Name: a standardized protocol for preference testing to assess fish welfare
Uploaded: 2020-02-22T13:30:00
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Este trabajo fue apoyado por una beca de colaboración en investigación y el Instituto Huck de la Universidad Estatal de Pensilvania, así como por USDA AES 4558. La investigación cumplió con todos los requisitos de los protocolos de cuidado y uso de animales de la Universidad Estatal de Pensilvania; IACUC No. 46466.

El estudio actual tiene aprobación y cumple con todos los requisitos de los protocolos de cuidado y uso de animales de la Universidad Estatal de Pensilvania; IACUC No. 46466.
1. Configuración del aparato de preferencia
<ol><li>Obtener la aprobación del Comité de Cuidado Animal del instituto (u organización equivalente) para todos los procedimientos experimentales y de cría que involucren animales vivos antes de comenzar el experimento.</li>
	<li>Utilice un tanque experimental hecho de ...

<ol>
	<li>Reed, B., Jennings, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidance+on+the+housing+and+care+of+zebrafish,+Danio+rerio.">Guidance on the housing and care of zebrafish, Danio rerio.</a> AAALAC International. , 36 (2010).</li><li>van Praag, H., Kempermann, G., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+consequences+of+environmental+enrichment.">Neural consequences of environmental enrichment.</a> Nature Reviews Neuroscience. 1, 191-198 (2000).</li><li>Oomen, C. A., Berkinschtein, P., Kent, B. A., Sakisda, L. M., Bussey, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+hippocampal+neurogenesis+and+its+role+in+cognition.">Adult hippocampal neurogenesis and its role in cognition.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews - Cognitive Science. 5 (5), 573-587 (2014).</li><li>DePasquale, C., Neuberger, T., Hirrlinger, A. M., Braithwaite, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+complex+and+threatening+environments+in+early+life+on+brain+size+and+behaviour.">The influence of complex and threatening environments in early life on brain size and behaviour.</a> Proceeedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 283 (1823), 1-8 (2016).</li><li>Salvanes, A. G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+enrichment+promotes+neural+plasticity+and+cognitive+ability+in+fish.">Environmental enrichment promotes neural plasticity and cognitive ability in fish.</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 280, 1-7 (2013).</li><li>Barnea, A., Pravosudov, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Birds+as+a+model+to+study+adult+neurogenesis:+bridging+evolutionary,+comparative+and+neuroethological+approaches.">Birds as a model to study adult neurogenesis: bridging evolutionary, comparative and neuroethological approaches.</a> European Journal of Neuroscience. 34 (6), 884-907 (2011).</li><li>LaDage, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+territoriality,+spatial+environment,+and+hippocampal+neurogenesis+in+male+side-blotched+lizards.">Interaction between territoriality, spatial environment, and hippocampal neurogenesis in male side-blotched lizards.</a> Behavioral Neuroscience. 127 (4), 555-565 (2013).</li><li>Kempermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+New+Neurons?+Possible+Functions+for+Adult+Hippocampal+Neurogenesis.">Why New Neurons? Possible Functions for Adult Hippocampal Neurogenesis.</a> Journal of Neuroscience. 22 (3), 635-638 (2002).</li><li>Dawkins, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+behaviour+to+assess+animal+welfare.">Using behaviour to assess animal welfare.</a> Animal Welfare. 13, 3-7 (2004).</li><li>Kistler, C., Hegglin, D., W&#252;rbel, H., K&#246;nig, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preference+for+structured+environment+in+zebrafish+(Danio+rerio)+and+checker+barbs+(Puntius+oligolepis).">Preference for structured environment in zebrafish (Danio rerio) and checker barbs (Puntius oligolepis).