Name: inguinal subcutaneous white adipose tissue (iswat) transplantation model of murine islets
Uploaded: 2020-02-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets at JoVE.com

עבודה זו נתמכת על ידי מענקים לאומי מפתח R & D תוכנית של סין (2017YFC1103704) קרנות מיוחדות לבניית בתי חולים ברמה גבוהה בפרובינצית גואנג-דונג (2019), פרויקט Sanming של הרפואה שנזן (SZSM201412020), קרן לרמה גבוהה משמעת רפואית בנייה של שנג (2016031638), קרן שנזן של המדע והטכנולוגיה (JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556), קרן שנזן לבריאות ותכנון משפחה הנציבות (SZXJ2017021SZXJ2018059), רפואי הקרן למחקר מדעי של פרובינציית גואנג-דונג של סין (A2019218), הקרן פוסט-דוקטורט בסין (2018M633218).

כל ההליכים בפרוטוקול זה עקבו אחר עקרונות הרווחה של בעלי החיים של הוועדה לסקירת האתיקה של בית החולים השני של שנזן. מקבלי השתל איון ותורמים היו 8-עד 10-שבוע בן C57BL/6 עכברים זכרים שנרכשו מהמרכז הרפואי בעלי חיים בפרובינצית גואנג-דונג. ההליך של קצירת, בידוד, תרבות, או מינהל של תאים שנקטפו בוצעו בתנא...

<ol>
	<li>Cho, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IDF+Diabetes+Atlas:+Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2017+and+projections+for+2045.">IDF Diabetes Atlas: Global estimates of diabetes prevalence for 2017 and projections for 2045.</a> Diabetes Research and Clinical Practice. 138, 271-281 (2018).</li><li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).</li><li>McCall, M., Shapiro, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+islet+transplantation.">Update on islet transplantation.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (7), 007823 (2012).</li><li>Pathak, V., Pathak, N. M., O'Neill, C. L., Guduric-Fuchs, J., Medina, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapies+for+Type+1+Diabetes:+Current+Scenario+and+Future+Perspectives.">Therapies for Type 1 Diabetes: Current Scenario and Future Perspectives.</a> Clinical Medicine Insights: Endocrinology and Diabetes. 12, 1179551419844521 (2019).</li><li>Bottino, R., Knoll, M. F., Knoll, C. A., Bertera, S., Trucco, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Future+of+Islet+Transplantation+Is+Now.">The Future of Islet Transplantation Is Now.</a> Frontiers in Medicine (Lausanne). 5, 202 (2018).</li><li>Stokes, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+sites+for+human+and+murine+islets.">Transplantation sites for human and murine islets.</a> Diabetologia. 60 (10), 1961-1971 (2017).</li><li>van der Windt, D. J., Echeverri, G. J., Ijzermans, J. N., Cooper, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+choice+of+anatomical+site+for+islet+transplantation.">The choice of anatomical site for islet transplantation.</a> Cell Transplantation. 17 (9), 1005-1014 (2008).</li><li>Addison, P., Fatakhova, K., Rodriguez Rilo, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+for+an+Alternative+Site+of+Islet+Cell+Transplantation.">Considerations for an Alternative Site of Islet Cell Transplantation.</a> Journal of Diabetes Science and Technology. , (2019).</li><li>Pepper, A. R., Bruni, A., Shapiro, A. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+islet+transplantation:+is+the+future+finally+now.">Clinical islet transplantation: is the future finally now.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 23 (4), 428-439 (2018).</li><li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+islet+function+in+islet+allotransplant+and+autotransplant+recipients,+despite+lower+islet+mass+in+autotransplants.">Similar islet function in islet allotransplant and autotransplant recipients, despite lower islet mass in autotransplants.</a> Transplantation. 91 (3), 367-372 (2011).</li><li>Bruni, A., Gala-Lopez, B., Pepper, A. R., Abualhassan, N. S., Shapiro, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+cell+transplantation+for+the+treatment+of+type+1+diabetes:+recent+advances+and+future+challenges.">Islet cell transplantation for the treatment of type 1 diabetes: recent advances and future challenges.</a> Diabetes, Metabolic Syndrome and Obesity: Targets and Therapy. 7, 211-223 (2014).</li><li>Smood, B., Bottino, R., Hara, H., Cooper, D. K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+the+renal+subcapsular+space+the+preferred+site+for+clinical+porcine+islet+xenotransplantation?+Review+article.">Is the renal subcapsular space the preferred site for clinical porcine islet xenotransplantation? Review article.</a> International Journal of Surgery and Medicine. 69, 100-107 (2019).</li><li>Luan, N. M., Iwata, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+allogeneic+islet+graft+survival+in+prevascularized+subcutaneous+sites+without+immunosuppressive+treatment.">Long-term allogeneic islet graft survival in prevascularized subcutaneous sites without immunosuppressive treatment.</a> American Journal of Transplantation. 14 (7), 1533-1542 (2014).</li><li>Yasunami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Subcutaneous+Site+of+Islet+Transplantation+Superior+to+the+Liver.">A Novel Subcutaneous Site of Islet Transplantation Superior to the Liver.</a> Transplantation. 102 (6), 945-952 (2018).</li><li>Rajab, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation:+alternative+sites.">Islet transplantation: alternative sites.</a> Current Diabetes Reports. 10 (5), 332-337 (2010).</li><li>Ekser, B., Vagefi, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Search+for+the+best+site+in+islet+xenotransplantation.">Search for the best site in islet xenotransplantation.</a> International Journal of Surgery and Medicine. 70, 106-107 (2019).</li><li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Method+for+Islet+Transplantation+to+the+Omentum+in+Mouse.">A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (143), e57160 (2019).</li><li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination.">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), e50374 (2014).</li><li>Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+murine+islet+isolation+and+subcapsular+kidney+transplantation.">A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (50), e2096 (2011).</li><li>Khatri, R., Hussmann, B., Rawat, D., Gurol, A. O., Linn, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraportal+Transplantation+of+Pancreatic+Islets+in+Mouse+Model.">Intraportal Transplantation of Pancreatic Islets in Mouse Model.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57559 (2018).</li><li>Carter, J. D., Dula, S. B., Corbin, K. L., Wu, R., Nunemaker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+guide+to+rodent+islet+isolation+and+assessment.">A practical guide to rodent islet isolation and assessment.</a> Biological Procedures Online. 11, 3-31 (2009).</li></ol>

