Name: inguinal subcutaneous white adipose tissue (iswat) transplantation model of murine islets
Uploaded: 2020-02-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets at JoVE.com

이 사업은 중국 의전사업(2017YFC1103704)의 국고병원 건립을 위한 특별기금(2019), 심천의학산명프로젝트(SZSM201412020), 고급기금의 보조금으로 지원되었다. 심천의 의료 분야 건설 (2016031638), 심천 과학 기술 재단 (JCJY2022229204849975, GJHZ2017031417135556), 심천 재단 건강 및 가족 계획위원회 (SZXJ20102111S222222 중국 광동성 과학 연구 재단 (A2019218), 중국 박사 후 과학 재단 (2018M633218).

이 프로토콜의 모든 절차는 심천 제 2 인민 병원의 윤리 검토위원회의 동물 복지 원칙을 따랐다. 아일렛 이식 수혜자 및 기증자는 광동성 의과 동물 센터에서 구입한 8-10주 된 C57BL/6 남성 마우스이었습니다. 수확된 세포의 수확, 분리, 배양, 또는 투여의 절차는 무균 조건에서 수행되었다.
1. 아일렛 준비
<ol><li>콜라게나아제 V 형 작동 용액을 준비하십시오. 콜라게나아제 V형을...

<ol>
	<li>Cho, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IDF+Diabetes+Atlas:+Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2017+and+projections+for+2045.">IDF Diabetes Atlas: Global estimates of diabetes prevalence for 2017 and projections for 2045.</a> Diabetes Research and Clinical Practice. 138, 271-281 (2018).</li><li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).</li><li>McCall, M., Shapiro, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+islet+transplantation.">Update on islet transplantation.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (7), 007823 (2012).</li><li>Pathak, V., Pathak, N. M., O'Neill, C. L., Guduric-Fuchs, J., Medina, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapies+for+Type+1+Diabetes:+Current+Scenario+and+Future+Perspectives.">Therapies for Type 1 Diabetes: Current Scenario and Future Perspectives.</a> Clinical Medicine Insights: Endocrinology and Diabetes. 12, 1179551419844521 (2019).</li><li>Bottino, R., Knoll, M. F., Knoll, C. A., Bertera, S., Trucco, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Future+of+Islet+Transplantation+Is+Now.">The Future of Islet Transplantation Is Now.</a> Frontiers in Medicine (Lausanne). 5, 202 (2018).</li><li>Stokes, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+sites+for+human+and+murine+islets.">Transplantation sites for human and murine islets.</a> Diabetologia. 60 (10), 1961-1971 (2017).</li><li>van der Windt, D. J., Echeverri, G. J., Ijzermans, J. N., Cooper, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+choice+of+anatomical+site+for+islet+transplantation.">The choice of anatomical site for islet transplantation.</a> Cell Transplantation. 17 (9), 1005-1014 (2008).</li><li>Addison, P., Fatakhova, K., Rodriguez Rilo, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+for+an+Alternative+Site+of+Islet+Cell+Transplantation.">Considerations for an Alternative Site of Islet Cell Transplantation.</a> Journal of Diabetes Science and Technology. , (2019).</li><li>Pepper, A. R., Bruni, A., Shapiro, A. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+islet+transplantation:+is+the+future+finally+now.">Clinical islet transplantation: is the future finally now.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 23 (4), 428-439 (2018).</li><li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+islet+function+in+islet+allotransplant+and+autotransplant+recipients,+despite+lower+islet+mass+in+autotransplants.">Similar islet function in islet allotransplant and autotransplant recipients, despite lower islet mass in autotransplants.</a> Transplantation. 91 (3), 367-372 (2011).</li><li>Bruni, A., Gala-Lopez, B., Pepper, A. R., Abualhassan, N. S., Shapiro, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+cell+transplantation+for+the+treatment+of+type+1+diabetes:+recent+advances+and+future+challenges.">Islet cell transplantation for the treatment of type 1 diabetes: recent advances and future challenges.</a> Diabetes, Metabolic Syndrome and Obesity: Targets and Therapy. 7, 211-223 (2014).</li><li>Smood, B., Bottino, R., Hara, H., Cooper, D. K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+the+renal+subcapsular+space+the+preferred+site+for+clinical+porcine+islet+xenotransplantation?+Review+article.">Is the renal subcapsular space the preferred site for clinical porcine islet xenotransplantation? Review article.</a> International Journal of Surgery and Medicine. 69, 100-107 (2019).</li><li>Luan, N. M., Iwata, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+allogeneic+islet+graft+survival+in+prevascularized+subcutaneous+sites+without+immunosuppressive+treatment.">Long-term allogeneic islet graft survival in prevascularized subcutaneous sites without immunosuppressive treatment.</a> American Journal of Transplantation. 14 (7), 1533-1542 (2014).</li><li>Yasunami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Subcutaneous+Site+of+Islet+Transplantation+Superior+to+the+Liver.">A Novel Subcutaneous Site of Islet Transplantation Superior to the Liver.</a> Transplantation. 102 (6), 945-952 (2018).</li><li>Rajab, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation:+alternative+sites.">Islet transplantation: alternative sites.</a> Current Diabetes Reports. 10 (5), 332-337 (2010).</li><li>Ekser, B., Vagefi, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Search+for+the+best+site+in+islet+xenotransplantation.">Search for the best site in islet xenotransplantation.</a> International Journal of Surgery and Medicine. 70, 106-107 (2019).</li><li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Method+for+Islet+Transplantation+to+the+Omentum+in+Mouse.">A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (143), e57160 (2019).</li><li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination.">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), e50374 (2014).</li><li>Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+murine+islet+isolation+and+subcapsular+kidney+transplantation.">A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (50), e2096 (2011).</li><li>Khatri, R., Hussmann, B., Rawat, D., Gurol, A. O., Linn, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraportal+Transplantation+of+Pancreatic+Islets+in+Mouse+Model.">Intraportal Transplantation of Pancreatic Islets in Mouse Model.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57559 (2018).</li><li>Carter, J. D., Dula, S. B., Corbin, K. L., Wu, R., Nunemaker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+guide+to+rodent+islet+isolation+and+assessment.">A practical guide to rodent islet isolation and assessment.</a> Biological Procedures Online. 11, 3-31 (2009).</li></ol>

