Name: inguinal subcutaneous white adipose tissue (iswat) transplantation model of murine islets
Uploaded: 2020-02-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من خلال منح من البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2017YFC1103704) صناديق خاصة لبناء مستشفيات عالية المستوى في مقاطعة قوانغدونغ (2019)، مشروع سانمينغ للطب في شنتشن (SZSM201412020)، صندوق المستوى العالي بناء الانضباط الطبي في شنتشن (2016031638)، مؤسسة شنتشن للعلوم والتكنولوجيا (JCJY20160229204849975، GJHZ20170314171357556)، مؤسسة شنتشن للجنة الصحة وتنظيم الأسرة (SZXJ2017021SZXJ2018059)، طبي مؤسسة البحث العلمي في مقاطعة قوانغدونغ الصينية (A2019218)، المؤسسة الصينية لعلوم ما بعد الدكتوراه (2018M633218).

اتبعت جميع الإجراءات الواردة في هذا البروتوكول مبادئ رعاية الحيوان من لجنة مراجعة الأخلاقيات في مستشفى الشعب الثاني في شنتشن. كان متلقو الكسب غير المشروع والمتبرعين من بين 8 إلى 10 أسابيع من العمر C57BL/6 فئران ذكر تم شراؤها من مركز الحيوانات الطبية في مقاطعة قوانغدونغ. تم إجراء عملية الحصاد أ...

<ol>
	<li>Cho, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IDF+Diabetes+Atlas:+Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2017+and+projections+for+2045.">IDF Diabetes Atlas: Global estimates of diabetes prevalence for 2017 and projections for 2045.</a> Diabetes Research and Clinical Practice. 138, 271-281 (2018).</li><li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).</li><li>McCall, M., Shapiro, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+islet+transplantation.">Update on islet transplantation.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (7), 007823 (2012).</li><li>Pathak, V., Pathak, N. M., O'Neill, C. L., Guduric-Fuchs, J., Medina, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapies+for+Type+1+Diabetes:+Current+Scenario+and+Future+Perspectives.">Therapies for Type 1 Diabetes: Current Scenario and Future Perspectives.</a> Clinical Medicine Insights: Endocrinology and Diabetes. 12, 1179551419844521 (2019).</li><li>Bottino, R., Knoll, M. F., Knoll, C. A., Bertera, S., Trucco, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Future+of+Islet+Transplantation+Is+Now.">The Future of Islet Transplantation Is Now.</a> Frontiers in Medicine (Lausanne). 5, 202 (2018).</li><li>Stokes, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+sites+for+human+and+murine+islets.">Transplantation sites for human and murine islets.</a> Diabetologia. 60 (10), 1961-1971 (2017).</li><li>van der Windt, D. J., Echeverri, G. J., Ijzermans, J. N., Cooper, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+choice+of+anatomical+site+for+islet+transplantation.">The choice of anatomical site for islet transplantation.</a> Cell Transplantation. 17 (9), 1005-1014 (2008).</li><li>Addison, P., Fatakhova, K., Rodriguez Rilo, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+for+an+Alternative+Site+of+Islet+Cell+Transplantation.">Considerations for an Alternative Site of Islet Cell Transplantation.</a> Journal of Diabetes Science and Technology. , (2019).</li><li>Pepper, A. R., Bruni, A., Shapiro, A. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+islet+transplantation:+is+the+future+finally+now.">Clinical islet transplantation: is the future finally now.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 23 (4), 428-439 (2018).</li><li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+islet+function+in+islet+allotransplant+and+autotransplant+recipients,+despite+lower+islet+mass+in+autotransplants.">Similar islet function in islet allotransplant and autotransplant recipients, despite lower islet mass in autotransplants.</a> Transplantation. 91 (3), 367-372 (2011).</li><li>Bruni, A., Gala-Lopez, B., Pepper, A. R., Abualhassan, N. S., Shapiro, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+cell+transplantation+for+the+treatment+of+type+1+diabetes:+recent+advances+and+future+challenges.">Islet cell transplantation for the treatment of type 1 diabetes: recent advances and future challenges.</a> Diabetes, Metabolic Syndrome and Obesity: Targets and Therapy. 7, 211-223 (2014).</li><li>Smood, B., Bottino, R., Hara, H., Cooper, D. K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+the+renal+subcapsular+space+the+preferred+site+for+clinical+porcine+islet+xenotransplantation?+Review+article.">Is the renal subcapsular space the preferred site for clinical porcine islet xenotransplantation? Review article.</a> International Journal of Surgery and Medicine. 69, 100-107 (2019).</li><li>Luan, N. M., Iwata, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+allogeneic+islet+graft+survival+in+prevascularized+subcutaneous+sites+without+immunosuppressive+treatment.">Long-term allogeneic islet graft survival in prevascularized subcutaneous sites without immunosuppressive treatment.</a> American Journal of Transplantation. 14 (7), 1533-1542 (2014).</li><li>Yasunami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Subcutaneous+Site+of+Islet+Transplantation+Superior+to+the+Liver.">A Novel Subcutaneous Site of Islet Transplantation Superior to the Liver.</a> Transplantation. 102 (6), 945-952 (2018).</li><li>Rajab, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation:+alternative+sites.">Islet transplantation: alternative sites.</a> Current Diabetes Reports. 10 (5), 332-337 (2010).</li><li>Ekser, B., Vagefi, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Search+for+the+best+site+in+islet+xenotransplantation.">Search for the best site in islet xenotransplantation.</a> International Journal of Surgery and Medicine. 70, 106-107 (2019).</li><li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Method+for+Islet+Transplantation+to+the+Omentum+in+Mouse.">A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (143), e57160 (2019).</li><li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination.">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), e50374 (2014).</li><li>Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+murine+islet+isolation+and+subcapsular+kidney+transplantation.">A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (50), e2096 (2011).</li><li>Khatri, R., Hussmann, B., Rawat, D., Gurol, A. O., Linn, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraportal+Transplantation+of+Pancreatic+Islets+in+Mouse+Model.">Intraportal Transplantation of Pancreatic Islets in Mouse Model.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57559 (2018).</li><li>Carter, J. D., Dula, S. B., Corbin, K. L., Wu, R., Nunemaker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+guide+to+rodent+islet+isolation+and+assessment.">A practical guide to rodent islet isolation and assessment.</a> Biological Procedures Online. 11, 3-31 (2009).</li></ol>

