir hücre hattına dönüştürün.Plakayı 4-6 saat 37 santigrat derece ve %5 karbondioksitle kuluçkaya yatırın. Daha sonra süpernatant aspire ve 100 mikrolitre DCM inkübasyon plaka ile değiştirin başka bir 24-36 saat enfekte algılama önce. Sonuçlarımız PPS artık insanlar için bulaşıcı olarak kabul edilir.Bu nedenle, bir maske takmak ve biyogüvenlik kabininde enfekte liktaht denemeleri yapmak gibi gerekli koruma prosedürlerinin alınması önerilir. Bu protokol, iki gruplu hemaglutinin ve nöraminidaz vesiküler stomatit virüsü G glikoprotein veya zarf glikoproteinleri olmayan 10 tip psödotipli partikül veya PPS üretmek için üretilmiştir. PPS iletim elektron mikroskobu ile görüntülendi ve bunların enfekteliği A549 ve MDCK olmak üzere iki hücre hattında değerlendirildi.H5 barındıran PPS grubunda H5N1, H5 plus N9 ve H5'in enfekte liği sırasıyla %90%18 ve A549 hücre hattı için %10, MDCK için %40%5 ve %5 idi. H7 barındıran PPS grubunda H7N9, H7 plus N1 ve H7'nin enfekte liği sırasıyla %10 7 ve A549 hücre hattı için %1, MDCK için %8 4 ve %1 idi. Veziküler stomatit virüsü G glikoprotein PP'nin enfektivitesi A549 için %21, MDCK hücreleri için %16 idi.Delta zarf glikoproteinler pp ise hiçbir enfektelik gösterdi. PP üreticisi HEK-293T/17 hücrelerinin bu prosedürün temelini oluşturduğunu hatırlamak önemlidir. Yani optimal büyüme bize HEK-293T/17 hücrelerinin en önemli olduğunu öğretir.Bu yordamı veya L2 gibi başka bir testten sonra sınırlama testi yapılabilir. Bu test neredeyse reseptör tercihinin biyolojik özellikleri kurtulmak verebilir ve desen PPS tropism ortaya çıkaracaktır. Onlar influenza virüsü glikoproteinler aldı beri iki artı max klonlanır.HA ve NA proteinleri ayrı ayrı incelenebilir, bu yüzden aralarında yeniden çeşitlendirilebilir. Mutantlar ve olgun etkileri keşfedilebilir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Determination of Molecular Structures of HIV Envelope Glycoproteins using Cryo-Electron Tomography and Automated Sub-tomogram Averaging

Cryo-Elektron Tomografi ve Otomatik Sub-tomogram Ortalaması kullanarak HIV Zarf Glikoproteinler Moleküler Yapılarının Belirlenmesi

Since its discovery nearly 30 years ago, more than 60 million people have been infected with the human immunodeficiency virus (HIV) (www.usaid.gov). The ...

Avian Influenza Surveillance with FTA  Cards: Field Methods, Biosafety, and Transportation Issues Solved

Kuş FTA Kartları İnfluenza Sürveyans: Alan Yöntemleri, Biyogüvenlik ve Ulaşım Sorunları çözüldü

Avian Influenza Viruses (AIVs) infect many mammals, including humans1. These AIVs are diverse in their natural hosts, harboring almost all possible viral ...

Packaging HIV- or FIV-based Lentivector Expression Constructs &amp; Transduction of VSV-G Pseudotyped Viral Particles

Packaging HIV- or FIV-based Lentivector Expression Constructs & Transduction of VSV-G Pseudotyped Viral Particles

Ambalaj HIV veya FIV tabanlı Lentivector İfade Yapıları &amp; VSV-G Pseudotyped Viral Parçacıklarının İletimi

As with standard plasmid vectors, it is possible to transfect lentivectors in plasmid form into cells with low-to-medium efficiency to obtain transient ...

Expression of Functional Recombinant Hemagglutinin and Neuraminidase Proteins from the Novel H7N9 Influenza Virus Using the Baculovirus Expression System

Bakülovirüs İfade Sistemi ile Novel H7N9 influenza virüs hemaglutinin Fonksiyonel rekombinant ve Neuraminidase Proteinlerin İfadesi

The baculovirus expression system is a powerful tool for expression of  recombinant proteins. Here we use it to produce correctly folded and  glycosylated ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

Bir Hücre temelli bir ELISA testi kullanarak, HIV-1 zarf trimerik Glikoproteinler konformasyonel Değerlendirilmesi

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

Modeling The Lifecycle Of Ebola Virus Under Biosafety Level 2 Conditions With Virus-like Particles Containing Tetracistronic Minigenomes

Tetracistronic minigenomlar İçeren virüs benzeri partiküller ile Biyogüvenlik Seviyesi 2 Koşullarında Ebola virüsü Ömrü Modelleme

Ebola viruses cause severe hemorrhagic fevers in humans and non-human primates, with case fatality rates as high as 90%. There are no approved vaccines or ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

Kimerik fare modellerinde Rekombinant Grip aşıların burun içinde yoluyla mukozal bağışıklık Okumak

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...

Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

Riboflavin ile Trombosit Ürünleri ve UV Işık Tedavisi: Yüksek Titre Bakteriyel Kontaminasyon Karşı Etkinliği

Contamination of platelet units by bacteria has long been acknowledged as a significant transfusion risk due to their post-donation storage conditions. ...

Rapid Molecular Detection and Differentiation of Influenza Viruses A and B

Hızlı moleküler algılama ve Nezle Virüsleri A ve B farklılaşması

Influenza is a contagious respiratory illness caused by influenza viruses A and B in humans and causes a significant amount of morbidity and mortality ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

Floresans tabanlı Nöraminidaz İnhibisyonu Tahlili antivirallerin nöraminidaz inhibitörü Class Nezle Virüslerinden eğilimi değerlendirilebilir

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...