השתלת איון הלבלב הוא טיפול מבטיח לטיפול T1DM. ההשפעה של טיפול זה מושפע גורמים רבים ובחירת אתר אופטימלי עבור השרשה איון חשוב מאוד. האתר האנטומי האידיאלי עבור השתלת איון צריך את המאפיינים הבאים: נגישות להשתלה פשוטה, ביופסיה, והליכי אחזור השתל; סיבוכים מופחתים; שיעור הצלחה גבוהה של בקרת גלוקוז ?...

השכיחות העולמית והשכיחות של סוכרת מסוג 1 (T1DM) עולים במהירות, על פי הנתונים הסטטיסטיים של הפדרציה הבינלאומית לסוכרת (צה"ל)1. השתלת איון היא אחת הגישות המבטיחים ביותר לטיפול T1DM4. מאז פריצת הדרך הגדולה שנעשתה השתלת איון קליני באמצעות פרוטוקול אדמונטון2 דווח, תפקוד הישרדות השתל איון ב T1DM הנמענים לאחר 5 שנים מגיע כעת על 50%3.
בעבר, מספר אתרי השתלת, כגון הכבד, כמוסת כליות, טחול, אזור תוך שרירי, מרחב תת עורי, מח עצם, ואת הכיס אונטל נחקרו עבור השתלת איון ניסיוני5,6,7. חלק מהאתרים הנ ל נבדקו בהגדרות הקליניות8. למרות השתלת איון לתוך הכבד נשאר השיטה הנפוצה ביותר בשימוש ביישום קליני בהווה9, יש כמה בעיות חשובות לכתובת בעת שימוש באתר זה. למשל, כיצד להפחית את אובדן מוקדם של האיים המושתלים שנגרמו על ידי התגובה הדלקתית מיידית של דם בתיווך (IBMIR) ואספקת חמצון העניים10,11 וכיצד לאחזר את שתלי איון במידת הצורך, כי הם מפזרים לוקליזציה בכבד. קפסולת הכליות עשויה להיות אתר אידיאלי עבור נמעני מכרסמים. עם זאת, הקפסולה כליה הדוקה מגביל את ההשתלה של איונים allogeneic מספקת בבני אדם, למרות שזה יכול להיות מתאים יותר עבור השתלת איון xenotransplantation בשל ההכנות מטוהרים מאוד חזירי איון בשימוש קליני5,12. לכן, החיפוש אחר אתר מתאים יותר עבור השתלת איון הוא בעיצומו.
החלל התת עורי עשוי לשמש כאתר הישימה קלינית עבור השתלת איון בשל הנגישות שלה. עם זאת, את היעילות של השתלת איון לחלל תת עורית הוא נמוך מאוד, ובכך דורשים מספר גדול יחסית של איוקמיה הפוכה13. לאחרונה, צוות מחקר יפני מצא את ISWAT, אתר תת עורית הספר מעולה להשתלה איון במודל murine בהשוואה לכבד14. ISWAT מכיל את העורק האפיקיבה ואת הווריד, כך אספקת הדם העשיר עשוי להבטיח השתלת איון revascularization. בכתב יד זה, אנו מציעים שיטת השרשה קלה באמצעות מטריקס מטריצות קרום הידרוג'ל כדי לתקן איונים murine מורנה ב ISWAT. פרוטוקול זה מוכיח יעיל עבור השתלת איון.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m Syringe-driven Filter Unit</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SLHV033RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tube</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Pasteur pipette</td>
			<td>JingAn Biological, China</td>
			<td>J00085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL syringe</td>
			<td>Szboon, China</td>
			<td>20170829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 surgical suture</td>
			<td>sh-Jinhuan, China</td>
			<td>CR537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mL syringe</td>
			<td>Szboon, China</td>
			<td>20170623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Ethanol</td>
			<td>LIRCON, China</td>
			<td>9180527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21202</td>
			<td>Dilution (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse Glucagon antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab10988</td>
			<td>Dilution (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse insulin antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>3014s</td>
			<td>Dilution (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blunt-pointed perfusion needle</td>
			<td>Oloey, China</td>
			<td>005</td>
			<td>32G, yellow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Meilune, China</td>
			<td>MB4219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 Mice</td>
			<td>Medical Animal Center of Guangdong Province</td>
			<td></td>
			<td>8~10 weeks</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell culture dish</td>
			<td>BIOFIL, China</td>
			<td>TCD000100</td>
			<td>General,Non-treated,87.8 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ST16R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cephalosporin</td>
			<td>Lukang medical, China</td>
			<td>150303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMRL-1066</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Codos Pet Clipper</td>
			<td>Szcodos, China</td>
			<td>CP-8000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagenase Type V</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C9262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-hank&#39;s buffer</td>
			<td>Coolaber, China</td>
			<td>PM5140-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dithizone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin staining media</td>
			<td>Beyotime Biotech, China</td>
			<td>C0109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescein diacetate (FDA)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>F1303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescent microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMIL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gel-loading pipet tips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS4884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Coolaber, China</td>
			<td>PM5150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxylin staining media</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>14166S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HISTOPAQUE-1077</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>RNBG0522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HISTOPAQUE-1119</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>RNBG0536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356234</td>
			<td>Basement Membrane Matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophor</td>
			<td>LIRCON, China</td>
			<td>5190313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>light-tight culture dish</td>
			<td>DVS, China</td>
			<td>AN-5058548</td>
			<td>self-made, glass dish sprayed with black paint</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Adhesive Tape</td>
			<td>Cofoe, China</td>
			<td>K12001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>non-invasive microtweezers</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>F11033-11 and F12016-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Touch ultraeasy Basic blood glucose monitoring system</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>33391713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ophthalmic scissors</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>S12012-12 and S11001-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P/S (penicillin / streptomycin)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pentobarbital sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium iodide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STZ (streptozotocin)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Strip</td>
			<td>GenUltimate</td>
			<td>100-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRITC-conjugated Goat anti-Rabbit IgG(H+L)</td>
			<td>proteintech</td>
			<td>SA00007-2</td>
			<td>Dilution (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vascular clamp</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>R31006-04</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inguinal subcutaneous white adipose tissue (iswat) transplantation model of murine islets