زرع البنكرياس الجسّة هو علاج واعد لعلاج T1DM. يتأثر تأثير هذا العلاج بالعديد من العوامل واختيار موقع مثالي لزرع الزلاق أمر مهم للغاية. يجب أن يكون الموقع التشريحي المثالي لزرع الجزلات الخصائص التالية: إمكانية الوصول إلى عمليات الزرع البسيطة والخزعة وإجراءات استرجاع الكسب غير المشروع؛ انخف...

ارتفاع معدل انتشار وانتشار مرض السكري من النوع 1 (T1DM) في جميع أنحاء العالم بسرعة ، وفقًا للبيانات الإحصائية للاتحاد الدولي للسكري (IDF)1. زرع الجزر هي واحدة من النهج الواعدة لعلاج T1DM4. منذ اختراق كبير المحرز في زرع جزيرة سريرية باستخدام بروتوكول ادمونتون2 تم الإبلاغ عنها، يعمل البقاء على قيد الحياة الكسب غير المشروع الجزيرة في المتلقين T1DM بعد 5 سنوات الآن تصل إلى حوالي 50٪3.
في الماضي ، تم استكشاف العديد من مواقع زرع الأعضاء ، مثل الكبد ، كبسولة الكلى ، الطحال ، المنطقة العضلية ، الفضاء تحت الجلد ، نخاع العظام ، والحقيبة omental لزرع الجزر التجريبية5،6،7. وقد تم اختبار بعض المواقع المذكورة أعلاه في البيئات السريرية8. على الرغم من أن زرع الجليسفيت في الكبد لا يزال الأسلوب الأكثر استخداما في التطبيق السريري في الوقت الحاضر9، وهناك العديد من المشاكل الهامة لمعالجة عند استخدام هذا الموقع. على سبيل المثال، كيفية الحد من فقدان مبكر للجزر المزروعة الناجمة عن رد فعل التهابي الفورية بوساطة الدم (IBMIR) وضعف الأوكسجين العرض10،11 وكيفية استرداد الطعوم الجزر إذا لزم الأمر ، لأنها تنتشر محليا في الكبد. قد تكون الكبسولة الكلوية موقعًا مثاليًا لمتلقي القوارض. ومع ذلك ، فإن كبسولة الكلى الضيقة تحد من زرع جزيرات الوجينية الكافية في البشر ، على الرغم من أنها قد تكون مناسبة بشكل أفضل لزرع الجزيرات بسبب مستحضرات جزيرة بورسين عالية النقاء المستخدمةسريرياً 5،12. لذلك ، فإن البحث عن موقع أكثر ملاءمة لزرع الجزلات قيد التقدم.
ويمكن استخدام المساحة تحت الجلد كموقع قابل للتطبيق سريرياً لزرع الجزلات بسبب إمكانية الوصول إليها. ومع ذلك ، فإن كفاءة زرع الجزيرات في الفضاء تحت الجلد منخفضة للغاية ، مما يتطلب عددًا كبيرًا نسبيًا من الجزر لعكس ارتفاع السكر في الدم13. في الآونة الأخيرة ، وجد فريق بحث ياباني ISWAT ، وهو موقع حديث تحت الجلد متفوق ًا على زرع الجزر في نموذج مورين بالمقارنة مع الكبد14. يحتوي ISWAT على الشريان والوريد شرسوفي ، لذلك قد تضمن إمدادات الدم الغنية إعادة الأوعية الدموية للجسّاب. في هذه المخطوطة، نقترح طريقة زراعة سهلة باستخدام هيدروجيل مصفوفة غشاء الطابق السفلي لإصلاح جزر مورين المتجانسة في ISWAT. هذا البروتوكول يثبت فعالية لزرع الجزر.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m Syringe-driven Filter Unit</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SLHV033RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tube</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Pasteur pipette</td>
			<td>JingAn Biological, China</td>
			<td>J00085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL syringe</td>
			<td>Szboon, China</td>
			<td>20170829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 surgical suture</td>
			<td>sh-Jinhuan, China</td>
			<td>CR537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mL syringe</td>
			<td>Szboon, China</td>
			<td>20170623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Ethanol</td>
			<td>LIRCON, China</td>
			<td>9180527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21202</td>
			<td>Dilution (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse Glucagon antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab10988</td>
			<td>Dilution (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse insulin antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>3014s</td>
			<td>Dilution (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blunt-pointed perfusion needle</td>
			<td>Oloey, China</td>
			<td>005</td>
			<td>32G, yellow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Meilune, China</td>
			<td>MB4219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 Mice</td>
			<td>Medical Animal Center of Guangdong Province</td>
			<td></td>
			<td>8~10 weeks</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell culture dish</td>
			<td>BIOFIL, China</td>
			<td>TCD000100</td>
			<td>General,Non-treated,87.8 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ST16R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cephalosporin</td>
			<td>Lukang medical, China</td>
			<td>150303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMRL-1066</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Codos Pet Clipper</td>
			<td>Szcodos, China</td>
			<td>CP-8000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagenase Type V</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C9262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-hank&#39;s buffer</td>
			<td>Coolaber, China</td>
			<td>PM5140-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dithizone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin staining media</td>
			<td>Beyotime Biotech, China</td>
			<td>C0109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescein diacetate (FDA)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>F1303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescent microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMIL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gel-loading pipet tips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS4884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Coolaber, China</td>
			<td>PM5150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxylin staining media</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>14166S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HISTOPAQUE-1077</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>RNBG0522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HISTOPAQUE-1119</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>RNBG0536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356234</td>
			<td>Basement Membrane Matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophor</td>
			<td>LIRCON, China</td>
			<td>5190313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>light-tight culture dish</td>
			<td>DVS, China</td>
			<td>AN-5058548</td>
			<td>self-made, glass dish sprayed with black paint</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Adhesive Tape</td>
			<td>Cofoe, China</td>
			<td>K12001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>non-invasive microtweezers</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>F11033-11 and F12016-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Touch ultraeasy Basic blood glucose monitoring system</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>33391713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ophthalmic scissors</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>S12012-12 and S11001-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P/S (penicillin / streptomycin)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pentobarbital sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium iodide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STZ (streptozotocin)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Strip</td>
			<td>GenUltimate</td>
			<td>100-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRITC-conjugated Goat anti-Rabbit IgG(H+L)</td>
			<td>proteintech</td>
			<td>SA00007-2</td>
			<td>Dilution (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vascular clamp</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>R31006-04</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inguinal subcutaneous white adipose tissue (iswat) transplantation model of murine islets

