Name: inducing acute liver injury in rats via carbon tetrachloride (ccl4) exposure through an orogastric tube
Uploaded: 2020-04-28T13:30:00
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저자는 감사하게도 베르사 델가도, 병리학과, 소로카 의료 센터, 건강 과학 학부, 네게브의 벤 구리온 대학, 실험실에서뿐만 아니라 조직학 분석에 그녀의 도움을 인정합니다.

실험은 헬싱키와 도쿄 선언의 권고와 유럽 공동체의 실험 동물 사용에 대한 지침에 따라 수행되었습니다. 실험은 네게브의 벤 구리온 대학의 동물 관리위원회에 의해 승인되었다.
참고: CCl4 모델은 이전 연구17에서생성되고 사용되었습니다. 프로토콜 타임라인은 표 1에서설명됩니다.
1. 실험 절차에 대한 쥐 준비
<p ...

<ol>
	<li>Hoofnagle, J. H., Carithers, R. L., Shapiro, C., Ascher, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fulminant+hepatic+failure:+Summary+of+a+workshop.">Fulminant hepatic failure: Summary of a workshop.</a> Hepatology. 21 (1), 240-252 (1995).</li><li>Rakela, J., Lange, S. M., Ludwig, J., Baldus, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fulminant+hepatitis:+Mayo+clinic+experience+with+34+cases.">Fulminant hepatitis: Mayo clinic experience with 34 cases.</a> Mayo Clinic Proceedings. 60 (5), 289-292 (1985).</li><li>Riordan, S. 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이 프로토콜에서, CCl4는 쥐에서 ALI를 유도하기 위해 간 독소로서 사용된다. ALI는 간 자렌치의 손실과 간 대사 및 합성 기능의 후속 dysregulation특징입니다. 약물, 바이러스, 독소, 자가 면역 질환, 대사 성 질환 및 혈관 장애는 모두 간세포 사망을 유발하며, 후속 염증 반응은 ALI의 발병기전에 기여합니다.
간으로의 초기 모욕은 사이토카인 생산, 케모카인 방출 및 염증 성...