</a> Applied Animal Behaviour Science. 135, 318-327 (2011).</li><li>Schroeder, P., Jones, S., Young, I. S., Sneddon, L. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+do+zebrafish+want?+Impact+of+social+grouping,+dominance+and+gender+on+preference+for+enrichment.">What do zebrafish want? Impact of social grouping, dominance and gender on preference for enrichment.</a> Laboratory Animals. 48 (4), 328-337 (2014).</li><li>Matthews, M., Trevarrow, B., Matthews, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+virtual+guide+for+zebrafish+users.">A virtual guide for zebrafish users.</a> Lab Animal. 31 (3), 34-40 (2002).</li><li>N&#228;slund, J., Johnsson, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+enrichment+for+fish+in+captive+environments:+Effects+of+physical+structures+and+substrates.">Environmental enrichment for fish in captive environments: Effects of physical structures and substrates.</a> Fish and Fisheries. 17 (1), 1-30 (2016).</li><li>Oliveira, K. V., Barreto, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+enrichment+reduces+aggression+of+pearl+cichlid,+Geophagus+brasiliensis,+during+resident-intruder+interactions.">Environmental enrichment reduces aggression of pearl cichlid, Geophagus brasiliensis, during resident-intruder interactions.</a> Neotropical Ichthyology. 8 (2), 329-332 (2010).</li><li>Brydges, N. M., Braithwaite, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+environmental+enrichment+affect+the+behaviour+of+fish+commonly+used+in+laboratory+work.">Does environmental enrichment affect the behaviour of fish commonly used in laboratory work.</a> Animal Behaviour Science. 118, 137-143 (2009).</li><li>Ahlbeck Bergendahl, I., Miller, S., Depasquale, C., Giralico, L., Braithwaite, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Becoming+a+better+swimmer:+structural+complexity+enhances+agility+in+a+captive-reared+fish.">Becoming a better swimmer: structural complexity enhances agility in a captive-reared fish.</a> Journal of Fish Biology. 90 (3), 1112-1117 (2017).</li><li>Roberts, L. J., Taylor, J., de Leaniz, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+enrichment+reduces+maladaptive+risk-taking+behavior+in+salmon+reared+for+conservation.">Environmental enrichment reduces maladaptive risk-taking behavior in salmon reared for conservation.</a> Biological Conservation. 144 (7), 1972-1979 (2011).</li><li>Jacobs, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+measurement+of+food+selection.">Quantitative measurement of food selection.</a> Oecologia. 14, 413-417 (1974).</li><li>DePasquale, C., Fettrow, S., Sturgill, J., Braithwaite, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+flow+and+physical+enrichment+on+preferences+in+zebrafish.">The impact of flow and physical enrichment on preferences in zebrafish.</a> Applied Animal Behaviour Science. 215, 77-81 (2019).</li><li>Bekoff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Encyclopedia of Animal Rights and Animal Welfare, 2nd edition. , 53 (2009).</li><li>Fraser, D., Nicol, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preference+and+motivation+research.">Preference and motivation research.</a> Animal Welfare. , 183-199 (2011).</li><li>Franks, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+do+animals+want.">What do animals want.</a> Animal Welfare. 28, 1-10 (2019).</li><li>Blaser, R. E., Rosemberg, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measures+of+anxiety+in+zebrafish+(Danio+rerio):+dissociation+of+black/white+preference+and+novel+tank+test.">Measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio): dissociation of black/white preference and novel tank test.</a> PLoS One. 7 (5), 1-8 (2012).</li></ol>