زرع زلاب البنكرياس هو علاج علاجي راسخ لمرض السكري من النوع 1. كبسولة الكلى هو الموقع الأكثر استخداما لزرع الجزر في نماذج القوارض. ومع ذلك ، فإن كبسولة الكلى الضيقة تحد من زرع جزر كافية في الحيوانات الكبيرة والبشر. تم العثور على الأنسجة الدهنية البيضاء تحت الجلد الجلدية (ISWAT) ، وهي مساحة جديدة تحت الجلد ، لتكون موقعًا قيمًا محتملًا لزرع الجزر. هذا الموقع لديه إمدادات الدم أفضل من المساحات الأخرى تحت الجلد. وعلاوة على ذلك، فإن ISWAT يستوعب كتلة أكبر من الجزر كبسولة الكلى، وزرع في ذلك هو بسيط. تصف هذه المخطوطة إجراء عزل الجزر وزراعة الفئران في موقع ISWAT لمتلقي فأرالسكري المنسّج. باستخدام هذا البروتوكول، تم عزل الجزر البنكرياس ية المورين من قبل هضم الكولاجين القياسية واستخدمت هيدروجيل مصفوفة غشاء الطابق السفلي لتحديد الجزر المنقى في موقع ISWAT. تم رصد مستويات السكر في الدم للفئران المتلقية لأكثر من 100 يوم. تم استرداد الطعوم الجليسية في اليوم 100 بعد زرعها للتحليل النسيجي. بروتوكول زرع الجزلات في موقع ISWAT الموصوف في هذه المخطوطة بسيط وفعال.

يتم إدخال إجراءين في هذا البروتوكول: إعداد الجزر المورين وزرع الجزر في موقع ISWAT. في الإجراء الأول ، بعد التجانب والهضم مع محلول الكولاجين من النوع الخامس ، والتنقية باستخدام Histopaque-1119 و Histopaque-1077 وخطوة إضافية لانتقاء اليد ، ستكون الجزر التورينة المعزولة نقية بما فيه الكفاية للزرع (كما هو موض?...

Watch this Scientific Journal Video about Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets at JoVE.com

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets

في هذا البروتوكول ، يتم وصف طريقة عزل الجزر التورانية وزرعها في الأنسجة الدهنية البيضاء تحت الجلد الجلدية. يتم زرع الجزر التورينية المعزولة في متلقي المورين باستخدام هيدروجيل غشاء الطابق السفلي. يتم مراقبة مستوى السكر في الدم من المتلقين، ويتم إجراء تحليل الأنسجة من الطعوم السبوة.

الاعلية الجلدية الجلدية الأنسجة الدهنية البيضاء (ISWAT) نموذج زرع الجزر المورين

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for ...