특히 알코올 및 약물 남용으로 인해 간에서 독성 모욕의 빈도가 증가하고 있습니다. 급성 간 손상 (ALI)은 높은 사망률과 관련이 있으며 임상 적 우려를 일으켰습니다1,,2. 독성 상해는 간세포 세포 사멸, 괴사 증, 또는 pyroptosis의 결과로 간에서 죽음 신호 통로로 이끌어 냅니다. ALI는 간뇌병증 및 단백질 합성 장애 등의 합병증을 포함하는 중증 간 기능 장애를 특징으로 하는 간 부전의 발달에 중요한 역할을 한다3,,4. 최근 연구는 간 실패를 동반하는 생리적 및 병리학적 변화에 대한 우리의 지식을 증가시켰지만, 세포 사멸의 메커니즘에 영향을 미치는 병리 분자 특징을 완전히 설명하지는 못했습니다. 게다가, 어떤 약물은 현재 ALI 환자에 있는 진보적인 악화를 반전하기 위하여 유효하지 않습니다. 현재, 유일하게 유의하고 효과적인 치료법은 간 이식5,,6.
ALI의 메커니즘 및 병리생리학을 조사하고 상이한 간보호 전략을 테스트하기 위해, 다른 동물 모델이 ALI를 유도하는 데 사용된다. ALI의 바람직한 동물 모델은 신뢰할 수 있고, 검증되고, 저렴하고 적용하기 쉬운 방법을 통해 질병의 병리학 적 과정을 모방해야합니다. 실험 모델의 예로는 간독성 제제, 전체 또는 부분 간절제술과 같은 외과 적 시술, 완전 또는 일시적인 편환성 및 감염 시술7,,8,,9가포함된다. 알려진 간독성 물질에는 갈락토사민, 아세트아미노펜, 티오아세타미드, 아조시메탄 및 CCl4가포함된다. 이들 중, CCl4는 아직잘 10,11,,,12,,13을특징으로하지 않았지만 널리 사용된다.
CCl4는 달콤한 냄새가 나고 낮은 온도에서 가연성이 거의 없는 유기 무색 액체 화합물입니다. CCl4의 고농도에 노출은 간 및 신장의 악화를 포함하여 중추 신경계에 손상을 일으킬 수 있습니다. CCl4는 반응성 산소 종을 형성하는 간에서의 생체 변환을 통해 ALI를 유도합니다. 이는 P450 시토크롬 효소 2E1을 통해 발생하며, 활성 대사 산물을 형성하고 거대 분자 결합에 의한 세포 손상을 초래하고, 지질 과산화의 향상 및 세포 내 칼슘 항상성의교란을 초래한다 14. 또한, CCl4 모델은 RNA 합성15의수준에서 성상 세포체를 자극하는데 사용될 수 있다. 이 간독소는 복강 내, 인트라포탈, 구강 및 위내 경로16에의해 투여되고 있다.
이 프로토콜에서, 우리는 오로위관을 통해 쥐에서 CCl4-유도ALI를 상세히 기술한다. 이 방법은 ALI의 병인을 조사하는 데 사용할 수 있는 강력하고 재현 가능한 ALI를 유도합니다. 간 질환 중증도의 결정은 혈청 글루타메이트 피루베이트 트랜스아미나제(GPT), 글루타믹 옥살로아세틱 트랜스아미나제(GOT) 효소 및 총 빌리루빈(TB)의 측정뿐만 아니라 헤마톡실린과 에오신(H&E)의 스테인드 간 조직에 의한 확실한 조직학적 진단을 통해 모니터링됩니다. 위내 접근을 통해 CCl4에 노출되면 위험 위험을 최소화하면서 실용적이고 저렴하며 최소침습적인 방법을 사용할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:924px;" width="923">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:212px;">22 G catheter BD Neoflon TM</td>
			<td style="width:153px;">Becton Dickinson Infusion Therapy AB</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td style="width:443px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:212px;">4% buffered formaldehyde solution</td>
			<td style="width:153px;">Sigma - Aldrich lab materials technologies</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:212px;">BD Microtainer SST TM Tubes</td>
			<td style="width:153px;">Becton Dickinson and Company</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:212px;">Carbone tetrachloride</td>
			<td style="width:153px;">Sigma - Aldrich lab materials technologies</td>
			<td style="width:116px;">CAS 56-23-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:212px;">Isofluran, USP 100%</td>
			<td style="width:153px;">Piramamal Critical Care, Inc</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:212px;">Olympus AU2700 Chemistry-Immuno Analyzer</td>
			<td style="width:153px;">Olympus (MN, USA)</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td>Analysis of blood samples was done by the fluorescence method</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:212px;">Olympus BX 40 microscope</td>
			<td style="width:153px;">Olympus</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:212px;">RAT Feeding Needles</td>
			<td style="width:153px;">ORCHID SCIENTIFICS</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:212px;">SYRINGE SET 1 and 2 ml MEDI -PLUS</td>
			<td style="width:153px;">Shandong Zibo Shanchuan Medical Instruments Co., Ltd</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inducing acute liver injury in rats via carbon tetrachloride (ccl4) exposure through an orogastric tube

급성 간 손상 (ALI) 간 실패의 개발에 중요 한 역, 간 뇌 증 및 장애인된 단백질 합성 등 합병증을 포함 하 여 심한 간 기능 장애를 특징으로 하는. 적절한 동물 모델은 ALI의 메커니즘과 병리생리학을 테스트하고 다른 간 보호 전략을 조사하는 데 필수적입니다. 화학적 변형을 수행하는 능력으로 인해 탄소 사염소산화물 (CCl4)은반응성 산소 종의 형성을 통해 ALI를 유도하기 위해 간에서 널리 사용됩니다. CCl4 노출은 복강 내, 흡입, 또는 비위 관 또는 오로 위관을 통해 수행 될 수 있습니다. 여기에서, 우리는 ALI가 oro위관을 통해CCl4 노출에 의해 유도되는 설치류 모형을 기술합니다. 이 방법은 저렴하고 쉽게 수행되며 위험 위험이 최소화됩니다. 이 모델은 매우 재현 가능하며 잠재적 인 간 보호 전략의 효능을 확인하고 간 손상의 마커를 평가하는 데 널리 사용할 수 있습니다.