Aquí presentamos un diseño experimental que nos permite investigar las preferencias de los peces para diferentes tipos de hábitats. Algunos pasos críticos que son importantes en las pruebas de preferencias incluyen: 1) asegurar que se mantengan condiciones uniformes en diferentes réplicas (por ejemplo, ruidos o movimientos externos, experimentador, química del agua, niveles de luz); 2) garantizar que las zonas se rotan entre réplicas y que una cantidad significativa de agua se sustituye por agua fresca de sumidero...

Las normas que rigen la forma en que los animales de laboratorio deben ser alojados en cautiverio son explícitas y bien definidas. La Asociación para la Evaluación y Acreditación del Cuidado Animal de Laboratorio (AAALAC) International supervisa y administra todas las organizaciones e instituciones que trabajan con animales de investigación y tiene directrices específicas para la cría y la vivienda apropiadas para las especies. Por ejemplo, la Guía de la AAALAC sobre la vivienda y el cuidado del pez cebra, Danio Rerio1 "alienta fuertemente" el uso del enriquecimiento (la adición de objetos físicos o conespecíficos en el entorno de la vivienda) cuando se aloja el pez cebra en cautiverio. La guía continúa afirmando: "Proporcionar plantas o estructuras artificiales que imitan el hábitat del pez cebra permiten a los animales una opción dentro de su entorno".
La evidencia sugiere que el enriquecimiento puede estimular el crecimiento de nuevas neuronas (neurogénesis) en áreas del cerebro implicadas en el procesamiento de información espacial2,y se cree que estos cambios neuronales están asociados con mayor capacidad de aprendizaje3. Los efectos del enriquecimiento en la neurogénesis y el aprendizaje han sido ampliamente estudiados en varios taxones, incluyendo peces4,5,aves6, reptiles7,y mamíferos8. Aunque estos tipos de estudios son importantes para entender los efectos del enriquecimiento en el cerebro y el comportamiento, no tienen en cuenta las opciones o preferencias particulares de los animales para un entorno en particular sobre otro.
Una pregunta fundamental a hacer al evaluar el bienestar de los animales cautivos es si los animales tienen o no lo que quieren9. Una manera de investigar esta pregunta que proporciona evidencia tangible es proporcionar a los animales opciones que nos permitan entender sus preferencias subjetivas. Por ejemplo, dos estudios han investigado si el pez cebra prefiere el acceso a un entorno enriquecido o llano, con ambos estudios indicando una preferencia por las áreas que contienen enriquecimiento10,11. Sin embargo, también se ha sugerido que el pez cebra parece indiferente al enriquecimiento ambiental12,por lo que la respuesta a la pregunta obviamente no es clara. Otra aplicación de las pruebas de preferencias asociadas con el bienestar animal se extiende a tratar de entender cómo diferentes aspectos de un entorno enriquecido juegan un papel en las decisiones que hace un animal individual. Sólo en peces, diferentes tipos de enriquecimiento tienen efectos diferenciales sobre el cerebro y el comportamiento, y esta relación se complica aún más por las diferencias individuales en los rasgos de personalidad13. Además, las pruebas de preferencias podrían ser útiles para estudios comparativos de enriquecimiento ambiental. Incluso a través de diferentes especies de peces, se ha demostrado que el enriquecimiento tiene un efecto en muchos tipos diferentes de comportamiento, incluyendo la agresión14,audacia15, locomoción16,y comportamiento de toma de riesgos17.
El índice de preferencias de Jacob es una prueba estadística que se utiliza con frecuencia para cuantificar las preferencias de vivienda18. El índice de preferencias de Jacob asigna un valor a cada hábitat diferente basado en el número de animales presentes en cada tipo de hábitat en diferentes puntos de tiempo, donde la preferencia oscila entre -1 (evitación) y +1 (la más preferida). Aquí describimos un método para utilizar el índice de preferencias de Jacob para investigar las preferencias de vivienda en los peces y utilizar el ejemplo de la evaluación de dos características importantes del medio acuático: 1) la presencia o ausencia de enriquecimiento; y 2) el flujo de agua19. Sin embargo, el protocolo podría adaptarse fácilmente para examinar una variedad de factores ambientales (por ejemplo, grava frente a arena como sustrato, plantas plásticas frente a plantas vivas, bajo versus alto flujo de agua) a través de diferentes especies y paisajes (por ejemplo, acuáticos y terrestres).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Artificial Aquarium Plants</td>
			<td>Smarlin</td>
			<td>B07PDZQ5M5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial Seaweed Water Plants for Aquarium</td>
			<td>MyLifeUNIT</td>
			<td>PT16L212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Experimental tanks</td>
			<td>United State Plastic Corporation</td>
			<td>6106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Floating food ring</td>
			<td>SunGrow</td>
			<td>B07M6VWH9V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow meter</td>
			<td>YSI</td>
			<td>BA1100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jager Aquarium Thermostat Heater</td>
			<td>Ehiem</td>
			<td>3619090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Master Water Quality Test Kit</td>
			<td>API</td>
			<td>34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPSS Statistics for Macintosh</td>
			<td>IBM</td>
			<td>Version 25.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Submersible Pump, SL-</td>
			<td>Songlong</td>
			<td>SL-381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TetraMin Tropical Flakes</td>
			<td>Tetra</td>
			<td>16106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple Flow Corner Biofilter</td>
			<td>Lee&#39;s</td>
			<td>13405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video camera</td>
			<td>Coleman</td>
			<td>TrekHD CVW16HD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Windows Media Player (video software)</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>Windows Media Player 12</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a standardized protocol for preference testing to assess fish welfare