زراعة جزيرة هي واحدة من أكثر الطرق الواعدة لعلاج مرض السكري من النوع الأول. والبحث عن موقع مناسب لزرع الجزيرة مستمر. زرع جزيرة إلى الأنسجة الدهنية البيضاء تحت الجلد الإربي هو طريقة بسيطة ولكنها فعالة التي قد يكون لها آثار سريرية.قد يؤدي استقراء هذا الإجراء إلى العيادة إلى تطوير علاج لمرضى السكري من النوع الأول. هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في زرع الجزر السريرية كما تم تحديد اللغات لتكون ليست موقعا مثاليا لengraftment الجزرية. من المهم أن تتبع بعناية كل خطوة من هذا الإجراء، وخاصة الخطوات الرئيسية، مثل هضم البنكرياس.سوف مظاهرة البصرية مساعدة الباحثين الجدد على هذه التقنية لتحديد أفضل كيفية تنفيذ عزل الجزر والتبدل. لحصاد جزيرة، رش أولا الفراء من 10 أسابيع من العمر C57 الأسود ستة ماوس مع 75٪ الإيثانول، وملء حقنة خمسة ملليلتر مع حل الكولاجين الطازجة. تجهيز حقنة مع 32 قياس الانحناء حادة وأشار إبرة التسريب، ووضع الماوس في موقف supine على كيس الثلج.استخدام مقص العيون مدببة مباشرة لجعل فتحة عرضية في الجلد من منطقة العانة، وتمديد شق نحو رأس الحيوان. فتح البطن تماما عن طريق شق V من منطقة العانة لعملية xiphoid، وتحريك الكبد لفضح المرارة وطول القناة الصفراوية المشتركة. ثم استخدم المشبك الوعائي لإغلاق فتحة الاثنيين القناة الصفراوية المشتركة وقطع فتحة صغيرة في المرارة.Cannulate القناة الصفراوية المشتركة من خلال فتح مع إبرة القذف المعدة مسبقا، وحقن ما يقرب من مليلتر من محلول الكولاجيناز في البنكرياس. عندما يتم تسليم جميع الكولاجيناز، استخدم زوجين من ملاقط صغيرة غير الباضعة لفصل البنكرياس المتغلغل من الأمعاء والمعدة والطحال، ووضع البنكرياس في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر على الجليد. عندما تم جمع جميع العينات، إضافة 100 ميكرولترات من الحمض النووي الأول لكل بنكرياس إلى أنابيب 50 ملليلتر ويهز بقوة كل أنبوب حوالي 40 مرة على مدى فترة 10 ثانية قبل وضع الأنسجة في حمام مائي 37 درجة مئوية لمدة ثلاث إلى خمس دقائق مع اهتزاز معتدل.في نهاية الحضانة، إضافة إلى حجم النهائي من 50 ملليلتر من وقف الحل لوقف الهضم. ونبض الطرد المركزي الأنابيب إلى سرعة 750 مرات G في أربع درجات مئوية قبل إيقاف بسرعة الطرد المركزي. بعد التخلص من المواد الخارقة، وغسل الكريات مرتين في 15 إلى 25 ملليلتر من وقف الحل في غسل تحت نفس ظروف الطرد المركزي كما أظهرت للتو.بعد الغسيل الثاني، تجمع ثلاث كريات لكل أنبوب في أنابيب مخروطية جديدة 50 ملليلتر. و resuspend خلايا البنكرياس في حجم إجمالي قدره عشرة ملليلتر من 1119 هيستوبليت. المقبل بعناية إضافة خمسة ملليلتر من 1077 هستوبليت أسفل الجانب من كل أنبوب، تليها خمسة ملليلتر من HBSS.فصل الخلايا بواسطة الطرد المركزي واستخدام ماصة باستور خمسة ملليلتر لجمع الجزر من واجهة HBSS Histopaque 1077. تجمع الجزر في أنبوب مخروطي جديد 50 ملليلتر في حجم نهائي من 50 ملليلتر من Stop Solution للطرد المركزي للنبض، وتجاهل المابير. Resuspend بيليه في 30 ملليلتر من حل وقف جديدة لمدة دقيقة واحدة الطرد المركزي، وإعادة تعليق الجزر في 30 ملليلتر من المتوسطة الثقافة.Decant الجزر في واحد 10 سنتيمتر ضوء ضيق طبق الثقافة في أنبوب. ووضع الطبق تحت المجهر ستيريو. باستخدام 200 نصائح ماصة هلام تحميل ميكرولتر، اختيار اليد الجزر الفروية البيضاء من الحل.