췌장 췌도 이식은 T1DM을 치료하는 유망한 치료법입니다. 이 치료의 효과는 많은 요인에 의해 영향을 받고 아일렛 이식을위한 최적의 부위를 선택하는 것은 매우 중요합니다. 아일렛 이식에 대한 이상적인 해부학 적 부위는 다음과 같은 특성을 가져야합니다 : 간단한 이식, 생검 및 이식 편이식 검색 절차에 대한 접근성; 감소 합병증; 혈액 포도 당 제어의 높은 성공률; 및 섬 이식편15,<...

국제 당뇨병 연맹 (IDF)1의통계 데이터에 따르면 타입-1 당뇨병 (T1DM)의 세계적인 부각 그리고 보급은 급속하게 상승하고 있습니다. 아일렛 이식은 T1DM4를 치료하기위한 가장 유망한 접근 법 중 하나입니다. 에드먼튼 프로토콜2를 이용한 임상 섬 이식에서 큰 돌파구가 보고된 이후, 5년 후 T1DM 수혜자에서 기능하는 섬 이식 생존은 이제 약 50%3에도달한다.
과거에는 간, 신장 캡슐, 비장, 근육 내 부위, 피하 공간, 골수 및 오멘탈 파우치와 같은 여러 이식 부위가 실험적인 췌도이식을위해 탐구되었다5,6,7. 위의 사이트 중 일부는 임상 설정에서 테스트 되었습니다8. 췌도 이식은 현재9에서임상 적용에서 가장 널리 사용되는 방법으로 남아 있지만,이 사이트를 사용할 때 해결해야 할 몇 가지 중요한 문제가 있습니다. 예를 들어, 즉각적인 혈액 매개 염증 반응(IBMIR)과 가난한 산소화공급(10,11)에 의해 야기된 이식된 작은 섬들의 조기 손실을 감소시키는 방법및필요한 경우 췌도 이식편을 회수하는 방법, 그들은 간에서 확산되기 때문에. 신장 캡슐 설치류 수용자에 대 한 이상적인 사이트 수 있습니다. 그러나, 단단한 신장 캡슐은 인간에서 충분한 동종 아일렛의 이식을 제한하지만, 고도로 정제된 돼지 섬 제제로 인해 아일트종이식에 더 적합할 수 있지만 임상적으로5,12. 따라서, 아일렛 이식에 적합한 부위에 대한 탐색이 진행되고 있다.
피하 공간은 접근성으로 인해 아일렛 이식에 임상적으로 적용 가능한 부위로서 사용될 수 있다. 그러나, 피하 공간으로의 섬 이식의 효율은 매우 낮으며, 따라서고혈당증(13)을역전시키기 위해 상대적으로 많은 수의 섬을 필요로 한다. 최근 일본의 한 연구팀은간(14)과비교했을 때 뮤린 모델에서 췌도 이식에 우수한 새로운 피하 부위인 ISWAT를 발견했다. ISWAT는 상복부 동맥과 정맥을 포함하므로 풍부한 혈액 공급은 아일렛 이식편 재혈관화를 보장 할 수 있습니다. 이 원고에서는 ISWAT에서 합성 뮤린 섬을 고정하기 위해 지하 막 매트릭스 하이드로겔을 사용하여 쉬운 이식 방법을 제안합니다. 이 프로토콜은 아일렛 이식에 효과적임을 증명합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m Syringe-driven Filter Unit</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SLHV033RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tube</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Pasteur pipette</td>
			<td>JingAn Biological, China</td>
			<td>J00085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL syringe</td>
			<td>Szboon, China</td>
			<td>20170829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 surgical suture</td>
			<td>sh-Jinhuan, China</td>
			<td>CR537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mL syringe</td>
			<td>Szboon, China</td>
			<td>20170623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Ethanol</td>
			<td>LIRCON, China</td>
			<td>9180527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21202</td>
			<td>Dilution (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse Glucagon antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab10988</td>
			<td>Dilution (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse insulin antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>3014s</td>
			<td>Dilution (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blunt-pointed perfusion needle</td>
			<td>Oloey, China</td>
			<td>005</td>
			<td>32G, yellow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Meilune, China</td>
			<td>MB4219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 Mice</td>
			<td>Medical Animal Center of Guangdong Province</td>
			<td></td>
			<td>8~10 weeks</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell culture dish</td>
			<td>BIOFIL, China</td>
			<td>TCD000100</td>
			<td>General,Non-treated,87.8 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ST16R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cephalosporin</td>
			<td>Lukang medical, China</td>
			<td>150303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMRL-1066</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Codos Pet Clipper</td>
			<td>Szcodos, China</td>
			<td>CP-8000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagenase Type V</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C9262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-hank&#39;s buffer</td>
			<td>Coolaber, China</td>
			<td>PM5140-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dithizone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin staining media</td>
			<td>Beyotime Biotech, China</td>
			<td>C0109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescein diacetate (FDA)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>F1303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescent microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMIL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gel-loading pipet tips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS4884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Coolaber, China</td>
			<td>PM5150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxylin staining media</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>14166S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HISTOPAQUE-1077</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>RNBG0522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HISTOPAQUE-1119</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>RNBG0536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356234</td>
			<td>Basement Membrane Matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophor</td>
			<td>LIRCON, China</td>
			<td>5190313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>light-tight culture dish</td>
			<td>DVS, China</td>
			<td>AN-5058548</td>
			<td>self-made, glass dish sprayed with black paint</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Adhesive Tape</td>
			<td>Cofoe, China</td>
			<td>K12001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>non-invasive microtweezers</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>F11033-11 and F12016-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Touch ultraeasy Basic blood glucose monitoring system</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>33391713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ophthalmic scissors</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>S12012-12 and S11001-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P/S (penicillin / streptomycin)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pentobarbital sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium iodide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STZ (streptozotocin)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Strip</td>
			<td>GenUltimate</td>
			<td>100-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRITC-conjugated Goat anti-Rabbit IgG(H+L)</td>
			<td>proteintech</td>
			<td>SA00007-2</td>
			<td>Dilution (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vascular clamp</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>R31006-04</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inguinal subcutaneous white adipose tissue (iswat) transplantation model of murine islets