Las técnicas de evaluación del bienestar animal tratan de tener en cuenta las necesidades y deseos específicos del animal en cuestión. Proporcionar enriquecimiento (la adición de objetos físicos o conespecíficos en el entorno de la vivienda) es a menudo una manera de dar a los animales cautivos la oportunidad de elegir con quién o con qué interactúan y cómo pasan su tiempo. Un componente fundamental del medio acuático que a menudo se pasa por alto en cautiverio, sin embargo, es la capacidad para que el animal elija realizar ejercicio físico. Para muchos animales, incluyendo peces, el ejercicio es un aspecto importante de su historia de vida, y se sabe que tienen muchos beneficios para la salud, incluyendo cambios positivos en el cerebro y el comportamiento. Aquí presentamos un método para evaluar las preferencias de hábitat en animales cautivos. El protocolo podría adaptarse fácilmente para examinar una variedad de factores ambientales (por ejemplo, grava frente a arena como sustrato, plantas plásticas frente a plantas vivas, bajo caudal frente a alto flujo de agua) en diferentes especies acuáticas, o para su uso con especies terrestres. La evaluación estadística de la preferencia se lleva a cabo utilizando el índice de preferencias de Jacob, que clasifica los hábitats de -1 (evitación) a +1 (la más preferida). Con esta información, se puede determinar lo que el animal quiere desde una perspectiva de bienestar, incluyendo su ubicación preferida.

Utilizamos la prueba de preferencia para investigar las preferencias de vivienda en peces cebra dada la opción entre el enriquecimiento variable, incluyendo 1) plantas de plástico y sustrato arenoso; y 2) flujo de agua. Estos se dividieron en cuatro zonas: (i) Sólo enriquecido; (ii) Sólo flujo; (iii) Enriquecido y Flujo; (iv) Llano; y un estadio central donde se entregó comida19. El pez cebra mostró la preferencia más alta por la zona Enriquecido y Flujo, que era significativamente diferent...

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A Standardized Protocol for Preference Testing to Assess Fish Welfare

Un aspecto fundamental de la evaluación del bienestar de los animales en cautiverio es preguntar si los animales tienen lo que quieren. Aquí, presentamos un protocolo para determinar la preferencia de vivienda en el pez cebra (Danio rerio) con respecto a la presencia/ausencia de enriquecimiento ambiental y el acceso al flujo de agua.

Un protocolo estandarizado para las pruebas de preferencias para evaluar el bienestar de los peces

Animal welfare assessment techniques try to take into consideration the specific needs and wants of the animal in question. Providing enrichment (the ...