השתלת איון הלבלב הוא טיפול רפואי מבוסס היטב עבור סוכרת סוג 1. קפסולת הכליה הוא האתר הנפוץ ביותר עבור השתלת איון במודלים מכרסמים. עם זאת, קפסולת הכליה הדוקה מגבילה את ההשתלה של איונים מספיקים בבעלי חיים גדולים ובני אדם. רקמת השומן הלבנה לבנה תת עורית (ISWAT), חלל תת עורי חדש, נמצא להיות אתר בעל ערך פוטנציאלי עבור השתלת איון. באתר זה יש אספקת דם טובה יותר מאשר חללים תת עורית אחרים. יתר על כן, ISWAT להכיל מסה איון גדול יותר מאשר קפסולת הכליה, והשתלת לתוך זה הוא פשוט. כתב יד זה מתאר את ההליך של בידוד איון העכבר והשתלת באתר ISWAT של העכבר סוכרתית התחביריים. באמצעות פרוטוקול זה, מורטין איונים הלבלב היו מבודדים על ידי העיכול הסטנדרטי קולגן ומטריצות קרום המרתף הידרוג'ל שימש לתיקון איונים מטוהרים באתר ISWAT. רמות הגלוקוז בדם של עכברי המטופל היו מנוטרים במשך יותר מ 100 ימים. שתלי איון אוחזרו ביום 100 לאחר ההשתלה ניתוח היסטולוגית. הפרוטוקול להשתלה איון באתר ISWAT המתואר בכתב יד זה הוא פשוט ואפקטיבי.

שני הליכים מוצגים בפרוטוקול זה: הכנה מורנה איון השתלת איון לאתר ISWAT. , בהליך הראשון לאחר השימוש והעיכול עם מסוג V קולגן הפתרון, טיהור עם Histopaque-1119 ו Histopaque-1077 וצעד נוסף לקטוף יד, איונים murine מבודדים יהיה טהור מספיק עבור השתלת (כפי שמוצג באיור 1) ואת איונים מבודדים כי יש כדאיות גבוה...

Watch this Scientific Journal Video about Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets at JoVE.com

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets

בפרוטוקול זה, שיטה של מורטין איון בידוד והשתלת לתוך רקמת השומן הלבן התת עורית מתוארת. האיים המבודדים של מורנה ממורג מושתלים לתוך המטופל מורין באמצעות קרום מרתף הידרוג'ל. רמת הגלוקוז בדם של המטופלים מנוטרים, ו ניתוח היסטולוגיה של שתלי איון מבוצע.

השתלת מודל שומן לבן תת-עורית (ISWAT) מדגם ההשתלה של איויין מורנה

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for ...