췌도 이식은 타입-1 당뇨병을 위한 잘 확립된 치료 처리입니다. 신장 캡슐은 설치류 모형에 있는 아일레 이식을 위해 일반적으로 이용되는 사이트입니다. 그러나, 단단한 신장 캡슐은 큰 동물 및 인간에 있는 충분한 작은 작은 것의 이식을 제한합니다. 새로운 피하 공간인 인큐니얼 피하 백색 지방 조직(ISWAT)은 저도 이식에 잠재적으로 귀중한 부위인 것으로 나타났습니다. 이 사이트는 다른 피하 공간보다 더 나은 혈액 공급이 있습니다. 더욱이, ISWAT는 신장 캡슐보다 더 큰 작은 덩어리를 수용하고, 그것으로 이식하는 것은 간단하다. 이 원고는 합성 당뇨병 마우스 수용자의 ISWAT 부위에서 마우스 췌도 격리 및 이식의 절차를 설명합니다. 이 프로토콜을 사용하여, 뮤린 췌도는 표준 콜라게나아제 소화에 의해 분리되었고 지하 막 매트릭스 하이드로겔은 ISWAT 부위에서 정제된 섬을 고정하는데 사용되었다. 수용자 마우스의 혈당 수준을 100일 이상 모니터링하였다. 아일렛 이식편은 조직학적 분석을 위해 이식 후 100일째에 회수되었다. 이 원고에 설명된 ISWAT 사이트에서 의정서는 간단하고 효과적이다.

이 프로토콜에는 두 가지 절차가 도입됩니다: 뮤린 아일렛 제제 및 ISWAT 부위에 의한 아일렛 이식. 첫 번째 절차에서, 타입 V 콜라게나아제 용액으로 정독 및 소화한 후, 히스타크-1119 및 히스타크-1077및 추가의 손 따기 단계로 정화한 후, 분리된 뮤린 섬은 이식에 충분히 순수할 것이다(도 1에도시된 바와 같이) 및 높은 생존율을 가지는 고립된 섬이 이식에 사용될 것이다(도 <st...

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Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets

이 프로토콜에서, 뮤린 아일렛 분리 및 인추니얼 피하 백색 지방 조직내로이식하는 방법이 기재되어 있다. 분리된 합성 뮤린 섬은 지하 막 하이드로겔을 사용하여 뮤린 수용자로 이식된다. 수령인의 혈당 수준을 모니터링하고, 아일렛 이식의 학력 분석이 수행됩니다.

뮤린 아일렛의 인과 피하 백색 지방 조직 (ISWAT) 이식 모형

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for ...

