Name: inguinal subcutaneous white adipose tissue (iswat) transplantation model of murine islets
Uploaded: 2020-02-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантами от Национальной программы никульных НИОКР Китая (2017YFC1103704)Специальные фонды для строительства больниц высокого уровня в провинции Гуандун (2019), Sanming проект медицины в Шэньчжэне (SSM201412020), Фонд высокого уровня Медицинская дисциплина Строительство Шэньчжэня (2016031638), Шэньчжэнь фонд науки и техники (JCJY20160229204849975, GJH'2017031417171733555), Шэньчжэнь Фонд здравоохранения и планирования семьи комиссии (S'XJ20170210210211021X Научно-исследовательский фонд китайской провинции Гуандун (A2019218), Китайский фонд постдокторской науки (2018M633218).

Все процедуры в этом протоколе следовали принципам благополучия животных Комитета по этике Второй народной больницы Шэньчжэня. Получателями и донорами на исданных на излому были мыши C57BL/6, купленные у Медицинского центра животных провинции Гуандун, были от 8 до 10 недель. Процедура сбор...

<ol>
	<li>Cho, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IDF+Diabetes+Atlas:+Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2017+and+projections+for+2045.">IDF Diabetes Atlas: Global estimates of diabetes prevalence for 2017 and projections for 2045.</a> Diabetes Research and Clinical Practice. 138, 271-281 (2018).</li><li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).</li><li>McCall, M., Shapiro, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+islet+transplantation.">Update on islet transplantation.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (7), 007823 (2012).</li><li>Pathak, V., Pathak, N. M., O'Neill, C. L., Guduric-Fuchs, J., Medina, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapies+for+Type+1+Diabetes:+Current+Scenario+and+Future+Perspectives.">Therapies for Type 1 Diabetes: Current Scenario and Future Perspectives.</a> Clinical Medicine Insights: Endocrinology and Diabetes. 12, 1179551419844521 (2019).</li><li>Bottino, R., Knoll, M. F., Knoll, C. A., Bertera, S., Trucco, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Future+of+Islet+Transplantation+Is+Now.">The Future of Islet Transplantation Is Now.</a> Frontiers in Medicine (Lausanne). 5, 202 (2018).</li><li>Stokes, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+sites+for+human+and+murine+islets.">Transplantation sites for human and murine islets.</a> Diabetologia. 60 (10), 1961-1971 (2017).</li><li>van der Windt, D. J., Echeverri, G. J., Ijzermans, J. N., Cooper, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+choice+of+anatomical+site+for+islet+transplantation.">The choice of anatomical site for islet transplantation.</a> Cell Transplantation. 17 (9), 1005-1014 (2008).</li><li>Addison, P., Fatakhova, K., Rodriguez Rilo, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+for+an+Alternative+Site+of+Islet+Cell+Transplantation.">Considerations for an Alternative Site of Islet Cell Transplantation.</a> Journal of Diabetes Science and Technology. , (2019).</li><li>Pepper, A. R., Bruni, A., Shapiro, A. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+islet+transplantation:+is+the+future+finally+now.">Clinical islet transplantation: is the future finally now.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 23 (4), 428-439 (2018).</li><li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+islet+function+in+islet+allotransplant+and+autotransplant+recipients,+despite+lower+islet+mass+in+autotransplants.">Similar islet function in islet allotransplant and autotransplant recipients, despite lower islet mass in autotransplants.</a> Transplantation. 91 (3), 367-372 (2011).</li><li>Bruni, A., Gala-Lopez, B., Pepper, A. R., Abualhassan, N. S., Shapiro, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+cell+transplantation+for+the+treatment+of+type+1+diabetes:+recent+advances+and+future+challenges.">Islet cell transplantation for the treatment of type 1 diabetes: recent advances and future challenges.</a> Diabetes, Metabolic Syndrome and Obesity: Targets and Therapy. 7, 211-223 (2014).</li><li>Smood, B., Bottino, R., Hara, H., Cooper, D. K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+the+renal+subcapsular+space+the+preferred+site+for+clinical+porcine+islet+xenotransplantation?+Review+article.">Is the renal subcapsular space the preferred site for clinical porcine islet xenotransplantation? Review article.</a> International Journal of Surgery and Medicine. 69, 100-107 (2019).</li><li>Luan, N. M., Iwata, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+allogeneic+islet+graft+survival+in+prevascularized+subcutaneous+sites+without+immunosuppressive+treatment.">Long-term allogeneic islet graft survival in prevascularized subcutaneous sites without immunosuppressive treatment.</a> American Journal of Transplantation. 14 (7), 1533-1542 (2014).</li><li>Yasunami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Subcutaneous+Site+of+Islet+Transplantation+Superior+to+the+Liver.">A Novel Subcutaneous Site of Islet Transplantation Superior to the Liver.</a> Transplantation. 102 (6), 945-952 (2018).</li><li>Rajab, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation:+alternative+sites.">Islet transplantation: alternative sites.</a> Current Diabetes Reports. 10 (5), 332-337 (2010).</li><li>Ekser, B., Vagefi, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Search+for+the+best+site+in+islet+xenotransplantation.">Search for the best site in islet xenotransplantation.</a> International Journal of Surgery and Medicine. 70, 106-107 (2019).</li><li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Method+for+Islet+Transplantation+to+the+Omentum+in+Mouse.">A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (143), e57160 (2019).</li><li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination.">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), e50374 (2014).</li><li>Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+murine+islet+isolation+and+subcapsular+kidney+transplantation.">A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (50), e2096 (2011).</li><li>Khatri, R., Hussmann, B., Rawat, D., Gurol, A. O., Linn, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraportal+Transplantation+of+Pancreatic+Islets+in+Mouse+Model.">Intraportal Transplantation of Pancreatic Islets in Mouse Model.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57559 (2018).</li><li>Carter, J. D., Dula, S. B., Corbin, K. L., Wu, R., Nunemaker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+guide+to+rodent+islet+isolation+and+assessment.">A practical guide to rodent islet isolation and assessment.</a> Biological Procedures Online. 11, 3-31 (2009).</li></ol>