Este protocolo nos da una mejor comprensión de lo que los peces quieren, al examinar las decisiones que toman con respecto a las preferencias de hábitat, que es fundamental para su bienestar. Este protocolo se puede adaptar fácilmente para examinar una variedad de factores ambientales diferentes, incluyendo grava versus sustrato arenoso, plantas vivas versus plásticas, o incluso a través de diferentes especies acuáticas. Para configurar un aparato de preferencia, utilice un tanque experimental de plástico blanco opaco, dividido en cuatro zonas con paredes hechas de acrílico, fijadas en su lugar con sellador de silicona.Coloque los materiales de enriquecimiento apropiados en cada zona de acuerdo con los parámetros de hábitat específicos a probar. Por ejemplo, incluyen sustratos arenosos frente a rocosos, plantas artificiales frente a refugios, o flujo de agua frente a plantas artificiales. Si el flujo de agua se va a utilizar como parámetro de interés, coloque pequeñas bombas para suministrar chorros de agua en el tanque y establecer las bombas a una velocidad específica, de modo que proporcionen un flujo constante y dirigido de agua basado en la ecología de las especies de interés y la historia de la vida.En medio del tanque experimental, tener una Arena Central donde se entregará la comida. El acceso a la Arena Central desde cada zona debe ser a través de una pequeña abertura en los muros de separación que es lo suficientemente grande, para las especies de interés, para moverse entre las zonas sin obstáculos, pero lo suficientemente pequeña como para reducir cualquier señal visual que el pez pueda experimentar de otras zonas. Coloque un biofiltro y un calentador en cada esquina del tanque fuera del área experimental, para no perturbar el flujo de agua y para asegurar una temperatura constante del agua en todas las zonas.Configura cualquier tanque experimental adicional como dicta el espacio, asegurando que todos los tanques replicados tengan condiciones uniformes. Coloque las cámaras en los trípodes, directamente encima de cada tanque experimental, para que todas las zonas sean visibles. Después de confirmar que las tarjetas de memoria tienen suficiente espacio para la grabación, ajuste la iluminación de la habitación en un ciclo gradual de 12 horas, claro/oscuro, para simular el amanecer y el atardecer.Y ajuste la temperatura del agua a 25, más o menos un grado Celsius. Mantenga los peces en tanques caseros cuando no se estén probando. El día del experimento, usa dos redes para capturar rápidamente todos los peces de prueba de sus tanques de origen, y colóquelos en la Arena Central del tanque experimental dentro de los 30 segundos de la captura.En los días uno a cuatro, los peces pasarán tiempo aclimatándose y explorando las diferentes zonas. No recopile datos en estos días. Durante la aclimatación, realice pruebas regulares de calidad del agua, reemplazando el agua si se detecta algún problema.Para alimentar a los peces, utilice un anillo de comida flotante, unido a la pared de la Arena Central en la superficie del agua, para entregar alimentos de pescado escamas a los peces. Después de 30 minutos de acceso ad libitum, utilice una red de inmersión para eliminar los restos de comida del tanque. En los días cinco a siete, encienda las cámaras y grabe los comportamientos de los peces durante dos horas después de cada alimentación programada por la mañana y la tarde.El día ocho, usa la red de inmersión para transferir todos los peces a sus tanques de origen. Dependiendo de la cantidad de agua de sumidero disponible, reemplace al menos un tercio del agua, en el tanque experimental, con agua de sumidero fresco para reducir los efectos de las hormonas del estrés en los peces y las repeticiones posteriores. A continuación, configure los tanques experimentales de acuerdo con el calendario de rotación de zona para esa semana, y comience el proceso de prueba con un nuevo lote de peces.Al final de cada día de grabación, descargue los vídeos en un ordenador. Y utilice software de vídeo para contar manualmente el número de peces en cada zona, a intervalos de cinco minutos, en cada período de grabación de dos horas. Para analizar las preferencias de hábitat, calcule el número medio de peces por zona para cada tanque de réplica.Para obtener una puntuación de preferencia para el uso de la estructura, calcule el índice de preferencias de Jacobs utilizando la fórmula como se indica. Considere que un pez ha entrado en una zona, cuando todo el cuerpo del pez cruza a través de la abertura entre las zonas. Para determinar si hay algún cambio en la velocidad a la que los peces cambian entre zonas, durante un período de observación, calcular el número de veces que un pez entra en cada zona desde la Arena Central, dividido por el número total de peces en el primer y último cinco minutos de cada período de observación.Y calcule una tasa de interruptor media de arranque y de acabado para cada tanque de réplica. Utilizando software estadístico, realice un análisis estadístico relevante, como un ANOVA unidireccional, con un índice de preferencia como la variable dependiente y la zona como variable predictora, y una prueba t emparejada en la velocidad de conmutación media de inicio y acabado para cada tanque. Para comparar cada zona entre sí, aplique la prueba post-hoc de comparación múltiple de Tukey.En este experimento representativo, el pez cebra demostró la mayor preferencia por la zona Enriquecido y Flujo, y evitó las zonas Flow Only y Plain, pasando más tiempo en la Arena Central. Además, el pez cebra se movía entre las diferentes zonas del hábitat con más frecuencia al comienzo del período de observación que al final. Es fundamental que se mantengan condiciones uniformes, como ruido externo, o movimiento, química del agua o niveles de luz en todos los tanques de réplica.Las pruebas de preferencias se extienden a tratar de entender cómo los diferentes aspectos del enriquecimiento ambiental influyen en las decisiones de un individuo. Pero también es útil para estudios comparativos de enriquecimiento ambiental.

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