아슬렛 이식은 타입-I 당뇨병 을 치료하기위한 가장 유망한 접근 중 하나입니다. 그리고 아일렛 이식에 적합한 부위에 대한 검색이 진행 중입니다. 유상증자 백색 지방 조직에 대한 아슬렛 이식은 임상적 영향을 미칠 수 있는 간단하면서도 효과적인 방법입니다.클리닉에이 절차의 외삽은 타입 I 당뇨병 환자에 대한 치료의 개발로 이어질 수 있습니다. 이 방법은 언어가 islet 이식에 이상적인 사이트가 아니라고 결정되었기 때문에 임상 적 이식에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 절차의 모든 단계, 특히 췌장 소화와 같은 주요 단계를 신중하게 따르는 것이 중요합니다.시각적 데모는 이 기술을 새로 접한 연구원들이 이 슬레치 격리 및 변환을 수행하는 방법을 더 잘 결정하는 데 도움이 됩니다. 아슬렛 수확을 위해 먼저 10주 된 C57 블랙 6 마우스의 털을 75%에탄올로 분사하고, 갓 준비된 콜라게나제 용액으로 5밀리리터 주사기를 채웁니다. 주사기를 32게이지 굽힘 무딘 뾰족한 관류 바늘로 장착하고, 얼음 가방에 마우스를 척추 위치에 놓습니다.직선 뾰족한 안과 가위를 사용하여 음모 부위의 피부에 횡단 개방을 하고 동물의 머리를 향해 절개를 확장하십시오. 음모 부위에서 xiphoid 과정에 V 절개를 통해 복부를 완전히 열고 간을 움직여 담낭과 일반적인 담관의 전체 길이를 노출시합니다. 그런 다음 혈관 클램프를 사용하여 일반적인 담관의 십이지장 개구부를 닫고 담낭의 작은 개구부를 자른다.이전에 준비된 관류 바늘로 개구부를 통해 일반적인 담관을 캔누레이하고, 췌장에 콜라게나아제 용액의 약 2밀리리터를 주입한다. 모든 콜라게나아제가 전달되면 두 쌍의 비침습적 마이크로 핀셋을 사용하여 내장, 위 및 비장에서 퍼프드 췌장을 분리하고 췌장을 얼음 위에 50 밀리리터 원원 튜브에 넣습니다. 모든 샘플을 채취하면 췌장당 100마이크로리터를 췌장당 100마이크로리터를 50밀리리터 튜브에 넣고 10초 동안 각 튜브를 약 40회 흔들어 적당한 흔들림으로 3~5분 동안 3~5분간 수수 욕조에 넣습니다.인큐베이션이 끝나면 소화를 막기 위해 50밀리리터의 최종 볼륨을 추가합니다. 그리고 펄스 원심 분리는 신속하게 원심 분리기를 중지하기 전에 4 섭씨에서 750 배 G의 속도로 튜브를 원심 분리합니다. 수퍼나티를 폐기한 후, 펠릿을 15~25밀리리터의 스톱 액액을 세척당 2회 세척한 후 동일한 원심분리 조건에서 세척합니다.두 번째 세척 후 튜브 당 3 개의 펠릿을 새로운 50 밀리리터 원내 튜브로 당기십시오. 그리고 히토파크 1119의 총 10 밀리리터의 부피에서 췌장 세포를 다시 중단한다. 다음으로 각 튜브의 측면에 히토파크 1077의 5 밀리리터를 조심스럽게 추가하고 HBSS의 5 밀리리터가 뒤따릅니다.세포를 원심분리로 분리하고 5밀리리터 파스퇴르 파이펫을 사용하여 HBSS Histopaque 1077 인터페이스에서 섬을 수집합니다. 펄스 원심분리를 위한 스톱 솔루션 50밀리리터의 최종 부피로 새로운 50밀리리터 원모형 원적 튜브에 섬을 풀로 붙이고, 상체를 폐기한다. 1분 원심분리를 위해 30밀리리터의 신선한 스톱 솔루션으로 펠릿을 재중단하고, 30밀리리터의 배양 배지에서 섬을 재보설한다.섬을 튜브 당 10센티미터 의 가벼운 문화 접시에 넣습니다. 그리고 스테레오 현미경 아래에 접시를 놓습니다. 200 마이크로리터 젤 로딩 파이펫 팁을 사용하여 용액에서 흰색 스페로이드 섬을 손으로 선택합니다.