Трансплантация поджелудочной железы является перспективной терапией для лечения T1DM. Эффект этой терапии зависит от многих факторов, и выбор оптимального места для имплантации на кисти является чрезвычайно важным. Идеальное анатомическое место для трансплантации газа должно иметь сл...

По данным Международной федерации диабета (IDF)1,заболеваемость и распространенность сахарного диабета 1 типа (T1DM) быстро растет. Трансплантация на ислете является одним из наиболее перспективных подходов для лечения T1DM4. Так как большой прорыв, достигнутый в клинической трансплантации на аклетов с использованием протокола Эдмонтон2 было сообщено, функционирование выживаемости трансплантата на пути в T1DM получателей после 5 лет в настоящее время достигает около 50%3.
В прошлом, несколько мест трансплантации, таких как печень, почечная капсула, селезенка, внутримышечная область, подкожное пространство, костный мозг, и оментальный мешок были исследованы для экспериментальной трансплантации островка5,6,7. Некоторые из вышеперечисленных сайтов были протестированы в клинических условиях8. Хотя трансплантация на айсе в печень остается наиболее широко используемым методом в клиническом применении в настоящее время9,Есть несколько важных проблем для решения при использовании этого сайта. Например, как уменьшить раннюю потерю пересаженных островков, вызванных мгновенной опосредованной воспалительной реакцией крови (IBMIR) и плохой подачей оксигенации10,11 и как получить островк и при необходимости, потому что они диффузно локализуются в печени. Почечная капсула может быть идеальным местом для реципиентов грызунов. Тем не менее, плотная капсула почки ограничивает трансплантацию достаточного аллогенных островков у человека, хотя это может быть лучше подходит для ксенотрансплантации островка из-за высокоочищенных препаратов островка свиньи, используемых клинически5,12. Поэтому ведется поиск более подходящего места для пересадки на территории на это.
Подкожное пространство может быть использовано в качестве клинически применимого места для трансплантации на воздушном котле из-за его доступности. Однако эффективность пересадки островка в подкожное пространство крайне низка, что требует относительно большого количества островков для обращения вспять гипергликемии13. Недавно японская исследовательская группа обнаружила ISWAT, новый подкожный сайт превосходит для трансплантации на аймин в модели мурина по сравнению с печенью14. ISWAT содержит эпигастральную артерию и вену, поэтому богатое кровоснабжение может обеспечить реваскуляризацию переускулярия газографа. В этой рукописи мы предлагаем простой метод имплантации с использованием гидрогеля матрицы мембраны в подвале для фиксации сингенных островков мурин в ISWAT. Этот протокол оказывается эффективным для трансплантации на илиаке.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m Syringe-driven Filter Unit</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SLHV033RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tube</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Pasteur pipette</td>
			<td>JingAn Biological, China</td>
			<td>J00085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL syringe</td>
			<td>Szboon, China</td>
			<td>20170829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 surgical suture</td>
			<td>sh-Jinhuan, China</td>
			<td>CR537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mL syringe</td>
			<td>Szboon, China</td>
			<td>20170623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Ethanol</td>
			<td>LIRCON, China</td>
			<td>9180527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21202</td>
			<td>Dilution (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse Glucagon antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab10988</td>
			<td>Dilution (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse insulin antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>3014s</td>
			<td>Dilution (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blunt-pointed perfusion needle</td>
			<td>Oloey, China</td>
			<td>005</td>
			<td>32G, yellow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Meilune, China</td>
			<td>MB4219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 Mice</td>
			<td>Medical Animal Center of Guangdong Province</td>
			<td></td>
			<td>8~10 weeks</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell culture dish</td>
			<td>BIOFIL, China</td>
			<td>TCD000100</td>
			<td>General,Non-treated,87.8 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ST16R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cephalosporin</td>
			<td>Lukang medical, China</td>
			<td>150303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMRL-1066</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Codos Pet Clipper</td>
			<td>Szcodos, China</td>
			<td>CP-8000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagenase Type V</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C9262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-hank&#39;s buffer</td>
			<td>Coolaber, China</td>
			<td>PM5140-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dithizone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin staining media</td>
			<td>Beyotime Biotech, China</td>
			<td>C0109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescein diacetate (FDA)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>F1303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescent microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMIL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gel-loading pipet tips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS4884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Coolaber, China</td>
			<td>PM5150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxylin staining media</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>14166S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HISTOPAQUE-1077</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>RNBG0522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HISTOPAQUE-1119</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>RNBG0536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356234</td>
			<td>Basement Membrane Matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophor</td>
			<td>LIRCON, China</td>
			<td>5190313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>light-tight culture dish</td>
			<td>DVS, China</td>
			<td>AN-5058548</td>
			<td>self-made, glass dish sprayed with black paint</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Adhesive Tape</td>
			<td>Cofoe, China</td>
			<td>K12001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>non-invasive microtweezers</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>F11033-11 and F12016-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Touch ultraeasy Basic blood glucose monitoring system</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>33391713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ophthalmic scissors</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>S12012-12 and S11001-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P/S (penicillin / streptomycin)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pentobarbital sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium iodide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STZ (streptozotocin)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Strip</td>
			<td>GenUltimate</td>
			<td>100-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRITC-conjugated Goat anti-Rabbit IgG(H+L)</td>
			<td>proteintech</td>
			<td>SA00007-2</td>
			<td>Dilution (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vascular clamp</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>R31006-04</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inguinal subcutaneous white adipose tissue (iswat) transplantation model of murine islets