TB, GOT 및 GPT 수준은 SHAM-조작 대조군(p&0.001)에 비해 ALI(더 높은 CCl4 투여량에서 더 많은)를 유도한 후 24시간 크게 증가하였다(그림1). 기준선에서 결핵, GOT 및 GPT의 수준은 정상이었고, sham-operate 컨트롤과 크게 다르지 않았습니다. 24 시간에서, 모든 3개의 개입 군, 1 mL/kg CCl4 (1, 1−2), 2.5 mL/kg CCl4 (3, 3−4), 및 5 mL/kg CCl4 (4, 4−5.75) sham-operate 대조군(0,...

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Inducing Acute Liver Injury in Rats via Carbon Tetrachloride CCl4 Exposure Through an Orogastric Tube

이 프로토콜은 오로 위관을 통해 CCl4 노출을 통해 급성 간 손상 (ALI)을 유도하는 일반적이고 실행 가능한 방법을 설명합니다. CCl4 노출은 간에서의 생체 변환 동안 반응성 산소 종의 형성을 통해 ALI를 유도합니다. 이 방법은 ALI의 병리생리학을 분석하고 다른 간 보호 전략을 검사하는 데 사용됩니다.

탄소 테트라 클로라이드를 통해 쥐에 급성 간 상해를 유도 (CCl4)오로 위관을 통해 노출

Acute liver injury (ALI) plays a crucial role in the development of hepatic failure, which is characterized by severe liver dysfunction including ...