섬들을 수확할 때 배양 배지 10밀리리터를 함유한 처리되지 않은 세포 배양 접시에 넣습니다. 가벼운 현미경으로 염색하는 디티존에 의해 손으로 수확한 섬의 순도를 확인하십시오. 그리고 형광제 제비에 의해 섬의 생존가능성을 검출하여 유안증이 플로리스트 현미경으로 염색한다.그런 다음 분리된 섬을 신선한 배양 배지에서 섭씨 37도에서 95%의 공기와 이식전까지 이산화탄소 5%로 배양합니다. 당뇨병 유도 후 3일과 4일을 시작으로, 각 연쇄상 조토신 주입 8주 된 남성 C57 블랙 6 마우스의 소달 정맥을 10:00 a.m 주위로 천자합니다.기본 혈당 모니터링 기구를 사용하여 각 마우스의 비 금식 혈액 포도당 수준을 결정한 다음 개별 검사 스트립에 혈액을 추가하십시오. 동물이 이틀 연속 리터당 적어도 20 밀리몰의 혈당 수준을 입증했을 때, 계량 및 수신자 마우스를 표시하고 마취 된 동물의 페달 반사에 대한 반응의 부족을 확인합니다. 해빙을 위해 얼음위에 영하 20도의 하이드로겔을 보관합니다.그리고 수용자당 450~500개의 섬 등가물을 얼음에 튜브당 200마이크로리터를 함유한 멸균 1.5밀리리터 원심분리기 튜브로 이송한다. 75%에탄올로 받는 사람의 왼쪽 잉구영역을 스와브하고 마우스를 스핀 위치에 놓습니다. 수술 용 테이프로 팔다리를 고정하고 클리퍼를 사용하여 수술 부위 주변의 머리카락을 제거하십시오.요오도프터로 수술 부위를 면봉하고 소독된 피부에 수직 절개를 합니다. ISWAT 내의 열등한 상복부 동맥과 정맥을 식별하고 혈관 위에 작은 주머니를 만듭니다. 원심분리에 의해 섬의 퇴적물을 제거하고 가능한 한 많은 상퍼를 제거하십시오.각 튜브에 해동 된 하이드로겔 20 마이크로 리터를 추가하고 거품을 피하기 위해 섬을 부드럽게 다시 중단합니다. 균질현탁액이 얻어지면 200마이크로리터 파이펫 팁을 사용하여 한 튜브에서 전체 슬레톤 하이드로겔 혼합물을 주머니에 조심스럽게 전달한다. 하이드로겔이 완전히 고화되면 이식 부위에 세팔로스포린 20 마이크로리터를 추가하고 5-0 연속 수술 봉합사로 근육과 피부를 닫습니다.그런 다음 수신자를 완전한 재조정이 있을 때까지 모니터링할 수 있는 열 패드의 깨끗한 케이지에 넣습니다. 뮤린 섬 처리 후 입증 된 바와 같이, 고립 된 뮤린 섬은 이식을 위해 충분히 순수할 것이다. 생존가능성이 높은 고립된 섬만 이식에 사용해야 합니다.하이드로겔과 함께 이목 이식편을 철저히 혼합한 후, 이식편은 ISWAT 부위에 이식될 수 있다. ISWAT로 이식한 지 약 1개월 후, 아슬렛 이식편은 고혈당증을 역으로 바꾸고 받는 마우스의 체중이 점차 증가한다. 이식 후 100일 후에 이식편을 제거하면 10:00 a.m 즉시 증가합니다.비 금식 혈액 포도 당 수준. 이 시점에서 조직학적 분석은, 이 슬레그래프가 그대로 남아 있음을 보여준다. 그리고 인슐린과 글루카곤 면역형광염색은 이식된 섬도 이식 후 100일 후에 기능한다는 것을 나타낸다.숙련 된 췌장 세포를 너무 강하게 흔들지 않도록주의하거나 얻어진 섬의 능력이 손상됩니다. 격리된 섬은 현장에서 분리된 이식의 효과를 현장에서 잉게인 피하 백색 지방 조직으로 비교하기 위해 신장 캡슐 하에서 이식될 수 있다. 절차는 간 외에 다른 사이트에 islet 이식의 임상 시험의 개시를 추가할 것입니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue (ISWAT) Transplantation Model of Murine Islets