وضع الجزر في طبق ثقافة الخلايا غير المعالجة التي تحتوي على 10 ملليلتر من المتوسطة الثقافة كما يتم حصادها. تحقق من نقاء الجزر التي التقطت باليد بواسطة تلطيخ dithizone تحت مجهر خفيف. وكشف جدوى الجزر بواسطة الفلوريسين diacetate البرووديوم يلطخ تحت المجهر فلوريسنت.ثم زراعة الجزر المعزولة في وسط الثقافة الطازجة في 37 درجة مئوية في الهواء 95٪ وثاني أكسيد الكربون 5٪ حتى زرع. ابتداء من أيام ثلاثة وأربعة بعد تحريض مرض السكري، ثقب الوريد السد من كل ستيبتوزولوتوسين حقن ثمانية أسابيع الذكور من العمر C57 أسود ستة ماوس حوالي 10:00 .m لجمع عينة دم من كل المتلقي.استخدم أداة أساسية لمراقبة الجلوكوز في الدم لتحديد مستوى السكر في الدم غير الصيام لكل فأرة ثم أضف الدم إلى شرائط الاختبار الفردية. عندما أظهر مستوى السكر في الدم لا يقل عن 20 ملليمول لكل لتر يومين على التوالي، تزن وتؤشر على الماوس المتلقي وتؤكد عدم وجود استجابة لدواسة منعكس في الحيوانات المُذنَع. ضع aliquot من الهيدرجيل من ناقص 20 درجة مئوية التخزين على الجليد للذوبان.ونقل 450 إلى 500 مكافئ جزيرة لكل مستلم إلى أنبوب طرد مركزي معقمة 1.5 ملليلتر يحتوي على 200 ميكرولترات متوسطة لكل أنبوب على الجليد. مسحة المنطقة الأربية اليسرى من المتلقي مع الإيثانول 75٪ووضع الماوس في موقف سوبين. إصلاح أطرافه مع الشريط الجراحي، واستخدام مقصات لإزالة الشعر حول موقع الجراحة.مسحة المنطقة الجراحية مع يودوفور وجعل شق عمودي في الجلد المطهر. تحديد الشريان السفلي والشردي داخل ISWAT وخلق جيب صغير فوق الأوعية. رواسب الجزر عن طريق الطرد المركزي وإزالة أكبر قدر ممكن من عظمى.إضافة 20 ميكرولترات من هيدروجيل المذاب إلى كل أنبوب، وإعادة بلطف الجزر، مع الحرص على تجنب الفقاعات. عندما تم الحصول على تعليق متجانس، استخدم 200 ميكرولتر ماصة تلميح لتسليم بعناية كامل خليط هيدروجيل جزيرة من أنبوب واحد في الجيب. عندما هيدروجيل قد توطدت تماما، إضافة 20 ميكرولترات من السيفالوسبورين إلى موقع زرع، وإغلاق العضلات والجلد مع خياطة جراحية مستمرة 5-0.ثم ضع المتلقي في قفص نظيف على لوحة حرارية مع المراقبة حتى إعادة شغل الوظائف بالكامل. بعد معالجة جزيرة مورين كما هو موضح، ستكون جزر المورين المعزولة نقية بما فيه الكفاية للزرع. وينبغي أن تستخدم فقط الجزر المعزولة ذات الجدوى العالية للزراعة.بعد خلط شامل من الطعوم جزيرة مع هيدروجيل، يمكن زرع الكسب غير المشروع في موقع ISWAT. بعد حوالي شهر واحد من زرع في ISWAT، والطعوم الجزر عكس ارتفاع السكر في الدم في حين أن وزن الجسم من الفئران المتلقي يزيد تدريجيا. في 100 يوما بعد زرع, إزالة الطعوم يؤدي إلى زيادة فورية في 10:00 .m.مستوى السكر في الدم غير الصيام. التحليل النسيجي في هذه المرحلة الزمنية، يكشف أن الطعوم في الجزيرة ظلت سليمة. والأنسولين وصبغة الغلوكاتون المناعية تشير إلى أن الجزر المزروعة تعمل أيضا في 100 يوم بعد زرع.يجب الحرص على عدم هز خلايا البنكرياس profused بقوة جدا أو آخر سوف تكون للخطر قدرة الجزر التي تم الحصول عليها. يمكن زرع الجزر المعزولة تحت الكبسولة الكلوية كتحكم في مقارنة آثار الزرع المعزول في الأنسجة الدهنية البيضاء تحت الجلد الإربية في الموقع. وسوف تضيف هذه العملية بدء التجارب السريرية لزرع جزيرة إلى مواقع أخرى إلى جانب الكبد.