Трансплантация поджелудочной железы является устоявшимся терапевтическим лечением диабета типа 1. Капсула почки является наиболее часто используемым местом для пересадки на газиотвую инфекцию моделям грызунов. Тем не менее, плотная капсула почки ограничивает трансплантацию достаточноостровов у крупных животных и людей. Было установлено, что подкожная подкожная белая жировая ткань (ISWAT), новое подкожное пространство, является потенциально ценным местом для трансплантации на воздушном шаре. Этот сайт имеет лучшее кровоснабжение, чем другие подкожные пространства. Кроме того, ISWAT вмещает большую массу на ище, чем капсула почки, и трансплантация в нее проста. Данная рукопись описывает процедуру изоляции и трансплантации мышей на сайте ISWAT сингенных получателей диабетической мыши. Используя этот протокол, мурин поджелудочной железы островки были выделены стандартным перевариванием коллагеназа и подвал мембранной матрицы гидрогель был использован для фиксации очищенных островков в ISWAT сайте. Уровни глюкозы в крови мышей-реципиентов отслеживались более 100 дней. На васильевке трансплантаты были извлечены в день 100 после трансплантации для гистологического анализа. Протокол для пересадки на месте ISWAT, описанный в данной рукописи, прост и эффективен.

В этом протоколе вводятся две процедуры: подготовка моринского дейстета и пересадка на место проведения ISWAT. В первой процедуре, после перфуляции и переваривания с типом V коллагеназного раствора, очистка с Histopaque-1119 и Histopaque-1077 и дополнительный шаг ручной подбор, изолированные островки м...

Watch this Scientific Journal Video about Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets at JoVE.com

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets

В этом протоколе описан метод изоляции мурин-опустительных и трансплантации в подкожную белую жировую ткань. Изолированные сингенные островки мурин пересаживаются в реципиент мурин с помощью гидрогеля мембраны в подвале. Контролируется уровень глюкозы в крови реципиентов, проводится гистологический анализ пересадок на аклетис.

Ингинезальная подкожная белая жировая ткань (ISWAT) Модель трансплантации островков Мурин

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for ...