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

자궁의 자동 이식하여 수술 유발 Endometriosis의 마우스 모델

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of ...

연구

의학

Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Orthotopic 폐 이식의 Murine 모델에 Obliterative Bronchiolitis의 개발

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

수정 커프 기술을 사용하여 쥐의 자궁 심장 이식 모델

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Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

이소성 심장 이식 마우스 모델을 사용하여 폐동맥 판막 이식

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

쥐의 각막 이식 : 고체 장기 이식의 가장 일반적인 형태를 연구하기위한 모델

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

지방 조직의 종점에 이식 캡슐화 열 발생 Preadipocytes

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

A Versatile Murine Model of Subcortical White Matter Stroke for the Study of Axonal Degeneration and White Matter Neurobiology

축삭 변성과 백질 신경 생물학의 연구를위한 다목적 쥐 모델 피질의 흰색 물질 스트로크

Stroke affecting white matter accounts for up to 25% of clinical stroke presentations, occurs silently at rates that may be 5-10 fold greater, and ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

생성 및 당뇨병 치유 하는 부상을 모델에서 줄기 세포 지방이 많은 파생 (ASC) 시트의 이식

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

A Technique for Subcutaneous Abdominal Adipose Tissue Biopsy via a Non-diathermy Method

비 투 열 방법을 통해 복 부 피하 지방 조직 생 검에 대 한 기술

Adipose tissue biopsies offer tissue samples that, upon analysis, may provide insightful overviews of mechanisms relating to metabolism and disease. To ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

쥐 모델에 부분 Colectomy 후 누설을 줄이기 위해 지방 조직 유래 줄기 세포의 이식

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...