나는 구로위관을 통해 탄소 테트라 클로라이드 노출을 통해 쥐에 유도 급성 간 손상에 대한 우리의 작업을 제시하고 싶습니다. 300 ~ 350 그램의 성인 남성 스프라그-Dawley 쥐를 선택합니다. 쥐 차우와 물 광고 리비툼을 제공합니다.오전 6시부터 오후 12시 사이에 모든 실험을 수행합니다. 이스라엘 네게브 벤 구리온 대학의 동물 관리 코미디는 이 프로토콜에 사용되는 모든 치료 및 테스트 절차를 승인했습니다. 12 시간 조명과 12 시간 어두운 주기와 22 섭씨 도의 실온에서 쥐를 유지합니다. 22 게이지 카테터로 꼬리 정맥을 캐너레이.기준선에서 혈액 샘플을 수집합니다. 혈액 생화학 적 분석은 혈청 GOT의 측정을 포함, GPT, 총 빌리루빈. 소로카 의료 센터의 생화학 실험실에서 간 효소 및 총 빌리루빈 수준의 검사가 수행되었습니다.주의: 증기 또는 피부 흡수를 포함한 고농도의 탄소 테트라클로리드에 노출되면 중추 신경계에 영향을 미치고 간과 신장을 퇴화시키고 장기간 노출되면 혼수 상태에 빠질 수 있습니다. 올리브 오일과 혼합된 탄소 테트라클로리제의 50% 용액을 차량으로 1대 1비율로 준비합니다. 구로위관을 통해 탄소 테트라클로리드 투여에 의해 생체내의 병독성을 유도한다.쥐의 구강을 통해 구위관을 삽입합니다. 탄소 테트라클로라이드의 다른 복용량에 쥐를 노출. 가벼운 급성 간 부상에 대 한 킬로 당 1 밀리 리터, 중간 급성 간 부상에 대 한 킬로 당 2 점 5 밀리 리터, 또는 심각한 급성 간 부상에 대 한 킬로 당 5 밀리 리터.가짜 그룹의 경우, 1킬로당 5 밀리리터에 쥐를 노출만 올리브 오일. 탄소 테트라클로리드 노출로부터 24시간 동안 혈액 샘플을 수집합니다. 혈액 생화학 적 분석은 혈청 GOT의 측정을 포함, GPT, 총 빌리루빈.복부가 위쪽으로 향하고 복부를 면도하는 등쪽 재조합의 해부 보드에 죽은 쥐를 놓습니다. 메스를 사용하여 항문에서 턱까지 벤트럼의 전체 길이를 절개합니다. 피부를 반사합니다.메스를 사용하면 항문에서 시포이드 연골에 복부 벽을 절개하여 복부 내장을 노출시합니다. 간을 페트리 접시에 옮기습니다. 헤마톡시린과 에진 염색을 수행합니다.20밀리미터 의 객관적 길이로 200배의 현미경 배율 하에서 슬라이스를 검사합니다. 간 단면도는 처리 프로토콜에 눈이 멀게 한 전문 병리학자에 의해 채점되어야 합니다. 0의 점수는 간 이상을 나타내지 않으며, 1 ~2 개는 가벼운 간 부상을 나타내며, 3 ~4 개는 중간 간 부상을 나타내며 5 ~ 6 개는 심각한 간 손상을 나타냅니다.다른 시간에 쥐의 다양한 그룹은 계획에 표시됩니다. 급성 간 손상을 유도 한 후 24 시간, GOT에서 상당한 증가가 있었다, GPT, 총 빌리루빈 수준, 대조군에 비해 노출 탄소 테트라 클로라이드에 따라. P값은 0점 0 0 1 미만이었습니다.조직 병리학적 변화는 다양한 용량에서 탄소 테트라염화물 중독 후 모든 그룹에서 24 시간 후에 관찰되었다. 조직학 채점 점수는 대조군에 대한 세 가지 중재 그룹 사이의 24시간 에서 상당히 높았다. P값은 0점 0 5 미만이었습니다.우리의 연구 그룹은 구로위관을 통해 탄소 테트라 클로라이드 노출을 통해 쥐에 있는 유도된 급성 간 상해의 일반적이고 물리적인 방법을 제시했습니다. 이 방법은 급성 간 손상의 병리생리학을 조사하고 보호 전략에 대해 다른 테스트하는 데 사용됩니다. 당신의 관심을 주셔서 대단히 감사합니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

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연구

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X-ray fluoroscopy is widely used for image guidance during cardiac intervention. However, radiation dose in these procedures can be high, and this is a ...

Acute and Chronic Tactile Sensory Testing after Spinal Cord Injury in Rats

쥐의 척수를 다친 후에 급성 및 만성 촉각 감각 테스트

Spinal cord injury (SCI) impairs sensory systems causing allodynia1-8. To identify cellular and molecular causes of allodynia, sensitive and valid sensory ...

Orthotopic Liver Transplantation in Rats

쥐에게 Orthotopic 간 이식

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

마우스의 급성 신장 손상 및 사후 상해 섬유증의 허혈 - 재관류 모델

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

급성 폐 손상의 열기 기관 절개 위산 흡인 쥐 모델은 최대한 급성 치명적 폐 손상의 결과

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

쥐의 심근 허혈 재관류 후 관상 동맥 흐름 예비의 평가

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

직접 경포당증 주입에 의해 마우스에 있는 심각한 폐 상해를 유도하는

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Acute Kidney Injury Model Induced by Cisplatin in Adult Zebrafish

성인 얼룩말 피시에 있는 Cisplatin에 의해 유도된 급성 신장 상해 모형

Cisplatin is commonly used as chemotherapy. Although it has positive effects in cancer-treated individuals, cisplatin can easily accumulate in the kidney ...