Трансплантация островка является одним из наиболее перспективных подходов к лечению сахарного диабета I типа. И поиск подходящего участка для пересадки островка продолжается. Пересадка островка в паховую подкожно-белую жировую ткань является простым, но эффективным методом, который может иметь клинические последствия.Экстраполяция этой процедуры в клинику может привести к разработке лекарства для диабетиков I типа. Этот метод может дать представление о клинической трансплантации островка, как лингвистический было установлено, что не является идеальным местом для островка engraftment. Важно внимательно следить за каждым этапом процедуры, особенно ключевые шаги, такие как пищеварение поджелудочной железы.Визуальная демонстрация поможет исследователям, новым для техники, лучше определить, как выполнять изоляцию островка и трансмутацию. Для сбора островка, первый спрей меха 10 недель назад C57 черный шесть мыши с 75%этанола, и заполнить пять миллилитров шприц со свежеприготовленным раствором коллагеназы. Оборудовать шприц с 32-го калибра изгиб тупой указал перфузии иглы, и поместите мышь в положение на спине на мешок со льдом.Используйте прямые остроконечные офтальмологические ножницы, чтобы сделать поперечное отверстие в коже лобковой области, и расширить разрез к голове животного. Полностью откройте брюшную полость через V-разрез от лобковой области к процессу xiphoid, и двигайтесь печеночной клеткой для того чтобы подвергнуть действию желчный пузырь и всю длину общего желчного протока. Затем используйте сосудистый зажим, чтобы закрыть двенадцатиперстную часть общего желчного протока и сократить небольшое отверстие в желчном пузыре.Cannulate общий желчный проток через отверстие с ранее подготовленной перфузионной иглой, и вводить около двух миллилитров раствора коллагеназы в поджелудочной железе. Когда все коллагеназы была доставлена, использовать две пары неинвазивных микро пинцетом, чтобы отделить пролитую поджелудочную железу от кишечника, желудка и селезенки, и поместите поджелудочной железы в 50 миллилитров конической трубки на льду. Когда все образцы были собраны, добавить 100 микролитров Dnase I на поджелудочную железу в 50 миллилитров труб и энергично встряхнуть каждую трубку около 40 раз в течение 10 секунд, прежде чем поместить ткани в 37 градусов по Цельсию водяной бане в течение трех-пяти минут с умеренной тряски.В конце инкубации добавьте до конечного объема 50 миллилитров Stop Solution, чтобы остановить пищеварение. И импульс центрифуга труб со скоростью 750 раз G при четырех градусах по Цельсию, прежде чем быстро остановить центрифугу. После отказа от супернатантов, мыть гранулы два раза в 15 до 25 миллилитров Stop Solution на стирку в тех же условиях центрифугации, как только что продемонстрировали.После второй стирки, бассейн три гранулы на трубку в новые 50 миллилитров конических труб. И повторное увеличение клеток поджелудочной железы в общей сложности десять миллилитров Histopaque 1119. Затем аккуратно добавьте пять миллилитров Histopaque 1077 вниз по стороне каждой трубки, а затем пять миллилитров HBSS.Разделите клетки по центрифуге и используйте пятими миллилитровую пипетку Pasteur для сбора островков из интерфейса HBSS Histopaque 1077. Бассейн островки в новой 50 миллилитров конической трубки в окончательном объеме 50 миллилитров Stop Solution для центрифугации импульса, и отказаться от супернатанта. Переусердствов гранулы в 30 миллилитров свежего стоп-раствора в течение одной минуты центрифугации, и повторно посовещения островков в 30 миллилитров среды культуры.Decant островки в один 10 сантиметров светоемкие культуры блюдо на трубку. И поместите блюдо под стерео микроскопом. Используя 200 микролитров гель-загрузки пипетки советы, стороны забрать белые сфероидальные островки из раствора.Размещение островков в необработанные клетки культуры блюдо, содержащее 10 миллилитров культуры среды, как они собирают. Проверьте чистоту подобранных островков путем окрашивания дитизона под легким микроскопом. И обнаружить жизнеспособность островков с помощью фторцеина диацетата йодидия окрашивания под флуоресцентным микроскопом.Затем культуры изолированных островков в свежей среде культуры при 37 градусов по Цельсию в 95%воздуха и 5%углекислого газа до трансплантации. Начиная дни три и четыре после индукции диабета, прокол хвостовой вены каждого стрептозотоцина вводили восемь недель старый мужчина C57 черный шесть мышей около 10:00 а.m., чтобы собрать образец крови от каждого животного-получателя.Используйте базовый инструмент мониторинга глюкозы в крови, чтобы определить не-быстрый уровень глюкозы в крови каждой мыши, а затем добавить кровь на отдельные тест-полоски. Когда животное продемонстрировало уровень глюкозы в крови не менее 20 миллимолей на литр два дня подряд, взвесить и отметить мышь-получателя и подтвердить отсутствие реакции на педаль рефлекс в анестезированные животные. Поместите алицит гидрогеля от минус 20 градусов по Цельсию хранения на льду для оттаивания.И передать от 450 до 500 островок эквивалентов на получателя в стерильные 1,5 миллилитровую центрифугу трубку, содержащую 200 микролитров среднего на трубку на льду. Шваб левой паховой области получателя с 75%этанола и поместите мышь в положение на спине. Исправить конечностей с хирургической лентой, и использовать клиперы, чтобы удалить волосы вокруг хирургического сайта.Шваб хирургической области с иодофором и сделать вертикальный разрез в дезинфицированной кожи. Определите нижняя эпигастральной артерии и вены в ISWAT и создать небольшой карман над сосудами. Осадок островков центрифугации и удалить столько супернатантов, как это возможно.Добавьте 20 микролитров разморожевания гидрогеля в каждую трубку и аккуратно будем повторно использовать островки, заботясь о том, чтобы избежать пузырьков. Когда однородная подвеска была получена, используйте 200 микролитровый наконечник пипетки, чтобы тщательно доставить всю смесь гидрогеля островка из одной трубки в карман. Когда гидрогель полностью затвердело, добавьте 20 микролитров цефалоспорина к месту трансплантации и закройте мышцы и кожу 5-0 непрерывным хирургическим швом.Затем поместите получателя в чистую клетку на тепловой площадке с мониторингом до полного лежачих. После обработки островков мурина, как попродемонстрировано, изолированные островки мурина будут достаточно чистыми для трансплантации. Для трансплантации следует использовать только изолированные островки с высокой жизнеспособностью.После тщательного смешивания островк трансплантатов с гидрогелем, трансплантат может быть имплантирован в сайт ISWAT. Примерно через месяц после трансплантации в ISWAT, островок трансплантатов обратной гипергликемии в то время как вес тела мышей-реципиентов постепенно увеличивается. Через 100 дней после трансплантации удаление трансплантатов приводит к немедленному увеличению в 10:00 .m.неэстивный уровень глюкозы в крови. Гистологический анализ на данный момент, показывает, что островок трансплантаты остались нетронутыми. А инсулин и глюкагон иммунофлуоресцентное окрашивание указывают на то, что пересаженые островки также функционируют при 100 днях после трансплантации.Будьте осторожны, чтобы не встряхнуть пролитые клетки поджелудочной железы слишком надежно, иначе способность полученных островков будет скомпрометирована. Изолированные островки могут быть пересажены под почечной капсулой в качестве контроля, чтобы сравнить последствия изолированной трансплантации в подкожной подкожной белой жировой ткани в месте. Процедура добавит начало клинических испытаний трансплантации островка к другим участкам, кроме печени.