השתלת איון היא אחת הגישות המבטיחות ביותר לטיפול בסוכרת מסוג I. והחיפוש אחר אתר מתאים להשתלת איון נמשך. השתלת איון לרקמת השומן הלבנה התת עורית התת עורית היא שיטה פשוטה אך יעילה שעשויות להיות לה השלכות קליניות.אקסטרפולציה של הליך זה למרפאה עלולה להוביל להתפתחות תרופה לחולי סוכרת מסוג I. שיטה זו יכולה לספק תובנה על השתלת איון קליני כמו לשוני נקבע לא להיות אתר אידיאלי עבור חריטה איון. חשוב לעקוב בזהירות אחר כל שלב של ההליך, במיוחד צעדים מרכזיים, כגון עיכול הלבלב.הדגמה חזותית תסייע לחוקרים חדשים בטכניקה כדי לקבוע טוב יותר כיצד לבצע את בידוד איון ואת transmutation. לקציר איון, לרסס תחילה את הפרווה של עכבר שחור C57 בן 10 שבועות עם 75% אתנול, ולמלא מזרק חמישה מיליליטר עם פתרון קולגנס מוכן טרי. לצייד את המזרק עם מחט עיקול מחודדת קהה 32-מד, ולמקם את העכבר בתמקם supine על שקית קרח.השתמש מספריים עיניים מחודד ישר לעשות פתח רוחבי בעור של אזור הערווה, ולהרחיב את החתך לכיוון הראש של החיה. פתח לחלוטין את הבטן באמצעות חתך V מאזור הערווה לתהליך xiphoid, ולהזיז את הכבד כדי לחשוף את כיס המרה ואת כל אורך צינור המרה המשותף. לאחר מכן השתמשו במהדק כלי דם כדי לסגור את פתח התריסירה של צינור המרה המשותף וחותכים פתח קטן בכיס המרה.Cannulate צינור המרה המשותף דרך הפתח עם מחט חיסון שהוכן בעבר, ולהזריק כשני מיליליטר של פתרון קולגן לתוך הלבלב. כאשר כל הקולגנס נמסר, השתמש בשני זוגות של פינצטה מיקרו פולשנית כדי להפריד את הלבלב המופרך מהמעיים, הקיבה והטהר, והניח את הלבלב לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר על קרח. לאחר איסוף כל הדגימות, הוסיפו 100 מיקרוליטרים של DNASE I לכל לבלב לצינורות 50 מיליליטר ורעידות נמרצות כל צינור כ-40 פעמים על פני תקופה של 10 שניות לפני שהניחו את הרקמות באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס במשך שלוש עד חמש דקות עם רעידות מתונות.בסוף הדגירה, להוסיף עד נפח סופי של 50 מיליליטר של פתרון להפסיק לעצור את העיכול. והדופק צנטריפוגה הצינורות למהירות של 750 פעמים G בארבע מעלות צלזיוס לפני במהירות לעצור את הצנטריפוגה. לאחר השלכת supernatants, לשטוף את כדורי פעמיים 15 כדי 25 מיליליטר של פתרון להפסיק לשטוף תחת אותם תנאי צנטריפוגה כפי שהוכח רק.לאחר הכביסה השנייה, בריכה שלוש כדורי לצינור לתוך צינורות חרוט חדשים 50 מיליליטר. ולתלות מחדש את תאי הלבלב בנפח כולל של עשרה מיליליטר של היטופק 1119. הבא בזהירות להוסיף חמישה מיליליטר של Histopaque 1077 לאורך הצד של כל צינור, ואחריו חמישה מיליליטר של HBSS.להפריד את התאים על ידי צנטריפוגה ולהשתמש פיפטה פסטר חמישה מיליליטר כדי לאסוף את איונים מממשק HBSS Histopaque 1077. בריכת האיים בצינור חרוט חדש 50 מיליליטר בנפח סופי של 50 מיליליטר של פתרון עצור עבור צנטריפוגה הדופק, ולהשליך את העל טבעי. תבזבזו מחדש את גלולת הכדור ב-30 מיליליטר של פתרון עצירה טרי לצנטריפוגה של דקה אחת, והשקיעו מחדש את האיים ב-30 מיליליטר של מדיום תרבותי.דקאנט את איונים לתוך אחד 10 ס"מ תבשיל תרבות אור הדוק לכל צינור. ומ מניחים את המנה מתחת למיקרוסקופ הסטריאו. בעזרת 200 טיפים לטעינת ג'ל מיקרוליטר, בחרו ידנית את איונים כדוריים לבנים מהתמיסה.