Research

JoVE Journal

Medicine

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue (ISWAT) Transplantation Model of Murine Islets

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

نموذج الفأر من بطانة الرحم جراحيا ، الناجمة عن زرع الذاتية لأنسجة الرحم

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of ...

Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

تطوير النزلات الشعبية مسد في نموذج الفئران من زرع الرئة Orthotopic

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

الفئران عنق الرحم القلب زرع نموذج باستخدام أزرار وتقنيات التعديل

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

زرع صمام الرئوي عن طريق نموذج الفأر من غيري مكاني القلب زرع

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

الفئران زرع القرنية: نموذج لدراسة الشكل الأكثر شيوعا من الصلبة زراعة الأعضاء

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

التغليف حرارة Preadipocytes للزراعة إلى الدهنية مستودعات الأنسجة

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

A Versatile Murine Model of Subcortical White Matter Stroke for the Study of Axonal Degeneration and White Matter Neurobiology

والسكتة الدماغية تنوعا فأري موديل تحت القشرية الأبيض المسألة لدراسة محور عصبي تنكس والأبيض المواد بيولوجيا الأعصاب

Stroke affecting white matter accounts for up to 25% of clinical stroke presentations, occurs silently at rates that may be 5-10 fold greater, and ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

إنشاء وزرع للخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية (ASC) ورقة في نموذج التئام السكري

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

A Technique for Subcutaneous Abdominal Adipose Tissue Biopsy via a Non-diathermy Method

تقنية للأنسجة الدهنية تحت الجلد للبطن خزعة عبر أسلوب غير النافذة

Adipose tissue biopsies offer tissue samples that, upon analysis, may provide insightful overviews of mechanisms relating to metabolism and disease. To ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

زرع صفحة الخلايا الجذعية المشتقة من الأنسجة الدهنية للحد من تسرب بعد Colectomy الجزئية في نموذج الفئران

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...