Research

JoVE Journal

Medicine

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue (ISWAT) Transplantation Model of Murine Islets

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

Мышиной модели индуцированного хирургического Эндометриоз через Авто-трансплантации тканей матки

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of ...

Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Развитию облитерирующего бронхиолит в мышиной модели ортотопической трансплантации легких

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Мышиный шейки Трансплантация сердца Модель с использованием модифицированного манжеты Техника

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Трансплантация клапана легочной артерии с помощью мыши Модель гетеротопической Трансплантация сердца

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Мышиные Трансплантация роговицы: Модель по изучению наиболее распространенная форма твердого трансплантации органов

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Инкапсуляция Термогенный преадипоциты для трансплантации в жировой ткани депо

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

A Versatile Murine Model of Subcortical White Matter Stroke for the Study of Axonal Degeneration and White Matter Neurobiology

Прикосновение Универсальный мышиной модели подкорковых белого вещества для изучения дегенерации аксонов и белого вещества нейробиологии

Stroke affecting white matter accounts for up to 25% of clinical stroke presentations, occurs silently at rates that may be 5-10 fold greater, and ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Создание и пересадку жировой производные стволовых клеток (ASC) листа в диабетической заживление модели

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

A Technique for Subcutaneous Abdominal Adipose Tissue Biopsy via a Non-diathermy Method

Техника для подкожной жировой ткани брюшной биопсии через метод Non диатермия

Adipose tissue biopsies offer tissue samples that, upon analysis, may provide insightful overviews of mechanisms relating to metabolism and disease. To ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Трансплантация стволовых клеток жировой ткани производные листа для уменьшения утечки после частичное колэктомия в мышиной модели

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...