הצבת האיים לתוך צלחת תרבות תאים מטופלת המכילה 10 מיליליטר של מדיום תרבות כפי שהם נקצרים. בדוק את טוהר האיים שנבחרו ביד על ידי כתמי dithizone תחת מיקרוסקופ אור. ולזהות את הכדאיות של איונים על ידי פלואורסין ניקוד רדידם יודיד מכתים תחת מיקרוסקופ פלורסנט.ואז תרבות האיים המבודדים בתרבות רעננה בינונית ב 37 מעלות צלזיוס ב 95% אוויר ו 5% פחמן דו חמצני עד ההשתלה. החל בימים 3 ו -4 לאחר אינדוקציה סוכרת, לנקב את וריד caudal של כל סטרפטוזוטוסין מוזרק שמונה שבועות זכר C57 שחור שישה עכבר סביב 10:00.m. כדי לאסוף דגימת דם מכל חיה הנמען.השתמש במכשיר ניטור גלוקוז בדם בסיסי כדי לקבוע את רמת הגלוקוז בדם ללא צום של כל עכבר ולאחר מכן להוסיף את הדם על רצועות בדיקה בודדות. כאשר בעל חיים הוכיח רמת גלוקוז בדם של לפחות 20 מילימול לליטר יומיים ברציפות, לשקול ולסמן את העכבר המטופל ולאשר חוסר תגובה רפלקס הדוושה בבעלי החיים הרדמה. מניחים aliquot של הידרוג'ל ממינוס 20 מעלות צלזיוס אחסון על קרח להפשרה.ולהעביר 450 עד 500 שווה ערך איון לכל נמען לתוך צינור צנטריפוגה סטרילי 1.5 מיליליטר המכיל 200 microliters של בינוני לכל צינור על קרח. ספוגית את האזור המגן השמאלי של הנמען עם 75%אתנול ולמקם את העכבר בתדר supine. לתקן את הגפיים עם סרט כירורגי, ולהשתמש קוצץ כדי להסיר את השיער סביב האתר הכירורגי.ספוגית את האזור הכירורגי עם יודפור ולעשות חתך אנכי בעור חיטוי. זהה את העורק והווריד האפיגמטריים הנחותים בתוך ISWAT וצור כיס קטן מעל כלי הדם. מעים את איונים על ידי צנטריפוגה ולהסיר על טבעי ככל האפשר.מוסיפים 20 מיקרוליטרים של הידרוג'ל מופשר לכל צינור, ומערבבים בעדינות את האיים, דואגים להימנע מבועות. כאשר הושגה השעיה הומוגנית, השתמש בקצה פיפטה 200 מיקרוליטר כדי לספק בזהירות את כל תערובת הידרוג'ל איון מצינור אחד לכיס. כאשר הידרוג'ל התגבש לחלוטין, להוסיף 20 microliters של צפלוספורין לאתר ההשתלה, ולסגור את השריר והעור עם תפר כירורגי מתמשך 5-0.לאחר מכן מניחים את הנמען בכלוב נקי על כרית תרמית עם ניטור עד ל recumbency מלא. לאחר עיבוד איון המורין כפי שהוכח, איי המורין המבודדים יהיו טהורים מספיק להשתלה. יש להשתמש רק באזורים מבודדים בעלי כדאיות גבוהה להשתלה.לאחר ערבוב יסודי של שתלי איון עם הידרוג'ל, השתל יכול להיות מושתל באתר ISWAT. לאחר כחודש של השתלה לתוך ISWAT, שתלי איון להפוך היפרגליקמיה בעוד משקל הגוף של העכברים הנמען גדל בהדרגה. בשעה 100 ימים לאחר ההשתלה, הסרת השתלים גורמת לעלייה מיידית בטמפרטורה של 10:00 .m.רמת גלוקוז בדם שאינה בצום. ניתוח היסטולוגי בנקודת זמן זו, מגלה כי שתלי איון נשארו שלמים. וכתמים חיסוניים של אינסולין וגלוקגון מצביעים על כך שגם האיים המושתלים מתפקדים ב-100 ימים לאחר ההשתלה.היזהר לא לנער את תאי הלבלב המוליכים חזק מדי או אחר היכולת של האיים המתקבלים ייפגע. איונים מבודדים ניתן להשתיל תחת קפסולת הכליה כפקד כדי להשוות את ההשפעות של ההשתלה המבודדת לתוך רקמת שומן לבן תת עורית inguinal באתר. ההליך יוסיף חניכה של ניסויים קליניים של השתלת איון לאתרים אחרים מלבד הכבד.

Research

JoVE Journal

Medicine

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue (ISWAT) Transplantation Model of Murine Islets

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

עכבר דגם של אנדומטריוזיס בניתוח המושרה על ידי השתלת אוטומטי של רקמות הרחם

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of ...

Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

פיתוח Bronchiolitis סותם במודל Murine של השתלת ריאות Orthotopic

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

עכברי צוואר הרחם לב השתלת דגם שימוש בטכניקת חפתים השתנה

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

השתלה של הריאה Valve שימוש במודל עכבר של Heterotopic לב והשתלות

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

השתלת קרנית עכברית: דגם לחקר הצורה נפוצה ביותר של Solid השתלות איברים

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Encapsulation תרמוגנית Preadipocytes להשתלה לבסיס מיון רקמת שומן

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

A Versatile Murine Model of Subcortical White Matter Stroke for the Study of Axonal Degeneration and White Matter Neurobiology

שבץ בחומר הלבן צדדי דגם Murine של קורטיקליים לחקר ניוון אקסונלית ולבן Matter לנוירוביולוגיה

Stroke affecting white matter accounts for up to 25% of clinical stroke presentations, occurs silently at rates that may be 5-10 fold greater, and ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

יצירת והשתלות של גיליון נגזר שומן בתאי גזע (ASC) במודל של ריפוי פצע סוכרתי

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

A Technique for Subcutaneous Abdominal Adipose Tissue Biopsy via a Non-diathermy Method

שיטה לביופסיה רקמת השומן התת עורית בטן באמצעות שיטה בלתי-diathermy

Adipose tissue biopsies offer tissue samples that, upon analysis, may provide insightful overviews of mechanisms relating to metabolism and disease. To ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

השתלת תאי רקמת שומן-Derived גיליון כדי להפחית את זליגת לאחר קיצור קיבה חלקית במודל של עכברים

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...